micro vibrionaceae

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IDENTIFICACION DEL GENERO VIBRIO

VIBRIONACEAE

1. Generalidades de la familia Vibrionaceae.

La familia Vibrionaceae incluye los géneros Vibrio, Aeromonas, Plesiomonas y Photobacterium. Las diferentes especies de Vibrio y los otros géneros que se aíslan de muestras clínicas presentan características bioquímicas similares a las de los géneros de la familia Enterobacteriaceae, Pseudomonas y otros géneros relacionados.Su hábitat natural se encuentra en zonas de agua dulce y salada en la naturaleza , donde viven de forma libre o como patógeno o en simbiosis con la vida acuática.

Morfología

Las especies de Vibrio se caracterizan por ser bacilos Gram-negativos aerobios, con una estructura celular curva, tienen motilidad y poseen un flagelo polar, no forman esporas, miden de 0.5 a 0.8 μm de diámetro por 1.4 a 2.6 μm de largo.

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Las especies de Vibrio crecen en presencia o ausencia de oxígeno. Todas estas especies producen la enzima citocromo C oxidasa (excepto la especie Vibrio metschnikovi), fermentan la glucosa y algunos producen gas. El cloruro de sodio estimula el crecimiento y algunas especies son estrictamente halofílicas. El género Vibrio contiene más de 30 especies y 12 de éstas son especies patógenas para el ser humano.

METABOLISMO RESPIRATORIO Y FERMENTATIVO DE V. CHOLERAE:

%

Utilización de citrato

99

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Producción de indol

Positivo:

99

Rojo de metilo

Positivo:

75

Arginina deshidrolasa

Negativa 100

Lisina descarboxilasa

Positiva: 99

Ornitina descarboxilasa

Positiva: izq 99

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FERMENTACIÓN DE:

Glucosa producción de ácido: positivo 100% Lactosa: Negativa Sacarosa: positiva 100% Oxidasa: Positiva 100%

Desarrollo en medio con 0% de Nacl: positivo Desarrollo con 1% de Nacl: Positivo.

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Los géneros Aeromonas y Plesiomonas se conforman por bacilos Gram-negativos, móviles por flagelos polares y anaerobios facultativos. Sin embargo, con bases genéticas se ha propuesto que Aeromonas debería constituir su propia familia y que Plesiomonas está más relacionada a la familia Enterobacteriaceae. Pueden distinguirse de las bacterias entéricas en medios diferenciales que se usan para cultivarlas y por la reacción positiva a la prueba de oxidasa.

El patógeno más reconocido de la familia Vibrionaceae es Vibrio cholerae por la diarrea fatal que puede llegar a producir, otras especies del género Vibrio, como V. parahaemolyticus, V. alginolyticus y V. mimicus se asocian tanto a infecciones intestinales como a extraintestinales.

Las especies de Aeromonas son de vida libre y se encuentran en agua dulce y, en ocasiones, en reptiles, anfibios, peces y en el suelo o los alimentos, su importancia primaria en microbiología médica es en relación con la diarrea y a veces causan infecciones de heridas en agua dulce o infecciones en pacientes inmunocomprometidos y, raramente, otras infecciones intestinales.

Las especies de Plesiomonas son más comunes en áreas tropicales y subtropicales; se han aislado de peces de agua dulce y numerosos animales. La mayor parte de Plesiomonas aisladas de humanos se ha obtenido de cultivo de heces de pacientes con diarrea.

Las especies de la familia Vibrionaceae son capaces de crecer en la mayoría de los medios rutinarios de laboratorio, incluyendo agar sangre y agar MacConkey. Las colonias producidas en estos medios son muy similares a las producidas por especies de la familia Enterobacteriaceae. Sin embargo, debido a que algunas especies son específicamente halofílicas, es necesario agregar una concentración final de 1% NaCl a aquellos medios que

carecen de sal. Usualmente es necesario hacer un enriquecimiento de estas bacterias a partir de los diferentes tipos de muestras en Agua Peptonada Alcalina (APA) a 35oC por 6-12 horas en aerobiosis para aumentar la recuperación en los medios de aislamiento primario.

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El medio de aislamiento primario más recomendado para la recuperación de las especies de Víbrio es el agar TCBS. Las placas de agar TCBS se incuban hasta por 48 horas antes de descartarlas. Es importante examinar cuidadosamente el crecimiento y el color de las colonias en las placas de agar TCBS.

Medio T.C.B.S.

Medio selectivo para el aislamiento y cultivo de Vibrio cholerae, Vibrio parahemolyticus y otras especies de Vibrio a partir de heces, agua y alimentos contaminados.

Es este el medio selectivo más adecuado para el aislamiento de las especies de Vibrio e inhibidor para la mayoría de las enterobacterias. Esta inhibición se basa en las altas concentraciones de tiosulfato y citrato, la presencia de las sales biliares y un pH fuertemente alcalino.

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La degradación de la sacarosa es variable entre las especies de Vibrio y las colonias son verdes para las cepas que no utilizan la sacarosa y amarillas para aquellas que producen ácido a partir de este azúcar. Sin embargo la proporción de la sacarosa en el medio está equilibrada en forma tal que no les inhiba el crecimiento por exceso de ácido. Aumentando la concentración de cloruro de sodio y disminuyendo la temperatura de incubación, pueden aislarse especies marinas sin importancia sanitaria.

Es importante observar que en este medio, aunque es selectivo, pueden crecer algunas especies entéricas como Proteus y Enterococcus, pero sus colonias son usualmente pequeñas y translúcidas. Las colonias de las especies de Proteus que fermentan sacarosa producen colonias amarillas que deben ser diferenciadas de las de Vibrio. Pseudomonas y Aeromonas pueden crecer en placas de agar TCBS y usualmente forman colonias azules.

Aeromonas crece en medios diferenciales como el MacConkey y Levine, aunque puede ser aislado en placas de agar sangre (con 5% en sangre de cordero) conteniendo ampicilina a una concentración final de 10 μg/ml. Plesiomonas crece en medios diferenciales como el agar MacConkey y en medios moderadamente selectivos como el agar Hektoen.

El medio de Hektoen es recomendado también para el aislamiento de Salmonella, Shigella y Vibrio, por cuanto suprime el crecimiento de la mayoría de los miembros de la familia Enterobacteriaceae y detecta la producción de ácido de la fermentación de azúcar y H2S. Las colonias de Plesiomonas se ven azul o azul verdoso con centro o sin centro negro.

2. Pruebas bioquímicas para la identificación de géneros y especies de la familia Vibrionaceae

Para la identificación bioquímica de las especies de la familia Vibrionaceae se deben realizar las mismas pruebas descritas para Enterobacteriaceae. Sin embargo, una vez realizado el aislamiento primario es esencial determinar si la bacteria es halofílica inoculando un caldo nutritivo conteniendo 0% y 3% de NaCl y se incuba a 35oC por 18-24 horas.

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Si la bacteria crece en presencia de 3% de NaCl pero no crece en el medio con 0% de NaCl, se puede concluir que la bacteria es halofílica. En caso que se determine que la bacteria es halofílica, es necesario agregar NaCl a una concentración final de 1% a los siguientes medios antes de realizar las correspondientes pruebas bioquímicas:

Caldo MRVP Caldo Triptona Caldo Base de Moeller Caldo Malonato Caldo Nitratos con campana de Durham Caldo Base Púrpura Bromocresol Medio Gelatina

3. Cronograma de actividades DIA 1 • Entrega de cultivos. • Realizar frotis y tinción de Gram.

• Sembrar cada bacteria en placas de:

Agar Sangre

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Agar MacConkey

Agar TCBS • Incubar las placas de Agar Sangre en jarras con candela por 18-24 horas a 35OC. • Incubar el resto de las placas a 35OC por 18-24 horas.

DIA 2 • Describir la morfología colonial de cada bacteria en los medios sembrados considerando tamaño,

forma, elevación, margen, tipo de superficie, características ópticas, producción de hemólisis y producción de pigmentos.

• Realizar un frotis y fijarlo para tinción de Gram.

• Inocular en Caldo Tripticasa-Soya al 0% y al 3% de NaCl. Incubar a 35oC por 24 horas. • Inocular cada bacteria en Agar TSI. Incubar a 35OC por 24 horas. • Realizar la prueba de oxidasa a partir del Agar Sangre. • Realizar la prueba de catalasa a partir del Agar Sangre.

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• Inocular los siguientes medios de cultivo a partir del Agar Sangre para la realización de pruebas bioquímicas de identificación para cada una de las bacterias:

Agar Movilidad Caldo MRVP (dos tubos, uno para la prueba de Rojo de Metilo, otro para prueba de Voges-Proskauer) Agar Citrato de Simmons

Caldo Triptona (prueba de producción de indol: positivo rojo)

Agar Urea de ChristensenCaldo Base de Moeller con 1% de lisina, arginina y omitina Caldo Púrpura de Bromocresol con 1% de los siguientes azúcares: glucosa, sacarosa, arabinosa, manitol y salicina

• Inocular la bacteria en Agar Sangre e incubar a temperatura ambiente por 24 horas para hacer tinción de flagelos.

DIA 3 1. • Realizar la tinción de flagelos utilizando el colorante de Kodaka. 2. • Realizar la lectura de los medios inoculados el día 2 utilizando los reactivos correspondientes. 3. • Realizar la lectura del TSI. 4. • Realizar la prueba de ONPG a partir del TSI.

Fuentes:Davis, D, Bernard, Tratado de microbiología, 4ª Edición, 1996, Editorial Masson, México.Rojas, Norman, Bacteriología Diagnostica, 2006, Universidad de costa rica, Facultad de microbiología.

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Tay, Gutierrez, Parasitología medicas y microbiología,2ª Edición 1998, Editorial Mendez Editores, México.OMS, Manual de para la identificación y suceptibilidad a los antimicrobianos de patógenos bacterianos importantes de salud pública en el mundo, 2003.

Referencias imágenes:

1. http://www.dshs.state.tx.us/idcu/disease/vibrio/cholerae/factsheet/cholgram.jpg2. http://pathmicro.med.sc.edu/fox/enterobact.htm3. http://service.merck.de/microbiology/tedisdata/prods/4973-1_10263_0500.html4. http://www.ams.cmu.ac.th/mt/clinmcrb/CMBwebsite/Price%20list_media.htm5. http://www.dshs.state.tx.us/idcu/disease/vibrio/cholerae/factsheet/default.asp6. http://microbes.historique.net/cholerae.html7. http://www.todomonografias.com/biologia-y-zoologia/aislamiento-y-carecterizacion-de-vidrio-

cholerae/

ANEXOS

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