lfccss-c-01-f04 guía de practica de laboratorio bioquimica biologia celular y molecular ii(1).pdf

LFCCSS-C-01-F04

Pregrado

GUA DE PRCTICAS DE LABORATORIO

BIOQUMICA, BIOLOGA CELULAR Y MOLECULAR II

DOCENTES:

Juana del Valle

ngela Cornejo

Vernica Casabona

Mara del Carmen De Lama

COORDINADOR (A):

Juana del Valle

ngela Cornejo

REA: CIENCIAS DE LA SALUD CICLO: 2015-02

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NDICE GENERAL

Introduccin ........................................................................................................................................ 3

Normas de Bioseguridad .................................................................................................................... 1

Preparacin de una Curva de Calibracin. Colorimetra .................................................................. 12

Enzimas ............................................................................................................................................ 18

Cuantificacin de Glucosa en suero ................................................................................................. 23

Cuantificacin de Colesterol, Triglicridos, Colesterol HDL-LDL en suero: ..................................... 27

Determinacin de cido rico en suero ............................................................................................ 33

Determinacin de Creatinina en suero ............................................................................................. 36

Determinacin de Hierro en suero .................................................................................................... 39

3 4 12 17 22 26 32 35 38

(ME67) Bioqumica, Biologa Celular y Molecular II

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INTRODUCCION

La Biologa es la ciencia que estudia a los seres vivos. Su nombre proviene de

dos palabras griegas bios, que significa " vida " y "logos " que significa

"razonamiento, estudio, tratado

Desde que el hombre tiene nocin de su presencia en este mundo, ya sea por

curiosidad o por una necesidad de supervivencia, es que ha requerido el

entendimiento de su entorno; y conforme fue aumentando en este conocimiento lo

sistematiz en su creacin llamada ciencia.

La Biologa en la Escuela de Medicina de la Universidad de Ciencias Aplicadas

es enfocada holsticamente, integrando tres reas en un continuum de conocimientos

que van desde los conceptos generales de la Ciencia Biolgica, pasando por la

Biologa Celular, Bioqumica y Biologa Molecular.

En este curso el alumno basndose en la curiosidad innata del ser humano,

adentrar en el conocimiento profundo de la Bioqumica, a fin de obtener la base

necesaria que le permita enfrentar los cursos posteriores que se desarrollarn en los

siguientes aos de su carrera.

El objetivo de esta gua es encaminar al alumno, bajo la direccin del Docente,

por el mundo biolgico desde lo ms simple a lo complejo. sta consta de una parte

introductoria, indicaciones generales a tomar en cuenta en todas las prcticas y las

indicaciones especficas por tema a desarrollar.


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NORMAS DE BIOSEGURIDAD

Este es un laboratorio universitario con fines pedaggicos. Por ello, se opta por trabajar con el

material ms inocuo posible para reducir los riesgos. Sin embargo, existen algunos materiales

que requieren de mucha precaucin en su manipulacin y manejo, por lo que todo trabajo en el

laboratorio debe ser considerado como especial.

1. PROCEDIMIENTOS 1.1 Vestimenta y equipos de proteccin para las prcticas en el Laboratorio

1. Para prevenir contaminacin y para proteger a las personas de algn tipo de accidente, es obligatorio el uso de un mandil o guardapolvo blanco mientras se est ejecutando alguna prctica dentro del Laboratorio. Los estudiantes sin mandil o guardapolvo blanco no sern admitidos en el Laboratorio.

2. Bajo ningn concepto se permitir el ingreso a prcticas de Laboratorio a personas que estn usando pantalones o faldas cortas, blusas o camisas de manga cero, camisas que presenten el abdomen descubierto, bufandas, pauelos largos u objetos que dificulten la movilidad. Asimismo, el calzado deber ser cerrado, no se permitirn sandalias, chancletas o zapatos de tacn alto.

3. Las personas que posean cabello largo debern traerlo recogido para minimizar posibilidades de contaminacin de muestras o incendios.

4. Se deber utilizar mascarillas descartables cuando exista riesgo de produccin de aerosoles (mezcla de partculas en medio lquido) o polvos, durante operaciones de pesado de sustancias txicas o biopatgenas, apertura de recipientes con cultivos despus de agitacin, etc.

5. Se debern utilizar guantes apropiados para evitar el contacto con sustancias qumica o material biolgico. Toda persona cuyos guantes se encuentren contaminados no deber tocar objetos ni superficies tales como: telfono, lapiceros, manijas de cajones o puertas, cuadernos, etc.

6. En el caso de diseccin de cuerpos humanos, se recomienda, segn indique el docente, utilizar proteccin ocular en el laboratorio (gafas de seguridad). Los lentes de contacto no estn permitidos ya que aumentan la exposicin de los ojos a productos qumicos y el formaldehido.

1.2 Observaciones antes de iniciar la prctica de Laboratorio

1. Si una gestante debe estar presente durante una prctica de Laboratorio tendr que informar obligatoriamente de su estado al Docente responsable del Laboratorio o al Coordinador del Laboratorio, debido a que est demostrado que el Formaldehido es teratognico en animales de laboratorio mientras que en seres humanos los resultados son ambiguos.

2. Si una persona tiene algn impedimento fsico y debe ingresar a una prctica de Laboratorio y no puede cumplir con la vestimenta y equipos de proteccin personal establecidos en el presente manual, deber informar al Docente responsable del Laboratorio o al Coordinador del Laboratorio.

1.3 Reglas de conducta para las prcticas en el Laboratorio

1. Los estudiantes deben llegar puntualmente a la sesin de Laboratorio. La tolerancia es de 5 minutos. Si llega tarde, deber reportarse inmediatamente con el Profesor responsable quien proceder segn corresponda a lo registrado en el slabo del curso.


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2. Los estudiantes deben ingresar al Laboratorio slo con lo estrictamente necesario para el desarrollo de la prctica segn lo indicado por el Docente responsable de la prctica (un cuaderno de apuntes, su gua y un libro si es que as lo requiere). En el caso del Laboratorio de Simulacin est prohibido el uso de lapiceros, crayones, plumones o similares que puedan manchar los equipos del centro.

3. Las mochilas, bolsas y carteras deben dejarse en los casilleros ubicados en los pasadizos del pabelln (es importante que el alumno siempre tenga su candado a la mano).

4. Queda prohibida la visita de personas ajenas a la prctica que se realiza.

5. Est terminantemente prohibido fumar, comer, ingerir bebidas, manipular lentes de contacto y cosmticos en el laboratorio.

No se permitir:

El uso de celulares, ningn tipo de equipo de sonido, videojuegos u otros objetos ajenos a la prctica de acuerdo a las indicaciones del docente.

El uso de equipo fotogrfico, salvo la autorizacin del Docente o el Coordinador de Laboratorio de la Facultada de Ciencias de la salud.

Descortesas hacia los compaeros, instructores, docentes y personal de apoyo.

Burlas en plena prctica y sobre todo que se utilice un vocabulario indebido.

Que los estudiantes deambulen de un lado para otro sin motivo y que corran dentro del Laboratorio.

6. Una vez que comienza la prctica no se podr salir del laboratorio, sin causa justificada, salvo excepciones y previa autorizacin de las personas responsables.

7. Los estudiantes deben revisar los antecedentes conceptuales y la gua de prctica correspondiente a la sesin previa al inicio de la misma.

8. El uso de cualquier equipo dentro del Centro de Simulacin debe hacerse bajo supervisin expresa del docente o personal del Centro.

9. Cada grupo de prctica (conformado por estudiantes) deber elegir un representante quien recoger el material de la prctica dejando un documento de identidad y firmando en el formato LFCCSS-PLCA-01-F01 Entrega y Devolucin de Materiales.

10. Todo el grupo de prctica en el laboratorio es responsable por la rotura y/o deterioro de material, reactivo y/o equipos del laboratorio durante el desarrollo de las prcticas. En caso de deterioro de materiales o equipos de laboratorio los estudiantes y el docente debe proceder segn el procedimiento LFCCSS-P-02 Deterioro de Materiales y/o Equipos de Laboratorio.

1.4 Cuidado para diseccin y estudios del cuerpo humano y sus rganos

1. Los rganos humanos empleados en los Laboratorios son restos de personas que se utilizan con fines educativos y para investigacin, por lo que deben ser tratados con respeto.

2. Los tejidos humanos y otros materiales obtenidos durante la diseccin del cuerpo donado (esto incluye prtesis, como articulaciones artificiales, marcapasos, vlvulas del corazn, etc.) no deben ser extrados del laboratorio bajo ninguna circunstancia.

3. No se debe transferir las partes del cuerpo de una mesa de trabajo a otra.

4. Despus de cada diseccin, el cuerpo donado debe envolverse con los respectivos cobertores especialmente diseados para mantenerlo humectado y en buen estado.


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5. El trabajo con material punzocortante debe ser supervisado por un Docente o personal de Laboratorio.

6. Las sustancias qumicas para embalsamar son irritantes a la piel y mucosas, debe evitarse el contacto directo de productos en manos y cara. Su inhalacin debe realizarse tomando las precauciones del caso. Para esto es conveniente el uso de mascarilla siempre que no sea tolerable.

6.5 Seguridad e higiene al terminar la prctica en el laboratorio

1. Al terminar la prctica de laboratorio se debe limpiar el rea de trabajo, usando desinfectante si se ha trabajado con tejidos o bacterias. Asimismo, se debe dejar limpia y seca el rea de trabajo si se ha empleado reactivos qumicos.

2. Los estudiantes deben lavar a conciencia el material empleado y manipular con cuidado el material de vidrio mojado.

3. En el laboratorio habr un recipiente para plsticos, para vidrio roto y para material plstico que haya estado en contacto con cultivos de clulas y/o virus. Se debe desechar cada cosa en el envase apropiado.

4. Antes de salir del Laboratorio se debe lavar las manos y los antebrazos, segn indique el Docente responsable de la prctica

5. Se debe consultar al Docente responsable si es apropiado devolver a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados. Nunca se debe dejar frascos de reactivos abiertos, deben mantenerse cerrados.

6. Todo equipo con el que se ha trabajado se debe dejar desconectado y con el cable enrollado, nunca se debe dejar suelto y si tiene funda se debe colocar sobre el equipo.

7. Por ningn motivo se podr retirar material, reactivo, cultivo u otro componente del laboratorio sin autorizacin del Coordinador del Laboratorio.

8. El ambiente de trabajo debe quedar ordenado tal como se recibi, se debe devolver todo los materiales y reactivos que se utiliz en la prctica.

9. Por ningn motivo los estudiantes permanecern dentro del Centro de Simulacin fuera del horario de las sesiones programadas para su entrenamiento por la coordinacin del Centro de Simulacin.

10. Si durante la ejecucin de la prctica del Laboratorio se produjera un accidente, el Coordinador del Laboratorio debe llenar el formato LFCCSS-C-01-F03 Informe de accidentes de Laboratorio y debe enviarlo a la Coordinadora de ciencias pre Clnicas y/o Directores de Carrera correspondiente.

6.6 Procedimientos ante Emergencias (Fuego)

1. En caso de fuego, terremoto, escape de gas u otra eventualidad, se debe abandonar el laboratorio a la mayor brevedad posible, siguiendo las instrucciones del Docente responsable y en estricto orden.

2. En caso de fuego pequeo y localizado, se debe apagar utilizando un extintor adecuado

3. En caso de fuego en el laboratorio se debe retirar los productos qumicos inflamables que estn cerca del fuego y cortar la llave de paso de gas.

4. Si se tiene fuego en la ropa y no est cerca de la ducha de seguridad no debe correr, se debe estirar en el suelo y rodar para apagar las llamas.Una vez apagado el fuego, la persona afectada se debe mantener tendida, y solicitar asistencia mdica inmediata. Nunca utilizar extintor para eliminar el fuego de la ropa.

6.7. Procedimientos ante Quemaduras


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1. Las pequeas quemaduras producidas por material caliente, baos, placa o mantas anti fuego deben se tratadas lavando la zona afectada con agua fra durante 10-15 minutos.

2. Las quemaduras ms graves requieren atencin mdica inmediata.

3. No utilizar cremas o pomadas grasas.

6.8 Procedimientos ante Cortes

1. Los cortes producidos por roturas de material de vidrio son un riesgo comn en el laboratorio. Estos cortes se deben lavar bien, con abundante agua, durante 10 minutos como mnimo.

2. Si el corte es pequeo y deja de sangrar en poco tiempo, se debe lavar con agua y jabn y luego tapar con una venda o apsito adecuado.

3. Si el corte es grande y no para de sangrar, requiere asistencia mdica inmediata.

6.9. Procedimiento ante derrames de productos qumicos sobre la piel

1. Los productos qumicos que se vierten sobre la piel deben ser lavados inmediatamente con agua abundante, como mnimo durante 15 minutos y segn las indicaciones de la ficha tcnica del producto.

2. Las duchas de seguridad son utilizadas en aquellos casos en que la zona afectada del cuerpo sea grande y no sea suficiente el lavado en el lavaojos o lavamanos.

3. Se debe sacar la ropa contaminada a la persona afectada lo antes posible mientras est bajo la ducha.

4. La rapidez en el lavado es muy importante para reducir la gravedad y la extensin de la zona afectada.

5. Se debe proporcionar asistencia mdica una vez tomadas las medidas iniciales bsicas.

6.10 Procedimiento ante contacto de productos qumicos en los ojos

1. En estos casos el tiempo es esencial, cuanto menor sea el tiempo de contacto menor ser el dao producido.

2. Se debe lavar los dos ojos con agua abundante durante 15 minutos como mnimo en el lavaojos.

3. Se debe mantener los ojos abiertos con la ayuda de los dedos para facilitar el lavado debajo de los prpados.

4. Es necesario recibir asistencia mdica, por pequea que parezca la lesin.

6.11 Procedimiento en caso de inhalacin de productos qumicos

1. Conducir inmediatamente la persona afectada a un sitio con aire fresco.

2. Solicitar asistencia mdica inmediata.

3. Tratar de identificar el vapor txico.

6.12 Procedimiento ante la ingestin de productos qumicos

1. Se debe pedir asistencia mdica.

2. Si la persona est inconsciente, se debe colocar en posicin decbito lateral con la cabeza de lado y taparlo con una manta. No se le debe dejar solo.


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3. No se debe inhalar alcohol ni inducirse al vmito sin saber de qu tipo de producto se trata.

6.13 Procedimiento ante emisin de un aerosol posiblemente peligroso

1. Se debe evacuar inmediatamente de la zona afectada

2. No se deber entrar al ambiente afectado durante una hora, para que los aerosoles puedan salir y se depositen las partculas ms pesadas.

3. Se debe colocar seales que prohban la entrada en la zona afectada

4. Las personas afectadas debe consultar al servicio mdico.

6.14 Procedimiento ante rotura o derrame de recipientes con cultivos

1. Empapar papel peridico con fenol al 5% y cubrir la mesa o piso (zona de derrame), dejar que actu durante 30 minutos como mnimo, antes de limpiar el rea.

2. Se debe utilizar guantes en toda la operacin.

6.15 Procedimiento ante accidente con material sospechoso que contenga un virus

1. Al producirse el accidente, se debe lavar la zona afectada con agua y jabn favoreciendo el sangrado de la lesin, si es necesario se cubre la lesin con un apsito.

2. Se tomar una muestra de sangre a la persona afectada, para VIH y hepatitis B.

3. Se debe examinar, una muestra del material con que se contamin el personal. Si la serologa de VIH de la persona afectada es negativa, esta prueba debe repetirse cada mes, hasta por un lapso de seis meses.

2. PICTOGRAMAS DE SEGURIDAD

Los pictogramas son representaciones grficas que indican una serie de riesgos relacionados al uso de un reactivo qumico. Aunque se emplean para superar la barrera del idioma en ocasiones van acompaadas de una palabra en uno o ms idiomas. Habitualmente son figuras negras en fondo naranja para hacerlas ms visibles y llamativas pero tambin pueden ser blanco y negro

Smbolo Peligro Precaucin

Compuestos que pueden inflamar

sustancias combustibles o favorecer la amplitud de incendios ya declarados,

dificultando su extincin

Evitar el contacto con sustancias combustibles


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Por contacto con estas sustancias se destruye tejido vivo y otros materiales

No inhalar los vapores y evitar el contacto con la piel, ojos y ropa

Sustancias que pueden explotar bajo

determinadas condiciones Evitar choque, percusin,

friccin, chispas y calor

Sustancias extremadamente inflamables, bien de forma espontnea,

o en contacto con el aire o el agua.

Aislar de fuentes de calor, llamas

o chispas

Sustancias inflamables o voltiles Aislar de fuentes de calor, llamas

o chispas

Material biolgico potencialmente

infeccioso debido a la posibilidad de

agentes (hongos, virus, bacterias)

Utilizar guantes y mascarillas de

acuerdo a concentraciones

Presencia de material radioactivo,

peligro de exposicin por radiacin

(alfa, beta y/o gamma)

Reduccin del tiempo de exposicin, aumento del blindaje

y aumento de la distancia a la

fuente radiante

Producen irritacin sobre la piel, ojos y

sistema respiratorio No inhalar los vapores y evitar el

contacto con la piel


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Sustancias que afectan de manera

irreversible al medio ambiente Evitar su eliminacin de forma

incontrolada

Sustancias que por inhalacin,

ingestin o penetracin cutnea pueden

entraar riesgos para la salud

Evitar cualquier contacto con el

cuerpo humano

Sustancias que por inhalacin,

ingestin o penetracin cutnea pueden

entraar graves riesgos para la salud

Evitar cualquier contacto con el

cuerpo humano y en caso de

malestar acudir al mdico

Producen efectos nocivos de poca

trascendencia Evitar contacto e inhalacin de

vapores


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Nuevos Pictogramas de peligro:

Nuevos pictogramas de peligro. Se han modificado el fondo y color del marco, as como la

orientacin del cuadrado. Algunos smbolos han sido sustituidos por otros.


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PREPARACION DE UNA CURVA DE CALIBRACION COLORIMETRIA

OBJETIVOS:

Determinar la concentracin de una sustancia por la intensidad del color que presenta

utilizando la tcnica de fotocolorimetra.

Comprender los conceptos planteados por Lambert y Beer.

Conocer los componentes y maniobrar de manera adecuada un fotocolormetro.

FUNDAMENTO TEORICO:

La fotocolorimetra se fundamenta en la mayor o menor absorcin de luz de acuerdo al

mayor nmero de molculas en una solucin, donde la tonalidad depender de la capacidad de

absorber un rayo de luz de determinada longitud de onda. La fotocolorimetra manipula las

variables de este fenmeno controlando la luz incidente proveniente de un foco luminoso y su

pureza, de modo tal que slo incida aquella luz que es especficamente adsorbida por la

partcula que deseamos analizar (analito).

Conociendo la longitud de onda ptima a la que absorben los analitos o especies

directamente relacionadas con ellos, se pueden realizar las pruebas analticas en los

laboratorios clnicos aplicando las leyes de fotocolorimetra.

La relacin de la longitud de onda con la frecuencia y con la energa de radiacin es

inversamente proporcional, por lo que las radiaciones ms energticas, ms penetrantes, son a

su vez las de mayor frecuencia y menor longitud de onda. En la regin visible del espectro

luminoso se aprecia el color detectado por el ojo humano, que va desde violeta hasta rojo, que

corresponde a las longitudes de onda que transmite, no que absorbe. Por ello, para realizar

mediciones de absorcin es necesario utilizar la longitud de onda en la que absorbe luz la

solucin coloreada.

Las tcnicas espectroscpicas se basan en la medida de los

efectos de la interaccin de las radiaciones electromagnticas con la

materia. Al incidir sobre el material biolgico con una intensidad inicial

(I0), las molculas y/o tomos del mismo absorben parte de esa

radiacin (Ia), otra parte la dispersa (Id) y otra atraviesa la muestra (It).

La cantidad de radiacin absorbida se ajusta a leyes fsicas concretas dependientes de las

caractersticas tanto de la radiacin como de la materia sobre la que se irradia.

Ia

ItIo


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La radiacin incidente ser igual a la suma de la radiacin absorbida, la dispersada y la

que atraviesa la muestra sin entrar en contacto con los tomos o molculas de la misma.

Ley de Lambert-Beer:

Es el resultado de la combinacin de las leyes de absorcin de ambos e indica la

relacin directamente proporcional que existe entre la absorbancia de una muestra y su

concentracin, al ser constantes los valores de trayecto ptico (b=1 cm), la longitud de onda de

la radiacin incidente y absorbida, expresada como absortividad molar con el coeficiente de

absortividad molar (psilon).

A= log I0/I = .b.c

Siendo:

I0 e I = Intensidad de la radiacin e intensidad de la radiacin final, despus de haber travesado

la cubeta de la muestra, respectivamente.

A = Absorbancia, Medida de la absorcin de la radiacin. Tambin se conoce como densidad

ptica o extincin. Es una magnitud adimensional. Generalmente los espectrofotmetros

expresan la absorbancia hasta las milsimas. Suelen ser magnitudes que oscilan entre 0 y 1,

aunque en determinados anlisis en los que se mide la variacin de absorbancia con el tiempo

pueden obtener valores superiores.

B = Trayecto ptico, su valor est estandarizado en 1 cm. Es la longitud de la muestra que atraviesa la radiacin cuando sta se encuentra depositada en una cubeta. Es una medida

estandarizada para todos los espectrofotmetros. (1 cm).

C = Concentracin de la sustancia (analito) de la muestra. Suele expresarse en moles/L (con la

absortividad molar) o g/L (si se emplea la absortividad): Si se despeja de la ecuacin de la ley

de Lambert-Beer.


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CLCULOS: Clculo de Concentraciones Para obtener la concentracin de una muestra problema se pueden utilizar dos procedimientos:

- Factor de calibracin.

- Curva de calibracin.

Factor de calibracin: Es la concentracin de una sustancia que corresponde a una unidad de medida,

generalmente 0,001 de absorbancia.

FC = Concentracin del patrn/ Absorbancia del patrn

Curva de Calibracin: La curva de calibracin consiste en la obtencin de la lectura de absorcin o de

porcentaje de transmitancia que corresponde a una secuencia creciente de concentraciones,

estas son graficadas en un papel milimtrico si se trata de absorbancia o densidad ptica y de

papel semilogartmico si se trata de % de transmitancia.

Concentracin problema [ ] = Absorbancia del problema (DO) x Factor de Calibracin (FC)


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MATERIALES: Azul de metileno (concentracin 0,025 g/L)

Pizeta con agua destilada

Espectrofotmetro Genesys

06 Tubos de ensayo

03 Pipetas de 5 y 10 mL

01 Gradilla

Lminas de parafina

Papel milimetrado (1 hoja por alumno)

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

El experimento consiste en preparar diluciones de concentracin creciente del

colorante azul de metileno y leerlas en cubetas de cuarzo en el fotocolormetro Genesys,

llevando a cero (0) el fotocolormetro con agua destilada. Para ello, se prepararn seis tubos de

ensayo de acuerdo al esquema y leern las soluciones en el fotocolormetro a una longitud de

onda de 540 nm.

Por ltimo, elaborar una grfica utilizando papel milimetrado para las lecturas hechas

en Densidad ptica (absorbancia).

Construir una curva de calibracin en papel milimetrado segn los resultados obtenidos

en el experimento.

TUBO (No)

Agua destilada

(mL)

Colorante Azul de Metileno

(mL)

Concentracin (g/L)

Absorbancia (Abs o D.O.)

1 10 0

2 8 2

3 6 4

4 4 6

5 2 8

6 0 10

Un valor de transmitancia del 100% representa una sustancia totalmente

transparente (no absorbe radiacin), mientras que un valor de transmitancia 0 representa

una sustancia totalmente opaca (absorcin total de la radiacin).


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CUESTIONARIO: Instrucciones:

Responda adecuadamente cada una de las preguntas que se presentan a continuacin:

1. Cul es el fundamento de la tcnica de Fotocolorimetra?

2. Cules son las principales tcnicas espectroscpicas que se utilizan en el anlisis

clnico?

BIBLIOGRAFA Gonzles de Buitrago, J. 2005. Tcnicas y mtodos de Laboratorio Clnico. 2 edicin.

Masson S.A. Barcelona Espaa


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ENZIMAS

OBJETIVOS:

Comprobar la accin cataltica de las enzimas catalasa y amilasa.

FUNDAMENTO TEORICO:

Las enzimas en su mayora son protenas que tienen la funcin de acelerar reacciones

qumicas en sistemas biolgicos. El trmino que define la rapidez a la que se produce una

reaccin qumica, catalizada o no, es la velocidad. Las enzimas incrementan la velocidad

actuando como catalizadores.

Por definicin, un catalizador es eficiente en cantidades muy pequeas, no es alterado

por la reaccin y afecta solamente la velocidad, mas no la posicin de equilibrio de una

reaccin. Todas las enzimas tienen esta propiedad, pero, adems, muestran una gran

especificidad en su catlisis debido al diseo de su sitio activo, siendo de unir y afectar

solamente molculas con un ordenamiento atmico particular.

Las enzimas aumentan la velocidad de las reacciones disminuyendo efectivamente la

cantidad necesaria de energa de activacin. Su funcin depende de la configuracin espacial

particular, especialmente en los sitios activos donde se unen los substratos.

Las enzimas participan en la mayor parte de las reacciones qumicas que tienen lugar

en la clula. Esto es posible gracias al hecho de que las enzimas son biocatalizadores

producidos por las mismas clulas. Las enzimas actan a una temperatura ptima de 25 C

37 C y cuando se las congela se inactivan. A altas temperaturas comienzan a

desnaturalizarse, por sta razn la temperatura no puede elevarse ms all de 37 C. Sin

embargo existen bacterias y algunas algas que soportan temperaturas de 100 C.

De la misma forma, estos biocatalizadores actan a un pH ptimo, algunos necesitan

un pH alcalino, otros un pH cido y otros, tal vez las ms importantes, actan en un pH neutro.


LFCCSS-C-01-F04 18

MATERIALES: - 25 ml de Perxido de Hidrgeno (Agua oxigenada al 20%).

- 5 Tubos de ensayo 150x15 mm.

- 2 Baquetas.

- 5 Paquetes de 1 g Arena fina limpia.

- 2 Beaker de 100 ml.

- 50 ml de Solucin de NaCl 0,9 % o Suero fisiolgico.

- Pizeta con Agua destilada.

- 05 Pipetas de 5 ml.

- 25 ml solucin de Lugol.

- 25 ml de Almidn al 1%.

- 01 Gradilla para tubos de ensayo.

- 01 Regla plstica transparente de 25 cm.

Material biolgico:

- 2 g de los siguientes tejidos: Hgado, Carne, Tomate y Papa.


Experiencia 1.-PRESENCIA DE CATALASA

Tubo

1

2

3

4

5

2gr

Hgado

Carne

Tomate

Papa

Agua

- Marcar con plumn marcador el volumen del tejido.

- Con la bagueta, homogenizar el tejido.


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- Adicionar 0,5 ml de perxido de hidrogeno e inmediatamente cronometrar el tiempo de

reaccin en cada tubo (segundos).

- Medir la altura que alcanza la reaccin del perxido de hidrogeno.

OBSERVE Y ANOTE:

La accin que tiene la catalasa sobre el perxido de hidrgeno.

La velocidad de desprendimiento del oxgeno.

Mida la altura que alcanzado la concentracin de oxgeno desprendido en cada uno

de los tubos.

Interprete la reaccin bioqumica que se produce.

Experiencia 2.- EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE SUSTRATO

Tubo

1

2

3

4

5

2gr

Hgado

Carne

Tomate

Papa

Agua

- Prepare una batera de 5 tubos de ensayo.

- Coloque en cada uno de ellos 2 gr de Hgado, Carne, Tomate, Papa y Agua destilada

respectivamente.

- Coloque 1 g de arena y con una baqueta rompa las paredes y membranas celulares.

- Adicionar 0,5 ml de perxido de hidrogeno e inmediatamente cronometrar el tiempo de

reaccin en cada tubo (segundos).

- Medir la altura que alcanza la reaccin del perxido de hidrogeno.

OBSERVE Y ANOTE:

La velocidad de desprendimiento del oxgeno.

Mida la altura que ha alcanzado la concentracin de oxgeno desprendido en cada

uno de los tubos.

Compare los resultados con los de la experiencia anterior.

Interprete la reaccin bioqumica que se produce.


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Experiencia 3.- PRESENCIA DE AMILASA SALIVAL

- Coloque 2 ml de saliva en una probeta, adicione agua destilada hasta enrazar 5 ml,

luego homogenizar.

- Para comprobar que no hayan trazas de almidn en la muestra de saliva, en un tubo a

parte colocar 1ml de la mezcla homogenizada y adicionar 2 gotas de lugol. Si la

coloracin es amarilla proseguir con el experimento (no debe haber coloracin azul o

violeta oscuro).

- En otro tubo de prueba mezcle 3 ml de almidn al 1% y 1 ml de saliva diluida. Observar

la accin enzimtica de la amilasa agregando 2 gotas de lugol.

- En caso la reaccin no sea inmediata en otro tubo aparte, mezclar 3 ml de almidn al

1%, 1 ml de saliva diluida y 5 gotas de solucin de NaCl 0,9% (Cloro como activador

metlico). Verificar la accin enzimtica de la amilasa agregando 2 gotas de lugol.

OBSERVE Y ANOTE

El tiempo necesario para que el almidn sea hidrolizado. CUESTIONARIO:

Instrucciones:


1. Defina con un ejemplo los siguientes trminos:

a. Catalizador

b. Sustrato.

c. Sitio activo

d. Apoenzima

e. Isoenzima

2. Mencione y explique los Factores que influyen en la actividad enzimtica.

3. Explique la funcin enzimtica de la Catalasa y Amilasa en nuestro organismo.

4. Cules son las enzimas de importancia clnica? Explique 4 de ellas.


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BIBLIOGRAFA Alberts, B. Jonson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Walter, W. Biologa Molecular de la

Clula4ta Edicin. Garland Science, Taylor & Francis Group, Londres.

Devlin T. 2004. Bioqumica. 4ta edicin. Editorial Reverte, S.A. Mxico D.F.

Nelson, D.L. y Cox, M.M. 2005. Lehninger. Principios de Bioqumica. 4 edicin. Ed. Omega.

Barcelona.

Donald Voet; Judith G. Voet; Charlotte Pratt. 2006. Fundamentos de Bioqumica. 3 Edicin.

Medica Panamericana. Buenos Aires.


LFCCSS-C-01-F04 22

CUANTIFICACIN DE GLUCOSA EN SANGRE

OBJETIVOS:

Determinar los niveles de glucosa en muestras de suero.

FUNDAMENTO TEORICO:

La glucosa es la forma principal en la que los glcidos que provienen del tracto

intestinal son presentados al resto de las clulas corporales. La glucosa es el nico combustible

utilizado en proporcin apreciable por unas pocas clulas especializadas y es el principal

combustible utilizado por el cerebro.

La sangre es el vehculo por el cual la glucosa es distribuida a los tejidos y esta puede

provenir de fuentes exgenas (realimentacin) o de la reserva de carbohidratos. El glucgeno

(en animales, hongos y bacterias) y el almidn (en plantas) sirven de reservas de glucosa para

uso metablicos posteriores. En los animales, una provisin constante de glucosa es esencial

para los tejidos como el cerebro y los eritrocitos, los cuales dependen casi por completo de

glucosa como fuente de energa.

La movilizacin de glucosa desde los depsitos, en principio del hgado, proporciona un

suministro constante de glucosa. Cuando sta es abundante, como, por ejemplo,

inmediatamente despus de una comida, se acelera la sntesis de glucgeno.

Cuando es requerido por el organismo, estas reservas pueden ser movilizadas y

degradadas rpidamente, lo que permite una autonoma mxima de 4 a 8 horas dependiendo

de la actividad realizada. Por ello, el ser humano es altamente dependiente de la ingestin de

carbohidratos de forma peridica.

Recuadro 3.2 Fundamentos de

Bioqumica ( Medica Panamericana 2006)


LFCCSS-C-01-F04 23

Durante la actividad fsica, los msculos del cuerpo utilizan mayor cantidad de glucosa,

que cuando el cuerpo est en reposo y esto hace que los niveles de glucosa en la sangre

bajen. Por lo cual, se puede evaluar la eficiencia del metabolismo de glucosa cuantificando sus

niveles en sangre.

Uno de los mtodos para determinar glucosa es el de la oxidacin enzimtica de la

misma para la obtencin de cido glucnico y perxido de hidrgeno. Paso seguido, se estima

el perxido en base a un cromgeno que es oxidado en presencia de una peroxidasa para

formar un compuesto colorado.

MATERIALES: Tubos de ensayo

01 Gradilla para tubos de ensayo

Micropipetas de volmenes 10ul y 1000ul.

Tips de 10ul y 1000ul.

01 Pipeta de 5 ml

Reactivo enzimtico para la determinacin de Glucosa

Standar de Glucosa ( 100 mg/dl)

Lminas de parafina

Bao mara 37C

Espectrofotmetro.

Material Biolgico:

Muestras de suero problema


LFCCSS-C-01-F04 24


- Se utilizar como muestra el suero de la sangre extrada (muestra de suero problema

asignada a cada grupo)

- Rotular los tubos de ensayos como se indica en el cuadro.

- Pipetear los volmenes correspondientes a cada tubo segn como est indicado en el

cuadro.

- Mezclar, sellar los tubos con lminas de parafina e incubar por 5 minutos a 37 C o a

temperatura ambiente (20 C a 25 C) por 10 minutos.

- Leer la absorbancia (longitud de onda: 505 nm) llevando a cero el espectrofotmetro

con el blanco de reactivo.

- El color resultante es estable por lo menos unos 20 minutos.

- Calcular la concentracin de la glucosa en las muestras proporcionadas, segn la

siguiente frmula:

FC = 100/ Absorbancia del Standard

Glucosa (mg/dL) = FC x Absorbancia de la muestra

RANGO:

Blanco Standard Muestra 1 Muestra 2

Muestra (mL) --- --- 0.01 0.01

Standard Glucosa (mL) --- 0.01 --- ---

Reactivo ( mL) 1 1 1 1

Glucosa en ayunas: 70-99 mg/dl


LFCCSS-C-01-F04 25

OBSERVE Y ANOTE:

Segn sus clculos discuta los resultados obtenidos.



1. Esquematiza y explica el mecanismo de absorcin intestinal de la glucosa y la

liberacin de insulina en las clulas beta pncreas.

2. Explique qu vas metablicas proveen combustible para el organismo que se

encuentra en estado de ayuno y ejercicio.

3. Esquematiza y explica cada punto de regulacin del proceso de Gluclisis.

4. Mencione y explique 4 enfermedades por almacenamiento de glucgeno.

BIBLIOGRAFA Devlin T. 2004. Bioqumica. 4ta edicin. Editorial Reverte, S.A. Mxico D.F.

Nelson, D.L. y Cox, M.M. 2005. Lehninger Principios de Bioqumica. 4 edicin. Ed. Omega.

Barcelona.

Donald Voet; Judith G. Voet; Charlotte Pratt. 2006. Fundamentos de Bioqumica. 3 Edicin.

Medica Panamericana. Buenos Aires.

Cooper, D.; Krainik, A.; Lubner, S.; Reno, H.2007.Manual Washington de Teraputica

Mdica.


LFCCSS-C-01-F04 26

CUANTIFICACIN DE COLESTEROL, TRIGLICRIDOS Y COLESTEROL HDL-LDL EN SUERO

OBJETIVOS:

Determinar los niveles de colesterol total y triglicridos en muestras de suero.

Determinar los niveles de colesterol HDL y LDL en muestras de suero.

FUNDAMENTO TEORICO:

Los lpidos son el cuarto grupo principal de molculas presentes en las clulas. Los

lpidos son sustancias de origen biolgico en gran medida hidrfobas, solubles en solventes

orgnicos e insolubles en agua. Participan en funciones orgnicas diversas como ser material

estructural, depsitos energticos, cofactores en reacciones enzimticas e, incluso, algunos

poseen una funcin hormonal o de sealizacin celular.

El colesterol es un componente esencial de las membranas plasmticas, se encuentra

presente en la sangre, bilis, y tejido cerebral. Es el precursor de los cidos biliares, esteroides y

de la vitamina D. El colesterol as como los triglicridos y fosfolpidos son esencialmente

insolubles en el agua. Por su carcter hidrofbico, el colesterol en sangre es transportada por

las lipoprotenas desde el tejido de origen (el hgado donde son sintetizados o el intestino

donde son absorbidos a partir de la dieta) hacia los tejidos donde sern almacenados o

consumidos.

Las lipoprotenas son complejos con mltiples componentes proteicos y lipdicos, que

transportan los lpidos en la sangre, ya que por ser sustancias no polares hidrofbicas no

pueden circular libremente.

El colesterol es esencial para el crecimiento y la viabilidad de las clulas de los

organismos superiores. No obstante, los altos niveles de colesterol srico son considerados

como un importante factor de riesgo de enfermedad y muerte porque contribuyen a la

formacin de placas aterosclerticas.

La evaluacin de los niveles de colesterol (total, asociado a HDL, asociado a LDL) y

los niveles de triglicridos constituyen una herramienta valiosa para la clasificacin de los

desrdenes lipdicos y para prevenir los riesgos de ateroesclerosis y enfermedades coronarias.

El colesterol se determina por las siguientes reacciones enzimticas:


LFCCSS-C-01-F04 27

MATERIALES: 12 Tubos de ensayo


01 Pipeta de 5 ml y 10 ml



Reactivo enzimtico para la medicin de Colesterol (C)

Reactivo enzimtico para la medicin de Triglicridos

Standard de Colesterol (C) (200 mg/dl)

Standard de Triglicridos (200 mg/dl)

Lminas de parafina

Bao mara 37C

Espectrofotmetro.

Material biolgico:



Experiencia 1.-DETERMINACION DE COLESTEROL TOTAL


c

u

a

d

r

o

.

- Agitar bien e incubar por 5 minutos a 37 C a Bao Mara o 10 a temperatura ambiente.

- Leer las absorbancias a 505 nm, dentro de los primeros 30 minutos

- Calcular la concentracin del colesterol, segn la siguiente frmula:

Blanco Standard Muestra

Suero (mL) - - 0.01

Standard Colesterol (mL)

- 0.01 -

Reactivo de color (C) (mL) 1 1 1


LFCCSS-C-01-F04 28


Colesterol (mg/dl) = FC x Absorbancia de la muestra

RANGO:

OBSERVE Y ANOTE:


Experiencia 2.-DETERMINACION DE TRIGLICERIDOS


cuadro.

- Agitar bien e incubar por 5 minutos a 37 C a Bao Mara o 10 minutos a temperatura

ambiente.

- Leer las absorbancias a 505 nm dentro de los primeros 30 minutos.


Triglicridos (mg/dl) = FC x absorbancia de la muestra

RANGO:


Suero (mL) - - 0.01

Standard de Triglicridos

(mL) - 0.01 -


Colesterol en ayunas: < 200 mg/dl

Triglicridos en ayunas: < 150 mg/dl


LFCCSS-C-01-F04 29

OBSERVE Y ANOTE:


Experiencia 3.-DETERMINACION DE COLESTEROL HDL

- Se utilizar una muestra previamente precipitada.


cuadro.


ambiente.


NOTA: Utilizar el estndar del kit de Colesterol Total, con el valor asignado de 76,5

mg/dl de Colesterol HDL.

- Calcular la concentracin del colesterol HDL en el sobrenadante:

FC = 76,5/ Absorbancia del Standard

Colesterol (mg/dl) = FC x absorbancia de la muestra

RANGO:


Sobrenadante (mL) - - 0.1

Standard Colesterol (mL) - 0.01 -


Colesterol HDL en ayunas: 40-60 mg/dl


LFCCSS-C-01-F04 30

OBSERVE Y ANOTE:


Experiencia 4.-DETERMINACION DE COLESTEROL LDL

- Se utilizar una muestra previamente precipitada.


cuadr

o.


ambiente.


NOTA: Utilizar el estndar del kit de Colesterol Total, con el valor asignado de 240

mg/dl de Colesterol HDL.

- Calcular la concentracin del colesterol LDL en el sobrenadante:

FACTOR = 240/ Absorbancia del Stndard

Colesterol sobrenadante (mg/dl) = FC x absorbancia de la muestra

Colesterol LDL (mg/dl) = Colesterol Total Colesterol de la muestra

RANGO:

OBSERVE Y ANOTE:


Sobrenadante (mL) - - 0.1

Standard Colesterol (mL) - 0.01 -


Colesterol LDL en ayunas:


LFCCSS-C-01-F04 31




1. Esquematice y explique la sntesis y el transporte del colesterol.

2. Explique el mecanismo de digestin y absorcin intestinal de lpidos.

3. Esquematice y explique el transporte de las Lipoprotenas.

4. Menciona y explique 2 enfermedades causadas por alteraciones en el metabolismo de

las lipoprotenas.

BIBLIOGRAFA Alberts, B. Jonson, A., Lewis, J., Raff, M., Roberts, K., Walter, W. Biologa Molecular de la

Clula. 4ta Edicin. Garland Science, Taylor & Francis Group, Londres.

Devlin T. 2004. Bioqumica. 4ta edicin. Editorial Reverte, S.A. Mxico D.F.

Nelson, D.L. y Cox, M.M. 2005. Lehninger. Principios de Bioqumica. 4 edicin. Ed. Omega.

Barcelona.


Mdica.


LFCCSS-C-01-F04 32

DETERMINACIN DE CIDO RICO EN SUERO

OBJETIVOS:

Determinar la concentracin de cido rico en suero.

FUNDAMENTO TEORICO: En los seres humanos el producto final de la degradacin de las purinas (un tercio de

los casos) y de la sntesis de novo (dos tercios de los casos) es el cido rico, el cual se

excreta en la orina.

Los humanos no tienen la enzima uricasa (oxidasa de uratos), la cual convierte el

cido rico en alantona y es fcil de excretar por va renal.

Aproximadamente, 90% del cido rico es filtrado libremente por el glomrulo y

reabsorbido posteriormente por un cotransportador, conocido como URAT1, el cual se localiza

en el lado apical de la clula del tbulo renal proximal. La disminucin en la excrecin renal del

cido rico es el mecanismo principal de la gota, mientras que en 10% de los casos se debe a

excesiva produccin del mismo.

La hiperuricemia se define como la concentracin plasmtica de urato mayor de 7

mg/dl. A pesar de que la precipitacin de cristales de urato monosdico requiere niveles de

cido rico por encima del de saturacin, slo un porcentaje reducido de individuos con

hiperuricemia padecen gota, porcentaje que aumenta a medida que los niveles de cido rico

srico suben acercndose al 50% en aqullos cuyo cido rico srico es superior a 9 mg/dL.

La gota es una enfermedad caracterizada por niveles elevados de cido rico en los lquidos

corporales. Su manifestacin ms comn es la inflamacin articular extremadamente dolorosa,

causada por la acumulacin de cristales casi insoluble de urato de sodio.

Para la determinacin de cido rico por oxidacin enzimtica, ste es oxidado por la

enzima uricasa generndose alantona y H2O2. Este ltimo, mediante una reaccin mediada

por la enzima peroxidasa, reacciona con el AC. 3-5 Dicloro 2 Hidroxi Bencensulfnico y

4 AAP, producindose un compuesto coloreado con un mximo de absorcin a 520 nm en

cantidad proporcional de cido rico presente en la muestra.

cido rico --- UOD------- Alantona + H 2 O 2 H 2 O 2 + DMAB + 4-AAP ------- POD ---- H2O + COMPLEJO COLOREADO


LFCCSS-C-01-F04 33



01 Pipeta de 5 ml

Micropipetas de volmenes 10ul, 200ul y 1000ul.

Tips de 10ul, 100ul y 1000ul.

Reactivo enzimtico para cido rico

Standard (10 mg/dl)

Lminas de parafina

Bao mara 37C

Espectrofotmetro

Material biolgico:



Las pipetas a utilizar deben estar limpias y libres de residuos para no contaminar el

reactivo. Llevar el reactivo a la temperatura a la que se realizar el ensayo. Utilizar los

volmenes indicados en la siguiente tabla:

Blanco

Standard

Muestra

Muestra (ml)

-

-

0.025

Standard (ml)

-

0.025

-

Reactivo de Trabajo

(ml)

1.00

1.00

1.00

Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 C. Leer las densidades pticas llevando el

espectrofotmetro con el blanco de reactivo. El color del reactivo es estable por lo menos 30

minutos.

Calcular la concentracin de cido rico en sangre.


cido rico (mg/dL) = FC X Absorbancia de la Muestra


LFCCSS-C-01-F04 34

RANGO:

OBSERVE Y ANOTE:




1. Esquematice y explique la sntesis de cido rico.

2. Esquematice y explique la biosntesis de la rea.

3. Qu alteraciones metablicas pueden traer como consecuencia un aumento en los

niveles sricos de cido rico? Explique.

4. Cul es la base bioqumica para la accin de los medicamentos utilizados en la gota?

Explique con un ejemplo.


DOcon C. 2006. Fundamentos y Tcnicas de Anlisis Bioqumico. Thomson Editores Spain

Parainfo, S.A. Madrid, Espaa.

Pacheco Leal, D. 2004. Bioqumica Mdica. Editorial Limusa, S.A. Mxico D.F.


Mdica.

cido rico en ayunas: 3-8 mg/dl


LFCCSS-C-01-F04 35

DETERMINACIN DE CREATININA EN SUERO

OBJETIVOS:

Determinar la concentracin de creatinina en suero.

FUNDAMENTO TEORICO: La creatina (Cr) o -cido metilguanidinoacticos es un compuesto nitrogenado natural,

que fue identificada en 1832 por el qumico francs Michel Eugne Chevreul, quien descubri

un componente del msculo esqueltico al que denomin con el nombre griego Kreas (carne) y

que lo relacion con la produccin de trabajo muscular. Efectivamente, la creatina tiene un

papel esencial en el almacenamiento y liberacin de grandes cantidades de energa. La Cr es

introducida en las clulas de los tejidos gracias a la accin de un transportador de membrana.

La creatina se combina con un grupo fosfato originando la fosfocreatina (PCr).Este

compuesto tiene gran importancia en el metabolismo energtico durante la contraccin del

msculo esqueltico y la recuperacin tras un esfuerzo fsico, debido a que este compuesto es

el responsable de la resntesis de ATP a partir de ADP por medio de una reaccin catalizada

por la enzima creatinquinasa. La PCr es reutilizada para generar ATP cuando es necesario,

gracias a la formacin-rotura del enlace fosfato, lo que proporciona un sistema de tampn

fosfato de alta energa, especialmente relevante en tejidos con alta demanda energtica como

corazn, cerebro y msculo. Finalmente el exceso de Cr y PCr resultado de esta va, se

degrada a creatinina (Crn) por un proceso no enzimtico, y se excretar por la orina, siendo su

eliminacin diaria directamente proporcional a la Cr corporal total del individuo.

La creatinina en presencia de picrato alcalino produce un color anaranjado (reaccin de

Jaff), que se mide a 510 nm, cantidad proporcional a su concentracin en la muestra.



01 Pipeta de 5 ml

01 Pizeta con agua destilada



Reactivo para cido rico

Espectrofotmetro


LFCCSS-C-01-F04 36

Material biolgico:






Desconocido Blanco reactivo

Muestra o Standard (ml) 0.10 ------

Reactivo trabajo (ml) 1.00 1.00

Agua destilada (ml) ------ 0.10

Mezclar y poner en la celda de lectura, llevando a cero el instrumento con el blanco

reactivo (510 nm). A los 20 segundos exactos leer absorbancia inicial (A1). Esperar

60 segundos exactos y leer absorbancia final (A2).

Calcular la concentracin de creatinina en suero.

RANGOS:

OBSERVE Y ANOTE:


Hombres: 0.7-1.4 mg/dl

Mujeres: 0.6-1.2 mg/dl

FC = Concentracin del Standard/ Diferencia de las Absorbancias del Standard.

Creatinina (mg/dL) = FC X Diferencia Absorbancia de la Muestra.


LFCCSS-C-01-F04 37



1. Qu es la Creatina? En qu se diferencia la Creatina con la Creatinina?

2. Esquematice y explique detalladamente la sntesis de Creatina.

3. Explique 2 patologas que produce hipercreatininemia.





Carrillo, P.;Gilli, M. Los efectos que producen la creatina en la performance deportiva.

Invenio, vol. 14, nm. 26, junio, 2011, pp. 101-115,


LFCCSS-C-01-F04 38

DETERMINACIN DE HIERRO EN SUERO

OBJETIVOS:

Determinar la concentracin del hierro en suero.

Discutir segn los valores obtenidos para las muestras.

FUNDAMENTO TEORICO:

El hierro es un mineral vital para el ser humano. Participa en mltiples procesos

metablicos, ya que se encuentra como componentes de enzimas y otros complejos

moleculares. El contenido de hierro en el cuerpo humano se encuentra distribuido en tres

formas: el almacenado, que se encuentra dentro de las clulas; el hierro en uso, que se

encuentra en la hemoglobina, enzimas y varios tipos de protenas; y el circulante. Dentro de las

funciones principales del hierro se puede mencionar: transporte de oxgeno a travs de la

hemoglobina, sntesis de ADN, al formar parte de la enzima ribonucleotido reductasa; y

transporte de electrones, por tener la capacidad de aceptar y donar.

El hierro se puede fijar a una serie de macromolculas e influir sobre su estructura y

funcin, con resultados perjudiciales para el organismo. Para protegerse contra estas

reacciones, existen diversas protenas fijadoras del hierro que funcionan especficamente para

almacenarlo y transportarlo. Estas protenas tienen una gran afinidad por el metal y, en estado

fisiolgico normal, tambin tienen centros de fijacin de hierro que no estn totalmente

ocupados. En algunas protenas se ha caracterizado bien la interaccin

La evaluacin de la concentracin de hierro srico es de gran utilidad, dado que un

aumento en sus niveles se encuentra asociado a diversas patologas tales como destruccin

aumentada de los glbulos rojos, defectos en el mecanismo de almacenaje, etc. De la misma

manera, su disminucin se asocia entre otras patologas a problemas de absorcin y

almacenaje, etc.

El hierro srico se determina disociando el Fe (III) unido a protenas mediante un buffer

cido que contiene como reductor clorhidrato de hidroxilamina. El Fe (II) producto de esta etapa

reacciona con el agente cromognico generando un complejo coloreado que se mide

fotomtricamente a 560 nm.


LFCCSS-C-01-F04 39



01 Pipeta de 5 ml


Tips de 100ul, 200 ul y 1000ul

01 Pizeta con agua destilada

Buffer cido: 50 ml de buffer (estable a temperatura ambiente)

Solucin Standard (500 g/dl)

Lminas de parafilm

Bao Mara 37C

Espectrofotmetro

Material biolgico:






Blanco

Standard

Muestra

Buffer cido (ml)

2.50

2.50

2.50

Agua destilada (ml)

0.50

-

-

Standard (ml)

-

0.50

-

Muestra

-

-

0.50

Mezclar e incubar a 37 C por 10 minutos. Leer la absorbancias (A1) contra el blanco reactivo a

560nm. Determine las diferencias de absorbancias restando A2 A1.


LFCCSS-C-01-F04 40

Calcular la concentracin de hierro en sangre.

RANGOS:

OBSERVE Y ANOTE:



Responda adecuadamente cada una de las preguntas que se presentan a continua

1. Explique la absorcin, transporte y almacenamiento de hierro en el organismo. No debe

olvidar incluir las protenas involucradas en estos procesos.

2. Mencione las protenas que contienen hierro. Explique detalladamente cada una.

3. Mencione y explique 2 patologas por acumulacin y por deficiencia de Hierro.





Toxqui, L.; De Piero, A.; Courtois, V.; Bastida, S.; Snchez, F.; Vaquero, M. Deficiencia y

sobrecarga de hierro; implicaciones en el estado oxidativo y la salud cardiovascular. 2010;

25(3):350-365.


Mdica.

Ferremia (g/dl) = Abs.Muestra Abs. Bl. Muestra X 500

Abs. Standard

Hombres: 45-160 g/dl

Mujeres: 30-160 g/dl

lfccss-c-01-f04 guía de practica de laboratorio bioquimica biologia celular y molecular ii(1).pdf

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