“ESTUDIO DEL CONTENIDO DE HIDROCARBUROS AROMÁTICOS

POLICÍCLICOS (HAPs) CARCINOGÉNICOS EN PESCADO Y

MARISCO DE LA COMUNIDAD AUTÓNOMA VASCA”

I.P.: Mª Dolores Guillén LorénPonente: Patricia Sopelana Garay

Grupo de Investigación PROCAYSEAL (Procesado, Calidad y Seguridad Alimentaria)

www.ehu.es/procaysealUPV/EHU

OBJETIVOS

1. Determinar el contenido de HAPs en los productos dela pesca más consumidos en la CAPV, incluyendoHAPs ligeros y pesados, así como sus derivadosalquilados.

Contribución a la valoración del grado de exposición de la población vasca a HAPs derivada del consumo de

pescado y marisco

2. Avanzar en el desarrollo metodológico para ladeterminación y control de HAPs en pescado ymarisco, estudiando las posibilidades de laMicroextracción en Fase Sólida (SPME) seguida deCromatografía de Gases/Espectrometría de Masas(CG/EM) para la extracción y determinación de estoscontaminantes en productos de la pesca.

Objetivos

Contribución al desarrollo de una metodología que permita “estimar”, de un modo sencillo y rápido, el grado

de contaminación por HAPs de pescado y marisco, facilitando así su control

MUESTRAS OBJETO DE ESTUDIO

Atún-Bonito-Salmón-Chicharro-Anchoa-Sardina-Salmonete

PESCADO “AZUL”

PESCADO “BLANCO” Merluza-Gallo-Bacalao-Rape-Besugo-Lubina

MOLUSCOS BIVALVOSMejillón-Almeja-Berberecho-Navaja

MOLUSCOS CEFALÓPODOS Calamar-Sepia-Pulpo

CRUSTÁCEOSLangostino-Gamba-Buey-Nécora-Cigala

METODOLOGÍA

1. Determinación de HAPs mediante SPME-CG/EM

Extracción de HAPs mediante SPME aplicada alespacio de cabeza de las muestras (HS-SPME)

Columna: HP-5-MS (60 m x 0,25 mm x 0,25 µm) Modo de adquisición: SIM y scan a la vez Identificación: SIM Semicuantificación: SIM

Desorción de los compuestos extraídos

Separación, identificación y semicuantificación deHAPs (CG/EM)

Metodología

En el inyector del cromatógrafo de gases A 250 ºC durante 5 min

Condiciones de extracción: 70 ºC - 55 min

Tipo de fibra: PDMS/DVB, 65 µm

2. Determinación de HAPs empleando unaMETODOLOGÍA basada en EXTRACCIÓN CONDISOLVENTE (ED-CG/EM)

Metodología

TRATAMIENTO ALCALINO DE LA MUESTRA(KOH, metanol)

EXTRACCIÓN LÍQUIDO-LÍQUIDO CON CICLOHEXANO)

AISLAMIENTO DE HAPs MEDIANTE TUBOS DE EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA (SILICAGEL)

SEPARACIÓN, IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE HAPs MEDIANTE CG/EM (SIM)

Clarificación del extracto

Filtración

Metodología

TRATAMIENTO ALCALINO DE LA MUESTRA(KOH, metanol)

EXTRACCIÓN LÍQUIDO-LÍQUIDO CON CICLOHEXANO)

AISLAMIENTO DE HAPs MEDIANTE TUBOS DE EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA (SILICAGEL)

Clarificación del extracto

Filtración

SEPARACIÓN, IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE HAPs MEDIANTE CG/EM (SIM)

2. Determinación de HAPs empleando unaMETODOLOGÍA basada en EXTRACCIÓN CONDISOLVENTE (ED-CG/EM)

Metodología

TRATAMIENTO ALCALINO DE LA MUESTRA(KOH, metanol)

EXTRACCIÓN LÍQUIDO-LÍQUIDO CON CICLOHEXANO)

AISLAMIENTO DE HAPs MEDIANTE TUBOS DE EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA (SILICAGEL)

Clarificación del extracto

Filtración

SEPARACIÓN, IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE HAPs MEDIANTE CG/EM (SIM)

2. Determinación de HAPs empleando unaMETODOLOGÍA basada en EXTRACCIÓN CONDISOLVENTE (ED-CG/EM)

Metodología

TRATAMIENTO ALCALINO DE LA MUESTRA(KOH, metanol)

EXTRACCIÓN LÍQUIDO-LÍQUIDO CON CICLOHEXANO)

AISLAMIENTO DE HAPs MEDIANTE TUBOS DE EXTRACCIÓN EN FASE SÓLIDA (SILICAGEL)

Clarificación del extracto

Filtración Columna: HP-5-MS (60 m x 0,25 mm x 0,25 µm) Modo de adquisición: SIM Identificación: SIM Cuantificación: SIM (patrones internos deuterados)

SEPARACIÓN, IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN DE HAPs MEDIANTE CG/EM (SIM)

2. Determinación de HAPs empleando unaMETODOLOGÍA basada en EXTRACCIÓN CONDISOLVENTE (ED-CG/EM)

RESULTADOS1. Análisis de las muestras por SPME-CG/EM

HAPs detectados

Naftaleno + derivados mono- y di-metilados Acenafteno Fluoreno

Acenaftileno Fenantreno + derivados mono-metilados

Fluoranteno Pireno

2 anillos

4 anillos

3 anillos

En todas las muestras de moluscosEn menos de la mitad de las muestras de crustáceos y pescado

Resultados - SPME

Abundancia de HAPs en los diferentes tipos demuestra

0

5.000.000

10.000.000

15.000.000

20.000.000

25.000.000

30.000.000

Área total HAPs

Proporciones de los distintos tipos de HAPs

0

20

40

60

80

100

Biv Cef Crus P. "azul" P. "blanco"

Biv Cef Crus P. azul P. blanco

% Naftaleno + derivados alquilados

0

1

2

3

4

5

6

7

8

Biv Cef Crus P. "azul" P. "blanco"Biv Cef Crus P. azul P. blanco

% Acenaftileno + Acenafteno + Fluoreno

0

2

4

6

8

10

Biv Cef Crus P. "azul" P. "blanco"

% Fenantreno + derivados alquilados

Biv Cef Crus P. azul P. blanco 0,00

0,50

1,00

1,50

2,00

2,50

Biv Cef Crus P. "azul" P. "blanco"

% Fluoranteno + Pireno (4 anillos)

Biv Cef Crus P. azul P. blanco

Resultados - SPME

2. Análisis del PERFIL COMPLETO de HAPs de una seriede muestras seleccionadas (ED-CG/EM)

Resultados - ED

HAPs detectados Naftaleno + derivados mono- y di-metilados Acenafteno Fluoreno Acenaftileno Fenantreno + derivados mono- y di-metilados Fluoranteno Pireno Benzo(a)antraceno Criseno + trifenileno Benzofluorantenos Benzo(e)pireno Benzo(a)pireno

+ derivados mono-metilados

Indeno(1,2,3-cd)pireno Benzo(ghi)perileno

2 anillos

3 anillos

4 anillos

5 anillos

6 anillos

Grado de contaminación de los diferentes tipos demuestra

Resultados - ED

020406080

100120140

Biv Cef Crust P. "azul" P. "blanco"

CONCENTRACIÓN TOTAL de HAPs (µg/kg)

Biv Cef Crus P. azul P. blanco

126,88 µg/kg (57,19 - 301,17) 65,17 µg/kg

(50,65 – 86,89)

55,29 µg/kg (49,59 - 60,98)

44,31 µg/kg (27,40 - 63,80)

85,87 µg/kg (35,69 - 183,08)

Proporciones de los distintos tipos de HAPs

Resultados - ED

2+3 anillos 4 anillos 5+6 anillos

0102030405060708090

100

BivalvosCefalópodosCrustáceosPescado "azul"Pescado "blanco"

%

Naftaleno + derivados alquilados

Resto de HAPs con 2-3 anillos

0

20

40

60

80

100

Suma:Benzo(a)antracenoCrisenoBenzo(b)fluorantenoBenzo(a)pireno

Benzo(a)pireno

Presencia de HAPs carcinogénicos

0,10 – 19,17 µg/kg < 30 µg/kg

0,18 - 2,52 µg/kg < 5 µg/kg

Productos de la pesca FRESCOS

Sólo límites para moluscos bivalvos(Reglamento (UE) Nº 835/2011)

Resultados - ED

Resto de productos estudiados

Indeno(1,2,3-cd)pirenoNaftaleno

HAP mayoritario

Resultados - ED

Otros HAPs “posiblemente carcinogénicos en humanos”según la clasificación de la IARC (grupo 2B)

Moluscos bivalvos

NaftalenoBenzo(a)antraceno

También HAPs incluidos en el grupo 2B

Resultados - SPME-ED

3. Comparación de los resultados obtenidos por SPME yED

SPME ED

Muestra Área fluoranteno

Área pireno [BaP] (µg/kg)

Mejillón 1.223.648 473.070 1,21Mejillón 444.637 151.254 1,70Mejillón 471.354 195.435 1,34Almeja 194.371 75.932 0,18Jibión 36.801 15.788 no detectadoAtún 23.654 35.645 no detectadoRape 12.879 12.685 no detectado

CONCLUSIONES

1. Aun cuando los niveles de HAPs carcinogénicos en lasmuestras de moluscos bivalvos estudiadas seencuentran dentro de los límites establecidos por lalegislación europea, es importante señalar la presenciade HAPs carcinogénicos en otro tipo de muestras paralas cuales no existen límites.

2. Debería prestarse especial atención a naftaleno, ya queno sólo es un HAP con un grado de carcinogenicidadequivalente al de otros para los cuales existen límites,sino que además es el compuesto mayoritario en todaslas muestras estudiadas.

Conclusiones

3. Sería conveniente implementar medidas para tratar dereducir el grado de contaminación de los moluscosbivalvos ya que, además de los HAPs contemplados enla legislación, pueden contener otros tambiéncarcinogénicos.

4. La SPME-CG/EM podría ser útil como herramienta decribado para valorar de un modo sencillo y rápido elgrado de contaminación por HAPs en muestras depescado y marisco.

“ESTUDIO DEL CONTENIDO DE HIDROCARBUROS AROMÁTICOS

POLICÍCLICOS (HAPs) CARCINOGÉNICOS EN PESCADO Y

MARISCO DE LA COMUNIDAD AUTÓNOMA VASCA”

I.P.: Mª Dolores Guillén LorénPonente: Patricia Sopelana Garay

Grupo de Investigación PROCAYSEAL (Procesado, Calidad y Seguridad Alimentaria)

www.ehu.es/procaysealUPV/EHU