PRÁCTICA # 2

CONTROL DE CALIDAD DE EQUIPOS, CENTRÍFUGA DE SEROLOGÍA, Y

DE MICROHEMATOCRITO.

CALIBRACIÓN DE CENTRÍFUGAS DE SEROLOGÍA

Como parte de un sistema de Control de Calidad, se deberá asegurar la óptima obtención de productos y/o resultados, garantizando un adecuado funcionamiento de los equipos que se utilizan para tal fin. La centrífuga serológica utilizada en Inmunohematología, deberá tener como propiedad poder alcanzar su máxima velocidad de 3500 rpm a los 5 segundos de haber sido puesta en marcha y a su vez, luego de mantenerse en esa velocidad el tiempo pre fijado en el temporizador, deberá desacelerar (frenar) y detenerse completamente en un lapso de 10 segundos. A su vez, la intensidad de la centrifugación deberá ser lo suficiente como para que siempre se forme un botón de hematíes que se mantenga como tal en una reacción débil así como para no permitir que haya falsos resultados positivos por aglomeración de los mismos.

Muestras Suspensión de hematíes de Muestra 1 al 5 %, considerarlos como control

POSITIVO.

Suspensión de hematíes de Muestra 2 al 5%, considerarlos como control NEGATIVO

Frasco gotero con Reactivo 2

MATERIALES

Tubos de vidrio, de 12 x 75

Pipetas Pasteur de vidrio, chupón de goma

Lápiz de cera.

EQUIPO

Centrífuga de serología

Aglutinoscópio

PROCEDIMIENTO 1. Preparar dos series de tubos de vidrio 12 x 75 mm, de 5 tubos cada una, la

primera rotularla como POSITIVO, la segunda como NEGATIVO. 2. Agregar una gota de las células respectivas (muestra 1: positiva; muestra 2:

negativa), y dos gotas del frasco gotero Reactivo 2 a cada serie, justo inmediatamente antes de centrifugar.

3. Se centrifugan los tubos por parejas, positivo y negativo. 4. El primer par comenzando por 10 Segundos, se lee, se anota y se descarta. 5. A continuación se hace lo mismo con cada par aumentando en 5 segundos.

POSITIVO NEGATIVO

Muestra 1 al 5% 1 gota

Muestra 2 al 5% 1 gota

Reactivo 2 2 gotas 2 gotas

Centrifugar por parejas a 3500 r.p.m. comenzando por 10 segundos

Anotar resultados según tabla adjunta

Repetir los pasos anteriores, ir incrementando el tiempo cada vez.

Se evalúa por cada tiempo: a. Delimitación del botón b. Facilidad de desprendimiento c. Grado de aglutinación resultante d. Sobrenadante libre de hematíes.

Los resultados que se vayan obteniendo se anotan en la hoja de trabajo dispuesta para el efecto.

Criterios de Control 10” 15” 20” 30” 45”

+ - + - + - + - + -

Liquido sobrenadante claro

Botón celular claramente definido

Células fácilmente resuspendidas

Reacciones negativas bien definidas

Grado de aglutinación para positivos

INTERPRETACIÓN

El tiempo óptimo de centrifugación es el tiempo más corto necesario para cumplir estos criterios:

1. La aglutinación en los tubos positivos es tan fuerte como se determina al preparar los reactivos.

2. No hay aglutinación ni ambigüedad en los tubos negativos.

3. El botón celular está claramente delineado y el borde se observa bien definido, no velloso.

4. El líquido sobrenadante es claro.

5. El botón de células se resuspende fácilmente.

6. De acuerdo con los resultados obtenidos se escoge el tiempo mínimo en el cual el tubo POSITIVO resulte un botón bien delimitado, fácil de desprender, con una aglutinación clara (1+) y el sobrenadante libre de hematíes; y el NEGATIVO presente un botón nítido, que se disgregue fácilmente.

CALIBRACIÓN DE CENTRÍFUGA DE MICROHEMATOCRITO

PRINCIPIO

Las centrífugas usadas para determinación de microhematocrito, como todo equipo de laboratorio, deberá comprobarse su tiempo óptimo de trabajo: al recibirlas, después de repararlas y si no hay un programa calendarizado de aseguramiento de la calidad por lo menos una vez por año.

Su temporizador y la velocidad deben comprobarse cada 3 o 4 meses.

Un método de calibración que proporciona vigilancia de calidad y permite seleccionar el tiempo óptimo de centrifugación consiste en examinar muestras idénticas de suspensión de hematíes dentro, por debajo y por encima de la gama aceptable de hematocrito.

El tiempo mínimo en que ocurre la máxima concentración se selecciona entonces para uso rutinario.

MATERIAL

Centrífuga de microhematocrito a estandarizar

Capilares de microhematocrito sin heparina

Plastilina

3 Muestras de sangre anticoagulada (EDTA) con hematocrito conocido: normal, bajo y alto.

Tabla de lectura de microhematocrito.

PROCEDIMIENTO

1. Homogenizar cuidadosamente las muestras de sangre. 2. Para cada muestra, llenar dos capilares de hematocrito, hasta 1 cm del borde

del capilar y sellarlos con plastilina. 3. Colocarlos en la centrífuga de microhematocrito y centrifugar durante 2

minutos. 4. Al leer, observar el color de los hematíes empacados y del plasma. La columna

de los hematíes ha de ser uniforme, el plasma trasparente y la línea de delimitación entre ambos, nítida.

5. Medir y registrar cada hematocrito. 6. Repetir los 5 pasos anteriores, incrementado los tiempos de centrifugación de

minuto en minuto hasta llegar a 10 minutos. Comparar los valores del hematocrito de cada muestra en los diferentes tiempos de centrifugación.

Tiempos de centrifugación

2’ 3’ 4’ 5’ 6’ 7’ 8’ 9’ 10’

Hematocrito Bajo

Hematocrito Normal

Hematocrito Alto

INTERPRETACIÓN

Para uso rutinario, seleccionar el tiempo de centrifugación más corto que dé la lectura más baja.