inhibición de enzimas - unamdepa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/apuntescq9hmcc_35792.pdfinhibición...
TRANSCRIPT
Inhibición de actividad enzimáticaHiram Manuel Castro Cruz
Repaso de catálisis enzimática
Inhibición de la actividad enzimática
Inhibición competitiva
Inhibición no competitiva
Inhibición acompetitiva
Comportamiento en la catálisis enzimática.
E+ S
k1
k -1
ESk2
E+P
𝑣0 = 𝑎 |𝑆|
𝑏+ 𝑆
Ecuación de Michaelis Menten.
1. Planteamiento de la ecuación de velocidad total.𝑑|𝑃|
𝑑𝑡= 𝑘2|ES|
2. Planteamiento de la ecuación de velocidad del intermediario.
𝑑|𝐸𝑆|
𝑑𝑡= 𝑘1|E||S| − 𝑘−1|ES| − 𝑘2|ES| = 0
3. Planteamiento del balance de masa de todas las especies de enzima
|E|0 = |E| + |ES| |E| = |E|0 − |ES|
Ecuación de Michaelis Menten.
4. Despeje de |E| y sustitución en la ecuación de velocidad del intermediario.
𝑑|𝑃|
𝑑𝑡=
𝑘2 |𝐸|0 𝑘1 |𝑆|
𝑘1 𝑆 + 𝑘−1+ 𝑘2
5. Despeje de |ES| y sustitución en la ecuación de velocidad total.
𝑑|𝐸𝑆|
𝑑𝑡= 𝑘1|S|(|E|0 − |ES| ) − 𝑘−1|ES| − 𝑘2|ES| = 0
6. Arreglo de ecuación, introduciendo vmáx y KM.
|ES| = 𝑘1 |𝐸|0 |𝑆|
𝑘1 𝑆 + 𝑘−1+ 𝑘2
𝑑|𝑃|
𝑑𝑡=
𝑣𝑚á𝑥 |𝑆|
𝑆 +𝑘−1+𝑘2
𝑘1
𝑑|𝑃|
𝑑𝑡= 𝑣0 =
𝑣𝑚á𝑥 |𝑆|
𝑆 + 𝐾𝑀
Ecuación de Michaelis Menten y de Linewaver-Burk.
𝑣0 = 𝑣𝑚á𝑥 |𝑆|
𝑆 + 𝐾𝑀
Ecuación de Michaelis Menten Ecuación de Linewaver Burk
0
0.02
0.04
0.06
0.08
0.1
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1
1/
v 0(s
/M)
1/|S| (1/M)
1
𝑣0=
𝐾𝑀𝑣𝑚á𝑥
1
|𝑆|+
1
𝑣𝑚á𝑥
𝑚 =𝐾𝑀𝑣𝑚á𝑥
𝑏 =1
𝑣𝑚á𝑥
Inhibición de la actividad catalítica de enzimas.
Inhibición
Competitiva
No competitiva
Acompetitiva0
20
40
60
80
100
120
0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000 10000v 0
(M s−1
)
|S| (mM)
sin inhi
comp inhi
no comp inhi
acomp inhi
Inhibición: Trata de la disminución en la velocidad de reacción que es provocada por laadición de un inhibidor, en virtud de su efecto sobre la concentración de un reactivo,catalizador o reacción intermedia.
Inhibición Competitiva
𝑑|𝑃|
𝑑𝑡=
𝑣𝑚á𝑥 |𝑆|
𝑆 + 𝐾𝑀 1+|𝐼|
𝐾𝑑 𝐼
𝐾𝑑 𝐼 = 𝐸 |𝐼|
|𝐸𝐼|
Inhibición competitiva. Efecto cinético sobre vmax y KM.
0
50
100
0 2000 4000 6000 8000 10000
v 0(M
s−1
)
|S| (mM)
sin inhi
comp inhi
𝑑|𝑃|
𝑑𝑡= 𝑣0 =
𝑣𝑚á𝑥 |𝑆|
𝑆 + 𝐾𝑀 1+|𝐼|
𝐾𝑑 𝐼
0
10
20
30
40
50
0 50 100 150 200
Ec. M-M
𝑣0 = 𝑣𝑚á𝑥 |𝑆|
𝑆 + 𝐾𝑀
𝐾𝑀( 1 + |𝐼|
𝐾𝑑 𝐼)𝐾𝑀
Inhibición competitiva. Ecuación de Linewaver-Burk
y = x + 0.01
y = 2x + 0.01
y = 3x + 0.01
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1
1/
v 0(s
/M)
1/|S| (1/mM)
1
𝑣0=
𝐾𝑀
𝑣𝑚á𝑥1 +
|𝐼|
𝐾𝑑 𝐼
1
|𝑆|+
1
𝑣𝑚á𝑥
|I| = 0 M
|I| = 1 M
|I| = 2 M
bm
0
0.005
0.01
0.015
0.02
0 0.001 0.002 0.003 0.004 0.005
Ec. L-B sin inhi1
𝑣0=
𝐾𝑀𝑣𝑚á𝑥
1
|𝑆|+
1
𝑣𝑚á𝑥
b = 1
𝑉𝑚á𝑥
Inhibición no competitiva
𝑑|𝑃|
𝑑𝑡= 𝑣0 =
𝑣𝑚á𝑥
1+|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
|𝑆|
𝑆 + 𝐾𝑀
1+|𝐼|𝐾𝑑 𝐼
1+|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
𝐾𝑑 𝐼 = 𝐸 |𝐼|
|𝐸𝐼|𝐾′𝑑 𝐼 =
𝐸𝑆 |𝐼|
|𝐸𝑆𝐼|
𝑣0 =
𝑣𝑚á𝑥
1+|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
|𝑆|
𝑆 + 𝐾𝑀
Si Kd I = K’d I
0
20
40
60
80
100
0 2000 4000 6000 8000 10000
v 0(M
s−1)
|S| (mM)
sin inhi
no comp inhi
Inhibición no competitiva. Efecto cinético sobre vmax y KM.
𝑣0 =
𝑣𝑚á𝑥
1+|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
|𝑆|
𝑆 + 𝐾𝑀
0
25
50
0 20 40 60 80 100
Ec. M-M
𝑣0 = 𝑣𝑚á𝑥 |𝑆|
𝑆 + 𝐾𝑀
𝐾𝑀
Inhibición no competitiva. Ecuación de Linewaver-Burk
y = x + 0.01
y = 2x + 0.02
y = 3x + 0.03
0
0.05
0.1
0.15
0.2
0.25
0.3
0.35
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1
1/
v 0(s
/M)
1/|S| (1/mM)
|I| = 0 M
|I| = 1 M
|I| = 2 M
1
𝑣0=
𝐾𝑀
𝑣𝑚á𝑥1 +
|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
1
|𝑆|+
1
𝑣𝑚á𝑥1 +
|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
bm
Ec. L-B sin inhi1
𝑣0=
𝐾𝑀𝑣𝑚á𝑥
1
|𝑆|+
1
𝑣𝑚á𝑥
-0.012 -0.01 -0.008 -0.006 -0.004 -0.002 0 0.002 0.004
|I| = 0 M
|I| = 1 M
|I| = 2 M
1
|𝑆|
1
𝑣0
−1
𝐾𝑀
Inhibición Acompetitiva
𝐾′𝑑 𝐼 = 𝐸𝑆 |𝐼|
|𝐸𝑆𝐼|
𝑣0 =
𝑣𝑚á𝑥
1+|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
|𝑆|
𝑆 +𝐾𝑀
1+|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
Inhibición Acompetitiva. Efecto cinético sobre vmax y KM.
0
20
40
60
80
100
0 2000 4000 6000 8000 10000
v 0(M
s−1
)
|S| (mM)
sin inhi
acomp inhi 0
25
50
0 25 50 75 100
𝑣0 =
𝑣𝑚á𝑥
1+|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
|𝑆|
𝑆 +𝐾𝑀
1+|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
𝐾𝑀𝐾𝑀/( 1 +
|𝐼|
𝐾𝑑 𝐼)
Ec. M-M
𝑣0 = 𝑣𝑚á𝑥 |𝑆|
𝑆 + 𝐾𝑀
Inhibición Acompetitiva. Ecuación de Linewaver-Burk
y = x + 0.01y = x + 0.02
y = x + 0.03
0
0.02
0.04
0.06
0.08
0.1
0.12
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1
1/
v 0(s
/M)
1/|S| (1/mM)
1
𝑣0=
𝐾𝑀
𝑣𝑚á𝑥
1
|𝑆|+
1
𝑣𝑚á𝑥1 +
|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
bm
|I| = 0 M
|I| = 1 M|I| = 2 M
Ec. L-B sin inhi1
𝑣0=
𝐾𝑀𝑣𝑚á𝑥
1
|𝑆|+
1
𝑣𝑚á𝑥
Comparación de los diferentes tipos de inhibición.Tipo de inhibición Efecto cinético en gráfica V0
vs |S|
Competitivo Cuando incrementa |I|:
No hay efecto en la velocidad máximaIncrementa el valor de KM
No competitivo Cuando incrementa |I|:
Disminuye la velocidad máximaNo hay efecto en la KM
Acompetitivo Cuando incrementa |I|:
Disminuye la velocidad máximaDisminuye el valor de KM
𝑣0= 𝑣𝑚á𝑥 |𝑆|
𝑆 + 𝐾𝑀 1+|𝐼|
𝐾𝑑 𝐼
𝑣0 =
𝑣𝑚á𝑥
1+|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
|𝑆|
𝑆 + 𝐾𝑀
𝑣0 =
𝑣𝑚á𝑥
1+|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
|𝑆|
𝑆 +𝐾𝑀
1+|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
Comparación de los diferentes tipos de inhibición.Tipo de inhibición Gráfica de 1/v0 vs 1/|S|
Competitivo Cuando incrementa |I|:
La pendiente incrementa de valor.La ordenada al origen es constante e igual a 1/Vmax.
No competitivo Cuando incrementa |I|:
La pendiente incrementa de valor.La ordenada al origen incrementa de valor.El intercepto es constante e igual a −1/KM.
Acompetitivo Cuando incrementa |I|:
La pendiente es contante e igual a KM/Vmax.La ordenada al origen incrementa de valor.
1
𝑣0=
𝐾𝑀
𝑣𝑚á𝑥1 +
|𝐼|
𝐾𝑑 𝐼
1
|𝑆|+
1
𝑣𝑚á𝑥
1
𝑣0=
𝐾𝑀
𝑣𝑚á𝑥1 +
|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
1
|𝑆|+
1
𝑣𝑚á𝑥1 +
|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼
1
𝑣0=
𝐾𝑀
𝑣𝑚á𝑥
1
|𝑆|+
1
𝑣𝑚á𝑥1 +
|𝐼|
𝐾′𝑑 𝐼