FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

RESULTADOS

A lo largo de la práctica se realizaron 3 procedimientos que por el tiempo y el número de integrantes se dividió de la siguiente manera:

1 persona realizaría la técnica para frotis sanguínea, 1 persona observaría y aseveraría acerca de los micro núcleos propios de la muestra que se fue dada a cada equipo, 2 personas realizaron y analizaron la muestra de tejido propio de cérvix analizando el tipo de neoplasia si es que existiera.

Bajo este preámbulo se presentan los siguientes resultados obtenidos en el laboratorio, el orden de presentación corresponde a él orden e que aparecen en la práctica mandada y no de acuerdo a en que jerarquía de orden fueron realizados.

Así pues, Se obtuvo:

Frotis sanguíneo (Resultados)A partir de una muestra normal, con números sanguíneos normales, teñida correctamente de acuerdo a la técnica, y bajo observación por todos los

miembros del equipo para su análisis se tiene como resultados:

Debido a un mal conteo previo y al tiempo restante dado para la repetición del conteo, a través de búsqueda en la toma, se contaron 19 células dentro de las cuales únicamente se reconoció células de tipo: Monocito, linfocito y neutrófilos, además de células segmentadas que aportan poco para el análisis de la muestra

Se buscó, sin resultado óptimo la presencia de los otros tipos de células (basófilos, macrófagos, eosinofilos) a parte de las encontradas y mencionadas en el párrafo anterior, las conclusiones de la presencia y ausencia de las células sanguíneas, será

descrita en el apartado de conclusiones sin embargo es

Leucocito encontrado Número promedioNeutrófilo 8 42.10% linfocito 7 36.84%monocito 1 5.24%

Fig 1.1. Frotis sanguíneo, técnica HE

Fig 1.1. Obsérvese la muestra, con algunas presencias de leucocitos visibles en la muestra.

FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

segmentados 3 15.78%importante mencionarse, que el que no se encontraran estará relacionada a una menor probabilidad de que exista una patología en el organismo del cual fue analizada la muestra.

Tabla 1.1 Células obtenidas de conteo de C. sanguíneas

Tabla 1.1: se presentan el número de células obtenidas por tipo de leucocito encontrado, añadiéndose a su vez el porcentaje de presencia de cada uno.

Tabla 1.2 Comparación de promedios en células encontradas

Leucocito Encontrado Promedio encontrado Promedio estándar de aparición.

Neutrófilo 42.10% 45 % a 75 %Linfocito 36.84% 15% a 45%Monocito 5.24% 4% a 9%Segmentado 15.78% 0% a 7%

Tabla 1.2 la comparación muestra un promedio normal en todas las células encontradas, únicamente excluyéndose el caso de los Neutrófilos segmentado que se encuentran ligeramente por encima de los valores normales.

Tejido de cérvix incluido en Parafina

A partir de una muestra sin conocimiento previo del organismo al que se le tomo la muestra, sin conocimiento previo de caso clínico y presencia o ausencia de neoplasia, con manejo de muestra adecuado, teñida correctamente de acuerdo a la técnica y a la instrucción dada por la aplacadora, y bajo observación por todos los miembros del equipo para su análisis se tiene como resultados:

Se observa crecimiento indiferenciado en la zona conocida como la zona de transformación, también llamada, zona de unión escamocolumnar, que sugiere la presencia de neoplasia interepitelial.

FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

El grado de avance, basándonos en el espesor de la invasión por parte de las células escamosas se clasifica como un NIC 2 con posibilidad de convertirse a carcinoma, aseveración que se enmarca en base a lo siguiente:

Ya que se muestra una invasión epitelial escamosa de alto grado, en 2 de las tres partes visibles en la imagen.

Además, se presentan zonas con marcada indiferenciación celular, sobre todo en las regiones apicales y alejadas de la membrana basal visible en la imagen presentada como resultado, lo que es signo característico de neoplasia de tejido, aunque no alcanza se tan poco diferenciado para considerarse como invasión epitelial escamosa de terer grado, ya que se muestran aun en 1/3 de la muestra células diferenciadas y pertenecientes al epitelio del cérvix normal o

fisiológico

Cabe señalar que, según la información consultada para la comparación, La hipertrofia nuclear y los cambios de tamaño y forma son características constantes de todas las células displásicos. La mayor intensidad tintorial (hipercromasia) es otra característica destacada. Las células displásicas siempre presentan distribución irregular de la cromatina, como en grumos, sin embargo, en la muestra dada, ya sea por múltiples factores, estos criterios no se lograron ver con total certeza, mostrándose solo en nuestra muestra mayor intensidad tintorial de las células, mostrándose incluso con distintas tonalidades visibles en la imagen 1.2, se encontró además que la hipertrofia nuclear y los cambios de tamaño y forma son visible en esta muestra, signo que pertenece a una neoplasia de alto grado y por lo que se considera de alto riesgo.

Fig. 1.2 Muestra de cérvix analizada en Laboratorio, técnica HE en parafina.

Fig.1.2 Se observa considerable cambio epitelial en zona propia de transición escamocolumnar (10x)

Fig 1.3 Muestra de cérvix analizada en Laboratorio, técnica HE en parafina.

Fig 1.3: epitelio poco diferenciado, signo de neoplasia.

FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

Tinción de micronúcleos en Células Bucales.

A partir de una muestra sin conocimiento previo del organismo al que se le tomo la muestra, sin conocimiento previo de caso clínico y presencia o ausencia de enfermedades asociadas, con manejo de muestra adecuado, teñida correctamente y previamente a la práctica, entregándose ya teñida, confiando en que la tinción se haya hecho correctamente de acuerdo a la técnica, y bajo observación por todos los miembros del equipo para su análisis se tiene como resultados:

Se observaron a microscopios 2 muestras debido a la no presencia de micro núcleos en la primera muestra, acompañado también de fallas técnicas por parte de los microscopios.

A partir de la figura 1.4 se asevera como resultados de la observación:

Los Micro núcleos observados se forman durante la transición de metafase – anafase en mitosis, pueden ser

cromosomas completos rezagados debido a un daño al uso mitótico o bien fragmentos de cromosomas acéntricos, en ambos casos no lograron incorporarse al núcleo de las células hijas aunque se menciona que a dificultades en la tinción y

en el uso de los microscopios el llegar a esta observación fue complicado y fue ayudados por la bibliografía consultada.

No se descarta, aunque la evidencia de presencia de micronnucleos es escasa que sean en indicador del efecto de agentes mutágenos, genotóxicos o teratógenos principalmente micronucleogénicos

Micro núcleos encontrados 1Células normales presentesCélulas micronucleadas Presentes (1)Células condensadas Ausentes

Fig. 1.4 visualización de micro núcleos

Fig. 1.4 se muestran diversos micronucleos en la muestra , posible anomalías de tipo citotóxicas (40x)

FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

carriorrexis AusentesNúcleo Picnotico AusentesCélulas binucleadas AusentesCariolisis ausentes

Tabla 1.3 Principales anormalidades micro nucleares

Tabla 1.3 se contabilizan las anormalidades presentes en los núcleos encontrados en la muestra de acuerdo a las anormalidades mas comunes.

DISCUSIÓN

Abarcaré la siguiente discusión dividiéndola en tres secciones, tales como se realizaron en la práctica y del mismo modo con el cual se dieron o explicaron los resultados en este reporte de prácticas por lo que empezaré con la discusión de los resultados obtenidos por el frotis sanguíneo, continuando con la discusión del tejido de cérvix, frotis bucal, para posteriormente dar una discusión general de la práctica como un todo.

-frotis sanguíneo

Dentro de la práctica encontramos a través de conteo 3 principales tipos de leucocitos: monocitos, linfocitos y neutrófilos, en valores normales y con presencia relativamente normal, sin embargo, tenemos que recordar que: La modificación de la cantidad de leucocitos puede orientar al diagnóstico de enfermedades infecciosas, inflamatorias, cáncer y leucemias, y otros procesos.

Un número disminuido de leucocitos (leucopenia) pueden aparecer en ciertas enfermedades:

Fallo de la médula ósea (por tumores, fibrosis, intoxicación, etc.) Enfermedades autoinmunes (Lupus, etc.) Enfermedades del hígado o riñón Exposición a radiaciones Presencia de sustancias citotóxicas

Un número aumentado de leucocitos (leucocitosis) puede deberse a:

Daño de tejidos en quemaduras Enfermedades infecciosas

FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

Enfermedades inflamatorias (por autoinmunidad-reumáticas ó por alergia) Estrés Leucemia

En la práctica encontramos la presencia de Neutrofilos, es conocido y se puede comprobar a través de la literatura que la presencia de estos puede estar causado por la presencia de un agente extraño, sea una bacteria, un virus, hongos, parásitos, células en destrucción o partículas en suspensión. Ya que los fagocita, sin embargo, ya que los encontramos en valores normales y no aumentados en gran cantidad se supone entonces que la muestra no sea indicadora de agentes extraños importantes en el organismo, sin embargo, se debe de corroborar con otros tipos de exámenes y mediante la exploración física.

A partir de la presencia de monocitos, cuyos gránulos contienen heparina e histamina por lo cual intervienen en reacciones alérgicas y en reacciones inflamatorias, se encontraron dentro de los valores normales incluso, limitando con los valores bajos normales, por lo que se considera la presencia de monocitos más como una presencia normal y fisiológica, que por necesidad debido a un proceso de alergia. Sin embargo, se debe de corroborar con otros tipos de exámenes y mediante la exploración física.

A partir de la presencia de Linfocitos, encargados en términos generales y sin tomar en cuenta las sub-clasificaciones que conocemos además tienen funciones específicas, Tienen receptores para antígenos específicos y, por tanto, pueden encargarse de la producción de anticuerpos y de la destrucción de células anormales, estas respuestas ocurren en el interior de los órganos linfoides, los cuales, para tal propósito, deben suministrar un entorno que permita la interacción eficiente entre linfocitos, macrófagos y antígeno extraño, esto participa en la inmunidad específica o adquirida, sin embargo de nuevo encontramos valores que tienden a la media que se encuentra en un conteo de frotis sanguíneo, por lo que por lo que se considera la presencia de linfocitos más como una presencia normal y fisiológica, que por necesidad debido a un proceso de antígeno-anticuerpo. . Sin embargo, se debe de corroborar con otros tipos de exámenes y mediante la exploración física.

Tejido de cérvix incluido en parafina.al analizar el tejido de cérvix, es muy notable el tipo de neoplasia interepitelial de cérvix que presenta nuestra muestra, tiene que mencionarse que la muestra permitía el correcto estudio de la misma por lo no afectaron, o afectaron muy poco la preparación de la muestra y la tinción de la misma.

Ahora bien hablando de lo investigado, comparándolo con la muestra, se tiene que mencionar que si bien el hecho de que haya sido clasificado como c de tipo 2 no

FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

indica como tal la presencia de un carcinoma cervical pero la probabilidad de la misma es bastante latente, incluso dice la información obtenida, que neoplasias mayores al grado 1 de diagnóstico ya no son recuperables por el propio organismo como proceso propio de descamación por lo que la debida medicación y tratamiento será necesario empezarlo de inmediato par evitar y dar as probabilidad de no generar un cáncer cervicouterino.

Cabe mencionar como dato diagnostico que la infección por el virus del papiloma humano (VPH) parece ser la "causa fundamental" en la génesis del cáncer de cérvix. Esta hipótesis es muy aceptada por la comunidad científica mundial y se apoya en numerosas evidencias morfológicas como la coexistencia de VPH con la NIC y la Neoplasia Intraepitelial Vulvar (NIV) y los datos que nos brinda la biología molecular como el elevado porcentaje de infección por el VPH en pacientes con carcinomas invasores del cuello uterino, de NIC, de NIV y carcinomas invasores de la vulva.

Tinción en micronnucleos de células bucales.

La poca o mucha presencia de micronnucleos en nuestra muestra, tiene un fundamento sobre todo si conociéramos a la persona de la cual se le tomo la muestra debido a que, sugiero que sabiendo la necesidad de realizar un tipo de estudios como este daría un panorama sobe lo que buscamos, saber el tipo de trabajo, condición social, uso de artículos de belleza e íntimos, cuidados personales y hábitos pudieran darnos un panorama de lo buscado y correctas interpretaciones de lo encontrado ya que se sabrían algunos aspectos importantes de la persona que dona su muestra para el estudio.

Pero hablado de la muestra la presencia de escasos micronnucleos puede ser un indicador de buen estado de salud cromosómico y posibles pocas probabilidades de desarrollar algún tipo de neoplasia pero esto puede ser engañoso ya que  la cavidad oral puede reflejar el estado de salud de los individuos, debido a que la mucosa que la recubre, puede presentar evidencias a nivel microscópico como macroscópico de cambios indicativos de enfermedad local sistémica o por

Fig.1.5 según lo analizado y después de constatarlo con el equipo se delibero que se encontraba ante un NIC 2

FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

exposición a sustancias tóxicas así como efectos secundarios por tratamientos. Dichas ventajas, favorecen su utilización en pruebas para evaluar genotóxicos o citotóxicos. La mucosa es una barrera protectora del resto del organismo, es un punto de contacto de agentes potencialmente peligrosos; por tanto, se torna susceptible de sufrir daños.

Fig 1.6 diferentes fotografías tomadas a micronnucleos de cavidad oral.

Fig 1.6 la importancia del estudio de los micronnucleos a nivel bucal puede dar un panorama general del estado de los epitelios de todo el cuerpo y por ende se entiende su importancia. (tomado de international journal of morphology)

CONCLUSIÓN

Bajo el desarrollo de esta práctica y su posterior investigación y análisis de resultados obtenidos se puede concluir de manera general de esta practica que:

Durante el análisis de la muestra de frotis sanguíneo, se obtuvieron valores fisiológicos normales, propios del tejido sanguíneo con lo cual se concluye que no existe presencia o al menos no una patológicamente importante de organismos o reacciones que involucran reacciones inmunologías por lo que se considera y solo

FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

a base de este estudio, que el organismo está en plena salud, Sin embargo, se debe de corroborar con otros tipos de exámenes y mediante la exploración física.

Al estudiar el tejido de cérvix y al clasificarlo como neoplasia interepitelial tipo 2 pudimos corroborar además de un estado patológico, algunas de los conceptos vistos en teoría durante la clase ya que esto está íntimamente relacionado con un cambio de configuración de las estructuras que provocan un súper crecimiento maligno que ayuda a comprender entonces la correlación entre la bioquímica y muchos proceso patológicos y no patológicos que tienen su porque o su manera de ser en base a su conformación química y me parece un punto importante de mencionar.

Complementando aún más lo anterior el estudio de los micronnucleos nos implica un estudio de los nucleótidos y como es que estas estructuras cambian haciéndose no funcionales y configurándose de una manera no benéfica en este caso para los epitelios haciendo marcador para patológica severas y crónicas que son de importancia vital sobre todo ahora en nuestros tiempos

A pesar de los contratiempos de la práctica y de los errores cometidos en ella, al realizar este reporte y entender con detenimiento cada una de sus partes se creó en este alumno un conocimiento verdadero y consciente de lo visto en esta práctica

Cuestionario

1.-Mencione los distintos tipos de microscopios y sus características

FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

Tipo Función figuraMICROSCOPIO DE TRANSPARENCIA O DE CAMPO CLARO

se caracteriza porque emplea luz natural o luz artificial como energía luminosa para formar las imágenes del objeto que se observa. La imagen muestra puntos o áreas iluminadas (generalmente coloreados) sobre un fondo claro o transparente.

MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO.

Se denomina así porque La imagen que se forma está constituida por una serie de estructuras brillantes sobre un fondo oscuro.

MICROSCOPIO DE CONTRASTE DE FASES

transformar, en los objetos transparentes, los pequeños índices de refracción que cada uno de sus componentes posee en diferencias de intensidad luminosa, ofreciendo imágenes donde las estructuras del objeto aparecen contrastadas en tonos oscuros o tonos brillantes y tonos intermedios.

MICROSCOPIO DE CONTRASTE INTERFERENCIAL DIFERENCIAL (CID) O DE NOMARSKI.

El sistema óptico, mediante un filtro especial (de luz polarizada) hace vibrar las ondas de luz en un solo plano, más o menos en un ángulo de 45;

FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

MICROSCOPIO DE LUZ POLARIZADA.

interactúan con las ondas luminosas que incidan en ellas de formas muy variadas, dependiendo de cómo ese objeto está orientado. Así, los índices de refracción del objeto serán diferentes dependiendo de los ejes de rotación del objeto.

MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA O DE RADIACIÓN ULTRAVIOLETA.

se emplean para demostrar una serie de componentes celulares o tisulares pues al unirse de manera específica a algunos de ellos y ser excitados por radiación ultravioleta o longitudes de onda menores

MICROSCOPIO TRIDIMENSIONAL DE RASTREO CONFOCAL.

se obtienen imágenes, preferentemente fluorescentes, sumamente nítidas, con una gran capacidad de resolución y sin que se produzca la fotooxidación del fluorocromo El mecanismo de acción de este microscopio se basa en la iluminación de la muestra con un delgado rayo laser concentrado en un foco que recorre con rapidez, punto por punto,

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN.

construido basándose en los mismos principios de un microscopio fotónico; con la diferencia que en vez de usar energía luminosa emplea haces de electrones y reemplaza las lentes ópticas (de vidrio) por “lentes” construidas mediante campos electromagnéticos.

FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO (SCANNING)

ofrece imágenes con una resolución que alcanzan de 10 a 20 nm. El aumento efectivo es de 15,000 a 50,000 diámetros. Otra ventaja de este microscopio es que forma imágenes con una gran profundidad de foco; de aproximadamente 500 veces que la del microscopio fotónico. Esta propiedad le confiere a la imagen su aspecto tridimensional

2.- Mencione las características de una célula humana y elabore un dibujo de sus partes incluyendo la función de sus orgánulos y principales características biológicas y bioquímicas.

La membrana plasmática es un complejo lipoproteico que define la frontera de la célula separando su contenido del medio que la rodea. El contenido celular comprende el citoplasma y el núcleo. El citoplasma comprende a su vez el hialoplasma, que es el medio interno de la célula, y una serie de estructuras inmersas en él que se denominan orgánulos celulares. Los orgánulos celulares presentan aspectos muy variados: algunos son simples complejos supramoleculares carentes de membrana, como los ribosomas o los centriolos; otros son compartimentos celulares delimitados por membranas, que pueden ser sencillas (como en los lisosomas, retículo endoplásmico, aparato de Golgi, etc.) o dobles (como en mitocondrias y cloroplastos).

FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

3.- Menciona 3 diferentes tipos de tinciones y describe la técnica y uso de cada una.

Tinción de Wright

Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tinción con la sangre hacia arriba.

FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

Cubrir completamente el portaobjetos o cubreobjetos con el colorante de Wright gota a gota.

Dejarlo que permanezca en el frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los glóbulos sanguíneos. El colorante deberá cubrir completamente el portaobjetos, pero no debe derramarse por los bordes.

Deberá agregarse una cantidad adicional si éste se comienza a evaporar. Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador de

Wright, para evitar la coloración débil. Esperar la formación de brillo metálico. Puede usarse de igual manera agua desionizada. Dejar actuar de 10-15 minutos.

Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensión presente un aspecto rosado al examinarlo a simple vista.

Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodón humedecido en alcohol para eliminar cualquier resto de colorante.

Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de inmersión

Tinción de Tricómico de Masson

Desparafinar e hidratar hasta el agua destilada de manera habitual. En material fijado en soluciones de formaldehído o alcohólicas se

recomienda hacer un mordentaje previo con líquido de Bouin durante 1 hora a 56-60 ºC o toda la noche a temperatura ambiente.

Enfriar y lavar en agua destilada hasta que desaparezca el color amarillo. Teñir con hematoxilina férrica durante 10 minutos. Lavar en agua corriente

durante 10 minutos. Lavar en agua destilada. Teñir con la solución de escarlata-fucsina ácida durante 2-5 minutos. Lavar en agua destilada. Tratar con la solución de ácido fosfomolíbdico-fosfotúngstico durante 10-15

minutos si se va a colorear con la solución de azul de anilina, o en la solución acuosa de ácido fosfotúngstico al 5% durante 15 minutos si se desea teñir con verde luz.

Teñir con solución de azul de anilina 15 minutos o con solución de verde luz 5 minutos.

Lavar en agua destilada Diferenciar en la solución de ácido acético al 1% durante 3-5 minutos. Deshidratar, aclarar y montar.

Tinción PAS reactivo de Shiff

FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

Desparafinar e hidratar los cortes con agua del grifo durante 10 min Aclarar con agua destilada Oxidar con ácido periódico al 0.5% durante 15 min Aclarar con agua corriente durante 10 min Teñir con el reactivo Q Path reaactivo e shiff durante 15 min Aclarar con agua corriente durante 10 min Meter en solución de Q path hematoxilina de Harris durante 4 min Aclarar con agua corriente durante 10 min Deshidratar y aclarar Montar en la lamina con la gamma Q path Coverquick

BIBLIOGRAFIA

Micronúcleos

http://www.scielo.cl/scielo.php? pid=S071795022013000200050&script=sci_arttext (nt. J. Morphol. vol.31 no.2 Temuco jun. 2013)

FRANCISCO JAVIER RANGEL ALMENDÁREZ NUA 433796

http://ameqa.org/AMEQA/V_congreso_memorias/EXTENSOS/EXT %20BB24.pdf

frotis sanguíneo

http://es.slideshare.net/laleshkazv/clulas-sanguneas https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003643.htm http://www.tuotromedico.com/temas/leucocitos.htm http://laphysis.blogspot.mx/2011/11/tema-6-fisiologia-de-los-leucocitos.html

Tejido epitelial de cérvix

http://scielo.sld.cu/scielo.php? pid=S0138600X2008000200004&script=sci_arttext (nt. J. Morphol. vol.31 no.2 Temuco jun. 2013)

https://scholar.google.com.mx/scholar? q=neoplasia+intraepitelial+cervical&hl=es&as_sdt=0&as_vis=1&oi=scholart&sa=X&ved=0ahUKEwisyYq4o4jMAhUiuYMKHc1sD4QQgQMIGDAA

http://screening.iarc.fr/colpochap.php?lang=3&chap=2 http://apps.elsevier.es/watermark/ctl_servlet?

_f=10&pident_articulo=90327863&pident_usuario=0&pcontactid=&pident_revista=305&ty=20&accion=L&origen=zonadelectura&web=www.elsevier.es&lan=es&fichero=305v13n01a90327863pdf001.pdf