PRICK TEST Ig E

ESPECIFICA

Dr. Edgar Matos BenavidesInmunólogo Alergólogo

PRICK TESTFue introducida por Blackley a finales del siglo XIX y descrita por primera vez por Lewis y Grant en 1924 Pero no fue hasta 1959, EBRUSTER H ,publico “El prick test un Nuevo test cutaneo para el diagnostico de los desordenes alergicos” Es una prueba rápida, sencilla, de elevada especificidad y sensibilidad, de alta fiabilidad y de bajo coste, que resulta muy útil para confirmar una sospecha diagnóstica de alergia.

EBRUSTER H: The prick test, a recent cutaneous test for the diagnosis of allergic disorders. Wien Klin Wochenschr 1959, 71:551–554

PRICK TESTSe basa en la reproducción de la reacción de HS tipo I (IgE – mediada), al introducir en la epidermis con una lanceta adecuada, un extracto del alérgeno sospechoso que desencadenara la liberación de histamina de los mastocitos de la piel provocando una pápula y eritema en la zona de punción.

Demoly P, Bousquet J, Manderscheid JC, Dreborg S, Dhivert H, Michel FB. Precisión of skin prick and punture tests with nine methods.J. Allergy Clin Inmunol. 2001; 88:758-62.

PRICK TESTEs un método fiable para diagnosticar la enfermedad alérgica mediada por IgE en pacientes con rinoconjuntivitis, asma, anafilaxias, eczema atópico y sospecha de alergia a medicamentos y alimentos. Proporciona evidencia de sensibilización y puede ayudar a confirmar el diagnóstico de un paciente sospechoso de Alergia.

The skin prick test – European standardsLucie Heinzerling*, Adriano Mari, Karl-Christian Bergmann, Megon Bresciani, Guido Burbach, Ulf Darsow,Stephen Durham, Wytske Fokkens, Mark Gjomarkaj, Tari Haahtela, Ana Todo Bom, Stefan Wöhrl, Howard Maibach and Richard Lockey , Allergy 2013, 3:3

IndicacionesSi se sospecha de una persona con una reacción de hipersensibilidad tipo I (tipo inmediato) alergia, basado en la historia clínica y los síntomas clínicosSPT debe ser interpretado con cuidado a la luz de la historia clínica, para que proceda asesoramiento sobre medidas de evitación y en caso sea necesario, el alérgeno correcto (s) recetado parainmunoterapia específica (SIT). The skin prick test – European standardsLucie Heinzerling*, Adriano Mari, Karl-Christian Bergmann, Megon Bresciani, Guido Burbach, Ulf Darsow,Stephen Durham, Wytske Fokkens, Mark Gjomarkaj, Tari Haahtela, Ana Todo Bom, Stefan Wöhrl, Howard Maibach and Richard Lockey , Allergy 2013, 3:3

PRICK TEST

PRICK TEST

+ Diámetro 3 mm

15 minutos

PRICK-FILM. LECTURA DE PRICK TEST CON

ESCÁNER

PRICK-FILM. LECTURA DE PRICK TEST CON ESCÁNER

VARIANTES DEL PRICK-TEST PRICK BY PRICK

CONDICIONES DE LOS ALERGENOS

Los Alérgenos usados idealmente debe ser estandarizado basado en el contenido de los determinantes mayores y menores ,ya que no todos los pacientes son alérgicos a cada antígeno dentro de un extracto individual. Deben tener la consistencia de lote a lote y los resultados de las pruebas de la piel deben ser comparables, cuando se utilizan los mismos extractos de diferentes fabricantes.

The skin prick test – European standardsLucie Heinzerling*, Adriano Mari, Karl-Christian Bergmann, Megon Bresciani, Guido Burbach, Ulf Darsow,Stephen Durham, Wytske Fokkens, Mark Gjomarkaj, Tari Haahtela, Ana Todo Bom, Stefan Wöhrl, Howard Maibach and Richard Lockey , Allergy 2013, 3:3

CONDICIONES DE LOS ALERGENOS

Cada empresa utiliza su propio material de referencia interna y unidades únicas para expresar potencias. Tal variabilidad entre los diferentes fabricantes conduce a una incapacidad para comparar diferentes productos y resultados de la pruebaEn 2001, un proyecto financiado por la UE, el proyecto CREATE, se introdujo para fomentar la estandarización de extractos alergénicos en base a su contenido de alérgeno principal (s). Evalua alérgenos recombinantesThe skin prick test – European standardsLucie Heinzerling*, Adriano Mari, Karl-Christian Bergmann, Megon Bresciani, Guido Burbach, Ulf Darsow,Stephen Durham, Wytske Fokkens, Mark Gjomarkaj, Tari Haahtela, Ana Todo Bom, Stefan Wöhrl, Howard Maibach and Richard Lockey , Allergy 2013, 3:3

CONDICIONES DE LOS ALERGENOS

Extractos no debe contener conservantes que pueden causar reacciones de falsos positivos, por ejemplo, mertiolato de sodio. Tampoco deben ser mezclados con otros alérgenos, por ejemplo, ácaros del polvo doméstico con extracto de caspa de perro.Cuando se prueba con alérgenos no comerciales, existe una verdadera necesidad de utilizar las pruebas de control en sujetos no alérgicos al comparar los resultados con los sujetos que son alérgicas.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DEL SPT

Específico 70-95% Sensible 80-97%

Crobach MJ, Hermans J, Kaptein AA, Ridderikhoff J, Petri H, Mulder JD: The diagnosis of allergic rhinitis: how to combine the medical history with the results of radioallergosorbent tests and skin prick tests. Scand J Prim Health Care 1998, 16(1):30–36

ALERGIAS POR INHALACIÓN

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DEL SPTEl valor predictivo positivo para el diagnóstico de la rinitis alérgica basado sólo en la historia clínica es

77% Rinitis alérgica persistente 82-85% Rinitis alérgica estacional intermitente . Esto aumenta al 97-99% si se usa SPT

Crobach MJ, Hermans J, Kaptein AA, Ridderikhoff J, Petri H, Mulder JD: The diagnosis of allergic rhinitis: how to combine the medical history with the results of radioallergosorbent tests and skin prick tests. Scand J Prim Health Care 1998, 16(1):30–36

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DEL SPT

Específico 20-60% Sensible 30-90%

Verstege A, Mehl A, Rolinck-Werninghaus C, Staden U, Nocon M, Beyer K,Niggemann B: The predictive value of the skin prick test weal size for the outcome of oral food challenges. Clin Exp Allergy 2005, 35(9):1220–1226.

ALERGENOS ALIMENTARIOS

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS DEL SPTEl valor predictivo positivo para el diagnóstico de

Leche de vaca 76%Huevo de gallina 89% .

Verstege A, Mehl A, Rolinck-Werninghaus C, Staden U, Nocon M, Beyer K,Niggemann B: The predictive value of the skin prick test weal size for the outcome of oral food challenges. Clin Exp Allergy 2005, 35(9):1220–1226.

Gal d 1 = Gallus domesticus, alergeno nº 1

HuevoGal d 1

Hierba TimoteaPhl p 1

AbedulBet v 1

CacahueteAra h 2

Abeja de la mielApi m 1

IgE ESPECIFICA

ANTECEDENTES• 1967 Descubrimiento de la Inmunoglobulina IgE.

• 1971 Pharmacia adquiere Allergon, líder en producción de alergenos.

• 1972 PRIST® Phadebas® IgE Test. Primer Test de Alergia en el Mundo.

• 1974 Fue lanzado Phadebas RAST®, primer Test en el mundo IgE Alergeno-específico.

• 1986 Pharmacia introduce Phadiatop® Primer marcador de ATOPIA en el Mercado.

• 1989 Pharmacia CAP System: Tecnología ImmunoCAPTM

ANTECEDENTES

• 1995 UniCAP 100 ® sistema automatizado para test de alergia.

• 2001 UniCAP® 1000 automatización a gran escala de los test IgE.

• 2002 Phadiatop® Infant El primer test de atopia en niños pequeños.

• 2002 Mas de 500 alergenos disponibles para test IgE.

• 2004 ImmunoCAP 250 Calidad y automatización para laboratorios

medianos.

• 2005 ImmunoCAP Rapid:El primer test para atención primaria.

• 2006 Phadia: Nuevo nombre de la compañía.

• 2007 ISAC (Immuno Solid-phase Allergen Chip ) 23 / 112

INMUNOBLOT“PANELES DE ALERGIA”

FUNDAMENTO : La prueba se basa en el principio del análisis del immunoblot. Los alérgenos especiales están pegados a la superficie de las membranas de la nitrocelulosa que se colocan en un canal de reacción.

INMUNOBLOT“PANELES DE ALERGIA”

B

NBT

B

B NBT

 

Comparación con el método de referencia

(IgE):

Comparación con el skin-prick test:

Sensibilidad: 84.3 % Sensibilidad: 95.1 %

IMMULITE 2500 3gAllergy

FUNDAMENTO

Es un análisis enzimoinmunométrico quimioluminiscente en fase sólida, en dos pasos, •Se basa en cinéticas en fase líquida en formato de bola•Representa un avance significativo sobre los métodos convencionales basados en la unión de los alérgenos a un soporte sólido, como los discos de papel. •Los alérgenos se unen covalentemente a una matriz polímero/copolímero soluble, la cual a su vez está marcada con un ligando. El uso de un copolímero aminoacídico aumenta la cantidad de alérgeno que puede soportar la matriz.

TECNOLOGÍA IMMUNOCAP

IgE del paciente

Alergenos (acoplado al ImmunoCAP)

Anti-IgE paciente unido a enzima β-GalactosidasaComplejo: Alergeno-IgE paciente

Sustrato de la enzima β-GalactosidasaComplejo: Alergeno-IgE paciente-Anti-IgE

Reacción enzimática: β-Galactosidasa

Sustrato no fluorescente Sustrato fluorescente Detección (4 metil umbiliferona)

FEIA: Fluoroenzimoimmunoensayo

Fases sólidas

• Capacidad de ligando: tubo recubierto, disco papel activado, esponja celulosa.

Tuborecubierto

Disco papelactivado

Esponja celulosaactivada

50 1501

Patrón WHO 75/502 Tecnología ImmunoCAP™

W H O

El primer test alergológico del mundo con calibración

directa según patrones 2º IRP WHO 75/502 para IgE

Documento de consenso de la WAO, ARIA y GALEN sobre el diagnóstico molecular de las alergias

Giorgio Wlter Canonica, Ignacio J. Ansotegui, Ruby Pawankar, Peter Schmid-Grendelmeier, Mariaanne van Hage

VENTAJAS INCONVENIENTES• Método automático • 40ul de suero por alérgeno

• Ensayo cuantitativo • Un alérgeno por ensayo

• Alta sensibilidad • Detecta anticuerpos de baja afinidad que pueden ser clínicamente irrelevantes.

• Bajo coeficiente de variación

• Proteínas naturales o recombinantes o extractos crudos

• Adecuado para el control de la sensibilización

Ventajas e inconvenientes de ImmnunoCAP

Canonical et al. Worl Allergy Organization Journall 2013, 6:17

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOSResultados

cuantitativos KUA/l

Nivel de Anticuerpo Alergeno Específico

Resultado Semi Cuantitativo

(Clase)< 0.35 Ausente o no detectable 0

0.35 a < 0.7 Bajo 10.7 a < 3.5 Moderado 2

3.5 a < 17.5 Elevado 317.5 a <50 Muy elevado 450 a < 100 Muy elevado 5100 a más Muy elevado 6

Los valores son expresados en KUA/l, en donde A representa anticuerpos específicos de alérgeno.

SIMILITUDES Y DIFERENCIAS ENTRE LA TECNOLOGÍA PHADIA ” IMMUNOCAP™

IN VITRO Y LA PRUEBA CUTÁNEA IN VIVO Características Tecnología Phadia

ImmunoCAPPrueba Cutánea

Alta sensibilidad Si Si

Alta especificidad Si Si/No

Alta reproducibilidad Si No

Resultados cuantitativos Si Si/No

Calibrado según OMS Si No

Programa de Garantia de Calidad Si No

Prueba utilizable con independencia del tratamiento farmaceutico.

Si No

Prueba utilizable con independencia del estado cutaneo del paciente.

Si No

Canonical et al. Worl Allergy Organization Journall 2013, 6:17

TEST DE SCREENING

Diagnóstico Clínico:• Síntomas• HC• Anamnesis• Exploracion

Laboratorio:

PhadiatopPhadiatop infant

POSITIVO

Posteriores tests:

Ig E específicas

Test iniciales de screening

Cuantificación detallada e individualizada

Test de screening: Phadiatop infant

De 2 a 5 años:

Phadiatop Infant es un test in vitro que diferencian la enfermedad atópica de la no atópica. Es el primer paso diagnóstico cuando se sospecha de una alergia atópica.Este test desmuestra la presencia de alergia atópica frente a alérgenos inhalantes y alimentario más prevalentes representativos de esta edad y patología.

Phadiatop Infant contiene una selección de alérgenos alimentarios como leche, huevo, cacahuate, soja y gamba; además una mezcla de alérgenos inhalantes que incluyen ácaros, pólenes, epitelios de perro y gato y hongos. Estos alérgenos son responsables de más del 98% de los antígenos responsables de la sensibilización alérgica en niños menores de 5 años.

Phadiatop Infant

Específicidad 89%

Sensibilidad 98%

Test de screening: Phadiatop

+ de 5 años:

Si existe sospecha clínica de sensibilización a neumoalergenos la indicación es Phadiatop.

Phadiatop® contiene una mezcla de alérgenos inhalantes prevalentes, variables según el entorno geográfico entre los que se incluyen ácaros, pólenes, epitelios de perro y gato y hongos responsables de más del 90% de sensibilizaciones en niños mayores de 5 años.

Phadiatop

Especificidad 89.2%

Sensibilidad 97.7%

DIAGNOSTICO MOLECULAR DE ALERGIAS

Una fuente alergénica…

…contains thousands of molecules…

Molécula alergénica = componente

…de las que sólo algunas son alergénicas

Componentes alergénicos

Específicos Marcadores de reactividad cruzada

Sensibilización GENUINA a una fuente

Sensibilización a componentes presentes en varias fuentes

De la fuente alergénica al componente

Mejorar el diagnóstico en los pacientes polisensibilizados a alimentos y/o inhalantes. Detecta la presencia de anticuerpos de alergia (IgE) frente a un panel de 113 alérgenos con tan sólo una mínima cantidad de sangre!El método ISAC (Immuno Solid-phase Alleregen Chip) aplica la tecnología más moderna en biología molecular para la detección de reactividad

Componentes con reactividad cruzada

 La soja, el abedul y el cacahuete contienen componentes con elevada similitud

Documento de consenso de la WAO, ARIA y GALEN sobre el diagnóstico molecular de las alergiasGiorgio Wlter Canonica, Ignacio J. Ansotegui, Ruby Pawankar, Peter Schmid-Grendelmeier, Mariaanne van Hage

CONCLUSIÓN Y PERSPECTIVAS

GRACIAS

El Equipo de

TrabajoUAAI-INSN

GRACIAS