proyecto tesis marihuayta

0

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUMICA

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE

FARMACIA Y BIOQUMICA

PROYECTO DE TESIS I

Identificacin preliminar de fitoconstituyentes de las hojas e

inflorescencias de Tanacetum parthenium (marihuayta) procedentes del

distrito de Huancaspata - La Libertad.

AUTORES:

Roque Rodrguez, Jorge Luis

Salazar Urbano, Harwin Jhoel

ASESOR:

Mg. Soto Vsquez, Maril Roxana.

TRUJILLLO - PERU

2011

1

NDICE

I. GENERALIDADES ....................................................................... Pg.1

1. Titulo .......................................................................................... Pg.1

2. Tipo de investigacin .................................................................. Pg.2

3. Fecha de inicio y trmino del proyecto ........................................ Pg.3

4. Recursos disponibles y no disponibles ......................................... Pg.7

5. Financiamiento .......................................................................... Pg.10

II. PLAN DE INVESTIGACIN ...................................................... Pg.11

1. Realidad problemtica............................................................... Pg.11

2. Justificacin .............................................................................. Pg.15

3. Problema .................................................................................. Pg.16

4. Hiptesis ................................................................................... Pg.16

5. Objetivos .................................................................................. Pg.16

6. Diseo de contrastacin ............................................................ Pg.17

7. Referencias Bibliogrficas ........................................................ Pg.31

8. Anexos ..................................................................................... Pg.34

1

PROYECTO DE INVESTIGACIN

I) GENERALIDADES

1. TTULO

Identificacin preliminar de fitoconstituyentes de las hojas e inflorescencias de

Tanacetum parthenium (marihuayta) procedentes del distrito de Huancaspata -

La Libertad.

2. PERSONAL INVESTIGADOR

2.1. AUTORES

Roque Rodrguez, Jorge Luis

Estudiante del VI ciclo de la Facultad de Farmacia y Bioqumica

de la Universidad Nacional de Trujillo

N de matrcula: 511102509

Correo electrnico: [email protected]

Salazar Urbano, Harwin Jhoel

Estudiante del VI Ciclo de la Facultad de Farmacia y Bioqumica

de la Universidad Nacional de Trujillo

N de matrcula: 0011100409


2.2. ASESOR

Mg. Soto Vsquez, Maril Roxana

2

Docente de las Ctedras de Farmacognosia y Farmacobotnica del

Departamento de Farmacotecnia de la Facultad de l Facultad de

Farmacia y Bioqumica de la Universidad Nacional de Trujillo.

Cdigo: 5727


3. TIPO DE INVESTIGACIN:

3.1 De acuerdo a la orientacin: Bsica.

3.2 De acuerdo a la tcnica de contrastacin: Descriptiva.

4. RGIMEN DE INVESTIGACIN:

Libre.

5. AREA DE INVESTIGACIN

Ciencias naturales.

6. LINEAS Y SUB LINEAS DE INVESTIGACIN

Lnea: Productos naturales

Sub lnea: Plantas medicinales

7. INSTITUCIN A LA QUE PERTENECE EL PROYECTO:

Universidad Nacional de Trujillo.

Facultad de Farmacia y Bioqumica.

Departamento Acadmico de Farmacotecnia.

Seccin de Farmacognosia.

3

8. LOCALIDAD E INSTITUCIN DONDE SE EJECUTAR EL

PROYECTO:

Localidad: Trujillo La Libertad.

Institucin: Universidad Nacional de Trujillo.

Facultad de Farmacia y Bioqumica.

Laboratorio: Farmacognosia y Farmacobotnica.

9. DURACION TOTAL DEL PROYECTO:

16 semanas.

10. FECHA DE INICIO Y TRMINO:

Supeditado a la aprobacin del proyecto.

11. CRONOGRAMA DE EJECUCION DEL PROYECTO

ETAPAS TIEMPO DE

DURACN

HORAS

SEMANALES

Recoleccin de Datos 8 semanas 08

Anlisis de Datos 4 semanas 05

Elaboracin del

Informe

4 semanas 05

12. HORAS SEMANALES DEDICADAS AL PROYECTO:

Alumnos: 15 horas.

Asesor: 3 horas.

13. RECURSOS DISPONIBLES:

13.1. PERSONAL

Autores: Roque Rodrguez, Jorge Luis.

4

Salazar Urbano, Harwin Jhoel.

Asesor: Mg. Soto Vsquez, Maril Roxana.

13.2. MATERIAL Y EQUIPO DE LABORATORIO

MATERIAL BIOLGICO:

1 Kg de hojas y 1 kg de inflorescencias de Tanacetum

parthenium (marihuayta) procedentes del distrito de Huancaspata

- La Libertad.

MATERIAL DE LABORATORIO

Material de vidrio

De uso comn en el Laboratorio de Farmacognosia

Material qumico

Reactivos:

cido 3,5 dinitrobenzoico

cido actico

cido ntrico

cido clorhdrico

cido pcrico

cido sulfrico

Alcohol amlico

Anhdrido Actico

5

Bicloruro de mercurio

Carbonato de sodio cristales

Clorhidrato de hidroxilamina

Cloruro frrico

Hidrxido de potasio

Hidrxido de sodio

Hipoclorito de sodio

Ninhidrina sal

Nitrato de plata

Pentacloruro de antimonio

Resorcina

Subnitrato de Bismuto

Sudn III

Sulfato cprico

Tartrato de sodio y potasio

Tricloruro de antimonio

Tricloruro frrico

Yodo resublimado

Yoduro de potasio

Solventes:

Acetona

Agua destilada

6

Benceno

Cloroformo

Etanol absoluto

Etanol 96

ter dietlico

Glicerina

Metanol

Tetracloruro de carbono

Equipos:

Balanza analtica OHAUS GA 200

Lmpara UV 254-366nm DESAGA

Cocina elctrica Finely

Refrigeradora Coldex

Bao Mara Memmert

Estufa THELCO H.W. Kessel Model 17.

Molino

Balanza triple brazo OHAUS 700/800 series

13.3. LOCALES:

Laboratorio de Farmacognosia y Farmacobotnica de la Facultad

de Farmacia y Bioqumica. Universidad Nacional de Trujillo.

7

14. RECURSOS NO DISPONIBLES Y PRESUPUESTO:

CODIGO DESCRIPCIN CANTIDAD PRECIO

UNITARIO TOTAL

2.3 BIENES Y SERVICIOS

2.3.1 10.1 SUMINISTROS PARA USO AGROPECUARIO, FORESTAL Y

VETERINARIO

2.3.1 10.12 MATERIAL BIOLGICO

Hojas y flores de

Tanacetum parthenium

(marihuayta)

2 Kg 10 .00 10.00

2.3.1 1.1 1

ALIMENTOS Y BEBIDAS PARA CONSUMO HUMANO

Bebidas (Agua) 2 personas 1.00 50.00

Almuerzos 2 personas 4.00 200

2.3.1 5.1 MATERIAL Y TILES DE OFICINA

2.3.1 5.1 2

PAPELERA EN GENERAL, TILES Y MATERIALES DE

OFICINA

Bolgrafo 4 0.50 2.00

Papel Bond A4 1 millar ------ 23.00

Resaltador 2 2.50 5.00

Corrector 1 2.50 2.50

Borrador 2 1.00 2.00

Cinta adhesiva 2 1.00 2.00

Tijeras 1 4.00 4.00

Engrapador 1 10.0 10.00

Etiquetas 1 paquete ------ 4.00

Grapas 1 paquete ------ 5.00

8

Flder 5 0.50 2.50

Regla 1 1.00 1.00

Plumones tinta

indeleble 2 3.00 6.00

2.3.1 5.3 1

ASEO, LIMPIEZA Y TOCADOR

Leja 2 2.00 4.00

Detergente 2 kg ------ 10.00

Papel toalla x 2 1 paquete ------ 8.00

Toalla 2 2.00 4.00

Franela 2 2.00 4.00

Jabn y jaboncillo 2 1.50 3.00

Bolsas de plstico 1 paquete ------ 1.50

2.3.1 8.2 1 MATERIAL, INSUMOS, INSTRUMENTAL Y ACCESORIOS

MDICOS, QUIRRGICOS, ODONTOLGICOS Y DE LA

LABORATORIO

Algodn 1 Kg 4.00 4.00

Papel filtro Wattman N 1 caja 40.00 40.00

Papel Kraft 3 pliegos 1.00 3.00

2.3.1 99.1 2 PRODUCTOS QUMICOS

Alcohol de 96 1 lt 6.00 6.00

2.3.1 99.1 99

OTROS BIENES

Agua destilada 15 lts 1.00 15.00

2.3.2 1.2 1 PASAJES Y GASTOS DE TRANSPORTE

Transporte 2 personas ------ 252.00

2.3.2 1.2 99 OTROS GASTOS

Transporte Nacional 2 personas 75 300

2.3.2 2.2 SERVICIOS DE TELEFONA E INTERNET

2.3.2 2.2 1 SERVICIO DE TELEFONA MVIL

Tarjeta para celular 4 10.00 40.00

9

RESUMEN DEL PRESUPUESTO

CODIGO CLASIFICADOR DE SERVICIOS PRECIO

2.3.1 10.12 Material biolgico 10.00

2.3.1 1.1 1 Alimentos y bebidas para consumo humano 250.00

2.3.1 5.1 Material y tiles de oficina 69.00

2.3.1 5.3 Aseo, limpieza y tocador 34.50

2.3.1 8.2 1

Material, insumos, instrumental y accesorios

mdicos, quirrgicos, odontolgicos y de la

laboratorio

47.00

2.3.1 99.1 2 Productos qumicos 6.00

2.3.1 99.1 2 Otros bienes 15.00

2.3.2 1.2 1 Pasajes y gastos de transporte 252.00

2.3.2 2.2 3 SERVICIO DE INTERNET

Internet General ------ 50.00

2.3.2 2.4 SERVICIO DE PUBLICIDAD, IMPRESIONES, DIFUSIN E

IMAGEN INSTITUCIONAL

2.3.2 2.4 4 SERVICIO DE IMPRESIONES, ENCUADERNACIN Y

EMPASTADO

Impresiones 100 0.20 20.00

Empastados 03

Unidades 20.00 60.00

2.3.2 4.1 99 DE OTROS BIENES Y ACTIVOS

Fotocopia 200 0.10 20.00

Digitacin General ------ 20.00

2.3.2 7.4 3

SOPORTE TCNICO

Memoria de

Almacenamiento

Masivo (USB -

4Gb)

1 40 40.00

10

2.3.2 1.2 99 OTROS GASTOS 300.00

2.3.2 2.2 Servicios de telefona e internet 90.00

2.3.2 2.4 Servicio de publicidad, impresiones, difusin e

imagen institucional 80.00

2.3.2 4.1 99 De otros bienes y activos 40.00

2.3.2 7.4 3 Soporte tcnico 40.00

TOTAL 1233.5

15. FINANCIAMIENTO:

Los recursos no disponibles sern financiados por los investigadores y los

disponibles por la Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad

Nacional de Trujillo.

11

II) PLAN DE INVESTIGACION:

1. REALIDAD PROBLEMTICA

Las plantas medicinales son vegetales que elaboran productos denominados

fitoconstituyentes, que ejercen accin beneficiosa y/o perjudicial, en el

organismo vivo. Su utilidad primordial, es aliviar la enfermedad y

restablecer la salud; es decir, que tienden a disminuir o neutralizar el

desequilibrio orgnico en el organismo enfermo (1).

Los fitoconstituyentes son producto de la fotosntesis a partir de un

metabolito primario (protenas, cidos grasos, polisacridos, carbohidratos,

lpidos, triglicridos, etctera.), tienen distribucin restringida en ciertas

plantas, a veces es caracterstico de un gnero o una especie, se le atribuye

propiedades teraputicas, son sumamente complejos y en algunos casos an

se desconoce su naturaleza qumica; otros son aislados y purificados e

incluso sintetizados (2)(3).

De los principales fitoconstituyentes podemos encontrar: Los flavonoides

(tambin conocidos como antoxantinas), son compuestos fenlicos que

suelen encontrarse bajo la forma de glucsidos con una o dos unidades de

azcar. Las cumarinas, se presentan a menudo en forma: libre, mezcladas o

glucsidos. Los esteroides de encuentran como glucsidos formando las

llamadas saponinas triterpenoidales y esferoidales. Los alcaloides,

constituyen el grupo ms grande de metabolitos secundarios que pueden

12

encontrarse en estado libre, como glucsido o formando sales con cidos

(4).

Para conocer los fitoconstituyentes responsables de la accin fisiolgica, se

les debe extraer con mtodos adecuados, aislar, determinar su estructura

qumica, as como tambin disear mtodos de sntesis, proponer

modificaciones y disminuir su toxicidad; dando a conocer a la humanidad

sobre estos resultados beneficiosos (2).

Probablemente ms del 90 por ciento de los principios activos que si bien

es cierto, actualmente son sintetizados por las industrias farmacuticas; su

naturaleza qumica fue descubierta en diferentes especies vegetales. Esto

hace ver la urgencia de nuevas e intensas investigaciones de nuestra flora,

para buscar principios activos que nos permitan hacer frente a las mltiples

enfermedades que da a da cobran ms vctimas.

Para alcanzar el nivel de cuantificacin de fitoconstituyentes debe

asegurarse la presencia de estos a travs de mtodos de extraccin

especficos (secuencia lgica de extraccin con solventes apropiados,

aplicacin de pruebas de coloracin y precipitacin). Una de las tcnicas

que se emplea es del Tamizaje Fitoqumico de la Dra. Miranda Martnez M.

y Cuellar A. (5)

Nuestro pas, el Per, es considerado el tercer pas mega diverso del

planeta, lo que implica que en nuestro territorio existe un gran potencial de

estudio de especies vegetales, 50000 para ser exactos, lo que constituye el

13

20% de las especies del planeta, de las que 2000 han sido utilizadas con

fines curativos. (6)

El Per presenta un gran riqueza en su flora, de la cual hay miles de

especies conocidas y cientos por descubrir, con menos del 10% estudiadas;

nuestro pas se caracteriza por s variedad geogrfica y diversidad de climas

que favorecen la existencia de numerosas plantas medicinales, sin embargo

uno de los mayores problemas es el poco conocimiento de su verdadera

actividad teraputica. Es indudable que existen muchas especies de plantas

que contienen sustancias de valor medicinal, pero poco a poco nada se ha

hecho por comprobar su eficacia en la terapia convencional y utilizarlas

como recursos naturales orientadas a solucionar problemas de salud (7)(8).

Muchas de estas plantas son usadas como remedios no oficiales y circulan

solo por la reputacin que el uso popular le ha conferido; tal es el caso del

Tanacetum parthenium que se conoce en nuestros medios andinos como

marihuayta

El Tanacetum parthenium, originaria del este de Europa, se encuentra

ampliamente distribuida de forma espontnea por todo el mundo. Pertenece

a la familia Asteraceae. Es una planta herbcea perenne y sufructicosa,

aromtica, de hasta 1 m de altura, hojas aovadas a oblongo aovadas de unos

12 cm, las inferiores pinnadas y pinnaticectas, superiores pinnatipartidas;

segmentos 2 o 4 pares, dentados, obtusos. Cabezuelas muchas, de hasta 2

cm de dimetro; el disco amarillo, las flores radiadas blancas. (7)

14

Se usa tradicionalmente para el tratamiento de la fiebre (de ah su

denominacin inglesa, feverfew), las artritis y la prevencin y tratamiento

de la migraa (9) (10) (11). Se atribuyen a esta planta cualidades como

revulsiva, tnica y estomacal Se trata de una planta muy utilizada en el

medio rural espaol para trastornos digestivos (12).

El tamizaje fitoqumico de esta planta, realizado por Steanovich M (1980)

en Inglaterra, mostro la presencia de polifenoles esteroidales insaturados.

La planta entera contiene 0.02-0.07% de un aceite esencial compuesto por

L-alcanfor, L-borneol, ortocarsina y terpenos y otros compuestos tales

como los sesquiterpenos magnolialida partenofilo, reynosina, santamarina y

tanacetina. Las partes areas, flor y semilla contienen partenolido. La hoja

contiene los sesquiterpenos artecanina, epoxiartemorina, canina,

partenolido, y perxido de tanatarpina (13).

En el estudio realizado por Won YK (2005), del extracto de la planta, al

cual se ha desprovisto de una sesquiterpenolactona parthenlido, el cual

parece proteger experimentalmente la piel de la radiacin UV y de otras

agresiones externas. Segn el autor, el parthenlido sensibilizara a las

clulas para estimular la apoptosis por medio de los rayos UV tipo B (14).

Un extracto etanlico de T. parthenium realizado por Jger AK, Krydsfeldt

K, Rasmussen HB (2009) ha mostrado una alta afinidad por los receptores

GABA(A) - benzodiazepina. La sustancia responsable de esta accin es la

apigenina (15).

15

Un estudio realizado por Kar HK, Langar S, Arora TC, Sharma P, Raina A,

Bhardwaj M. (2009) a 28 pacientes con dermatitis de contacto a diversas

plantas medicinales, result que un total de 72.7% tenan alergia a la

Matricaria, con lo que los autores concluyeron que la matricaria es una

agente ambiental significativo en el desarrollo de dermatitis por contacto al

aire libre (16).

Un ensayo clnico aleatorio realizado por Diener H, Pfaffenrath V,

Schnitker J. (2005), de 16 semanas de duracin, doble ciego, multicntrico,

controlado frente a placebo con 170 pacientes que padecan migraa,

registr una reduccin significativa del nmero de ataques (17).

Estudios realizados por Lesiak K, Ohguchi K, Ito M y Pajak B (2008-2010)

sobre la sesquiterpenolactona parthenlido ha mostrado tener efecto contra

clulas cancerosas humanas de melanoma. Este efecto podra deberse a la

inhibicin de la lactona sobre la expresin de la tirosinasa o,

indirectamente, por medio de una modificacin gentica (18), (19), (20).

2. JUSTIFICACIN

La Organizacin Mundial de la Salud (OMS) ha determinado que

alrededor del 80% de la poblacin mundial utiliza la medicina tradicional

para atender las necesidades primarias de asistencia mdica. Analizando el

inters por el estudio y empleo de medicina tradicional en la asistencia

mdica y el reconocimiento de la importancia de las plantas medicinales

para el sistema de salud de pases en desarrollo, es que a travs del

16

presente trabajo de investigacin se pretende contribuir con el

conocimiento y proporcionar informacin de los fitoconstituyentes que

presenta la especie Tanacetum parthenium (marihuayta) utilizado de

manera tradicional por los pobladores de Huancaspata para aliviar sus

dolores e inflamaciones.

Segn lo expuesto anteriormente nos planteamos el siguiente problema:

3. PROBLEMA:

Cules son los fitoconstituyentes presentes en las hojas e inflorescencias

de Tanacetum parthenium (marihuayta) procedentes del distrito de

Huancaspata - La Libertad?

4. HIPOTESIS:

Implcita

5. OBJETIVOS:

5.1 OBJETIVO GENERAL:

Determinar los fitoconstituyentes de las hojas e inflorescencias de

Tanacetum parthenium (marihuayta) procedentes del distrito de

Huancaspata - La Libertad.

5.2 OBJETIVOS ESPECIFICOS:

Extraer los fitoconstituyentes de las hojas e inflorescencias de


Huancaspata - La Libertad.

17

Identificar los fitoconstituyentes de las hojas e inflorescencias de


Huancaspata - La Libertad

6. DISEO DE CONTRASTACIN:

6.1 DISEO DE INVESTIGACIN:

Tipo de diseo: Descriptivo de una sola casilla.

Descriptivo

6.2 MATERIALES DE ESTUDIO:

6.2.1 MATERIA L BIOLGICO:

6.2.1.1 Material botnico:

Hojas e inflorescencias de Tanacetum parthenium (marihuayta)

procedentes del distrito de Huancaspata - La Libertad

6.2.1.2 Material de vidrio:

De uso comn en laboratorio

6.2.1.3 Equipos:

Balanza analtica OHAUS GA 200

Lmpara UV 254-366nm DESAGA

Donde:

M: Hojas e inflorescencias de

Tanacetum parthenium

O: Fitoconstituyentes

M

O

18

Cocina elctrica Finely

Refrigeradora Coldex

Bao Mara Memmert

Estufa THELCO H.W. Kessel Model 17.

Molino

Balanza triple brazo OHAUS 700/800 series

6.2.1.4 Reactivos:

De uso comn en marchas fitoqumica

6.3 MTODO

6.3.1 IDENTIFICACIN Y DETERMINACIN TAXMICA

DE LA ESPECIE:

Se llevar un ejemplar de la planta al Herbarium Truxillensis

(HUT) para su identificacin y posterior verificacin

taxonmica segn el sistema filogentico de la especie.

6.3.2 RECOLECCIN DE LA MUESTRA

1 Kg de las hojas e inflorescencias de Tanacetum parthenium

sern recolectadas del distrito de Huancaspata, ubicada a 3200

m.s.n.m., situado a 48.5 LS y 15 LO de la provincia de Pataz

del departamento La Libertad.

19

6.3.3 ANLISIS FITOQUMICO

6.3.3.1 PREPARACIN DE LA MUESTRA

Seleccin de la muestra: El material recolectado ser

trasportado al laboratorio de Farmacognosia de la

Facultad de Farmacia y Bioqumica de la Universidad

Nacional de Trujillo, en donde se eliminar las sustancias

extraas presentes en el material vegetal.

Lavado de la droga: Luego de la separacin de las

sustancias extraas, se proceder a lavar el material

vegetal con agua potable a chorro y despus con agua

destilada. Luego se secar con papel toalla.

Secado: Una vez lavado las flores y hojas se colocar

estas sobre papel kraff y se secar a temperatura

ambiente removiendo cada da hasta que el peso sea haga

constante.

Pulverizacin: Una vez secada las hojas y flores estas se

pulverizarn con ayuda de un mortero. Luego se pasar a

travs de una set de tamices hasta obtener partculas de

tamao homogneas.

6.3.3.2 TAMIZAJE FITOQUMICO PRELIMINAR:

El Tamizaje Fitoqumico preliminar se realizar

siguiendo el mtodo de Miranda M. y Cuellar A (5).

20

Fundamento: De acuerdo con este mtodo para la

marcha fitoqumica de Miranda Martinez M. &

Cuellar Cuellar A., cada muestra ser sometida a la

accin extractiva de solventes de polaridad creciente:

ter dietlico, Etanol y agua, modificando el pH del

medio con el fin de obtener los metabolitos

secundarios de acuerdo a su solubilidad, para luego

llevar a concentrar dichos extractos utilizando

destilacin al vaco con lo cual se podr secar el

extracto. Luego de separar las fracciones se realizar

la identificacin de los metabolitos secundarios

haciendo uso de reactivos de coloracin y precipitacin.

Mtodo y procedimiento: En este caso se emplear un

esquema general, el cual utiliza una extraccin sucesiva

con solventes de polaridad creciente. De este modo, se

realizar la extraccin sucesiva del material vegetal para

la Aplicacin de Tcnicas de Tamizaje Fitoqumico

detallado en el esquema I (segn Anexo). Posteriormente

en cada extracto por separado se proceder de acuerdo a

los esquemas II, III y IV.

En cada caso, para realizar los ensayos se

proceder de la siguiente forma:

21

ENSAYO DE SUDAN: Permitir reconocer

compuestos grasos, para ello, a la alcuota de la

fraccin en el solvente de extraccin, se le aadir

1mL de una solucin diluida en agua del colorante

Sudan III. Se calentar en bao de agua hasta

evaporacin del solvente. La presencia de compuestos

grasos se considerar positiva si aparecen gotas o una

pelcula coloreada de rojo en el seno del lquido o en

las paredes del tubo de ensayo.

ENSAYO DE DRAGENDORFF: Permitir

reconocer la presencia de alcaloides, para ello, si la

alcuota del extracto estuviera disuelta en un solvente

orgnico, este se ha de evaporar en bao de agua y el

residuo redisolverse en 1mL de cido clorhdrico al

1%. Si el extracto es acuoso, a la alcuota se le aadir

I gota de cido clorhdrico concentrado, (calentar

suavemente y dejar enfriar). Con la solucin acuosa

cida se realizar el ensayo, se aadir III gotas del

reactivo de Dragendorff.

ENSAYO DE MAYER: Se realizar segn la forma

descrita anteriormente, hasta obtener una solucin

cida. Se aadir luego, una pizca de cloruro de sodio

22

en polvo, se agitar y filtrar. Se ha de aadir II III

gotas de la solucin reactiva de Mayer.

ENSAYO DE WAGNER: Se partir al igual que en

los casos anteriores de la solucin cida, se aadir II

III gotas del reactivo y clasificando los resultados de

la misma forma.

ENSAYO DE BALJET: Permitir reconocer la

presencia de cumarinas. Para ello, si la alcuota del

extracto no se encontrase en alcohol, debe evaporarse

el solvente en bao de agua y redisolverse en la menor

cantidad de alcohol (1mL). En estas condiciones se

adicionar 1mL del reactivo, considerndose un

ensayo positivo la aparicin de coloracin o

precipitado rojo.

ENSAYO DE HIDROXAMATO FRRICO

PARA CUMARINAS: Se colocar una gota del

extracto en una placa de porcelana y se aadir luego,

I gota de clorhidrato de hidroxilamina disuelto en

etanol al 10%. Se aadirn unas gotas de hidrxido de

potasio al 10% en etanol y se calentar a la llama

hasta burbujeo, posteriormente, han de agregarse unas

gotas de cido clorhdrico 0.5mol/L y una gota de

23

cloruro frrico al 1%. La reaccin se considera

positiva si aparece una coloracin violeta.

ENSAYO DE BORNTRAGER: Permitir reconocer

la presencia de quinonas. Para ello si la alcuota del

extracto no se encontrase en cloroformo, el solvente

deber evaporarse en bao de agua y el residuo

redisolverse en 1mL de cloroformo. Se agregar 1mL

de hidrxido de sodio, hidrxido de potasio amonio

al 5%. Se agitar, mezclando las fases y se dejar en

reposo hasta su ulterior separacin. Si la fase acuosa

alcalina (superior) se coloreara de rosado o rojo.

ENSAYO DE LIEBERMANN-BURCHARD:

Permitir reconocer la presencia de triterpenos y/o

esteroides. Para ello, si la alcuota del extracto no se

encontrase en cloroformo, el solvente deber

evaporarse en bao de agua y el residuo redisolverse

en 1mL de cloroformo. Se adicionar 1mL de

anhdrido actico y se mezcla bien. Por la pared del

tubo de ensayo se dejarn resbalar II a III gotas de

cido sulfrico concentrado sin agitar. Un ensayo

positivo se ha de reconocerse por un cambio rpido de

coloracin:

24

IMPORTANTE: Para realizar este ensayo no puede

haber agua en el medio de reaccin, pues sta con el

cido sulfrico reacciona de forma violenta y puede

ocurrir un accidente.

ENSAYO DE CATEQUINAS: Para ello se tomar I

gota de la solucin alcohlica, con la ayuda de un

capilar se aplicar sobre papel filtro. Sobre la mancha

se aplicar solucin de carbonato de sodio. La

aparicin de una mancha verde carmelita a la luz UV,

ha de indicar un ensayo positivo.

ENSAYO DE RESINAS: Para detectar este tipo de

compuesto, se aadir a 2 mL de la solucin

alcohlica, 10mL de agua destilada. La aparicin de

un precipitado indicar un ensayo positivo.

ENSAYO DE FEHLING: Permitir reconocer en un

extracto la presencia de azcares reductores. Para ello,

si la alcuota del extracto no se encontrase en agua,

deber evaporarse el solvente en bao de agua y el

residuo redisolverse en 1 a 2mL de agua. Se

adicionarn 2 mL del reactivo y se calentar en bao

de agua 5 a 10min. El ensayo se considerar positivo

si la solucin se colorea de rojo o aparece precipitado

rojo.

25

ENSAYO DE LA ESPUMA: Permitir la presencia

de saponinas. De modo que si la alcuota se

encontrase en alcohol, se ha de diluir con cinco veces

su volumen en agua y se agitar, dicha mezcla,

fuertemente durante 5 a 10min. El ensayo se

considerar positivo si apareciese espuma en la

superficie del lquido de ms de 2 mm de altura y

persistente por ms de 2min.

ENSAYO DEL CLORURO FRRICO: Permitir

reconocer la presencia de compuestos fenlicos y/o

taninos en un extracto vegetal. Si el extracto de la

planta se realizara con alcohol, el ensayo determinar

tanto fenoles como taninos. A una alcuota del

extracto alcohlico se le han de aadir III gotas de una

solucin de tricloruro frrico al 5% en solucin salina

fisiolgica. Si el extracto es acuoso, el ensayo

determinar fundamentalmente taninos. A una

alcuota del extracto se aadir acetato de sodio para

neutralizar y III gotas de una solucin de tricloruro

frrico al 5% en solucin salina fisiolgica, un ensayo

positivo puede dar la siguiente informacin general:

o Coloracin rojo-vino: compuestos fenlicos en

general.

26

o Coloracin verde intensa: taninos del tipo

pirocateclicos.

o Coloracin azul, taninos del tipo pirogalotnicos.

ENSAYO DE LA NINHIDRINA: Permitir

reconocer la presencia de aminocidos libres o de

aminas en general. Se tomar una alcuota del extracto

en alcohol, o el residuo de la concentracin en bao

de agua, si el extracto se encontrase en otro solvente

orgnico, se mezclarn con 2mL de solucin al 2% de

ninhidrina en agua. La mezcla se calentar 5 a 10min

en bao de agua. Este ensayo se considerar positivo

cuando se desarrolle un color azul violceo.

ENSAYO DE SHINODA: Permitir reconocer la

presencia de flavonoides en un extracto de un vegetal.

Si la alcuota del extracto se encontrase en alcohol, se

diluir con 1mL de cido clorhdrico concentrado y un

pedacito de cinta de magnesio metlico. Despus de la

reaccin se esperar 5min, se aadir 1mL de alcohol

amlico, se mezclan las fases y se dejar reposar hasta

que se separen. Si la alcuota del extracto se

encontrase en agua, se proceder de igual forma, a

partir de la adicin del cido clorhdrico concentrado.

El ensayo se considerar positivo cuando el alcohol

27

amlico se coloree de amarillo, naranja, carmelita o

rojo; intensos en todos los casos.

ENSAYO DE KEDDE: Permitir reconocer en un

extracto la presencia de glucsidos cardiotnicos. Una

alcuota del extracto en etanol se mezclar con 1mL

del reactivo y se dejar reposar durante 5 a 10 min. En

un ensayo positivo se desarrollar una coloracin

violcea, persistente durante 1 a 2 h.

ENSAYO DE ANTOCIANIDINAS: Permitir

reconocer la presencia de flavonoides. Se calentarn

2mL del extracto etanlico 10min. con 1mL de HCl

q.p. se dejar enfriar y se aadir 1mL de agua y 2mL

de alcohol amlico. Se agitar y se dejar separar las

dos fases. La aparicin de color rojo a marrn en la

fase amlica ser indicativa de un ensayo positivo.

ENSAYO DE MUCLAGOS: Permitir reconocer la

presencia de una estructura tipo polisacrido, el cual

formar un coloide hidrfilo de alto ndice de masa

que aumenta la densidad del agua donde se extrae.

Para ello una alcuota del extracto se enfriar en agua

de 0 a 5 C y si la solucin tomase una consistencia

gelatinosa el ensayo es positivo.

28

ENSAYO DE PRINCIPIOS AMARGOS Y

ASTRINGENTES: El ensayo se realizar,

saboreando I gota del extracto acuoso del vegetal y

reconociendo el sabor de cada uno de estos principios,

bien diferenciados al paladar.

ENSAYO DE ACEITE FIJO, SECANTE O

ESENCIAL: Se tomarn 5mL del extracto y se dejar

evaporar sobre una luna de reloj o placa petri a

temperatura ambiente. La aparicin de un lquido

despus de la evaporacin, si dejase manchas de grasa

sobre el papel de filtro indicar presencia de aceite

fijo. Si al evaporarse el disolvente apareciera una

pelcula fina resinosa, sta indicar la presencia de

aceites secantes. Si al evaporarse el disolvente

apareciera un lquido oleoso aromtico que no deje

mancha de grasa sobre el papel de filtro indicar la

presencia de aceite esencial.

ENSAYO DE HIDROCARBUROS: Se tomarn

10mL del extracto y se dejar evaporar al aire, se

disolver el residuo obtenido en acetona calentando

suavemente sobre bao de agua, de ser necesario. Se

dejar algunas horas en el refrigerador. La aparicin

29

de un precipitado, indicar la presencia de

hidrocarburos.

ENSAYO DE CAROTENOS: Si el ensayo de

hidrocarburos resultara positivo, se proceder a filtrar

el precipitado obtenido y disolver el residuo en 2mL

de cloroformo. Se tomar la solucin clorofrmica y

se aadir reactivo de Carr-Price. La aparicin de una

coloracin verde-azulada indicar la presencia de

carotenos.

En el estudio fitoqumico se buscarn los siguientes

componentes:

Alcaloides

Aceites esenciales

Aminocidos

Antocianidinas

Azcares Reductores

Carotenos

Catequinas

Compuestos grasos

Cumarinas

Esteroides

30

Fenoles

Flavonoides

Glicsidos cardiotnicos

Hidrocarburos

Lactonas

Muclagos

Quinonas

Resinas

Saponinas

Taninos

Triterpenoides

6.- TRATAMIENTO DE RESULTADOS

Los resultados se reportarn en cuadros utilizando el programa de Microsoft

Office , donde se indicar ausencia (-) o presencia (+) de los

fitoconstituyentes.

31

REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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Edit. Acribia S.A. Espaa. Pp. 157 - 200.

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11. TASSORELLI C, GRECO R, MORAZZONI P, RIVA A, SANDRINI G,

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33

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parthenolide-dependent proapoptotic activity in cancer cells. Folia Histochem

Cytobiol. 2008; 46(2):129-35.

34

ANEXO

35

ESQUEMA I

EXTRACCIN SUCESIVA DEL MATERIAL VEGETAL PARA LA APLICACIN DE

TCNICAS DE TAMIZAJE FITOQUMICO

Extraer con 150 mL de ter dietlico

por maceracin durante 48 horas a

temperatura ambiente

FILTRAR

EXTRACTO DE TER

DIETLICO

Medir volumen y calcular

concentracin

RESIDUO SLIDO Pesar y secar

EXTRAER CON 3 VECES EL

PESO DEL RESIDUO EN

VOLUMEN CON ETANOL DE 70

POR MACERACIN DURANTE

48 HORAS

FILTRAR

RESIDUO SLIDO

Pesar y secar

EXTRAER CON 3 VECES EL PESO DEL

RESIDUO EN VOLUMEN CON AGUA

DESTILADA POR MACERACIN

FILTRAR

EXTRACTO ALCOHLICO DE 70

Medir volumen y calcular concentracin

EXTRACTO ACUOSO

Medir volumen y calcular concentracin

RESIDUO SLIDO

Pesar y secar

MATERIAL VEGETAL

50 g

36

ESQUEMA II

REACCIONES A REALIZAR EN EL EXTRACTO DE TER DIETLICO

EXTRACTO DE TER

DIETLICO

DIVIDIR EN FRACCIONES

5mL

ENSAYO DE

SUDAN

(Aceites y

Grasas)

15mL (dividido en 3

porciones)

ENSAYOS DE

DRAGENDORFF

MAYER Y WAGNER

(Alcaloides)

10 mL

ENSAYO DE

HIDROCARBUROS

5mL

ENSAYO DE

LIEBERMANN-

BUCHART

(Triterpenos -

Esteroides)

2 mL

ENSAYO DE

CAROTENOS

5 mL

ENSAYO DE

ACEITES FIJO,

SECANTE O

ESENCIAL

I gota

ENSAYO DE

HIDROXAMATO

FRRICO

(Cumarinas)

5 mL

ENSAYO DE

LIEBERMANN-

BUCHART

(Triterpenos -

Esteroides)

5mL ENSAYO DE

BALJET (Lactonas y

Cumarinas)

15 mL (dividido en 3

porciones)

ENSAYOS DE

DRAGENDORFFMAYER

Y WAGNER

(Alcaloides)

EXTRACTO DE

TER DIETLICO

37

ESQUEMA III

REACCIONES A REALIZAR EN EL EXTRACTO ALCOHOLICO AL 70

EXTRACTO ALCOHLICO


1 mL ENSAYO

DE CATEQUINAS

2 mL

ENSAYO

DE

RESINAS

2 mL

ENSAYO DE FELHING (Azcares

reductores)

2 mL ENSAYO DE

BALJET (Lactonas)

2 mL

ENSAYO DE LIEBERMAN-BOURCHARD (Triterpenos y Esteroides)

2 mL ENSAYO DE

ESPUMA (Saponina)

2 mL ENSAYO DE

FeCl3 (Fenoles y Taninos)

2 mL ENSAYO DE NINHIDRINA (Aminocidos)

2 mL ENSAYO DE

BORNTRAGER (Quinonas)

2 mL ENSAYO DE

KEDDE (Cardenlidos)

2 mL ENSAYO DE

SHINODA (Flavonoides)

2 mL ENSAYO DE

ANTOCIANIDINA

6 mL en 3

porciones

ENSAYOS DE

DRAGENDORFF

MAYER Y

WAGNER

(Alcaloides)

38

ESQUEMA IV

REACCIONES A REALIZAR EN EL EXTRACTO ACUOSO

5 mL en 3 porciones

ENSAYO DE DRAGENDORFF,

MAYER Y WAGNER

(Alcaloides)

2mL

ENSAYO DE CLORURO FERRICO (Taninos)

2 mL

ENSAYO DE

SHINODA

(Flavonoides)

2mL

ENSAYO DE FEHLING (Azcares Reductores)

2 mL

ENSAYO DE

ESPUMA

(Saponinas)


10mL ENSAYO DE

MUCILAGOS

I II gotas ENSAYO DE

PRINCIPIOS AMARGOS Y ASTRINGENTES

EXTRACTO ACUOSO

proyecto tesis marihuayta

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