proyecto informe final biotecnología vegetal
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8/18/2019 Proyecto Informe Final Biotecnología Vegetal
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UNIVERSIDAD POLITECNICA SALESIANA
INGENIERIA EN BIOTECNOLOGIA DE LOS
RECURSOS NATURALES
BIOTECNOLOGIA VEGETAL
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INTRODUCCI2N
El mortiño (Vaccinium floribundum), de la familia Ericaceae, llamado también uva demonte, es una fruta nativa de los páramos ecuatorianos (Loján, 2003). Es un arbusto
peueño, !eneralmente de " a # m de alto. $osee flores blancas con l%neas rosadas,
de unos & mm de lar!o. 'us frutos son baas !lobosas de & a "0 mm de diámetro, de
color prpura oscuro en la madure*, con cáli* persistente en el ápice+ pulpa comestible
de sabor al!o ácido, pero a!radable, con semillas numerosas, peueñas (arc%a,
20"3).
En páramos ecuatorianos es considerada endémica -a sido utili*ada por sus -abitantes
desde tiempos inmemoriales principalmente en el %a de los ifuntos para la
elaboraci/n de la tradicional colada morada. En la actualidad aunue es poco comn se
lo emplea para consumo fresco as% como en ju!os, mermeladas dulces. 'us frutos
tienen contenidos importantes de a*cares, minerales, antioidantes, vitaminas del
complejo 1, minerales como potasio, calcio, f/sforo (orales, 20""). $or sus
propiedades f%sico u%micas presenta la ventaja de ser refri!erado sin alteraci/n de sus
caracter%sticas or!anolépticas nutricionales, variaciones en peso o volumen, para la
l b i/ i d l i d l d l l f ili d
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OBJETIVO GENERAL3
4 esarrollar un cultivo in vitro de ortiño (Vaccinium floribundum Kunth),
utili*ando dos medios de cultivo artesanales a bases de 7u!o de $iña 7u!o de
caña.
OBJETIVOS ESPEC45ICOS3
• esarrollar el protocolo de desinfecci/n /ptimo para eplantes de mortiño
(Vaccinium floribundum Kunth).• Evaluar el porcentaje de crecimiento de eplantes en funci/n del medio.• eterminar el medio de cultivo artesanal ideal para el crecimiento in vitro de
mortiño (Vaccinium floribundum Kunth).
METODOLOG4A
Pre#ara67n de Med6o de 8l*6!o3
• Etraer *umo de piña ju!o de caña.6il i b l id d d l di
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'iembra 0,",2,3,#,&:nstrumental; étodo
mero. apacidad.6rasco de loro " 300 ml6rascos de siembra "8 2&0 ml
6rasco de =lco-ol ?0@ 2&00 ml?&0 ml
ajas $etri 2 &0 ml
6rascos de a!ua -ervida &?00 ml&00 ml200 ml
etal$in*as 2 4=!uja de disecci/n " 4étodo
$ l
alor seco; Aorno de cocina a ?0B 20 min
aracter%sticas; >mero. 5amaño
$apel filtro 1& cm
2
"0 cm2
$apel cocina 1& cm
2
"0 cm2
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Pro*oolo" de de"6n9e67n3
S6e%&ra :0 (-1;-0;/0-alC) al 2.&@ por cinco minutos, reali*ar cinco
l d - id li i d i d f l
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(>alC) 2.&@ "0 min=!ua -ervida 300 ml I
l−1
& min I3
'iembra "Jemas
"8H"0H20"&
=!ua
corriente
300 ml I
l−1
DDD=lco-ol ?0@ 3 min(>alC) 2.&@ 3 min=!ua
destilada
300 ml I
l−1
3 min I3
S6e%&ra :- (=;--;/0-
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$rotocolo 2 6ec-a; eactivo F G5:E$C
Eposici/n
ontaminaci/n
'iembra 2
'emillas?H""H20"&
=!ua D
7ab/n
L%uido
&00 mlI
l−1
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a!itaci/n
D
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l−1
4
=lco-ol ?0@ & minloro "0@ & min=!ua -ervida &00 ml I
l−1
& min I3
'iembra 2?H""H20"&
=!ua D7ab/n
L%uido
&00 mlI
l−1
& min D
a!itaci/n
D
=!ua -ervida &00 ml I
l−1
4
l - l i
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-ervida cada lavado por & minutos. 'e reali*/ los cortes del tallo dentro de una soluci/n
de a!ua D ju!o de lim/n antes de introducir los eplantes en el medio.
Explante: Semillas
Las semillas se colocaron sobre una toalla de cocina, ue fue utili*ada como una bosa
de té, para poder sumer!ir las semillas en las soluciones primero se -i*o un lavado en
una me*cla de a!ua D jab/n por cinco minutos en a!itaci/n, lue!o se -i*o un lavado con
a!ua destilada para uitar toda el a!ua con jab/n, lue!o se sumer!e en alco-ol ?0@
cinco minutos, se sumer!e loro al "0@ por cinco minutos, se -ace tres lavados en
a!ua -ervida cada uno por & minutos se introduce en el medio de cultivo estéril.
$rotocolo 6ec-a; eactivo F G5:E$C
Eposici/nontaminaci/n
'iembra 2
'emillas"3H""H20"&
=!ua D
7ab/n
L%uido
&00 mlI l−1 & min D
a!itaci/n
4 4=!ua
-ervida&00 mlI l
−1
4
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'e procedi/ a filtrar el ju!o de caña puro en papel filtro -asta obtener un color másclaro, se coloc/ &00ml en una olla a la ue se añadi/ &00ml de a!ua+ para ue
!elifiue se añadi/ #&! de !elatina sin sabor (elK-ada) al final para dar lacoloraci/n deseada se utili*/ colorante ve!etal 34# !otas.
• $iña
'e procedi/ a filtrar el ju!o de piña etra%do ese momento en papel filtro -astaobtener un color más claro, se coloc/ 300ml en una olla se llev/ a ebullici/n por
poco tiempo para ue se desnaturalice la bromelina+ posteriormente se añadi/?00ml de a!ua+ para ue !elifiue se añadi/ 80! de !elatina sin sabor (elK-ada) alfinal para dar la coloraci/n deseada se utili*/ colorante ve!etal 34# !otas.
$rotocolo de desinfecci/n
Jemas ailares
$rocedimiento; Los tallos con presencia de emas ailares se lavaron en a!ua corriente para retirar restos de tierra e impure*as, lue!o se sumer!i/ en una me*cla de a!ua de lallave D jab/n l%uido a la ve* ue con auda de un cepillo dental suavementefre!ábamos el los tallos con emas, esto por cinco minutos, con la finalidad de uitar maor cantidad de impure*as tierra ue se encuentra entre ad-erida a los tallo las-ojas, lue!o a los se!mentos de tallo (3 cm), se los sumer!i/ por cinco minutos en
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=lco-ol ?0@ & minloro "0@ & min
=!ua-ervida
&00 ml I l−1 & min I3
'iembra 3Jemas 08H"2H20"&
=!ua D7ab/n
L%uido8 mlI l
−1 & min Da!itaci/n
DD
=!ua
-ervida &00 ml Il−1
4=lco-ol ?0@ & minloro "0@ & min=!uadestilada
&00 ml I l−1
& min I3
S6e%&ra :. (-/;-/;/0-
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loro "0@ & min=!ua -ervida &00 ml I
l−1
& min I3
'iembra #Jemas
2H"2H20"& =!ua D7ab/nL%uido
&00 mlI
l−1
& min Da!itaci/n
D
=!ua -ervida &00 ml I
l−1
4
=lco-ol ?0@ & minloro "0@ & min=!uadestilada
&00 ml I
l−1
& min I3
Pro*oolo de e"*er6l6a67n de %a*er6al3
$ara la esterili*aci/n del instrumental utili*ado en la siembra, tanto para semillas como para emas
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'iembra # "2H"2H20"&:nstrumental; Mtodo
mero. apacidad.6rasco de loro " 300 ml6rascos de siembra "8 2&0 ml6rasco de =lco-ol ?0@ 2 &00 ml
?&0 mlajas $etri 2 &0 ml
6rascos de a!ua -ervida & ?00 ml&00 ml200 ml
etal $in*as 2 4=!uja de disecci/n " 4
Mtodo
$apel alor seco; Aorno de cocina a ?0B 20 min
aracter%sticas; >mero. 5amaño$apel filtro 8 & cm2
"0 cm2
$apel cocina 8 & cm2
"0 cm2
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S6e%&ra :< (/0;-/;/0-
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(' &.#) aña Darb/n
0,082& &,82& 0,003?& 0,082& 0,"2&
5otal de componentesutili*ados
0,2& L 22,& ! 0,0"& ! 0,2& L
Elaboraci/n edio de ultivo N7u!o de $iña D arb/nO
'e procedi/ a filtrar el ju!o de piña puro en papel filtro -asta obtener un color másclaro, se coloc/ &00ml en una olla, más ?& ! de !elatina sin sabor 0.03 ! de carb/nactivado ue es un compuesto antioidante a ue contribue a absorber compuestosfen/licos. 'e adiciona en concentraciones cercanas al 0." 4 3@ (pesoHvol), ('-arr,=dema, M =bedini, 20"&). Lue!o se añaden los &00ml de a!ua se procede a calentar -asta -omo!eni*ar la me*cla, por aproimadamente unos 20 minutos para favorecer a la
desnaturali*aci/n de la 1romelina ue no afecte a la !elificaci/n.
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impure*as tierra ue se encuentra ad-erida a los tallo las -ojas, lue!o a los
se!mentos de tallo (3 cm), se los sumer!i/ por " minuto en alco-ol al ?0 @, lue!o se lossumer!i/ en loro (-ipoclorito de sodio) al 20@ por "0 minutos, posteriormente sereali*/ tres lavados con a!ua -ervida cada lavado por & minutos, pare retirar totalmenteun eceso de u%micos ue afecten al eplante. 'e reali*/ los cortes del tallo dentro de
una soluci/n de a!ua D ju!o de lim/n antes de introducir los eplantes en el medio.
PROTOCOLO DE DESIN5ECCI2N YEMAS,
Eplante$C5CCLCE':>6E:Q>
=LCACL@vHv
5iempoeposici/
n
F>alCG@vHv
5iempoEposici/n
Lavado=!ua
Aervida(J &.") ?0@ " min 20@ "0 min 3(J &.2) ?0@ " min 20@ "0 min 3(J &.3) ?0@ " min 20@ "0 min 3(J &.#) ?0@ " min 20@ "0 min 3
PROTOCOLO DE DESIN5ECCI2N SEMILLAS,
Eplante$C5CCLCE':>6E:Q>
=LCACL
@vHv5iempo
eposici/n
F>alCG
@vHv
5iempo
Eposici/n
Lavado
=!uaAervida(' &.") ?0@ " min 20@ "0 min 3(' &.2) ?0@ " min 20@ "0 min 3(' &.3) ?0@ " min 20@ "0 min 3(' &.#) ?0@ " min 20@ "0 min 3
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CONCLSIONES3
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BIBLIOGRA5IA
arc%a, 7. =. ("# de 6ebreo de 20"3). ecuperado el "" de >oviembre de 20"&, de
-ttp;HHRanobosur.blo!spot.comH20"3H02Harbol4frutal4c-ivacu.-tml
Loján, L. 2003. El verdor de los andes ecuatorianos; realidades promesas. $roecto
esarrollo 6orestal $articipativo en los =ndes, pá!. 2P8.
Luc-i, . (30 de ao de 20"2). ecuperado el "" de >oviembre de 20"&, de
-ttp;HHurandia.blo!spot.comH20"2H0&H-ierbas4del4planeta4sol4se!un4SilliamT30.-tml
orales, =. 2002U20"". 6rutoterapia, nutrici/n salud $lus
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56 > Con*a%6na67n "e%6lla" 56 . 5ra"o" de "e%6lla" "6n on*a%6na67n
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56 - Ye%a" on*a%6nada" en %ed6o de #6a. 56 / Ye%a" on*a%6nada" en %ed6o de aa
Ta&la
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