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Evaluación de la actividad antagónica de diferentes cepas de bacterias contra Clavibacter michiganensis in vitro
Sánchez-Sánchez-J.B* , Rosales-Colunga-L.M
Área Agroindustrial. Facultad de Ingeniería
Universidad Autónoma de San Luis Potosí
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Solanum lycopersicum
•Origen
•Especie hortícola más importante para el consumo
humano
• Generador de empleos• Forma parte de la dieta del ser humano
(Secretaría de Agricultura, 2016)
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LA HORTALIZA CON LA MAYOR SUPERFICIE SEMBRADA EN TODO EL MUNDO
(SECRETARÍA DE AGRICULTURA, 2016)
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PRODUCCIÓN DE TOMATE EN MÉXICO
Principales productores de tomate:
•Sinaloa
•San Luis Potosí
•Baja California
•Zacatecas
•Michoacán
Fuente: SAGARPA, 2017
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(Hausbeck MK et al., 2000)
Clavibacter michiganensis subespecie
michiganensis , principal patógeno del
jitomate
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No hay tratamiento efectivo, es necesario encontrar un
control biológico con cepas antagonistas .
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Algunas cepas de Bacillus son antagonistas de Cmm
(Boudyach et al 2001)
(Jung et al 2014)
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HIPÓTESIS
Evaluación del antagonismo de cepas morfológicamente similares a Bacillus, aisladas del efluente de una planta tratadora de aguas contra Cmm.
Las cepas morfológicamente similares a Bacillus presentaran actividad inhibitoria contra Cmm.
OBJETIVO
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METODOLOGÍA
Aislamiento Bacteriano
Análisis antagónico en medio solido
Análisis antagónico en medio liquido
Identificación de Cmm
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AISLAMIENTO BACTERIANO
Aislamiento bacteriano
Bacterias morfológicamente similares a Bacillus
Efluente de planta tratadora de
agua, industria papelera
CmmTallo enfermo de
cáncer bacteriano
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AISLAMIENTO BACTERIANO
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ANÁLISIS ANTAGÓNICO EN MEDIO SÓLIDO
Siembra de Cmmen medio líquido
Preparación de medio sólido LB en
cajas de Petri
Agregar 250 μl de Cmm a cajas de
petri
Tomar 4 trozos de papel filtro
Empapar los papeles filtro con las
bacterias sembradas
anteriormente
Colocarlos en las cajas con Cmm
sembrado
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ANÁLISIS ANTAGÓNICO EN MEDIO SOLIDO
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Cepa Halo de
inhibición (Diámetro)
Crecimiento
Bacteriano (Diámetro)
Cepa A 1.60 cm 0.90 cm de la bacteria A.
Cepa B No se presenta
1.25 cm de bacteria B.
Cepa C 1.22 cm 1.22 cm de bacteria C.
Tabla 1. Evaluación de inhibición de Cmm por diferentes cepas
aisladas
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Cepa D 1.8 cm de
D.
1.07 cm de
bacteria D.
Cepa E No presenta
0.62 cm de bacteria E.
Cepa F 1.7cm de D 0.65 cm de bacteria F.
Cepa G 5.5 cm de D
1.35 cm de bacteria G.
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ANÁLISIS ANTAGÓNICO EN MEDIO LÍQUIDO
Se cultivan bacterias en
medio líquido LB
Densidad óptica cada 24
hrsCentrifugación
Preparación de suspensiones
Densidad óptica cada 24
hrs
Elaboración de curva de
crecimiento
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ANÁLISIS ANTAGÓNICO EN MEDIO LIQUIDO
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Grafico 1. Densidad Óptica de las diversas cepas de bacterias a
190 hrs
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
OD
600 n
m
Cepas
Bacteria A
Bacteria B
Bacteria C
Bacteria D
Bacteria E
Bacteria F
Bacteria G
CONTROL
0
0.5
1
1.5
2
2.5
3
3.5
4
0 25 50 75 100 125 150 175 200
OD
60
0 n
m
Tiempo (h)
Bacteria A Bacteria B Bacteria C Bacteria D
Bacteria E Bacteria F Bacteraia G CONTROL
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Identificación de Cmm
Preparación de medio sólido LB
Siembra de bacterias en
medio solido LB
Incubación Identificación de
las bacterias morfológicamente
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Identificación de Cmm
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CONCLUSIÓN
➢ De las cepas evaluadas en medio sólido LB, 5 presentan halos de inhibición del crecimiento
del patógeno.
➢ En los ensayos de inhibición en medio liquido 2 cepas inhibieron fuertemente el crecimiento
del patógeno.
➢ La cepa que mostró resultados positivos en ambos ensayos fue la cepa C.
➢ Al identificar la bacterias en medio sólido, se pudo apreciar que la bacteria que estaba
presente efectivamente es Clavibacter michiganensis
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REFERENCIAS
• Secretaría de Agricultura, G. D. (12 de Noviembre de 2016). ¿Tomate o jitomate? Recuperado el 15 de Noviembre de 2017, de Secretaría de Agricultura, Ganadería, Desarrollo Rural, Pesca y Alimentación: https://www.gob.mx/sagarpa/articulos/tomate-o-jitomate?idiom=es
• E. H. Boudyach , M. Fatmi , O. Akhayat , E. Benizri & A. Ait Ben Aoumar Selection of Antagonistic Bacteria of Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis and Evaluation of Their Efficiency Against Bacterial Canker of Tomato, Biocontrol Science and Technology.(2001).
• W.J. Jung , F. Mabood , A. Souleimanov , L.G. Whyte, T.D. Niederberger , D.L. Smith. Antibacterial activity of antagonistic bacterium Bacillus subtilis DJM-51 against phytopathogenic Clavibactermichiganense subsp. Michiganense ATCC 7429 in vitro (2014).
• Hausbeck MK, Bell J, Medina-Mora C, Podolsky R, Fulbright DW. Effect of bactericides on population sizes and spread of Clavibacter michiganensis subsp. michiganensis on tomatoes in the greenhouse and on disease devel- opment and crop yield in the field. (2014)