métodos de crecimiento microbiano expo
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MÉTODOS DE CRECIMIENTO MICROBIANO
EQUIPO 6
INTEGRANTES:KAREN MORALES LÓPEZ
YAMILI ESQUIVEL HERNANDEZ
ALMA NURY MONTEJO MARTÍNEZ
ANDY BENJI GONZALEZ GOMEZ
JONATHAN ROSIQUE
PROFESOR:
ILDEFONSO JESÚS DÍAZ RAMÍREZ
UNIVERSIDAD JUÁREZ AUTÓNOMA DE
TABASCODIVISIÓN ACADÉMICA DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Cuenta en placa Diluciones seriadas
Se emplean soluciones diluidas o
diluciones de una muestra
concentrada para que cada
colonia formada provenga de un
solo microorganismos aunque
algunas agrupaciones no puedan
ser separadas.
Conjunto de diluciones en
secuencia, cada una a partir de la
anterior, con incrementos
progresivos y regulares.
Método de siembra por extendido.
Cuenta de colonias.
Método de siembra por vertido
Método para el conteo de
microorganismos totales.Recuento microscopico.
CÁMARAS PETROFF NAUBAUER
Las cámaras de recuento son portas excavados modificados sobre cuya
superficie está marcada una rejilla con pequeños cuadros de área conocida.
Se utilizan para contar el número de células por unidad de volumen de
suspensiones bacterianas. Para trabajar se cubre la cámara con un
portaobjetos y por capilaridad se introducen las muestras.
La muestra se añade aquí
con cuidado para que no
rebose; el espacio entre el
porta objetos y el cubre
objetos es de 0,02mm (1/50
ml ). La rejilla tiene 25
cuadros grandes , un área
total de 1𝑚𝑚2y un volumen
total de 0,02𝑚𝑙3
Observación
microscópica: Se
cuenta las células en
un cuadro.
-Ver ejemplo
- En la practica se
hace el conteo en
varios cuadros
grandes y se saca la
media.
LIMITACIONES:
Es muy tedioso
No es práctico para un gran número de muestras
No es muy sensible, se necesitan al menos 106 bacterias/ml para que sean observadas en
el microscopio.
No distingue células vivas de las muertas.
CUENTA DE BREED El método de Breed es un método de recuento directo bastante simple, fácil y
eficaz a pesar de ser un método antiguo (1911). Este método de Conteo Directo al
Microscopio(CMD) es usado mayoritariamente para el diagnostico microbiológico
de la leche y selo considera un método rápido para estimar el grado de
contaminación bacteriano de la leche.
El método de Breed también es usado para diagnóstico de mastitis
bovina(diagnósticosubclínico). En ésta, el coloreado con azul de metileno nos per
mite ver además leucocitos y células somáticas, también se pueden usar
coloraciones por los métodos de Levowitz–Weber o Broadhurst–Paley que
permiten observar específicamente células somáticas en leche.
PROCEDIMIENTO PARA HACER UN RECUENTO TOTAL DE MICROOORGANISMOS QUE HAY EN UNA MUESTRA DE LECHE (OBJETIVO).
MATERIALES: microscopio calibrado, láminas portaobjeto, lámina patrón de Breed, pipeta de
Breed o asa en anillo calibrado, colorante de Gram o Azul de metileno, xilol, papel Tisú,
muestra de leche.
PROCEDIMIENTO:
1.- Estandarización de equipo
Se coloca la lámina patrón que tiene una tabla macrométrica marcada, que tiene divisiones
de 0.1 a 0.01 µm; con el objetivo de inmersión.
Cálculo del factor microscópico.
2.- Preparación se la película:
Se lava la lámina, desengrasándola. Una vez hecho se coloca sobre la lámina patrón, en
este caso al carecer de ella se coloca una lámina de cartón quetenga una cuadrado de 1
cm
Enseguida colocar la muestra de leche previamente homogenizada (20veces).
Con el asa calibrada se coloca 0.01 ml. de la muestra en la lámina. Esta seextiende por toda
el área del cuadrado de la lámina patrón.
Luego debe hacerse el secado lento para evitar el resquebrajamiento de la película; en
especial cuando la muestra se trata de leche.
En algunas muestras es necesario desengrasar la película con Xilol.3
Teñir la película por el Método de Gram o tinción simple con azul demetileno.
3.- Examen Microscópico
4.- Cómputo y cálculo del microorganismo
5.- Cálculos y Resultados
TURBIDIMETRIA
En una suspensión microbiana, la cantidad de microorganismos está directamente
relacionada con la turbiedad o densidad óptica.
La metodología es útil con suspensiones de densidad microbiana baja y con
cultivos en donde los microorganismos son unicelulares y con un tamaño de unos
cuantos micrómetros, características que les permiten mantenerse suspendidos y
homogéneamente distribuidos; en tanto que con microorganismos de mayor
tamaño y con aquellos productores de polisacáridos esta metodología no es
adecuada.
PESO SECO
Se puede determinar el peso seco donde la masa seca (estufa a 105 º C
toda la noche) es aproximadamente entre el 10 al 20% de la masa húmeda.
Inconvenientes: método tedioso que requiere tiempo y errores en pesadas (
1 mg de peso seco equivale a una masa bacteriana de 5 x 10 9 bacterias) o
bien, el peso húmedo donde se centrifuga y se elimina el sobrenadante y se
determina el peso del sedimento.
Inconvenientes: grandes errores debido al líquido intercelular retenido, tipo
y forma de las agrupaciones de la cepa, etc.
MedicionCrecimiento_19837.pdf
Determinación de componentes característicos: peptidoglicano,
ARN, ADN, proteínas se usan en bacterias que forman grumos no
dispérsales o crecen en filamentos en general se emplean en
determinaciones en ambientes naturales
Métodos indirectos :
Turbidimètricos (ópticos): la base común consiste en la medición
de la cantidad de luz dispersada o trasmitida a través del cultivo
bacteriana. La dispersión de la luz dentro de ciertos limites es
proporcional a la masa del cultivo
TURBIDEZ
Escala de Mc Farland: es unaserie de patrones de turbidez(precipitado de SO4 Ba)previamente calibrados y seestablece la equivalencia entre laturbidez de cada tubo y la masa oconcentración de bacterias(células/ml) que genera unaturbidez similar. Un método más útil es lamedida de turbidez con fotómetroo espectrofotómetro que hacenpasar luz a través de lassuspensión celular y detectan lacantidad de luz no dispersada. Los resultados se expresan enunidades fotométricas ounidades de densidad ópticaproporcionales al número decélulas y a la masa celular.
La turbidez producida por el crecimiento microbiano de microorganismos
unicelulares puede ser medida de acuerdo a la capacidad de absorber la
luz. La muestras a determinar son generalmente translúcidas cuando no
presentan crecimiento microbiano.
La turbidez se determina por la densidad óptica (DO) que puede ser
expresada como Absorbancia, % de Transmitancia o Unidades Klett (UK)
BIBLIOGRAFÍA
Oscar, B. (2009). Folleto explicativo de la técnica en cámara de Neubauer. Celeromics.
Rómulo, A. (2008). Practica No.02; Recuento total de microorganismos: Método de
Breed. Universidad Nacional Pedro Ruiz Gallo Pp. (2-6).
Villa, V. Cinética de crecimiento microbiano. Bioquímica microbiana.
Administración de manuales y documentos de la facultad de química, UNAM. Adriana
Mejía Chávez y Lilia Vierna García. Microbiología general