Título:

“MANEJO DE LOS PRINCIPALES EQUIPOS E INSTRUMENTOS, PREPARACIÓN DE MATERIAL DE VIDRIO, MATERIAL AUXILIAR

Y SU FORMA DE ESTERILIZACION”

Asignatura: Microbiología

Docente responsable: Jacinto Hervias, Pedro

Grupo de laboratorio: G1

Integrantes:

Ajahuana Villafan, Teresa Mónica Cruzat Campos, Alexandra Echeverría Vega, Patricia Huaman Pashanasi, Gisela Quintana Blas, Paola Silva Villacrez, Jhuliana Vargas Huyhua, Milagro

Semestre académico: 2015 – 2

Ciclo académico: VIII

LIMA –PERÚ

2015

INTRODUCCIÓN

FACULTAD DE CIENCIAS FARMACEUTICAS Y BIOQUIMICAS

INTRODUCCIÓN

Un laboratorio de microbiología es un lugar convenientemente habilitado donde se puede habilitar, manejar y examinar microorganismos. Este tipo de trabajo debe ser llevado a cabo con una buena técnica aséptica y por tanto se requiere un ambiente limpio y ordenado. Cuando manejamos cualquier tipo de muestra debemos evitar que microorganismos ajenos a nuestros cultivos y presentes en el ambiente se introduzcan en ellos contaminándolos, o que los microorganismos de la muestra nos contaminen a nosotros. Por ello se debe trabajar en condiciones de estabilidad. En el laboratorio de microbiología encontraremos estas condiciones bien en campanas de seguridad biológica o bien en la proximidad de la llama de un mechero de alcohol o de gas. Aunque los microorganismos que se manipulan no se han considerados patógenos todos los cultivos de todos los microorganismos deben ser manejados con precaución por su potencial patogenicidad Las bacterias y otros microbios crecen mejor cuando se mantiene a temperaturas óptimas. Por lo tanto, los laboratorios son generalmente equipados con una incubadora. Una incubadora es similar a un horno y más capaz de mantener una temperatura bastante constante. Muchas especies de bacterias crecen óptimamente a 37 grados centígrados, 98.6 grados Fahrenheit. Esta es la misma que la temperatura del cuerpo se encuentra en los seres humanos normales. Las especies bacterianas encontradas en muestras de suelo en general, prefieren una temperatura más fría de crecimiento de alrededor de 25 grados Celsius. Es importante mantener un ambiente libre de contaminantes dentro de la incubadora con una limpieza aséptica después de cada uso, Por eso se debe existir un procedimiento de control de calidad, como lugar en el que se cultivan y manipulan microorganismos patógenos, requiere medidas especiales de seguridad y control, para proteger del contagio al personal que trabaja en él y evitar el paso de microorganismos al medio externo.

La esterilización es la completa eliminación de microorganismos y sus formas de resistencia (esporas).

En esta práctica aprenderemos los materiales, equipos y esterilización de los instrumentos que se usa en un laboratorio de Microbiología.

I. OBJETIVOS

II. MARCO TEORICOa) EQUIPOS E INSTRUMENTOS

a) Materiales de vidrio

Placa Petri: sirve para crear cultivos microbianos Asa de siembra : asa para siembra por diseminación en superficie Pipeta: traspaso de líquidos en volúmenes exactos Embudo: permite filtrar sustancias Matraz: permite preparar las soluciones liquidas Cubre objetos: cubre las preparaciones microscópicas sobre el porta objetos Porta objetos: lamina donde se coloca el objeto para poder ser observado

en la microscopia Luna de reloj: utensilio que permite contener sustancias corrosivas

b) Materiales de metal

Mechero: utensilio metálico que permite calentar sustancias

c) Equipos

Centrifuga : Se utiliza en la separación de sólidos suspendidos en líquidos. Hay centrífugas de tamaño y velocidades variables, la velocidad, se mide en revoluciones por minuto, La velocidad a la cual sedimentaran las partículas en un líquido dependen de varios factores :Tamaño de la partícula. El peso de la partícula. La viscosidad del líquido. La fuerza gravitacional. Ultra centrifugación; para obtener alteraciones elevadas (mayor o igual a 100000 g), pueden ser: Ultra centrifugación analítica: para determinación de características físicas de proteínas o de ácido nucleicos. Ultra centrifugación preparativa: permite la separación de organelo

Incubadora: una incubadora es un dispositivo que sirve para mantener y hacer crecer cultivos microbiológicos o cultivos celulares. La incubadora mantiene la temperatura, la humedad y otras condiciones en grado óptimo, tales como el contenido de dióxido de carbono (CO2) y de oxígeno en su atmósfera interior. Las incubadoras son esenciales para una gran cantidad de trabajos experimentales en biología celular, la microbiología y en biología molecular y se utilizan para cultivos celulares, tanto bacterianos como de células eucariotas.

Autoclave: Una autoclave es un recipiente de presión metálico de paredes gruesas con un cierre hermético que permite trabajar a alta presión para realizar una reacción industrial, una cocción o una esterilización con vapor de agua. Su construcción debe ser tal que resista la presión y temperatura desarrollada en su interior. La presión elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a los 100 °C. La acción conjunta de la temperatura y el vapor produce la coagulación de las proteínas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la reproducción de éstos, hecho que lleva a su destrucción.

Horno estabilizador: Los hornos de aire caliente, también llamados hornos de calor seco, son dispositivos eléctricos utilizados para esterilización que forman parte del equipamiento de laboratorio. El horno utiliza calor seco para esterilizar los objetos que se introducen en él. En general, pueden funcionar con temperaturas comprendidas entre 50 y 300 °C (de 122 a 572 °F).

Baño maría: El baño de maría o baño serológico para laboratorio es un equipo que se utiliza en laboratorios de química, este equipo se utiliza para el calentamiento indirecto, por convección térmica del medio y de sustancia, se basa en un método empleado para conferir la temperatura uniforme a una sustancia liquida o solida, sumergiendo el recipiente que lo contiene en otro mayor con agua que se lleva hasta la ebullición.

b) FORMAS DE ESTERILIZACION

Limpieza, desinfección y esterilización El material que se utiliza en el laboratorio de microbiología se contamina y se contamina con gérmenes. Al reutilizarlo, este material puede transmitir los gérmenes a otras personas o a la muestra que se está analizando, contaminándola y afectando a los resultados de los análisis que se lleven a cabo con ella. Ambos problemas conducen a enfermedades, a repetición de análisis, a errores en el diagnóstico, etc. Para evitar esos riesgos tenemos dos opciones:

• Utilizar material desechable, que se elimina después de un solo uso.

• Lavar el material utilizado, desinfectarlo y, si es necesario, esterilizarlo antes de su reutilización.

La esterilización es un procedimiento físico, químico o combinado, que destruye todos los microorganismos y las esporas de una superficie o de un material. Podemos clasificar en tres grupos los objetos que se esterilizan en un laboratorio:

• Aquellos que utilizarás para tomar muestra, siempre que haya de hacerse con material estéril: frascos contenedores, espátulas, bisturís, pinzas, etc.

• Los objetos de vidrio o de acero inoxidable que usarás en los distintos análisis microbiológicos: los tubos de vidrio en los que se han realizado las diluciones decimales, las pipetas.

Métodos físicos de esterilización: del mismo modo que la desinfección, la esterilización se puede llevar a cabo usando métodos físicos o químicos. Los métodos físicos se basan en aplicar a un objeto una energía tan intensa que elimine los seres vivos. Esta energía puede producirse mediante calor seco, calor húmedo o irradiación con rayos gamma, aunque también se puede esterilizar utilizando filtros que impidan el paso de los microorganismos.

c) La esterilización mediante calor seco: El calor seco oxida las proteínas o incluso carboniza la materia orgánica. Puede aplicarse mediante incineración, flameado o calor seco. - La incineración Los objetos o los productos de desecho se introducen en un horno, que se calienta a una temperatura muy alta, de modo que elimina los microorganismos al mismo tiempo que destruye el objeto. En ellos se incineran los residuos clínicos infecciosos o los cadáveres de animales de experimentación o sus órganos. En empresas especializadas se incineran residuos químicos, como fármacos citostáticos, medicamentos caducados, productos del revelado de radiografías, envases vacíos de anestésicos o incluso envases del plástico PVC. - El flameado El flameado consiste en colocar el objeto dentro de una llama durante un mínimo de 20 segundos. Este procedimiento está actualmente en desuso.

Las estufas de esterilización En términos sencillos, una estufa de esterilización funciona como un horno eléctrico: unas resistencias calientan su interior hasta 200ºC y un reloj y un termostato regulan el proceso. El aparato tiene estantes y una pared doble, aislante, para conservar el calor y evitar quemaduras a las personas que lo manipulan. Existen dos variantes de estas estufas: la estufa Poupinel, que es más pequeña, y el horno Pasteur. En las estufas de calor seco pueden esterilizarse los objetos de vidrio o de porcelana y los instrumentos metálicos, después de empaquetarlos en cajas metálicas o en bolsas de papel de aluminio. Se necesita 1 hora a 170 °C para los dos primeros y 2 horas a 160°C para los segundos y el tiempo empieza a contar desde que el aparato alcanza la temperatura indicada. Por eso la duración total del ciclo de esterilización, incluyendo calentamiento y enfriamiento, puede ser de dos horas en el primer caso y de más de dos horas y media en el segundo.

A) La estufa de calor seco tiene varias desventajas : Es un sistema lento (porque se esterilizan pocos instrumentos en cada ciclo). Algunos materiales no soportan estas temperaturas (los plásticos, las gomas o los

tejidos). Deteriora el filo de los instrumentos metálicos delicados . Aun así, es un método sencillo y relativamente barato y su utilización es frecuente

en laboratorios farmacéuticos y veterinarios.

B) Procedimiento de uso de la estufa de esterilización

Coloca los instrumentos en el interior de la estufa, una vez empaquetados. Ponla en marcha.

Selecciona la temperatura en el termostato y el tiempo en el reloj, en función del material que vayas a esterilizar. La temperatura se va elevando progresivamente hasta alcanzar la seleccionada, algo que puedes ir comprobando con el termómetro interior.

El aparato se detiene cuando se consume el tiempo programado. Deja que vaya descendiendo la temperatura hasta que esté a menos de 30 °C. Abre

entonces el horno y cierra las cajas de instrumental antes de sacarlas.

C) La esterilización mediante calor húmedo: El método de esterilización más conocido que utiliza el calor húmedo es el autoclave, aunque con él puede conseguirse esterilización o desinfección, en función del tiempo y de la temperatura seleccionados. El autoclave En nuestra vida cotidiana aprovechamos dos cualidades del vapor de agua: su penetración y su facilidad para difundir el calor. Estas dos cualidades son la base del autoclave. La autoclave es un recipiente de paredes gruesas con tapa hermética, con mandos para regular la temperatura, el tiempo y la presión. En términos sencillos, un autoclave funciona como una olla a presión. El vapor de agua es mucho más penetrante que el calor seco , lo que permite que el autoclave pueda trabajar a temperaturas más bajas que la estufa Poupinel y conseguir el mismo resultado.

D) La esterilización en frío: La esterilización en frío se consigue usando rayos gamma, una forma de radioactividad, que son radiaciones con mucha energía, capaces de destruir los gérmenes. Estas radiaciones son tan penetrantes que esterilizan el material aunque esté envuelto en plástico e incluso dentro de cajas de cartón o madera. La irradiación no deja residuos radioactivos en los objetos. Ahora bien, a causa de esta inmensa capacidad de penetración, es imprescindible que las instalaciones para la irradiación estén muy bien aisladas, para evitar que los rayos gamma afecten a las personas o se dispersen por el ambiente. Dado que estas instalaciones son muy complejas y caras, las emplean las industrias especializadas que fabrican material desechable, como catéteres intravenosos, válvulas, placas de Petri o material plástico de un solo uso, como asas de siembra, pipetas y puntas de pipeta.

E) Los métodos químicos de esterilización :

Algunos instrumentos no soportan temperaturas superiores a 60ºC, como los que contienen fibra óptica o los plásticos termolábiles, por lo que es necesario esterilizarlos en frío mediante sustancias químicas. El problema es que las sustancias químicas, utilizadas en concentraciones y durante períodos suficientes para ser letales para todos los microorganismos, son tóxicas también para las personas, de modo que hay que usarlas con unas precauciones especiales. Existen diferentes compuestos Utilizables como esterilizadores químicos: el más común es el glutaraldehído.

Equipos:

INCUBADORA:

III. METODO EXPERIMENTAL

a) Materiales

b) Examinación de los equipos

Análisis de la autoclave (equipo de esterilización)

Boton de controles

Boton de encendido y apagado

termostato

Rejilla de división del cuerpo interno de la incubadora

Puerta del equipo

Puerta de cristal

Análisis de la incubadora Análisis de la estufa

Análisis de la Campana

c) Observación del cultivo bacteriano:

Se colocó el haz de siembra (forma redonda) en el mango para obtener la cantidad de siembra correcta , antes de ello se pasó a su esterilización

Pasos de la esterilización:

se llevó al mechero de bunsen durante unos minutos , hasta que este rojo vivo ( esto demuestra su esterilización)

Una vez realizado la esterilización , se rosa para poder obtener un pequeño trozo de la muestra de cultivo bacteriano

Se prepara el porta objetos primero esterilizándolo en el mechero ,luego se procedió con agregar unas 3 gtas de agua destilada y añadiendo la muestra sustraída del cultivo bacteriano

Se procede a ver el microscopio: procedemos a observar y describir lo que estamos viendo ya sea forma tamaño

d) Pasos para una correcta empaquetamiento del material:

Se preparó antes tapones para los tubos de ensayo

Para la placa Petri: Primero se corta el papel kraft en 30cm

x 30cm de tal manera que cierre por completo al juego de placa Petri , se dobla la parte sobrante en zona superior luego la puntas restantes se emite un movimiento hacia atrás

Luego se procede a sellar con el pabilo sujetándolo en forma de cruz doblemente

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Para la pipeta : Se procede a realizar tiras los cortes al papel kraft son de un ancho de 4.5cm y un largo de 30cm para en forma diagonal proceder envolverlos empezando por la punta

Y finalmente aplastar la sección sobrante de tal manera que este ajustada con pabilo

Obs: La placa Petri más pequeña debe está en la parte superior cubriendo a la más grande de tal manera que esto prevenga que el cultivo no se vea afectado

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IV. RESULTADOS Y DISCUSION

PREPARACIÓN DEL MATERIAL DE VIDRIO DE USO EN EL LABORATORIO

Al realizar la preparación de material de vidrio debimos de asegurar que los materiales de vidrio este correctamente limpios.Una vez teniendo los materiales correctamente limpios procedimos a envolverlos con papel Kraft antes de su esterilización.

Placa Petri .Pudimos envolverlas de 1 hasta 3 unidades en cada paquete y al termino sujetarlo con pabilo para asegurar la envoltura.

Pipetas: Se envuelven completamente con papel kraft, se usaron tiras de este papel y se las envuelve en forma diagonal y empezando por la punta, de forma que la pipeta quedará íntegramente cubierta por el papel kraft. Luego se produce a Rotular, por la parte externa del papel, la capacidad de la pipeta.

Tubos de ensayo y matraz de Erlenmeyer: Se colocan en los dos materiales de vidrio una torunda de algodón la cual sea consistente.

V. CONCLUSIONES

Es necesaria la preparación (envoltura) de los materiales de vidrio a utilizar, teniendo en cuenta que las placas Petri siempre deben de ser envueltas al revés, la envoltura hace posible que no entren en contacto directo con las manos del operador las cuales podrían estar contaminadas, lo cual afectaría el trabajo que se estuviera realizando.

Los equipos de laboratorio mencionados son los de mayor uso que daremos en práctica , como por ejemplo la incubadora nos proporcionara un ambiente adecuado , la estufa nos generara una corriente de aire interna la cual eliminará rastros de humedad , etc. .

La placa Petri se coloca en la incubadora de forma que la tapa de la placa este como soporte, esto debido a que si se produjeran gases, estos no contaminen lo sembrado.

VI. CUESTIONARIO

1. ¿Con qué propósito se envuelve totalmente el material a esterilizar?

El propósito de cualquier sistema de envoltorio es el de contener estos objetos y protegerlos de la contaminación por suciedad, polvo y bacterias. El paquete debe preservar la esterilidad de su contenido hasta el momento de su apertura, momento a partir del cual serán utilizados en área estéril. Los objetos deben estar envueltos de manera tal que el envoltorio que los contiene pueda ser abierto y su contenido extraído sin contaminaciones.

2. En un cuadro comparativo explicar las diferentes formas y condiciones del proceso de esterilización que se emplea según el tipo de material a esterilizar

PROCESO EMBALAJE POSIBLE

ESTERILIZACIÓN POR CALOR HUMEDO

conocido que utiliza el calor húmedo es el autoclave, aunque con él puede conseguirse esterilización o desinfección, en función del tiempo y de la temperatura seleccionados

- Papel grado quirurgico (ideal)-Papel Kraft norma IRAM 3106-Cartulinas-Tela tejida/no tejida-Pouch polipropileno-Vidrios (líquidos)-Contenedor rígido perforado con filtro

ESTERILIZACIÓN POR CALOR SECO

El calor seco oxida las proteínas o incluso carboniza la materia orgánica. Puede aplicarse mediante incineración, flameado o calor seco

-Caja metal-Foil aluminio-Vidrios-Poliamida

ESTERILIZACIÓN POR OXIDO DE ETILENO

El gas EtO se filtra en los paquetes así como en los propios productos para acabar con los microorganismos que quedan después del proceso de producción o envasado

-Papel grado quirúrgico-Papel Kraft normas IRAM 3106-Pouch polietileno/polipropileno-Polietileno baja densidad-Tela tejida/no tejida-Polipropileno-Contenedor rígido perforado con filtro

ESTERILIZACIÓN POR PLASMA DE PEROXIDO DE HIDROGENO

-Polipropileno-Pouch de Tyvek

3. Informar en forma concisa el uso e importancia de los equipos descritos en la practica En este informe hayamos los conocimientos adquiridos en la Unidad de esterilización la importancia, el cuidado, la responsabilidad, el interés por la salud del paciente y de nosotros mismos. Experimentamos el proceso de eliminación de microorganismos a utensilios reutilizables por donde ingresan quienes reciben el material, como es el tratamiento que se le da a este producto para que siga siendo utilizado. Y a su vez es muy importante para tener buenos resultados.