Bioquímica. Practica No. 6. 2012

EXTRACCION Y CUANTIFICACION DE GLUCOGENO EN ORGANISMOS MARINOS O HIGADO.

Calixto Heredia Lidda Mariam

Instituto Tecnológico de La Paz

Laboratorio de Bioquímica

2 de mayo de 2012

Resumen:___________________________________________________________________________________El glucógeno es una forma que tiene el cuerpo de acumular energía. Es un polímero de la glucosa. Se puede decir que es la gasolina de nuestro organismo. Nuestra fuente de obtención de glucógeno fue de almeja, se extrajo y cuantifico el glucógeno que se encontraba en esta muestra, arrojando los resultados de positivo con la prueba de lugol, con un 33% de glucógeno. Este tipo de metodología se recomienda hacerla con un animal que ha sido sacrificado en menos de 24 horas, para que nos de un buen rendimiento.___________________________________________________________________________________Introducción:

El glucógeno es una forma que tiene el cuerpo de acumular energía. Es un polímero de la glucosa. Se puede decir que es la gasolina de nuestro organismo.Parte de la energía que absorbemos de la comida (hidratos de carbono) se convierte en glicógeno que se acumula en el hígado (glucógeno-hepático) y en los músculos (glucógeno-muscular). El glucógeno hepático nos interesa menos en el deporte, su función es mantener estable la glucosa en la sangre. [1]

Es el polisacárido que se almacena en el organismo animal. A menudo se le

designa como almidón animal. Es una estructura mucho más ramificada que la amilopectina con cadenas de 12 a 14 residuos de alfa-D-glucopiranosa (con enlaces glucosidicos alfa-D-[1→4]) y ramificaciones unidas por medio de enlaces glucosidicos (1→6). [2]

Se encuentra principalmente en el hígado y en el musculo representando hasta un 10% y un 1-2% de su peso húmedo, respectivamente.

Estructura del glucógeno [3]

El glucógeno se libera de los tejidos que lo contienen por calentamiento con una base fuerte (KOH) hasta la destrucción total del tejido. La separación del glucógeno del tejido se consigue mediante la adición de etanol (precipita polisacáridos y elimina los monosacáridos solubles) y sulfato de sodio (coprecipitante). Así, se produce un precipitado que contiene una mezcla de glucógeno, proteínas y ácidos nucleicos, que han resistido el calentamiento anterior.

El tratamiento posterior con ácido tricloroacético (TCA) hace que precipiten las proteínas y ácidos nucleicos de la mezcla. El glucógeno aislado se vuelve a precipitar con etanol, obteniéndose una preparación con un alto grado de pureza. El tratamiento con antrona (que contiene (H2SO4) es un método rápido para la determinación de hexosas y alopentosas constituyentes de un polisacárido. Mediante este método, el glucógeno es hidrolizado por un ácido (H2SO4) hasta sus unidades elementales (monosacáridos), que pueden ser luego deshidratadas dando furfural, y éste último, reacciona con la antrona y se forma un producto coloreado (azul-verdoso) con un máximo de absorbencia a 620 nm. El valor resultante se compara con los obtenidos al preparar una recta estándar con glucosa pura, usando el mismo método.[4]

El objetivo de esta práctica es el de obtener glucógeno y la estimación en porcentaje de glucógeno.

Metodología:

Digestión

Se picó lo más pequeño posible la muestra con la que se trabajó, lo colocamos en un matraz erlenmeyer de 250 ml y se añadió50 ml de KOH 3.0 N, al terminar se calentó en baño maría a 80°C durante 30 minutos. Después de transcurrido ese tiempo se enfrió y acidulo con H2SO4.

Precipitación

Se pasó la solución a un vaso de precipitado de 500 ml y se agregó 150 ml de alcohol de 96 °. Agitamos con mucho cuidado y se dejo reposar durante 10 minutos. Al terminar se separó el sobrecalentado por decantación o filtración y se pasó el precipitado a un vidrio de reloj que fue previamente pesado. Al terminar se colocó en un desecador (modelo G01350A-1, marca Thermo) y posteriormente se pesó.

Identificación

Se disolvió una pequeña porción del precipitado en un poco de agua destilada y se colocó 2 mL de esta en un tubo de ensayo, en otro tubo de ensayo se colocó 2 mL de solución de glucógeno al 1%. Después se añadió 5 gotas de solución de yodo a cada tubo, se procedió a comparar los resultados de los dos tubos y se anotó las observaciones.

Resultados:

La muestra con la que se trabajó peso 20.04 g, al terminar la práctica se volvió a pesar y se obtuvo 8.5 gramos, con un 33% de glucógeno. La prueba

de lugol a la muestra extraída dio negativo, para la prueba con el glucógeno al 1% nos dio positiva. A continuación se muestra un cuadro con los resultados de todos los equipos.

Grafica 1

Equipo

Muestra

Glucógeno al 1%

Glucógenoextraído

1 Camarón

Positivo Negativo

2 Almeja

Positivo Negativo

3 Hígado de pollo

Positivo Negativo

4 Callo Positivo Negativo 5 Almej

aNegativo

Negativo

6 Almeja

Negativo

Negativo

7 Pulpo positivo Negativo Tabla de resultados de todos los equipos.

Discusión:

Las reservas de glucógeno son limitadas y pueden llagar a agotarse, la velocidad con que sucede este agotamiento de las reservas depende de la intensidad que tenga el ejercicio realizado y de la cantidad de glucógeno que se ha almacenado antes de emprender el entrenamiento.

Es por eso que al terminar la práctica, nos dimos cuenta de que algunos resultados dieron negativo. Esto puede deberse a que la fuente de donde se obtuvo el glucógeno ya estaban previamente muertas, y conservadas, es por eso que lo más eficiente y recomendable es que se sacrifique un animal y al instante extraer el glucógeno. Ya que esta reserva de

glucógeno que tiene el organismo es muy limitada, y el cerebro tanto como el musculo necesitan del glucógeno para que el organismo funcione.

Conclusión:

El glucógeno es una forma que tiene nuestro cuerpo para acumular energía. Estas reservas son limitadas y se llegan a agotar. Es por eso que al extraer y cuantificar glucógeno de algún animal marino o de hígado se necesitan menos de veinticuatro horas para poder extraer aunque sea solo un poco de este polisacárido.[4]

Bibliografía:

1. http://www.todonatacion.com/ ciencias-del-deporte/glucogeno.php (30 de abril de 2012)

2. Bioquímica de Harper, David W. Martin Jr., 14ª edición, pág. 171-172

3. http://es.wikipedia.org/wiki/Gluc %C3%B3geno (30 de abril de 2012)

4. http://www.uco.es/organiza/ departamentos/bioquimica-biol-mol/pdfs/22%20AISLAMIENTO%20GLUC%C3%93GENO.pdf (30 de abril de 2012)