UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS E INGENIERIASDEPARTAMENTO DE QUÍMICA

LABORATORIO DE BIOQUIMICAPRACTICA Nº 9

FORMACIÓN DE ÁCIDO LÁCTICO EN LA GLUCÓLISIS

OBJETIVOS.

1. Producir ácido láctico a partir del músculo de rata.2. comprobar la formación de dicho ácido mediante pruebas características.

Teoría relacionada (consultar).

PROCEDIMIENTO

Sacrifique una rata o curiel y extraiga los músculos de las patas. Desmenuce rápidamente con ayuda de una tijera y macere en un mortero limpio y seco manteniendo a baja temperatura. Pese dos porciones de 1 g del macerado y viértalas en dos tubos de ensayo. Uno de los tubos de ensayo se utilizará como control, agréguele inmediatamente 1 ml de A.T.A al 20%. En ambos tubos de ensayo agregue (5 ml de solución de glucosa al 0,5 % en bicarbonato de sodio 0,5 M ).agregue 5 gotas de vaselina o aceite vegetal. Seguidamente coloque los tubos en un baño de María a 37 ºC durante 2 horas.

Después de la incubación en el tubo de ensayo experimental se vierte 0.5 ml de la solución de A.T.A al 20%, se agita, y los contenidos de ambos tubos se filtran aparte.

Para precipitar los carbohidratos se toman de cada uno de los tubos 2.5 ml del filtrado, se les agrega 2 ml de solución de sulfato de cobre al 20 % y 0.5g de hidróxido de calcio. Las muestras se agitan cuidadosamente y después durante un periodo de 15 minutos, se repite la operación alternándola con intervalos de reposo. Seguidamente se filtran.

Con cuidado se toman 1 ml del filtrado y se vierten al otro tubo de ensayo, el cual se coloca en un baño de hielo y se le agrega 15 gotas de ácido sulfúrico. Las muestras se colocan seguidamente en un baño de agua hirviendo por 4 minutos. E inmediatamente se colocan en un baño de hielo. Una vez que se ha enfriado se agrega a cada tubo 8 gotas de una solución alcohólica de hidroquinona al 0,2 % y se agitan. Observar ambos tubos.

Materiales ReactivosBisturí A.T.A 20%Mortero con mano solución de glucosa al 0,5% en4 tubos de ensayo bicarbonato de Sodio al 0,5 MBaño Serológico vaselinaPipetas de 5 y 10 ml sulfato de cobre al 20%Balanza hidróxido de CalcioBeaker 400 ml, 200ml hidroquinona 0,2 %Tabla de disección ácido sulfúrico concentradoEmbudo y papel filtro

Preguntas de actividad complementaria.

1. Qué función cumple la solución de hidroquinona?2. Escriba la reacción entre la hidroquinona y el ácido láctico.3. Qué condiciones hay que tener en cuenta para la producción de ácido láctico según reacciones de la glucólisis.4. ¿En que tejidos es mayor la producción de este ácido. De que depende la producción de dicho ácido?5. ¿Por que debe el ratón o rata estar en actividad el día anterior?.

BIBLIOGRAFÍA:

PLUMER, D.T. Introducción a la bioquímica práctica. México. MaGraw- Hill Latinoamericana, S.A.

CONN, E. y Stumpf, P.K. Bioquímica F.

LÓPEZ, E y ANZOLA, C. Guías de laboratorio de Bioquímica. Facultad de Ciencias. Universidad Nacional sede Bogotá.