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X Congreso Argentino de Virología 2011 - Mesas redondas 13

X Congreso Argentino de Virología

MESAS REDONDAS

LUNES 26 DE SEPTIEMBRE

X CONGRESO ARGENTINO DE VIROLOGÍA

MESA REDONDA N° 1 INMUNIDAD INNATA ANTIVIRAL

MR1-1 - ROL DEL INTERFERON EN LA TROMBOCITOPE-NIA INDUCIDA POR EL VIRUS JUNÍN. RG POZNER1, AE URE2, C JAQUENOD DE GIUSTI2, LP D´ATRI1, JE ITALIA-NO3,4, O TORRES1, V ROMANOWSKI2, M SCHATTNER1, RI-CARDO M GÓMEZ2

1Laboratorio de Trombosis 1, Instituto de Investigaciones Hema-tologicas ‘‘Mariano R Castex’’, Academia Nacional de Medicina, CONICET, Buenos Aires, Argentina, 2Instituto de Biotecnología y Biología Molecular, CONICET-UNLP, La Plata, Buenos Ai-res, Argentina, 3Division of Translational Medicine, Brigham and Women’s Hospital, Boston, Massachusetts, EEUU 4Department of Vascular Biology, Children’s Hospital Boston, Boston, Massa-chusetts, EEUU.

La fiebre hemorrágica argentina (FHA) es una enfermedad endemo-epidémica causada por el virus Junín (JUNV), miem-bro de la familia Arenaviridae. A pesar de que una vacuna viva atenuada introducida hace más de 10 años ha demostrado ser eficaz, la FHA sigue siendo una infección potencialmente letal. Al igual que en otras fiebres hemorrágicas virales (FHV), los pacientes con FHA presentan fiebre y complicaciones hem-orrágicas. Aunque las causas de la hemorragia no son bien comprendidas, se han descrito alteraciones de la hemostasia, disfunción de las células endoteliales y un bajo recuento de plaquetas. La trombocitopenia es una característica común en los síndromes de FHV y es una señal importante para su di-agnóstico. Sin embargo, el mecanismo patogénico subyacente no ha sido dilucidado.Hemos planteado la hipótesis de que la trombocitopenia es el resultado de una alteración del proceso de megakaryo / trombopoyesis inducida por el virus. Por lo tanto, se evaluó el impacto de JUNV en distintos aspectos la megacario/trombopoyesis utilizando un modelo in vitro de célu-las CD34+ humanas estimuladas con trombopoyetina. Nuestros resultados mostraron que las células CD34+ se infectaron con el JUNV de un modo restringido. La infección fue dependiente del receptor de la transferrina 1 (TfR1) y la expresión del TfR1 de superficie fue mayor en los cultivos infectados sugiriendo una nueva estrategia de difusión de los arenavirus en las células progenitoras hematopoyéticas. A pesar de que la proliferación, la sobrevida y la diferenciación en los cultivos infectados fue normal, la infección afectó selectivamente la trombopoyesis ya que se observó una disminución en la formación de proplaqu-etas, en la liberación de plaquetas y en la externalización de P-selectina a través de un efecto bystander. La disminución en la liberación de plaquetas también mostró ser TfR1-dependien-te, fue mimetizada por Poli I:C y los interferones de tipo I (IFN alfa / beta) (IFN-I) fueron implicados como mediadores pará-crinos claves. Entre las moléculas relevantes involucradas en la trombopoyesis, sólo el factor de transcripción NF-E2 mostró una disminución moderada de su expresión en megacariocitos tanto en los cultivos infectados como después del tratamiento con IFN-I. Por otra parte, los megacariocitos tratados con IFN-I presentaron anormalidades ultraestructurales parecidas a las re-portadas en los ratones trombocitopénicos con fenotipo NF-E2(-/-).

Nuestro estudio presenta un mecanismo potencial que puede explicar la trombocitopenia en FHV y otras enfermedades aso-ciadas con aumento de los niveles de IFN-I en la médula ósea.

MR1-2 - INTERACCIÓN ENTRE EL VECTOR VIRAL MVA Y LAS CÉLULAS DENDRÍTICAS. MF PASCUTTI1, AM RO-DRÍGUEZ1, J FALIVENE1, L GIAVEDONI2, I DREXLER3, Y M. MAGDALENA GHERARDI1

1Centro Nacional de Referencia para el SIDA, Facultad de Me-dicina, UBA, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina. 2Southwest National Primate Research Center, San Antonio, Texas, EEUU. 3Institute of Virology and Clinical Cooperation Group, Universidad Técnica de Munich, Alemania.

El virus vaccinia Ankara modificado (MVA) es una cepa at-enuada de poxvirus, que se encuentra actualmente en evalu-ación como vector vacunal en varios ensayos clínicos frente a diferentes patógenos. En diferentes reportes se ha descripto por un lado que las células dendríticas (CD) son capaces de madurar luego de la infección con MVA, sin embargo los datos referentes a la funcionalidad de las CD son controvertidos. En este trabajo, hemos estudiado el fenotipo y funcionalidad de las CD humanas infectadas por MVA. En concordancia con los estudios previos, encontramos que tras la infección con MVA de CD derivadas de monocitos, se produce un incremento significativo en la expresión de CD86 y HLA-DR. Es más, las células CD produjeron un amplio abanico de quimiocinas y citocinas, y a su vez fueron capaces de activar e inducir la producción de IFN-γ en células T CD4+ y CD8+ alogénicas y en PBL específicos autólogos. El análisis de la maduración de CD tras la infección con un virus MVA que expresa GFP (MVA-GFP) reveló que el aumento de la expresión de CD86 se observó principalmente en las CD vecinas (GFP-). Mientras que las CD directamente infectadas (GFP+) produjeron TNF-α, pero fueron incapaces de producir la quimiocina CXCL10 y re-sultaron menos eficientes en inducir la producción de IFN-γ en células (PBL) autólogas específicas para el antígeno CEF. La maduración de las CD vecinas se produjo tras la incubación con sobrenadante de células infectadas ó con células apop-tóticas infectadas. Pudimos comprobar la participación de IFN de tipo I en la inducción de CXCL10 en las células CD vecinas. Los resultados de este trabajo demuestran por primera vez que en cultivos de CD infectados por MVA el rol protagónico en relación a las características de funcionalidad y madura-ción es llevado a cabo por las células CD (GFP-) vecinas a las directamente infectadas por el vector viral. Estos hallazgos tienen importancia en el área de diseños de vacunas basadas en este vector.

MR1-3 - ACTIVACIÓN DIFERENCIAL DE LA RESPUES-TA INMUNE EN RATONES INFECTADOS O VACUNADOS CON EL VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA: ROL DE LAS CÉ-LULAS DENDRÍTICAS ESPLÉNICAS. C LANGELLOTTI*, V QUATTROCCHI*,C ALVAREZ #, M OSTROWSKI§, P ZAMO-RANO*, MÓNICA VERMEULEN#.

* Instituto de Virologia, Centro de Investigaciones en Ciencias Ve-terinarias, Instituto Nacional de Tecnologia Agropecuaria (INTA)-Castelar, Buenos Aires, Argentina. # Laboratorio Inmunología. Instituto de Investigaciones Hematológicas, Academia Nacional de Medicina, Ciudad Autónoma de Buenos Aires. § Centro Nacional

14 Revista Argentina de Microbiología (2011) 42 - Supl. 1

de Referencia del HIV. Facultad de Medicina, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

El virus de la fiebre aftosa (VFA) es una enfermedad viral contagiosa, aguda y febril de los animales de pezuña hendida. Es conocido que el virus interactúa con las células dendríticas, tanto en el huésped natural como en el modelo experimental, pero su impacto sobre la subsecuente respuesta adaptativa es controvertido. La vacuna comúnmente utilizada contra la enfer-medad contiene la forma inactiva del virus (VFAi). Sin embargo, es poco lo que se conoce en términos de los subtipos de célu-las dendríticas y su interacción con el virus infectivo e inactivo. Desde hace unos años, trabajamos en esta temática. Así en-contramos que la infección con el VFA causa una importante reducción de las células dendríticas esplénicas (15% vs Ct; *p≤0.01) que afecta mayormente a las células dendríticas pla-smacitoides (CDp), esta disminución está asociada a una tem-prana inhibición de la proliferación celular (30% vs Ct; *p≤0.05) que coincide con un aumento pequeño pero significativo en los niveles de IFN-α plasmático en los ratones infectados, sin embargo luego de las 120 hs post-infección la respuesta ce-lular es restaurada. Por el contrario, la inoculación de ratones con el VFAi induce un incremento en el reclutamiento de CDp (36% vs Ct;*p≤0.01) en el bazo de los ratones así como un aumento en los niveles de la IL-10 por las CD convencionales lo que culmina con la activación de una respuesta T regulatoria (CD4+CD25+Foxp3+: 40% vs Ct; *p≤0.05). En conclusión, el desarrollo de la respuesta adaptativa por el VFA sigue cursos distintos, que dependen del dialogo que establece el virus infec-tivo o inactivo con las CD.

MESA REDONDA N° 2 VIROLOGÍA AMBIENTAL

MR2-1 - VIRUS ENTÉRICOS EN AGUAS SUPERFICIALES DE ARGENTINA, SUS CARACTERÍSTICAS Y EVOLUCIÓN. VIVIANA A. MBAYED

Cátedra de Virología, Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

La contaminación viral de aguas representa un riesgo para la salud humana, sin embargo las regulaciones sobre la cali-dad microbiológica de aguas en Argentina no incluye la de-tección viral. Por lo tanto, se integró una red de laboratorios para evaluar la presencia de virus en aguas de ríos de nuestro país. Los laboratorios que integran la red pertenecen a Uni-versidades e Instituciones Públicas de diferentes provincias de Argentina (Universidad de Buenos Aires, Córdoba, Salta, Tucumán, Quilmes, Instituto Nacional de Enfermedades In-fecciosas ANLIS-Malbrán and Prefectura Naval Argentina). En este trabajo se comparó la detección de diferentes virus entéricos en ríos de tres regiones del país: Río de la Plata y Riachuelo-Matanza en ciudad de Buenos Aires y Gran Buenos Aires; Río Suquía, en Córdoba y Ríos Arias-Arenales Salta. Estos ríos sufren la contaminación por factores humanos y animales, incluyendo la descarga de plantas de tratamiento de efluentes cloacales. Las muestras de aguas se recolectaron durante el período 2009-2010 a lo largo del cauce de los ríos y se concentraron en los laboratorios por tres métodos alter-nativos: adsorsión-elusión a membranas con carga negativa, precipitación con PEG o ultrafiltración. Se emplearon técnicas de nested PCR o qPCR para la detección de enterovirus, ade-novirus, rotavirus, norovirus y virus de hepatitis A. Mientras que adenovirus fue uno de los virus más detectados, el virus de hepatitis A se encontró escasamente. Otros virus, tales como norovirus, mostraron estacionalidad, con mayor presen-cia durante el invierno. En ríos con contaminación puntual o difusa con efluentes de campos con actividades ganaderas, pudieron detectarse enterovirus de origen bovino y porcino. La caracterización molecular de los genomas virales reveló que los genotipos detectados en las muestras del medio ambiente

coinciden con los detectados en muestras clínicas, como en los casos de rotavirus y hepatitis A, sin embargo, para ente-rovirus, algunos genotipos asociados a brotes en la población no pudieron encontrarse en el medio ambiente. Los análisis fi-logenéticos sobre secuencias genómicas de norovirus demos-traron que el principal genotipo detectado fue el GII.4, variante 2006b, ampliamente distribuida en el mundo. Sin embargo, en ríos asociados a poblaciones de gran densidad demográfica se pudieron encontrar también otros genotipos, como GII.2, GII.4, GII.7, GII.17, GII.b, GII.e y GII.g. Los análisis de clonado molecular demostraron la cocirculación de varios genotipos. Las cepas detectadas estuvieron más relacionadas filogené-ticamente con cepas recientes de otros países que con otras locales encontrada previamente, sugiriendo una extensa di-seminación de cepas que impide la estructuración geográfi-ca de los árboles filogenéticos. Un análisis de coalescencia Bayesiana permitió estimar las fechas de divergencia de los norovirus locales y sus tasas de evolución. Finalmente, se trata de un estudio de vigilancia de virus entéricos en aguas superficiales de Argentina, con una caracterización genética y evolutiva de las cepas detectadas.

MR2-2 - CIRCULACIÓN DE GENOTIPOS DE ROTAVIRUS-A EN BRASIL: UN ENFOQUE AMBIENTAL. TM FUMIAN, JPG LEITE, TL ROSE, T PRADO, MARIZE P MIAGOSTOVICH.

Laboratório de Virologia Comparada e Ambiental - Instituto Oswal-do Cruz – IOC, Fiocruz, Rio de Janeiro, Brasil.

Rotavirus A (RV-A) belongs to the Reoviridae fam-ily, Rotavirus genus, and posses a double-stranded RNA (dsRNA) with eleven segments that encoding for six struc-tural (VP) and six non-structural proteins (NSP). RV-A are shed in extremely high concentration (up to 1010 g-1) from stools of infect child with acute gastroenteritis and can per-sist in the environment for long periods. Some features as stability in aqueous environments and resistance to water treatments may facilitate their transmission to humans via contaminated waters. Despite the difficult to determine the ratio of gastroenteritis cases due to waterborne way, it has been suggested that a significant percentage of the cases is related to water quality. As RV-A is one of the most impor-tant causes of mortality in infants worldwide, an attenuated G1P[8] RV-A vaccine, Rotarix® (GlaxoSmithKline, Rixen-sart, Belgium), has been developed and introduced for use in many countries. This RV-A vaccine was included in the Brazilian Expanded Immunization Program (PNI) in March 2006 and became available to the entire birth cohort. The impact of this vaccine on the circulating RV-A genotypes is unknown and difficult to predict, so continuous genotype surveillance is needed to identify the effects of the vaccine program on circulating strains, particularly on genotype prevalence and the emergence of uncommon strains. The monitoring of the viruses in circulation in sewage from a wastewater treatment plant (WTP) has been described as an appropriate model to understand the spread of RV-A in the population served by the WTP, as influents may contain viruses shed from patients with sporadic or asymptomatic cases. The aim of this study was to evaluate the spread of RVA in the environment after the introduction of Rotarix® in Brazil. For this purpose, a WTP in Rio de Janeiro was monitored for one year to detect, characterize and discrimi-nate RV-A genotypes and identify possible circulation of vaccine strains. Using TaqMan® quantitative PCR (qPCR), RV-A was detected in 100% (mean viral loads from 2.40 x 105 to 1.16 x 107 genome copies (GC)/L) of sewage influent samples and 71% (mean viral loads from 1.35 x 103 to 1.64 x 105 GC/L) of sewage effluent samples. The most preva-lent RV-A genotypes were P[4], P[6] and G2, based on VP4 and VP7 classification. Direct nucleotide sequencing (NSP4 fragment) and restriction enzyme digestion (NSP3) analysis did not detect RV-A vaccine-like strains from the sewage samples. These data on RV-A detection, quantification and


molecular characterization highlight the importance of envi-ronmental monitoring as a tool to study RV-A epidemiology in the surrounding human population and may be useful in an ongoing vaccine monitoring program, since sewage may be a good screening option for a rapid and economical over-view of the circulating genotypes. This work was financially sponsored by CNPq – PROSUL 490292/2008-9 and CNPq – PAPES V.

MR2-3 - VIRUS ENTÉRICOS EN UN RÍO DE LA CIUDAD DE SALTA. CUANTIFICANDO EL RIESGO. HR POMA1, A KUN-DU2, S WUERTZ2 Y VERÓNICA RAJAL1,3

1Facultad de Ingeniería, INIQUI, CONICET – Universidad Nacional de Salta. Salta, Argentina. 2Department of Civil & Environmental Engineering, University of California in Davis, EEUU. 3Fogarty International Center, University of California in Davis, EEUU

El Río Arenales corre de oeste a este cruzando la ciu-dad de Salta para desembocar en el dique Gral. Belgrano. En su recorrido sufre el impacto de descargas cloacales crudas ilegales, aguas pluviales, microbasurales y descar-gas de efluentes industriales. A pesar de ello sus aguas se emplean para varios propósitos, domésticos, industriales y recreativos. El objetivo de este estudio fue la determi-nación de la presencia de virus entéricos en el río y la evaluación cuantitativa del riesgo que representa para la salud de la población. Se ha realizado un monitoreo men-sual durante un año (Febrero 2009 a Febrero 2010) en once puntos a lo largo del río (5 sobre el río y 6 sobre des-cargas). Se han determinado propiedades fisicoquímicas in situ (pH, temperatura, concentración de oxígeno disuel-to, conductividad, salinidad y turbidez) empleando sonda multiparamétrica. En el laboratorio se analizaron bacterias indicadoras (coliformes totales y fecales, método de los tubos múltiples), Escherichia coli y Enterococcus mediante filtración por membrana y cultivo en medios específicos. Muestras de 20 litros de agua fueron posteriormente con-centradas empleando una unidad de ultrafiltración hasta alcanzar 50 mL finales. Se realizó una elución y el con-centrado final, constituido por retenido más eluido, fue de unos 70 mL. Una fracción del concentrado fue destinada al análisis parasitológico mediante tinción y microscopía óptica, y otra para el análisis de virus. Se extrajeron los ácidos nucleicos usando kit comercial (Qiagen) y el eluido se usó para la determinación de adenovirus (AdV), noro-virus genotipo II (NV) y enterovirus (EV) empleando PCR en tiempo real. Cerca del 45% de las muestras fueron positivas para AdV, encontrándose en mayor frecuencia que NV (9%) y EV (8%). Sólo NV mostraron estacionalidad habiendo sido detectados sólo durante el otoño-invierno. Con los resultados obtenidos para los puntos de monitoreo sobre el río (aguas receptoras) se ha realizado la evalu-ación cuantitativa de riesgo a enfermar por AdV, EV y NV. Los cálculos se han realizado usando el Método de Monte Carlo estándar de primer orden y dos curvas de dosis-re-spuesta: exponencial para AdV y Beta-Poisson para EV y NV. La exposición individual durante las actividades recre-ativas se calculó como el volumen de agua ingerido por la concentración del patógeno. La dosis estimada para cada persona expuesta se calculó teniendo en cuenta la tasa in-dividual de exposición por la duración total del evento. Se consideraron tres modos de exposición: ingestión por adul-tos al nadar, ingestión por niños al nadar e inhalación por cualquier persona o contacto secundario. La simulación se hizo para 100 usuarios en actividades recreativas en un sitio particular por un día y luego por 1000 días. El riesgo dominante resultó ser para NV, mientras que para AdV y EV fue muy bajo. El riesgo de enfermar con NV fue de 29% para adultos (contacto primario), 30% para niños y 27% para contacto secundario, valores que exceden el actual criterio de la EPA para enfermedades gastrointestinales (0.8% para agua dulce).

MARTES 27 DE SEPTIEMBRE


MESA REDONDA N° 3 VACUNAS DE NUEVA GENERACIÓN

MR3-1 - MEJORAS EN VACUNAS ANTI-AFTOSA GÉNICAS Y PEPTÍDICAS PARA BOVINOS. ALEJANDRA V CAPOZZOA, MA LAVORIAA, D BUCAFUSCOB, M WILDAA, OL FRANCO MAHECHAA, F MANSILLAA, DM PÉREZ FILGUEIRAB, PR GRI-GERAA.

aICT Milstein. CONICET. Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Argentina, bInstituto de Virología. INTA-Castelar, Buenos Aires. Argentina.

El sitio antigénico A (ASA) comprendido entre los aa 139-149 de la proteína capsidal VP1 del Virus de la Fiebre Aftosa (VFA) se localiza en el “loop” G-H de VP1, que está expuesto en la superficie del virión. Esta secuencia contiene el motivo arginina-glicina-ác. aspártico que está altamente conservado entre los serotipos y media la entrada del virus a las células. La respuesta neutralizante está dirigida principalmente hacia ASA. Sin embargo, péptidos sintéticos del esta secuencia fallan en reproducir las conformaciones de ASA el virión y además carecen de epitopes T funcionales en bovinos, que sean ca-paces de activar células T colaboradoras. Para superar estas limitaciones, ideamos un antígeno quimérico que fuera capaz de exponer adecuadamente al ASA y de proveer epitopes T funcionales en bovinos. La construcción “G-ASA” contiene un dímero en tándem del ASA (VFA, serotipo C3 Indaial) en un si-tio expuesto del ectodominio del extremo N-terminal de la glico-proteína G del Virus de la Estomatitis Vesicular G, flanqueado por epitopes T alineados. El modelado de G-ASA mostró que al colocar un dímero de ASA una de las dos secuencias adquiría una configuración expuesta en la superficie de la molécula quimérica. G-ASA fue expresada en el sistema Baculovirus re-combinante/células de insecto para producir la proteína DEL BAC, y también preparada como vacuna génica (pC DEL). La funcionalidad de los epitopes de células T bovinas presentes en DEL BAC fue comprobada in vitro, mediante la activación de la secreción de IFN-α específica en células mononucleares de sangre periférica de bovinos inmunizados con vacuna com-ercial anti-aftosa. La aplicación de dos dosis de 30µg de DEL BAC en terneros estimuló títulos séricos de anticuerpos neu-tralizantes anti-VFA (mayormente IgG1) compatibles con una expectativa de protección superior al 90%. La vacuna génica (pC DEL) indujo seroconversión luego de una sola dosis (150 mg en PBS), con altos niveles de IgG1. Los anticuerpos séri-cos de los terneros vacunados con DEL BAC y pC DEL reac-cionaron fuertemente con el virus nativo en ensayos de ELISA, inmunoprecipitaron partículas virales 140S y neutralizaron la infección por VFA in vitro. Los resultados demuestran que la mejor inmunogenicidad de esta construcción, respecto a la uti-lización del ASA asociado a epitopes T ubicuos, se debería al tamaño de la proteína quimérica, su capacidad que reproducir una o más de las conformaciones nativas de ASA, y a la funcio-nalidad y disposición de los epitopes T bovinos provistos por la glicoproteína G.

MR3-2 - CONTROL DE INFLUENZA PORCINA MEDIANTE VACUNACIÓN. DANIEL R PÉREZ.

Department of Veterinary Medicine - University of Maryland, Co-llege Park, MD 20742, EEUU.

Since 1998, the emergence of triple reassortant (TR) influ-enza viruses, which have their genes derived from human, swine and avian strains, have caused a dramatic change in the epide-miology of influenza in pigs in North America and elsewhere. TR swine influenza viruses have become endemic in North Ameri-can swine. TR strains of the H3N2, H1N2, and H1N1 subtypes


predominate in the US swine population and reassortment with either classical swine H1N1 and human H1N1 and H3N2 viruses, has led to seven different circulating lineages. A unique feature shared by all of these novel reassortants is the maintenance of the so-called triple reassortant internal gene (TRIG) cassette, which consists of the avian-like PB2 and PA genes, the human-like PB1 gene and the classical swine NP, M and NS genes. The TRIG cassette appears to accept multiple HA and NA types, which could provide a selective advantage to swine viruses pos-sessing this internal gene constellation. The natural outbreaks of H1N1pdm in pigs – a TRIG virus – and laboratory studies un-derscore the threat that the virus poses to the swine industry. In this regard, the development of safe and potent vaccines that are effective in more than one animal species would be highly desir-able. Live attenuated influenza vaccines (LAIVs) closely mimic natural infection and have several advantages over inactivated vaccines. LAIVs trigger cell-mediated immunity and mucosal immune responses, thereby providing longer-lasting immunity and broader antigenic coverage than conventional inactivated vaccines. Field experience with both the human and the equine influenza live vaccines have demonstrated the safety, effective-ness, and the genetic and phenotypic stability of these vaccine platforms. In swine medicine, however, temperature-sensitive LAIVs have not yet been developed, despite their demonstrated safety and efficacy for other animal vaccines. More recently, live attenuated vaccines based on deletions in the NS1 viral protein have been shown to provide protection in swine. Currently, com-mercially available swine influenza vaccines are based on inacti-vated whole virus preparations of the H1N1 and H3N2 subtypes. The use of vaccination has become a common practice to control swine influenza in the US. Nonetheless, these commercially avail-able vaccines provide limited protection against the antigenically diverse influenza viruses that circulate in North American pigs, and consequently, forced swine producers to use autogenous inactivated vaccines with the hope of achieving better antigenic matching (38). However, it is important to note that the use of in-activated vaccines has been associated with enhanced pneumo-nia when immunized pigs were challenged with divergent viruses (38). In this presentation we will discuss the alternative strategies available for vaccination of swine against influenza, particularly LAIVs, and their advantages and disadvantages.

MR3-3 - LOS BACULOVIRUS COMO VECTOR DE INMU-NIZACIÓN PARA LA GENERACIÓN DE RESPUESTA CI-TOTÓXICA ANTITUMORAL. P MOLINARI*, MI CRESPO…, MJ GRAVISACO*, O TABOGA*, GABRIEL MORÓN…

*Instituto de Biotecnología, CNIA, INTA Castelar, Buenos Aires, Argentina, …Centro de Investigaciones en Bioquímica Clínica e Inmunología (CIBICI-CONICET), Facultad de Ciencias Químicas, Universidad Nacional de Córdoba, Córdoba, Argentina.

Los baculovirus (BV) son virus de ADN patogénicos para los insectos, capaces de infectar un amplio espectro de células de mamíferos sin llegar a replicarse en ellas. Esta propiedad permite vislumbrar su uso potencial como estrategia de estimulación del sistema inmune de los mamíferos. Nosotros hemos desarrollado una forma recombinante del virus de la polihedrosis nuclear múl-tiple de Autographa californica, por inserción de un fragmento de un antígeno modelo, la ovalbúmina (OVA), en la proteína VP39 de la cápside viral (BV-OVA). Nosotros hemos encontrado en ratones inyectados con BV-OVA que este virus recombinante tie-ne la capacidad de actuar como un fuerte inductor de respuesta inmune contra OVA mediada por células CD4 y CD8, actuando como vector de antígenos y como adyuvante. También actúa promoviendo la activación del sistema inmune innato a través de la activación de células dendríticas, células NK y NKT y la producción de citoquinas pro-inflamatorias. Los ratones inmuni-zados con BV-OVA mostraron una clara respuesta antitumoral específica de antígeno, evidenciado por ensayos profilácticos y terapéuticos. Estos hallazgos, junto con la ausencia de una inmunidad pre-existente efectiva contra BV en seres humanos y la falta de expresión viral en células de mamíferos hacen de los BV un excelente candidato para el desarrollo de vacunas.

MESA REDONDA N° 4 ANTIVIRALES. SITUACIÓN ACTUAL

Y NUEVAS PERSPECTIVAS.

MR4-1 - EPIT�ELIAL RAFT CULTURES FOR INVESTIGA-EPIT�ELIAL RAFT CULTURES FOR INVESTIGA-TIONS OF VIRUS GROWT�, PAT�OGENESIS AND EFFI-CACY OF ANTIVIRAL AGENTS. GRACIELA ANDREI1, J VAN DEN OORD2, S DURAFFOUR2, R SNOECK1.

1Rega Institute for Medical Research, K.U.Leuven, B-3000 Leuven, Bélgica, 2Laboratory of Morphology and Molecular Pathology. K.U.Leuven, B-3000 Leuven, Bélgica.

The organotypic epithelial raft cultures, originally developed to study keratinocytes differentiation, represent a novel ap-proach to the study of viruses able to infect epithelial cells. Orga-notypic epithelial raft cultures accurately reproduce the process of epithelial differentiation in vitro and can be prepared from nor-mal keratinocytes, explanted epithelial tissue, or established cell lines. This culture system permits cells to proliferate and fully di-fferentiate at the air–liquid interface on a dermal-equivalent sup-port. Normal primary human keratinocytes (PHKs) stratify and fully differentiate in a manner similar to the normal squamous epithelial tissues, while transformed cell lines exhibit dysplastic morphologies similar to the (pre)neoplastic lesions seen in vivo. This three-dimensional (3D) culture system provides an essen-tial tool for investigations of virus growth, virus–host cell inte-ractions, for the genetic analysis of viral proteins and regulatory sequences, and for the evaluation of antiviral agents. The 3D epithelial cultures have proven a breakthrough in the research on papillomaviruses, since their life cycle is strictly linked to the di-fferentiation of the host epithelium. However, many other viruses target epithelial cells, representing the initial site of infection, the site of replication, and a staging area for transportation to other tissues. Therefore, it is not surprising that in the last years the use of organotypic epithelial raft cultures has been expanded to other viruses (i.e. herpesviruses, adenoviruses, poxviruses, and parvoviruses) able to infect epithelial cells at least during a part of their replicative cycle. We have demonstrated that organotypic epithelial raft cultures can be adapted to study the efficacy and selectivity of antiviral agents against α-herpesviruses and seve-ral orhtopoxviruses. To date, we have evaluated the efficacy of different antivirals by examining the virus-induced cytodestructi-ve effects following hemathoxylin–eosin stains of raft sections. The quantification of the antiviral effects has been performed by measuring viral titers by plaque assay and/or by measuring viral DNA load by real-time PCR. OERCs can also be adapted to re-produce the process of viral transmission from blood to epithelial cells by studying the ability of mononuclear cells (MCs) to trans-mit the viral infection to a differentiated epithelium. Furthermore, specific populations of MCs and endothelial cells can be added to the 3D culture system. An immune reconstituted epithelium represents a relevant in vitro model for the study of viral immu-nobiology. Although the preparation of 3D cultures of epithelial cells is time consuming and laborious, they provide an in vitro system to study virus growths and virus–host cell interactions under conditions that more closely resemble the in vivo situation. In addition, organotypic epithelial raft cultures are essential for the study of virus whose grows is dependent on epithelial cell differentiation.

MR4-2 - BÚSQUEDA DE FACTORES CELULARES ANTIVI-RALES A TRAVÉS DE ENSAYOS DE ALTO RENDIMIENTO. CYBELE GARCÍA

Laboratorio de Estrategias Antivirales, Departamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Ciudad Autónoma de Buenos Ai-res, Argentina

El virus dengue (DENV) es un arbovirus de la familia Flavivi-ridae que presenta cuatro serotipos (DENV-1 a DENV-4) y son transmitidos al hombre por mosquitos del género Aedes. La in-fección resulta en un amplio espectro clínico que abarca desde


infecciones inaparentes, hasta formas más severas de fiebre hemorrágica de dengue y síndrome de shock de dengue. En la actualidad no hay vacunas ni agentes quimioterapéuticos espe-cíficos disponibles para prevención o tratamiento del dengue, por lo que representa una de las prioridades en el desarrollo de antivirales. Con el objetivo de identificar factores celulares antivirales, en el presente trabajo se propuso el uso combinado de microarreglos (microarrays) en conjunto con el mecanismo de interferencia de ARN, a través de ensayos de alto rendi-miento (high throughtput screening). En primer lugar, se utili-zaron microarreglos de ADN para analizar la expresión génica de varias líneas celulares infectadas con DENV-2. A partir de los perfiles obtenidos en las muestras fueron identificados 75 genes relacionados con la inmunidad innata que resultaron estar sobreexpresados en todas las líneas celulares luego de 24 y 48 horas post infección. Luego, en forma complementaria se utilizaron vectores lentivirales que expresan pequeños ARN con estructura de horquilla (small hairpin RNAs, shRNAs) con el fin de silenciar la expresión de los mismos y definir así su potencial antiviral. Para ello, se pusieron a punto las condicio-nes que permitieran la transducción de células con 5 shRNAs redundantes dirigidos hacia cada uno de los 75 genes, segui-do de una infección con DENV-2, a través de ensayos de alto rendimiento utilizando un sistema automatizado provisto por el Broad Institute (EEUU). Los resultados se analizaron mediante ensayos de inmunofluorescencia indirecta revelando la expre-sión de la proteína NS3 del virus dengue, y por RT-PCR cuanti-tativa detectando genoma viral. A partir de este nuevo estudio, se identificaron 23 genes con propiedades antivirales. Algunos de estos genes ya habían sido identificados por otros grupos de investigación, como PKR, RIG-I, IFITM2, CASP3, sin embargo el análisis también reveló nuevos genes como TRIM19, GMPR, DUSP5, CD38, IFI27, IFI35, GBP1, SP110, IFI6, que constitu-yen interesantes perspectivas de investigación en el campo an-tiviral. En particular, nuestro grupo de trabajo se ha enfocado en estudiar el rol de TRIM19 (proteína de la leucemia promielocíti-ca, PML) en la infección con DENV. Los ensayos preliminares demuestran que esta proteína podría cumplir una función anti-viral clave en la progresión del ciclo de replicación de DENV, por lo que concluimos que la combinación del análisis aleatorio de la respuesta génica de células infectadas (microarreglos), en conjunto con el silenciamiento de genes mediante shRNAs, constituyen un abordaje muy útil en ensayos de alto rendimien-to para caracterizar nuevos factores celulares antivirales.

MR4-3 - RESISTENCIA A DROGAS ANTIRRETROVIRALES. SITUACIÓN EN LA ARGENTINA. HORACIO SALOMÓN.

Centro Nacional de Referencia para el SIDA. Facultad de Medi-cina. Universidad de Buenos Aires, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina

La generación de resistencia a drogas antivirales es un fenómeno descripto frecuentemente desde hace ya algunas décadas. El constante avance en el conocimiento y desarrollo de nuevas drogas antirretrovirales en los últimos años, con-juntamente con un aumento en la frecuencia de su uso en la terapéutica contra el sida, genera lógicos interrogantes sobre el impacto que estos fenómenos puedan tener sobre la Salud Pública. Cuando se realiza un tratamiento con drogas antirre-trovirales pueden seleccionarse, en los individuos tratados, variantes virales (mutaciones) asociadas a resistencia a estas drogas que podrían hacer ineficaz el tratamiento. La resisten-cia a determinados fármacos está asociada con una mutación única o con una serie de mutaciones que se van seleccionando progresivamente, según los antirretrovirales disponibles en la práctica clínica. El significado clínico de la resistencia sería dependiente de su relación con la falla del fármaco y de éste con la progresión de la enfermedad. Dada la posibilidad de transmisión de variantes resistentes y el comportamiento como cuasiespecies de las poblaciones de HIV-1, es esperable en-contrar la presencia de estas variantes en pacientes vírgenes de tratamiento. Conocer la prevalencia de estas variantes en los pacientes con infección primaria es de gran importancia sa-

nitaria. Analizaremos los distintos estudios realizados y mostra-remos la necesidad de implementar un programa sustentable de monitoreo de resistencia a drogas antirretrovirales en nues-tro país y en la región.

III SIMPOSIO VIROLOGÍA CLÍNICA

MESA REDONDA SC N° 1VIRUS EN TUMORES �UMANOS

MRSC1-1 - PRESENCE OF A BETARETROVIRUS IN �UMAN BREAST CANCER: IMPLICATIONS FOR PAT�OGENESIS. BEATRIZ GT POGO, SM MELANA, T MARIN, T NARTEY, H MORAN, AT LEE, JF HOLLAND

The Tisch Cancer Institute Mount Sinai School of Medicine, New York, EEUU.

Our laboratory demonstrated the presence of retroviral sequences homologous to the mouse mammary tumor virus (MMTV) in a large proportion of human breast cancers. A 660 bp sequence of the MMTV env gene, with no significant homo-logy to any viral or human sequence reported in the GenBank, has been found in 40% of the U.S. human breast cancers stu-died. This sequence is expressed in most of the tumors contai-ning the env sequence. It is not detected in the normal breast tissue of patients with carcinomas carrying the env sequence, indicating its exogenous origin. A complete provirus structure with 95% homology to MMTV has been described and desig-nated as human mammary tumor virus (HMTV). Betaretroviral particles from primary cultures of breast cancer cells (MSSM) have been isolated and characterized. Virion RNA is more than 90% homologous to MMTV RNA and to the HMTV proviral DNA previously identified. Co-culture experiments between MSSM cells and normal human epithelial breast cells, B and T human lymphocytes and human dendritic cells showed that recipient human cells became infected with HMTV. However, protein ex-pression was only observed in 10-15% of the infected cells by FACS analysis suggesting the presence of an innate resistance to HMTV in human cells. We have then investigated whether human APOBEC and TRIM proteins are implicated in resistan-ce to HMTV expression. The results indicated that APOBEC G and F, TRIM 5, 21 and 25 are all highly expressed in HMTV cells as measured by quantitative RT-PCR and may be invol-ved in the viral restriction. Additional molecular changes seen in infected cells are disruption of the cytoskeleton and eviden-ce for epithelial-mesenchymal transition. Non-acute retrovirus causes malignancy by two molecular mechanisms: insertion activation and Env involvement in signaling. Our results su-ggest that both mechanisms may be implicated in HMTV patho-genesis. The origin of the HMTV is uncertain. The detection of HMTV in human milk, as it has been recently reported by us and others, opens new avenues to study transmission. In con-clusion, HMTV is able to infect a variety of cells bringing about striking molecular changes. Whether these changes play a role in human breast carcinogenesis is being actively investigated.

MRSC1-2 - POLYOMAVIRUSES ARE BACK IN T�E FIELD: T�E �UMAN MERKEL CELL CARCINOMA. ALDO VENUTI

Laboratory of Virology- Regina Elena National Cancer Institute, Rome, Italia.

Polyomaviruses are small (40–50 nanometer in diameter), double-stranded DNA viruses that infect multiple species. The genomes are divided into three regions: first, the early coding region, which encodes for the small and the large tumour an-tigen (LTA); second, the late coding region, which encodes for the viral capsid proteins VP1, VP2, VP3 and the nonstructural agnoprotein and third, the noncoding control region, which con-tains the viral promoters and the origins of replication. Since the discovery of SV40, polyomaviruses have been suspected as possible causes of cancer in humans. Indeed, polyomavi-


ruses can induce tumour formation in experimentally infected animals and viral DNA integration into the host genome usually precedes tumour development. Fourteen different polyomavi-ruses have been described to date and five of those are specific for humans: JC, BK, KI, WU and MCPyV. The latter three were discovered only within the last 2 years: KIPyV and WUPyV were identified from large-scale high-throughput screenings of respi-ratory secretions from patients with respiratory tract infections, whereas MCPyV was identified in Merkel cell carcinoma (MCC) using digital transcriptome subtraction. The early proteins of polyomavirus transform and immortalize cultured cells, there-fore, the possible role of polyomaviruses in the etiology of hu-man tumours (in particular of BK and JC) has been extensively investigated, but the results have been inconclusive until the work of Feng et al who discovered in MCC the presence of a new polyomavirus naturally integrated into cellular DNA, as in the experimental polyomavirus-induced animal tumours. This finding has been confirmed by several independent groups in-cluding our own observation in Italian patients. The frequency of virus-positive cases is generally high and ranged from 69% to 85%. However, about 20 % of MCC has no polyomavirus suggesting that this tumour may have other nonviral causes as well. Concerning a causal role of MCPyV in MCC a key aspect is that integration takes place prior to tumour development. In addition the distinct integration at different locations into the cell genome between tumours argues against a possible inser-tional mutagenesis mechanism. Finally all published MCC-de-rived MCPyV LTA sequences (as well as our own unpublished observation) harbour mutations which prematurely truncate the protein eliminating the helicase function but preserving the hsc70 and the RB binding motifs. This observation leads to hypothesize that this protein truncation should be a necessary event before a tumour can evolve following integration of the virus in the hosts’ genome. A replication-competent LTA might either lead to persisting virus production with host cell lysis or result in DNA fragmentation due to aberrant viral replication. Thus, integration of a full-length viral genome would be incom-patible with further expansion of the infected, proliferating cell. In conclusion the discovering of the association of a new poly-omavirus with this very aggressive cancer will have a profound impact on future therapies as the viral proteins marking and inducing the MCC development are very promising targets.

MRSC1-3 - T�E MEC�ANISM OF EPSTEIN-BARR VIRUS PERSISTENT INFECTION AND T�E ORIGINS OF ASSO-CIATED TUMORS. DAVID A. THORLEY-LAWSON.

Dept. of Pathology, Tufts University School of Medicine, Boston MA, EEUU.

Epstein-Barr virus is a human herpesvirus that is a para-digm for understanding persistent infection. It infects >90% of the human population usually early in life and then remains for the life of the human host. This persistent infection is al-most always benign but occasionally is associated with the development of cancers several of which constitute significant health problems. These include immunoblastic, Hodgkin’s and Burkitt’s lymphomas. We have presented a large body of evi-dence in support of a model, which is now generally accepted, of how EBV establishes and maintains this infection. The es-sence of this model is that EBV usurps the normal biology of the B lymphocyte. Specifically, EBV uses a series of B cell stage specific transcription programs to first activate the newly infected B cell then drive it through a germinal center reaction (the site where B cells usually undergo affinity maturation of their immunoglobulin genes) to emerge as a latently infected resting memory B cell – the site of long term persistence. Ul-timately, reactivation of the virus from these cells occurs when they are triggered into terminal differentiation to become plas-ma cells. This infectious virus then becomes amplified through lytic infection of the epithelium at the mucosal surface prior to release into saliva – the vehicle via which the infection is spread. When the progression of newly infected cells into the

memory compartment is compromised at any given stage this can give rise to EBV associated lymphoma. In this presenta-tion I will review the model of EBV persistence, where and how it becomes dysregulated leading to lymphoma and new evidence implicating viral miRNAs in the development of these tumors.

MESA REDONDA SC N° 2GASTROENTERITIS VIRALES

MRSC2-1 - CARGA DE LA ENFERMEDAD Y EPIDEMIOLO-GÍA MOLECULAR DEL ROTAVIRUS. HERLINDA GARCÍA LOZANO

Laboratorio de Virus Gastrointestinales. Departamento de Vi-rología. Instituto de Diagnóstico y Referencia Epidemiológicos, InDRE de la Secretaría de Salud. Distrito Federal. México,

La enfermedad por Rotavirus (RVs) es una de las princi-pales causas de morbi-mortalidad por diarrea a nivel mundial. Se estima 111 millones de casos de diarrea, 25 millones de consultas, 2 millones de hospitalizaciones, y 400.000 muer-tes por RVs. 82% de estas muertes ocurren en países en vías de desarrollo. En Latinoamérica, el RVs es la causa de unas 75,000 y 15,282 muertes, principalmente en los menores de 5 años de edad. La epidemiología de las infecciones por ro-tavirus en los países en desarrollo, presenta diferencias im-portantes de lo que acontece en los países desarrollados, los niños adquieren la enfermedad en las etapas más tempranas en la vida, de 6 – 24 meses de edad; las infecciones ocurren lo largo del año, y ser causadas por una mayor diversidad de cepas que las que se identifican en países desarrollados, identificación de cepas emergentes con nuevos tipos G y P; además de observarse un mayor número de infecciones mixtas asociadas con una gastroenteritis severa con deshi-dratación. Diversos estudios han demostrado que las cepas de RVs G1P[8], G2P[4],G3P[8] y G4[8] son los tipos G y P de mayor circulación e importancia epidemiológica en todo el mundo. A la fecha se han identificado 14 tipos G (G1-G14) y 20 tipos P (P1-P20) asociados con las infecciones de seres humanos. No obstante, en la última década, el uso de méto-dos de tipificación basados en la biología molecular, como la RT-PCR y secuenciación nucleotídica han permitido la iden-tificación y la circulación de cepas emergentes y re-emergen-tes tipos G (G5, G6, G8, G9, G10 y G12) y tipos P ([P[3], P[6], P[9], P[11], P[14] y P[19]) diferentes a los previamente descritos y su incremento ha sido reportado en diferentes paí-ses. A partir de la década de los noventa se ha observado una mayor circulación del genotipo emergente G9 en el plano mundial, representando en la actualidad el 5° genotipo más frecuente, después de los genotipos G1–G4, y 15% de las infecciones en América del Sur. En Latinoamérica se observa una diversidad de los genotipos de Rotavirus. En Brasil se han reportado los genotipos G1P[8], G2P[4], G3P[8] y G4[8]; representando el 50% de los genotipos más comunes, G5 y G9; P[P8] y [P6] como genotipos emergentes. Asimismo infecciones mixtas y cepas P no tipificables. En México, de 2000 al 2010, los estudios de Vigilancia Virológica han mos-trado la distribución de los genotipos G1P[8], G2P[4], G3P[8] y G4[8] con un predominio del genotipo G1((80%), seguido de G2, G3 y G4, respectivamente. En el 2010, se observó un predominio del genotipo emergente G9 P[4] (61.6%) aso-ciado con un brote de diarrea aguda por RVs en la región del sureste del estado de Chiapas. Infecciones mixtas y cepas no tipificables también son observadas. Estudios realizados en Argentina, revelan que los genotipos circulantes de mayor frecuencia son G1P[8], G4[8], G2P[4] y G9P[6] como un ge-notipo prevalente emergente en los últimos años. Infecciones mixtas 8% y un 2% de muestras no tipificables a G y P. Por lo que la tipificación es un componente importante en la Vigilan-cia Virológica para fortalecer la Vigilancia Epidemiológica de la Diarrea por Rotavirus.


MRSC2-2 - ROTAVIRUS VACCINES: EFFICACY VERSUS EFFECTIVENESS, PUBLIC �EALT� IMPACT AND EFFECT ON VIRAL ECOLOGY. ALEXANDRE C LINHARES, MCA JUS-TINO

Instituto Evandro Chagas, Secretaria de Vigilância em Saúde, Ministério da Saúde, Belém, Para, Brasil.

Rotavirus causes annually an estimated 527,000 deaths and 138 million diarrhoeal episodes. Most of the deaths (>85%) occur in Asia, sub-Saharan Africa and Latin America. As from 2006 two new rotavirus vaccines, RotaTeqTM (Merck and Co., PA, USA) and RotarixTM (GSK Biologicals, Rixensart, Belgium), have been licensed in many countries. Both vaccines were shown to be safe and highly effective against severe rotavirus gastroenteritis in large clinical trials and post-licensure studies. The safety profile and efficacy of RotaTeqTM were demonstrat-ed in a study that enrolled >70,000 infants in 11 countries. The vaccine reduced 96% of hospitalisations, 94% of emergency department visits, and 86% of office visits for rotavirus illness. Recent studies from Africa and Asia showed efficacy rates of 64% and 51% during the first year of life, respectively. In a trial involving >63,000 infants in 11 Latin American countries and Finland, RotarixTM achieved >80% protection against severe rotavirus gastroenteritis during the first 2 years of life. Higher levels of protection were yielded in Southeast Asia (nearly 100%) and Europe (96%). Recent studies in Africa have shown efficacies of 82% and 50% in South Africa and Malawi, respec-tively. In Houston, Texas, RotaTeqTM effectiveness against rotavirus gastroenteritis was 88% versus 2 different control groups combined. In Nicaragua this vaccine achieved a 58% protection against severe rotavirus gastroenteritis. In El Salva-dor RotarixTM was 76% effective against severe rotavirus gas-troenteritis using controls matched by age and neighbourhood. Case-control studies with RotarixTM in Brazil were undertaken in Recife and Belém. In Recife vaccine effectiveness was 77% against hospitalisations caused by G2P[4], regardless of the control group used. Depending on the control group used in Belém, effectiveness ranged from 40% to 78%. In Australia, vaccine effectiveness was 85% among indigenous children during an outbreak of G9; in a further evaluation of RotarixTM in the same population, during an outbreak of G2P[4], only 19% protection was yielded against rotavirus hospitalisations. Significant declines in the number of hospitalisations for rota-virus gastroenteritis were observed in the USA (58%-86%),

Australia (89%-94%) and El Salvador (69%-81%). A reduction in admissions for all-cause gastroenteritis was seen in Mex-ico (40%), Panama (22%-33%) and Brazil (17%-48%). Diar-rhoea mortality decreased significantly in <1 year-old children in Mexico (42%) and Brazil (22%-39%). Although data from the United States have shown an increase in G3P[8] strains in states using RotaTeqTM, a recent study reported high vac-cine effectiveness against severe disease due to this serotype. In Australia, a higher prevalence of G2P[4] was observed in states with RotarixTM introduction, whilst G3P[8] was dominant in locations exclusively using RotaTeqTM. In Brazil it has been hypothesised that the observed increase in G2P[4] strains could have occurred due a vaccine-induced selective pressure. Nevertheless, recent effectiveness studies have shown a high protection against severe disease caused by G2P[4]. In conclu-sion, findings in the early rotavirus vaccines era have shown a substantial impact on severe childhood gastroenteritis and deaths. Nevertheless, the still controversial issue of rotavirus vaccination effect on viral ecology warrants further studies to monitor the circulating rotavirus strains during the post-licen-sure period.

MRSC2-3 - NOROVIRUS Y SU ROL EN LAS ENFERMEDA-DES TRANSMITIDAS POR ALIMENTOS. EPIDEMIOLOGÍA, DIAGNÓSTICO Y PREVENCIÓN. KARINA A GOMES

Laboratorio de Gastroenteritis virales.Instituto Nacional de En-fermedades Infecciosas. ANLIS “Dr Carlos.G.Malbrán”. Ciudad Autónoma de Buenos Aires. Argentina

Tradicionalmente las Enfermedades de Transmisión Alimen-taria (ETAs) han sido asociadas a patógenos bacterianos. Los avances en el desarrollo de técnicas moleculares han permitido demostrar la importancia del rol de los agentes virales como pro-ductores de ETAs, siendo Norovirus (NV) el principal virus asocia-do a este tipo de infecciones. Se estima que en países desarro-llados es el responsable del 93 % de brotes de gastroenteritis de origen alimentario, mientras que en Argentina ha sido reportado como el agente causal del 63 % de los brotes de gastroenteritis no bacteriana. NV pertenece a la familia Caliciviridae. Es un virus no envuelto con un genoma de ARN lineal de polaridad positiva que posee tres marcos de lectura. Causa una gastroenteritis autolimi-tada, donde los casos más severos ocurren en niños y ancianos. Los principales síntomas asociados a la infección por NV incluyen diarrea, vómitos, dolor abdominal, nauseas, fiebre y cefalea. La duración de la enfermedad es de 12 a 60 hs con un período de incubación de 24 a 48 horas. Diversos factores como variabilidad genética, baja dosis infectiva, largos períodos de excreción, y su resistencia a condiciones ambientales adversas facilitan su dise-minación. La transmisión ocurre por tres vías principales: contacto persona a persona, agua y alimentos, donde el consumo de mo-luscos bivalvos está fuertemente asociado a brotes por NV. En la actualidad la principal metodología diagnóstica utilizada es la transcripción reversa seguida de una reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR). Los enzimoinmunoensayos (EIA) desarro-llados no poseen buena sensibilidad ni especificidad, sin embargo su uso es recomendado para screening en estudios de brotes. No obstante, las muestras negativas por EIA deben ser confirmadas mediante técnicas referenciales. El pico de excreción viral ocurre entre el segundo y quinto día post infección, pudiendo ser detec-tado en heces hasta 4 semanas posteriores. El correcto lavado de manos y desinfección de superficies así como la implementación de buenas prácticas de higiene en la manipulación de alimen-tos, se consideran pautas cruciales para evitar la transmisión de este virus, sobre todo en comunidades cerradas como hospitales, guarderías y geriátricos. Existen sistemas de control microbiológi-co de alimentos y agua que no han sido eficientes para predecir contaminación viral. Es importante considerar que las medidas de prevención de contaminación bacteriana pueden no ser efectivas para virus. En este sentido se plantean nuevos desafíos a futuro para el desarrollo y validación de métodos de detección de NV en alimentos y agua. Resulta esencial generar un sistema de notifi-cación de brotes de alto impacto en nuestro país, así como tam-bién la de implementar la búsqueda de este virus en la vigilancia de las ETAs para no subestimar el real impacto de este problema.

MIÉRCOLES 28 DE SEPTIEMBRE


MESA REDONDA N° 5 - ASPECTOS MOLECULARES DE LA REPLICACIÓN VIRAL

MR5-1 - ENSAMBLADO Y LIBERACIÓN DEL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA �UMANA EN MACRÓFAGOS Y LINFOCITOS T: EVENTOS REGULADOS POR RAB27A. M CABRINI, C RODRÍGUEZ RODRIGUES, F REMES-LENICOV, A MERLOTTI IPOLITO, J SABATTÉ, A CEBALLOS, J GEFF-NER, MATÍAS OSTROWSKI.

Centro Nacional de Referencia para el SIDA. Facultad de Medici-na. UBA, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

La producción de partículas infecciosas del Virus de la In-munodeficiencia Humana (VIH) requiere que los tres princi-pales componentes virales- Gag, la proteína de envoltura y el RNA genómico- alcancen coordinadamente el sitio de ensam-blado. Una vez presentes los tres componentes en el mismo sitio, se producirá la biogénesis viral, en un proceso dirigido por la poliproteína Gag la cual, mediante multimerización homólo-ga, tiene la capacidad de formar partículas virales inmaduras. Una vez producida la brotación, estas partículas completan su maduración cuando Gag es clivada por la proteasa viral, dando


origen a las proteínas de la matriz, la cápside, la nucleocápside, p6 y dos péptidos más pequeños, denominados SP1 y SP2. El hecho de que Gag pueda ser observada tanto en la membra-na plasmática como en endosomas, condujo a la hipótesis de que existen varios sitios de ensamblado del VIH. Por un lado, Gag, puede iniciar y completar el ensamblado en la membrana plasmática. Esto ocurriría principalmente en los linfocitos T. Por otro lado, Gag podría iniciar el ensamblado de HIV en endoso-mas tardíos, para luego viajar junto a estas organelas hacia la superficie celular y acceder, de esta manera, al espacio extra-celular. Este fenómeno ocurriría en linfocitos T y, sobre todo, en macrófagos. Este último mecanismo de liberación viral a través de endosomas, presenta gran similitud con la vía de secreción de exosomas, pequeñas vesículas originadas por invaginación de la membrana limitante de los endosomas tardíos que, tras la fusión de los endosomas con la membrana plasmática, son liberadas al espacio extracelular. La proteína Rab27a es una pequeña GTPasa que fue recientemente identificada como actor central en el control del tráfico de estos compartimentos endosomales y la regulación de la secreción de exosomas. Teniendo en cuenta el posible paralelismo entre la vía de liberación del VIH y de exo-somas, el papel desempeñado por Rab27a en la producción de partículas virales infecciosas fue evaluado, tanto en linfocitos T CD4 como en macrófagos, los dos tipos celulares de mayor im-portancia en la patogenia del HIV. La distribución intracelular, el nivel de maduración y la cantidad de partículas virales liberadas se vieron profundamente afectados en macrófagos y linfocitos T CD4+ en los que Rab27a fue silenciada mediante la utilización de ARN de interferencia. Estos resultados sugieren que en los linfocitos T CD4+ el tráfico endosomal de Gag es, al igual que en macrófagos, de alta importancia para el correcto ensamblado del HIV y su posterior liberación. Más aún, estos resultados permiten definir a la proteína Rab27a como un factor necesario para la correcta replicación del VIH en ambos tipos celulares. La identifi-cación de Rab27a como una nueva proteína celular implicada en la producción del HIV permitirá profundizar nuestra comprensión del ciclo de este virus y, eventualmente, ser utilizada como un nuevo blanco de intervención terapéutica.

MR5-2 - ESTUDIO DE LOS DETERMINANTES MOLECULA-RES DEL ENSAMBLADO DE ARENAVIRUS. NORA LÓPEZ

Centro de Virología Animal, Instituto de Ciencia y Tecnología Dr. César Milstein, CONICET, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

El virus Tacaribe (TCRV), un miembro de la familia Are-naviridae, está estrechamente relacionado con los arenavirus sudamericanos productores de fiebres hemorrágicas y en par-ticular, con el virus Junín, agente causal de la Fiebre Hemorrá-gica Argentina. Sin embargo, el TCRV no es patógeno, carac-terística que contribuye a que sea un interesante modelo para el estudio de los arenavirus patógenos. Tal como los demás miembros de esta familia, TCRV es un virus envuelto, que se genera por brotación en la membrana plasmática de las células infectadas. Su genoma está constituido por dos segmentos de ARN de cadena simple (S y L), cada uno de los cuales usa una estrategia bisentido para codificar dos proteínas. El segmento genómico S codifica para la nucleoproteína (N) y para el pre-cursor (GPC) de las glicoproteínas de envoltura. El segmento L codifica para una ARN polimerasa ARN dependiente llamada proteína L y para la proteína Z, propulsora de la morfogénesis viral. Ambos segmentos de ARN se asocian estrechamente a la proteína N formando las nucleocápsides, que funcionan como templado para la transcripción y replicación del genoma viral por parte de la polimerasa L. Con el propósito de investigar las bases moleculares del ensamblado y brotación de los arenavi-rus, nuestro grupo desarrolló un sistema de genética reversa que permite la replicación de un minigenoma y su ensamblado dentro de partículas de tipo viral (VLPs) quiméricas infectivas. Utilizando ese sistema, pudimos demostrar que la interacción entre las proteínas Z y N es necesaria para la incorporación tanto de las nucleocápsides como de las glicoproteínas virales a las VLPs. Esos resultados evidenciaron que la proteína N no sólo participa en la replicación del genoma viral sino que tam-

bién desempeña un rol importante durante el ensamblado de las partículas de arenavirus. Mediante coinmunoprecipitación, ensayos de formación de VLPs y microscopia confocal, pudi-mos definir dos dominios funcionales bien diferenciados en la proteína N de TCRV: un dominio carboxi-terminal, implicado en la interacción con Z, y otro amino-terminal, involucrado en la ho-mo-oligomerización de N. Encontramos también que la integri-dad de un motivo Zinc finger (CX2HX23CX4C) carboxi-terminal, conservado en todos los arenavirus, es crucial para la interac-ción N-Z y para la incorporación de N a VLPs. Demostramos además, que la auto-asociación de N requiere de la integridad de un motivo coiled coil situado en la región amino-terminal, y que la mutación de aminoácidos que ocupan posiciones clave dentro de ese motivo anula la capacidad de N de sostener la replicación del genoma viral. Por otra parte, el sistema de gené-tica reversa nos ha permitido abordar el estudio de las señales presentes en el genoma viral que participan en su replicación y ensamblado en partículas infecciosas. El conocimiento de las bases moleculares de esos procesos podría contribuir a la iden-tificación de nuevos blancos para el desarrollo de compuestos antivirales contra este grupo de virus.

MR5-3 - MODULATION OF INNATE IMMUNE RESPONSES BY DENGUE VIRUS. S AGUIRRE1, S PAGNI1, T SAVAGE1, D BERNAL-RUBIO1, C FILOMATORI3, JR RODRIGUEZ--MADOZ1, A DE SILVA2, A GAMARNIK3, ANA FERNANDEZ--SESMA1

1 Department of Microbiology and The Global Health and Emerging Pathogens Institute, Mount Sinai School of Medicine. New York, EEUU., 2 University of North Carolina, Chapel Hill, NC, EEUU., 3 Instituto Leloir, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

Our group has recently reported that DENV infection of hu-man DCs does not induce type I IFN production by those infected DCs, impairing their ability to prime naïve T cells towards Th1 im-munity (Rodriguez-Madoz et al. J Virol 2010a). We subsequently showed that DENV infection reduces the ability of human dendrit-ic cells (DCs) to produce type I IFN in response to different stimuli , and that this inhibition requires a proteolytically active NS2B3 (Rodriguez-Madoz et al. J Virol 2010b). These reports strongly suggest that the inhibition of type I IFN production in primary hu-man DCs by DENV rendered them unable to prime T cells to-wards antiviral adaptive immune responses, which constitutes a potent immune evasion mechanism of DENV. We are currently working on the identification of host factors that may interact with the NS2B3 protease complex and participate in the inhibition of IFN as well as DENV-intrinsic elements responsible for the induc-tion of type I IFN in infected cells. One of our approaches is the use of target pull down experiments by tandem affinity purifica-tion with different versions of the protease complex (NS2B3) as a bait to further identify possible cellular targets and characterize the mechanism of inhibition of Type I IFN production in human immune cells by this viral product. Additionally, we are analyz-ing the immune response in human dendritic cells, using primary isolates of DENV and a series of deletion mutants of the 3’ un-translated (UTR) region. Preliminary results show that specific deletions in this region that have been shown to affect replication in mammalian cells (Alvarez et al. Virology, 2005) may also con-fer a rearrangement of the viral RNA structure that can be sensed differently by the cellular PRRs, and result in different levels of type I IFN induction in DCs by those mutant viruses. To validate our findings with laboratory strains and recombinant DENV, we are analyzing the ability of different DENV isolates with different epidemic history to induce type I IFN production and other pro-inflammatory cytokines in human DCs and other primary cells.

MESA REDONDA N° 6 VIRUS DE PLANTAS

MR6-1 - ROL DEL ÁCIDO SALICÍLICO EN LA RESPUESTA DE DEFENSA A PVX EN SOLANUM TUBEROSUM. MARÍA ROSA MARANO, F SICILIANO, S SIMONSINI, G SÁNCHEZ, N GERHARDT


Área Virología, Instituto de Biología Molecular y Celular de Rosario (CONICET), Facultad de Ciencias Bioquímicas y Farmacéuticas, Universidad Nacional de Rosario, Rosario, Argentina.

Las plantas poseen un sistema inmune, complejamente regulado en respuesta a la invasión por microorganismos patógenos. A nivel basal, la planta es capaz de detectar pa-trones moleculares conservados asociados con el patógeno (PAMPs) e iniciar una respuesta de resistencia, conocida como inmunidad inducida por PAMPs. Si el patógeno es capaz de superar o eludir esta línea de defensa, podría ser interceptado por un segundo mecanismo de resistencia denominado inmu-nidad inducida por efector o resistencia gen por gen. En esta segunda respuesta, las proteínas codificadas por los genes de resistencia (R) de la planta reconocen específicamente a efec-tores del patógeno, productos de sus genes de avirulencia. Esta interacción usualmente se manifiesta como una respuesta de defensa hipersensible (HR) en el sitio de entrada del patógeno. La HR conduce a la muerte celular programada en el sitio de la infección y alrededor del sitio de ingreso del patógeno, lo cual restringe su multiplicación y diseminación, limitándolo dentro del área necrótica. En Arabidopsis thaliana y Nicotiana tabacum se demostró que el ácido salicílico (AS) participa en la cascada de transducción de señales en la respuesta de defensa local y sistémica frente a diferentes patógenos. Solanum tuberosum (papa) contiene altos niveles basales de AS (40 a 100 veces más altos que Arabidopsis y tabaco), y su rol en la respuesta a estrés biótico es controvertido. A fin de evaluar la participación del AS en la respuesta de resistencia en papa, se ha elegido el sistema de interacción muy bien caracterizado entre el virus X de la papa (PVX) y el gen de resistencia Nb. Nb es un gen simple dominante presente en el cv. Pentland Ivory que confiere una HR a las cepas ROTH1 y CP2 de PVX, las cuales contienen la proteína efectora de 25 kDa. Esta proteína también se en-cuentra involucrada en el movimiento intercelular del virus y es el supresor de la respuesta antiviral basada en el silenciamiento de ARN. Para determinar si el AS es requerido en la resistencia mediada por Nb, se han generado líneas transgénicas de S. tu-berosum cv Pentland Ivory (genotipo Nb) que expresan el gen de la salicilato hidroxilasa (NahG) de Pseudomona putida, enzi-ma que degrada el AS. Estas líneas transgénicas, deficientes en AS, son menos resistentes a la infección por PVX e incapaces de inducir una respuesta de defensa sistémica (SAR) frente a subsecuentes infecciones virales. A través de análisis bioquími-cos y moleculares se demuestra que los niveles basales de AS se correlacionan con la resistencia mediada por Nb y que las señales que inducen SAR son similares a la respuesta mediada por otras proteínas R.

MR6-2 - CARACTERIZACIÓN FUNCIONAL DE LAS PROTEÍ-NAS CODIFICADAS POR EL MAL DE RÍO CUARTO VIRUS (FIJIVIRUS, REOVIRIDAE) EN PLANTAS E INSECTOS. GA MARONICHE, VC MONGELLI, G LLAUGER, MARIANO DEL VAS

Instituto de Biotecnología CICVyA INTA-Castelar, Buenos Aires, Argentina.

El virus del Mal de Río Cuarto (MRCV, Fijivirus, Reoviridae) causa la principal enfermedad del maíz en la Argentina. El vi-rus es transmitido por delfácidos de manera persistente y asin-tomática. En plantas su replicación está limitada al floema de diversas gramíneas y provoca síntomas severos. El genoma viral consiste en 10 segmentos de dsRNA que codifican para 13 proteínas. Se desconoce la función de la mayoría de proteínas virales (en particular de las no estructurales) en el marco de la infección. El objetivo general de nuestro trabajo es el análisis de los mecanismos moleculares que determinan la interacción entre el MRCV y sus dos hospedantes alternativos (plantas e insectos) para lograr desarrollar estrategias más efectivas de control de la enfermedad. Se estudió la distribución subcelular de las proteínas del MRCV fusionadas a GFP y expresadas en células de insectos. Se identificaron proteínas virales con loca-lización nuclear que podrían intervenir en la regulación trans-

cripcional de las células del hospedante, una proteína capaz de promover la formación de filopodios membranosos y proteínas capaces de interactuar con componentes del citoesqueleto que podrían intervenir en el movimiento intra e intercelular del virus. Asimismo, se determinó que la expresión de la proteína P9-1 da lugar a inclusiones citoplasmáticas conspicuas similares a los viroplasmas. A raíz de este resultado se exploraron las carac-terísticas bioquímicas de esta proteína demostrándose que, al igual que las proteínas mayoritarias del viroplasma de reovirus animales, P9-1 tiene actividad ATPasa y capacidad de unión a ácidos nucleicos de simple cadena. En paralelo, se estudió la capacidad supresora del silenciamiento génico en plantas de las proteínas del MRCV mediante ensayos de agroinfiltración. Si bien ninguna de ellas mostró este tipo de actividad, P7-1 y P7-2 fueron capaces de regular la expresión génica en plantas promoviendo la degradación de mRNAs. Además se determinó que P7-2 se comporta como un determinante de patogenicidad en plantas y es la única proteína viral que no está presente en un virus relacionado que no tiene la capacidad de infectar plan-tas. En conjunto estos resultados nos llevaron a proponer que P7-2 juega un rol clave en la infección de plantas por el MRCV. Actualmente estamos ensayando la capacidad de las distintas proteínas del MRCV con actividad supresora del silenciamiento en líneas celulares de Drosophila. Asimismo estamos analizan-do la interacción de las proteínas virales entre sí y con proteí-nas de trigo utilizando el sistema de doble híbrido de levaduras.

SIMPOSIO VIROLOGÍA CLÍNICA

MESA REDONDA SC N° 3ACTUALIZACIÓN EN LA VIGILANCIA Y

DIAGNÓSTICO DE LAS ENCEFALITIS POR ARBOVIRUS, DENGUE Y FIEBRE AMARILLA.

MRSC3-1 - ACTUALIZACIÓN DE LOS MÉTODOS DE DIAG-NÓSTICO Y LA VIGILANCIA EN LOS LABORATORIOS DE REFERENCIA DE DENGUE Y FIEBRE AMARILLA. MARÍA ALEJANDRA MORALES.

Instituto Nacional de Enfermedades Virales Humanas (INEVH) “Dr. Julio I. Maiztegui”, ANLIS, Pergamino, Buenos Aires, Argentina.

La vigilancia de enfermedades transmisibles por vectores se realiza en Argentina siguiendo el Manual de Normas y Procedi-mientos de Vigilancia del Ministerio de Salud de la Nación, me-diante una estrategia clínica y laboratorial que utiliza el Sistema Nacional de Vigilancia de la Salud en sus módulos Clínico (C2) y Laboratorial (SIVILA) como sistemas de información. Tanto dengue como fiebre amarilla constituyen enfermedades de no-tificación obligatoria y hasta tanto no se confirma la existencia de un brote epidémico en una región, todo caso sospechoso debe ser estudiado por laboratorio. En Argentina funciona des-de 1997 una Red Nacional de Laboratorios para el diagnóstico de dengue y otros arbovirus, con laboratorios estratégicamente distribuidos en las áreas de mayor riesgo epidemiológico del país. Las provincias efectúan los primeros estudios y posibi-litan la rápida implementación de medidas de control ante la aparición de casos probables de dengue y fiebre amarilla. La red utiliza reactivos que se gestionan y controlan en forma centralizada y posee un algoritmo de diagnóstico uniforme. El Centro Nacional de Referencia realiza la confirmación diagnós-tica y estudios de caracterización viral, y conduce el control de calidad interno en el diagnóstico de dengue. Por otro lado, el Centro Nacional de Referencia integra un grupo multicéntrico seleccionado por la OMS-TDR para la evaluación de reactivos comerciales para dengue cuyo objetivo es aportar conocimien-to sobre las características de desempeño de las herramientas de diagnóstico disponibles en el mercado mundial. A pesar de la importancia de los Flavivirus como patógenos emergentes y los grandes avances en los métodos de diagnóstico molecular y serológico realizados en los últimos años, los actuales métodos de diagnóstico tienen una serie de limitaciones. En los últimos años se ha incorporado en la red nacional de laboratorios el uso


de una técnica comercial de enzimoinmunoensayo para detec-ción de la proteína no estructural NS1 de dengue como mé-todo de tamizado de las muestras agudas y su desempeño en terreno es evaluado por el procesamiento en paralelo mediantes técnicas virológicas, moleculares y serológicos. Se encuentran en evaluación diversos protocolos de amplificación viral por RT-PCR en tiempo real, constituyendo una nueva herramienta con un alto potencial para mejorar la detección y cuantificación del genoma viral en las muestras obtenidas durante la fase aguda de la infección. Entre las infecciones virales que pueden ser diag-nosticados por serología, las infecciones por Flavivirus resultan complejas por varias razones. Los pacientes pueden tener infec-ciones múltiples y/o secuenciales diferenciándose respuestas de anticuerpos tipo primaria o secundaria, con diferentes relaciones IgM / IgG y distinto grado de reactividad cruzada con antígenos homólogos y heterólogos. Un alto porcentaje de los casos con-firmados por serología y la diferenciación de infecciones agudas o remotas son realizados en Argentina mediante el estudio de pares serológicos mediante la prueba de neutralización con un panel integrado por los Flavivirus reconocidos en el país.

MRSC3-2 - DIAGNÓSTICO DEL VIRUS ENCEFALITIS ST.LOUIS Y PROBLEMÁTICA ACTUAL. LORENA I. SPIN-SANTI

Instituto de Virología “Dr.J.M.Vanella”, Facultad de Ciencias Mé-dicas, UNC, Córdoba, Argentina.

El virus encefalitis St. Louis (VESL), Flavivirus endémico en Ar-gentina, ha emergido en la última década causando brotes huma-nos y casos esporádicos en varias provincias. La detección viral en humanos es difícil debido a que produce una viremia fugaz. Las pruebas de RT-nested PCR y PCR en tiempo real han demostrado ser métodos sensibles y específicos. Sin embargo, el diagnóstico depende casi exclusivamente de la serología. El diagnóstico pre-suntivo se basa en el hallazgo de anticuerpos IgM por MAC-ELISA en LCR y/o suero. La rapidez de esta prueba es de gran utilidad, aunque estos anticuerpos pueden persistir hasta seis meses o más post infección. Por otra parte esta prueba no es capaz de diferenciar entre Flavivirus estrechamente relacionados debido a la reactividad cruzada que presentan los anticuerpos. Los anticuerpos de tipo IgG pueden ser demostrados por las pruebas de ELISA, Inhibición de Hemoaglutinación (IH), IFI y Neutralización (NT). La cuantificación del isotipo IgG1 por IFI (alcanza su máximo título entre los 8-30ds pi) podría ser una herramienta diagnóstica adicional para identifi-car temporalmente la infección. La NT es la prueba más específica para confirmar resultados de encuestas serológicas realizadas por IH y MAC-ELISA. El diagnóstico definitivo consiste en la demos-tración de seroconversión entre el suero obtenido del paciente en fase aguda y en fase convaleciente de la infección. La problemática actual en el diagnóstico de los Flavivirus es la reactividad cruzada que presentan los anticuerpos frente a antígenos virales heterólo-gos. Así, una elevada reactividad cruzada ocurre entre miembros del mismo complejo antigénico (VESL y virus West Nile (VWN)) y en una infección aguda la identificación del agente infeccioso puede ser dificultosa y depende de la técnica utilizada tan bien como de la historia de la infección y del estado inmune del hospedador. En una infección primaria con VESL hay una respuesta monotípica de AcIH y AcNT. Los títulos de anticuerpos son más altos que para antígenos virales heterólogos. Sin embargo, cuando el diagnóstico se realiza en muestras de individuos de áreas donde circulan varios Flavivirus, las infecciones secuenciales y repetidas son comunes, y la posibilidad de identificar el agente etiológico depende de la ca-pacidad del ensayo para distinguir entre Flavivirus antigénicamente relacionados. Así, individuos con inmunidad previa al menos para un Flavivirus antes de la infección con VESL son caracterizadas por reacciones cruzadas heterólogas de AcIH y AcNT; las respuestas secundarias son más rápidas y de mayor título que las primarias y en algunos casos pueden ser resueltas por titulación comparativa por NT con una batería de Flavivirus circulantes en la región. La co-circulación de VESL, VWN y Dengue en varias regiones de nuestro país constituye un desafío para el diagnóstico etiológico a la vez que demuestra la necesidad de implementar técnicas más específicas para identificar el agente viral.

MRSC3-3 - DIAGNOSTICS AND EPIDEMIOLOGY OF TWO ARBOVIRUSES: WEST NILE Y C�IKUNGUNYA VIRUS. ELI-ZABETH HUNSPERGER

Centers for Disease Control and Prevention, Division of Vector Borne Diseases, Dengue Branch, San Juan, Puerto Rico.

West Nile Virus (WNV) is a member of the family Flaviviri-dae of arthropod-borne, single-stranded, positive-sense RNA viruses that was first isolated from a febrile woman in Uganda in 1937. The virus is maintained in nature in a cycle involving mosquito vectors and avian amplifying hosts- humans are dead-end incidental hosts. It had emerged as a public health threat in the United States in 1999. The virus then spread through the U.S. at an alarming rate following its introduction. The mode of introduction of WNV into the continental US is still unclear however its introduction may have occurred either via migratory birds, mosquitoes, other arthropods or displaced mosquitoes. Interestingly, no further evidence that the virus was spreading into Central and South America was identified in early 2000. Studies were conducted to investigate its transmission in Cen-tral and South America and serological evidence in animals was documented. This serological documentation included evidence in humans, horses and positive resident birds however confir-mation through virus isolation was only obtained from Mexico in 2003. In 2006, Argentina published the first isolation of WNV in South America followed by a second report of isolation of WNV in Puerto Rico in 2007. Interestingly, phylogenetic analysis of the Puerto Rico virus appeared similar to those circulating in North America but the Argentina virus was a new introduction. Hence, further studies are necessary to determine the primary amplifying host and the mode of introduction of this virus in trop-ical and sub-tropical regions. Chikungunya (CHIK) is a member of the Togaviridae family of viruses and an emerging vector-borne disease currently circulating in South-East Asia region. According to the WHO, outbreaks have been reported from India, Indonesia, Myanmar, Sri Lanka, Thailand and Maldives. This virus causes sporadic epidemic outbreaks in recent years in India and in the island countries of the Indian Ocean that have an attack rate of up to 75%. Because there is such a high mor-bidity rate and prolonged polyarthritis leading to considerable disability in a proportion of the affected population, CHIK can cause substantial socio-economic impact in affected countries. Additionally the emergence of Aedes albopictus as another ef-ficient vector besides Aedes aegypti for the disease transmis-sion may have caused the resurgence of CHIK. Other envi-ronmental factor may also have contributed to its resurgence including climate changes. Chikungunya may be the next public health threat for future emergence in the Americas. The PAHO organized laboratory training and epidemiology training to rec-ognize and diagnose these two arbovirus diseases. These train-ing courses focused on both clinical and laboratory diagnosis. Basic guidelines such as the algorithm of testing of suspected samples for early detection and case definitions were provided. The results of the training were that 7 national laboratories were trained for WNV and CHIK serology and molecular diagnosis. A course was held in Lima Peru in 2009 to train all epidemiologists from the same countries for early warning of CHIK. In conclu-sion, early warning of an emerging infectious disease may save money, time and resources in order to begin prevention and to reduce morbidity, mortality and the burden of disease.

MESA REDONDA SC N° 4DIAGNÓSTICO MOLECULAR

MRSC4-1 - CONTROL DE CALIDAD EN EL LABORATORIO DE BIOLOGÍA MOLECULAR. MARINA I GUTIÉRREZ

Stamboulian Laboratorio, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

El aseguramiento de la calidad incluye una serie de proce-dimientos que garantizan que se obtenga un resultado veraz, confiable y apropiado para el uso destinado. Esto requiere que


se trabaje en forma estandarizada, reproducible y trazable e se incluyan diversas actividades que permiten a los laboratorios lograr y mantener un buen desempeño de las pruebas realiza-das. Los pasos fundamentales a seguir son: 1) Establecer pro-cedimientos de laboratorio estandarizados (SOP), que incluyan todos los pasos de cada prueba, desde la toma y conservación de la muestra hasta el control del funcionamiento de los instru-mentos usados. 2) Definir los requisitos de calidad y un sistema de gestión (registros, evaluación, interpretación, mantenimiento del equipamiento, auditorías internas). 3) Determinar acciones correctivas ante potenciales problemas. 4) Asegurar la capa-citación del personal. La estandarización se logra cuando las pruebas de laboratorio producen los mismos resultados con una alta exactitud y pueden ser reproducidos a lo largo del tiempo. La estandarización también permite la producción de resultados comparables entre distintos laboratorios, facilitando la interpretación por parte del médico. Las pruebas de biología molecular que se utilizan en el diagnóstico y seguimiento de los pacientes se basan en la técnica de PCR. A pesar de que es un área reciente, existen algunas recomendaciones internacio-nales. Los pasos analíticos que deben controlarse comprenden la toma de muestra, su conservación y envío, el aislamiento de ácidos nucleicos, la amplificación y su detección. El espa-cio físico debe tener áreas bien definidas para distintos usos (muestras y aislamientos, pre-PCR y post-PCR) con elementos y materiales disponibles en cada una. Los controles básicos por experimento incluyen un control positivo, un control negativo y un control de reactivos (sin templado). A su vez cada mues-tra biológica debe evaluarse con un control interno, que pue-de ser endógeno (por ejemplo, amplificación de un gen propio en muestras celulares) o exógeno (ácido nucleico agregado). Esto asegura que esa muestra presenta ácidos nucleicos am-plificables y no presenta inhibidores. Existen algunos sistemas comerciales y cada laboratorio debe verificar el desempeño de los mismos en su sistema analítico propio (especificidad, linea-lidad, reproducibilidad). Sin embargo, muchas prácticas son de-sarrolladas in situ (PCR caseras) y se debe validar la especifi-cidad, el límite de detección, la repetitividad intra e inter-ensayo y el rango lineal (para ensayos cuantitativos). Estos paráme-tros no son transferibles de un laboratorio a otro. Se mostrarán ejemplos de nuestro laboratorio para cada uno de ellos. Para asegurar el desempeño de una práctica a lo largo del tiempo es importante evaluarla con controles de calidad externos y/o inter-laboratorios. Se mostrarán ejemplos.

MRSC4-2 - APLICACIONES DE MÉTODOS MOLECULARES AL DIAGNÓSTICO VIRAL. GUSTAVO PALACIOS, WI LIPKIN

Center for Infection and Immunity, Mailman School of Public Health, Columbia University, New York, EEUU.

Recent advances in nucleic acid diagnostic methods have revolutionized microbiology by facilitating rapid, sensitive micro-bial surveillance and differential diagnosis of infectious diseas-es. Implementation of these methods may enable intervention when the prognosis is optimal for limiting replication, dissemina-tion, transmission, morbidity and mortality. It may also reveal unappreciated links between infection and chronic diseases. In this lecture I will discuss mechanisms of microbial pathogen-esis, routes to proving causation, and a staged strategy for sur-veillance and discovery. In reviewing the strengths and limita-tions of various analytical platforms, I will provide examples that illustrate how each platform can be used to investigate clinical problems.

MRSC4-3 - DIAGNÓSTICO DE INFECCIONES VIRALES EN SISTEMA NERVIOSO CENTRAL. DIANA VIALE

Servicio de Microbiología, Hospital de Pediatría Garrahan, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

La encefalitis y meningoencefalitis son síndromes neurológi-cos con alta morbilidad y mortalidad, causantes de inflamación del parénquima cerebral y en algunos casos de las meninges. Las de origen viral se caracterizan por líquido cefalorraquídeo

claro, por lo que se denominan también meningitis asépticas. Los principales patógenos son los virus del grupo Herpes, En-terovirus (EV), Arbovirus, y Sarampión. Los métodos diagnósti-cos basados en la amplificación de ácidos nucleicos a partir de muestras de líquido cefalorraquídeo (LCR) abarcan la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), PCR en formato multiplex, anidada, y tiempo real, y retrotranscripción y posterior PCR (RT-PCR) para los virus ARN.

En muestras muy tempranas la detección de ácidos nuclei-cos por PCR para herpesvirus puede resultar falsamente ne-gativa. La mortalidad sin tratamiento es del 70% y disminuye a un 8 a 19% con administración temprana del antiviral. Se recomienda seguir la evolución con muestras obtenidas luego de 10 días de iniciado el tratamiento. Es de utilidad la cuantifi-cación del ADN viral, sobre todo en neonatos en los que puede predecir evolución futura. Otros virus de la familia Herpes son Citomegalovirus (CMV), Epstein Barr (EBV) y Varicela Zoster (VZV). Un resultado de PCR positivo para EBV o CMV pue-de revelar infección o reactivación del virus latente por acción de otro patógeno. VZV puede causar encefalitis por infección primaria o reactivación, aún sin la presencia de manifestacio-nes cutáneas, lo que dificulta el diagnóstico clínico. Los EV son los causantes del 80 a 85% de los casos de meningitis asépti-cas, con predominio en verano-otoño en niños y adolescentes. Ingresan por la vía oral, producen una primer viremia y en la segunda viremia pueden invadir el sistema nervioso. Si bien para investigar brotes y estudios epidemiológicos se necesita realizar el cultivo y obtener muestras de otros sitios, para el diagnóstico clínico la RT-PCR convencional o tiempo real es rápida y tiene alta sensibilidad y especificidad. Existen mé-todos comerciales como el NASBA, con más de un 94% de sensibilidad y 100% de especificidad. Para la detección de en-cefalitis por Arbovirus (encefalitis equina del este y del oeste, encefalitis de San Luis y encefalitis equina venezolana) existen técnicas de detección por PCR que deben complementarse con la detección de anticuerpos intratecales y en sangre. El virus del Sarampión puede causar encefalitis aguda, encefalomielitis y panencefalitis esclerosante subaguda. La RT-PCR se utiliza tanto para detección de infección aguda como subaguda, y su cuantificación permite el monitoreo de la carga viral durante el curso del tratamiento de ambas. Otros agentes que también causan encefalitis son Adenovirus, Parotiditis, Herpes 6, Retro-virus, Rabia, JC y BK.

JUEVES 29 DE SEPTIEMBRE

CONGRESO ARGENTINO DE VIROLOGÍA

MESA REDONDA N° 7 PATOGÉNESIS VIRAL

MR7-1 - INTERACCIONES DEL VIRUS DE EPSTEIN BARR CON EL MICROAMBIENTE TUMORAL EN LA PATOGÉ-NESIS Y RESPUESTA TERAPÉUTICA DE LINFOMAS. EP-EP-STEIN-BARR VIRUS AND TUMOR MICROENVIRONMENT INTERACTIONS IN T�E PAT�OGENESIS AND CLINICAL RESPONSE OF LYMP�OMAS. ROCÍO HASSAN

Laboratório de Biologia Molecular, Centro de Transplante de Medula Óssea (CEMO)- Instituto Nacional de Câncer. Rio de Janeiro, Brasil.

Epstein-Barr virus (EBV) is a gammaherpesvirus that es-tablish latency in memory B cells. Co-evolved specific immune responses have favored a latent and largely non-pathogenic interaction between humans and EBV. Under some circum-stances, EBV is associated with human cancers, such as Burkitt and Hodgkin lymphomas, nasopharyngeal and gastric carcinoma and post-transplant lymphoproliferative disorders. Viral strategies include exploitation of cell machinery, co-opting of B-cell signaling and immune evasion. Manipulation of im-mune responses at a local level (tumor microenvironment) is a largely unknown viral mechanism. The aim of this presentation is to discuss the known interactions between EBV and tumor


microenvironment in EBV-associated cancers, with particular focus on childhood vs adult classical Hodgkin lymphoma (cHL). cHL is characterized by a low percentage of tumor cells amidst a high number of infiltrating inflammatory cells, mostly CD4+ lymphocytes with a suppressor profile; and exhibits a complex epidemiological pattern, including histological variability and EBV association (30-80%). In cHL, EBV displays a latency pattern characterized by the expression of EBNA1, LMP1 and LMP2A proteins and EBER and BamH1A transcripts. In adult cHL, EBV can induce the production of cytokines involved in the Treg-CD4+ cell migration. In children, we did not observe differences in the number of CD4+, FoxP3+ and C-maf+ cells between EBV+ and EBV- cases. Instead, EBV+ cHL children expresses significantly higher levels of MCH class I, an intact antigen presentation machinery and higher numbers of intratu-moral activated cytotoxic (CD8+, Tia-1+ and Granzyme B+), as well as T-bet+ (Th1) T lymphocytes. The molecular signature of EBV+ cHL seems to be characterized by Th1 and antiviral responses. EBV+ cHL children were characterized by a better therapeutic response. A worst EFS was observed in cases with high number of FoxP3 lymphocytes (Treg), FoxP3/CD8_Tia1 ratio >1 suggesting that: 1) the immune response against EBV is mediated by CD8+ cytotoxic lymphocytes and 2) FoxP3+ lymphocytes are inhibiting the cytotoxic response directed against EBV, as demonstrated by several studies. Although EBV is able to modulate the immune escape and several stud-ies point to an adverse prognosis for EBV+ adult cHL, it is likely that in pediatric cHL, EBV might elicit an effective immune antitumor response, which may be negatively modulated by a suppressor microenvironment. If confirmed, this would have significant implications for the application of microenvironment targeted therapies in the pediatric settings. This reinforces the existence of a distinct anti-tumor model of immune response in EBV-associated hematopoietic malignancies as compared to solid cancers and highlights the cytotoxic vs. suppressor nature of the immune responses against viral antigens in cHL.

MR7-2 - GRIPE PANDÉMICA EN ARGENTINA: PATOGÉNE-SIS Y CONSECUENCIAS. FERNANDO POLACK

Fundación INFANT. Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argen-tina. Department of Pediatrics, Johns Hopkins University, EEUU.

En esta presentación discutiremos el impacto de la gripe pandémica H1N1 en pacientes pediátricos en Argentina y de-scribiremos los mecanismos de enfermedad responsables del aumento de morbi-mortalidad en niños, jóvenes y adultos por gripe de temporada y pandémica a lo largo del último siglo. El virus pandémico H1N1 2009 causó en su primer año 10 veces más muertes pediátricas que los virus de influenza circulantes en los años anteriores. Sin embargo, su impacto disminuyó en 2010 no registrándose internaciones por su causa en un millón de pa-cientes pediátricos monitoreados. Por su parte, adultos jóvenes afectados por la pandemia sucumbieron a causa de una enfer-medad de influenza mediada por inmunocomplejos patológicos y los ancianos fueron protegidos contra la nueva gripe por in-munidad preexistente adquirida antes del año 1957. Asimismo, delinearemos nuevas estrategias preventivas contra los virus de la gripe en pacientes de distintas edades que- a través de vías alternativas a las conocidas actualmente- pueden disminuir la se-veridad de la enfermedad en los próximos años. La presentación detallará el efecto de la leche materna, las bacterias coloniza-doras de la nasofaringe y anticuerpos recientemente reportados que confieren protección universal contra la gripe.

MR7-3 - T�E �OMICS� OF CCR5 EXPRESSION AND ITS RE-T�E �OMICS� OF CCR5 EXPRESSION AND ITS RE-LATIONS�IP TO �IV-AIDS PAT�OGENESIS. SUNIL AHUJA

Veteran’s Administration Center for AIDS and HIV Infection, and University of Texas Health Science Center at San Antonio, San Antonio, Texas, EEUU.

Model systems exemplifying complex environmental-genetic-epigenetic interactions that impact on disease pathogenesis are

lacking. In this seminar I will review the interactions between en-vironmental exposures that result in increased T-cell activation (e.g. infection with HIV) and genetic/epigenetic features in CCR5, the major HIV-1 coreceptor. Both levels of T-cell activation (TCA) and CCR5 are key determinants of HIV-AIDS susceptibility. Prior studies have shown that polymorphisms (genomics) in CCR5 influence CCR5 levels and HIV-AIDS susceptibility. I will review these data along with data from my lab on the epigenomics of CCR5 and how this relates to HIV-AIDS susceptibility and CCR5 genomics. I will demonstrate that the extent and spatial patterns of DNA methylation in the cis-regulatory regions (cis-regions, i.e., promoters) of CCR5 provide a parsimonious basis for the wide in-ter-T-cell type and inter-subject differences in CCR5 expression on T-cells. Several findings suggest that HIV may have exploited the interaction of TCA with CCR5 genetics/epigenetics for its selective advantage. Foremost, TCA induces demethylation of CCR5 cis-regions, resulting in CCR5 upregulation. Second, HIV infection as-sociates with striking demethylation of CCR5 cis-regions in T-cells, but methylation levels fail to recover, despite suppression of viral replication. Third, CCR5 cis-regions that bear SNPs which confer increased versus decreased CCR5 gene/surface expression and HIV-AIDS susceptibility exhibit relative permissiveness versus resistance to undergo TCA-induced demethylation, respectively. Thus, our data suggests that CCR5 DNA methylation resides at the interface of TCA, CCR5 genotype, and CCR5 expression on T-cells, and novel CCR5-associated epigenetic traits evident mainly upon TCA influence HIV-AIDS susceptibility.

MESA REDONDA N° 8EVOLUCIÓN VIRAL

MR8-1 - ANÁLISIS FILOGENÉTICO Y GENÓMICO DE LOS VIRUS DE GRIPE A PANDÉMICA DETECTADOS EN EL �OSPITAL DE NIÑOS ‘DR. RICARDO GUTIÉRREZ’ EN 2009. PAOLA BARRERO

Laboratorio de Virología, Hospital de Niños Ricardo Gutiérrez, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina

Una pandemia de gripe causada por el virus de la influenza de origen porcino A/H1N1 (H1N1pdm) se registró en 2009 con 12.080 casos confirmados y 626 fallecidos en la Argentina. En el Hospital de Niños ‘Dr. Ricardo Gutiérrez’ se detectaron 330 virus H1N1pdm entre mayo y agosto de 2009, y se han logrado los análisis filogenéticos y genéticos de 21 genomas concatena-dos enteros de casos leves y mortales. Además, se llevó a cabo el análisis de otras 16 secuencias de los genes hemaglutinina (HA), neuraminidasa (NA) y matriz (M) de aislamientos argen-tinos. Se evaluó la microevolución y el monitoreo de resistencia de un fragmento de NA de 228 muestras durante todo el pico mediante secuenciación y pirosecuenciación. También se evaluó la cinética de crecimiento viral en las muestras con reemplazos a nivel genómico o características clínicas especiales. En este estudio, encontramos por inferencia bayesiana que las secuen-cias completas de los genomas analizados se agrupaban con el clado 7 distribuído a nivel mundial. Las secuencias de las HA se relacionaron con muestras del otoño-invierno del hemisfe-rio norte de septiembre a Diciembre de 2009. Las secuencias de las NAs de Argentina se agruparon con el grupo de Nueva York. El fragmento N-4, así como la agrupación jerárquica de las muestras mostraron que una secuencia consenso prevaleció en el tiempo y que diferentes variantes, incluyendo cinco cepas H275Y, resistentes al oseltamivir, surgieron de mayo a agosto de 2009. Aislamientos provenientes de casos mortales y resistentes al oseltamivir tuvieron retraso del crecimiento y un fenotipo de placa pequeña en comparación con sensibles al oseltamivir y el consenso de las cepas. A pesar de que estas cepas podrían no ser suficientemente adecuadas para prevalecer en toda la po-blación, la vigilancia molecular ha demostrado ser esencial para monitorear la resistencia y la dinámica viral en nuestro país.

MR8-2 - ESTUDIOS FILOGEOGRÁFICOS CON EL VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA. GUIDO A KÖNIG1, GS CABANNE1, 2


1Instituto de Biotecnología, Instituto Nacional de Tecnología Agro-pecuaria INTA-Castelar, Buenos Aires, Argentina, 2 CONICET, Museo Argentino de Ciencias Naturales “B. Rivadavia”, Ciudad Autónoma de Buenos Aires.

La filogeografía es el estudio de los principios y procesos que gobiernan la distribución geográfica de los linajes génicos. Esto permite reconstruir la historia evolutiva de uno o varios organismos y poner a prueba hipótesis de diversificación. Esta disciplina, que se aplica a niveles intraespecíficos o a especies cercanamente emparentadas, surgió hace 20 años gracias a la aplicación de teorías y métodos de genética de poblaciones, filogenia, y evolución molecular. Así es que la filogeografía es una disciplina híbrida, una mezcla de estos tres aspectos de la biología evolutiva. Entre las múltiples aplicaciones del análisis filogeográfico se pueden destacar aquellos estudios destina-dos a: 1) Inferir y-o poner a prueba eventos históricos a través de la identificación de patrones geográficos de variación ge-nética y la reconstrucción de rutas de migración de especies; 2) Comparar los resultados de especies codistribuidas a fin de comprender los mecanismos de origen de la biodiversidad a una escala regional; 3) Realizar predicciones acerca de los patrones filogeográficos esperados bajo nuevas condiciones, en el pasado o futuro; y 4) Determinar el lugar de origen y las vías de dispersión de especies consideradas plagas agrí-colas o invasoras. El objetivo de esta presentación es revisar los estudios filogeográficos virales haciendo especial hincapié en el virus de la Fiebre Aftosa (VFA). El virus VFA se clasificó inicialmente de acuerdo con sus propiedades antigénicas, en siete serotipos. Posteriormente se hicieron subdivisiones en to-potipos, de acuerdo con los orígenes geográficos y la historia evolutiva de cada serotipo. A partir de entonces, se han publi-cado diversos trabajos que intentaron conjugar de una u otra forma los datos epidemiológicos de los brotes con los datos genéticos de los aislamientos virales que los representan. En la mayoría de los casos, a partir de la información filogenética obtenida con la región génica 1D se realizaron estudios sobre el origen de un brote o la localización de algún grupo en par-ticular. Recientemente surgieron estudios que utilizan como marcador la totalidad, o gran parte, del genoma viral. Estos estudios se realizaron tanto a nivel global como de serotipo o de epizootias particulares. Sin embargo, los estudios de la his-toria evolutiva a partir de una correlación entre las diferencias genéticas, temporales y geográficas no han dado resultados significativos o no han sido suficientemente explorados. Una mayor utilización de las nuevas herramientas desarrolladas para la genética de poblaciones es necesaria para avanzar en la filogeografía viral. Las mismas ya están siendo aplicadas para otros patógenos como el virus de la Inmunodeficiencia Humana y el de la Influenza.

MR8-3 - VARIABILIDAD GENÉTICA Y EVOLUCIÓN MOLE-CULAR DE VIRUS INFLUENZA A �1N1 PANDÉMICO EN LA REGIÓN SUDAMERICANA. NATALIA GOÑI

Laboratorio de Virología Molecular, Facultad de Ciencias, Univer-sidad de la República. Montevideo, Uruguay.

Los virus de la influenza causan entre 300,000 y 500,000 muertes en todo el mundo por año, y en años pandémicos, este número puede aumentar a un millón (1957-1958) o hasta 50 millones, como se vio en la pandemia de 1918. La primera pandemia de este siglo fue declarada en abril de 2009, con la emergencia de un nuevo virus influenza A H1N1 (H1N1pdm) en México y Estados Unidos, rápidamente esparciéndose para la región sudamericana en donde se detectaron los primeros casos en Mayo de 2009. Para Noviembre de 2009, el virus fue detectado en 207 países, infectando a más de 630,000 perso-nas en el mundo y causando más de 7,900 muertes. En este estudio, se presenta el análisis de secuencias completas de los genes de la hemaglutinina y la neuraminidasa de cepas H1N1pdm que circularon en la región sudamericana y se com-pararon con secuencias de otras partes del mundo y con la cepa vacunal para el hemisferio sur en el año 2010. Además se realizaron los análisis de coalescencia correspondientes

con el fin de determinar la tasa de evolución y la dinámica de las poblaciones de los virus A/H1N1pdm que circularon. Los resultados obtenidos revelaron que altas tasas evolutivas y un rápido crecimiento de la población viral han contribuído duran-te el inicio de la pandemia. Las cepas de América del Sur per-tenecen en su mayoría, al clado 7. Aún queda por conocer si la predominancia de dicho clado se relaciona a la adaptabilidad del virus y a una más eficiente transmisión entre humanos. El entendimiento de la evolución de las cepas H1N1pdm dentro de la región sudamericana es de gran importancia en relación con la diversificación global, los mecanismos moleculares invo-lucrados en la aparición, dispersión y resistencia de las cepas H1N1pdm que han circulado en esta región, así como la de-terminación de las relaciones genéticas y antigénicas entre las cepas de Sudamérica y las cepas vacunales incluídas en las vacunas recomendadas para el hemisferio sur.

I SIMPOSIO VIROLOGÍA VETERINARIA

MESA REDONDA SV N° 1VIROSIS EMERGENTES:

ARTERITIS VIRAL EQUINA

MRSV1-1 - RE-EMERGENCIA DE ARTERITIS VIRAL EQUI-NA-AÑO 2010. MARÍA BARRANDEGUY

Laboratorio de Virus Equinos (LVE), Instituto de Virología, CICVyA INTA- Castelar, Buenos Aires, Argentina.

La Arteritis Viral Equina (AVE) es una enfermedad conta-giosa producida por un virus de la familia Arteriviridae, genero Arterivirus, orden Nidovirales. El virus es envuelto y su genoma es de ARN monocatenario de sentido positivo. No se ha deter-minado la existencia de diferentes serotipos; sin embargo cir-culan cepas que difieren en la severidad de los signos clínicos que producen, en el potencial abortigénico que poseen y clasi-ficadas en genogrupos relacionados principalmente con la ubi-cación geográfica de los aislamientos (americano y europeo). El curso de la infección es generalmente subclínico, ocasional-mente produce enfermedad respiratoria, abortos, muerte en po-trillos jóvenes e infección persistente en padrillos. Se transmite por vía respiratoria (durante el periodo agudo) y venérea a tra-vés de semen infectado. Algunos padrillos, luego de la infección respiratoria quedan como portadores del virus, transmitiéndolo eficientemente por servicio natural o mediante la utilización de semen fresco o congelado para inseminación artificial. Es una infección considerada “notificable” por la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE). A fines de marzo del año 2010, el médico veterinario a cargo de un haras en la localidad de Villa Lía, partido de San Antonio de Areco, se contactó con el LVE del Instituto de Virología del INTA Castelar para consultar por la ocurrencia de abortos en un grupo de yeguas sangre pura de carrera (SPC) y remitió órganos de un feto equino de 6 me-ses de gestación recientemente abortado. El aislamiento viral en cultivo celular y la RT-PCR demostraron que el aborto se había producido por la infección con el virus de AVE. En virtud de los antecedentes epidemiológicos de la infección con este virus en Argentina resultaba difícil de explicar la introducción de esta infección en la raza SPC. El aislamiento de virus de AVE de uno de los sémenes utilizados para inseminar yeguas de salto que convivían con las yeguas SPC preñadas, permitió concluir sobre el origen de la infección. El virus también fue aislado de un potrillo de 45 días de vida que murió, luego de presentar un cuadro agudo de debilidad, en el mismo lote de yeguas. Asimismo, el virus fue aislado de 4 de 9 muestras de semen provenientes de machos enteros que habían contraído la infección durante este brote de AVE. Las cepas aisladas du-rante el brote 2010 fueron estudiadas mediante secuenciación del fragmento genómico correspondiente al ORF 5 que codifica para la proteína de envoltura GL, epitope neutralizante del vi-rus, determinándose que todas agrupan con el subgrupo 1 del genogrupo europeo. Se concluye que un semen importado de Holanda utilizado para inseminar 3 yeguas de salto originó la in-fección posteriormente transmitida por vía respiratoria a yeguas


SPC gestantes en las que se produjeron abortos. Los eventos relatados son una nueva evidencia de la diseminación de in-fecciones virales a través del comercio internacional de semen y confirman la necesidad de fortalecer los controles sanitarios y la vigilancia epidemiológica.

MRSV1-2 - LA ESTRATEGIA ES EL CONTROL. MARIO LÓ-PEZ OLIVA

Asociación Argentina de Veterinaria Equina (AAVE), Ciudad Au-tónoma de Buenos Aires, Argentina.

El caballo es el animal doméstico que ha prestado más servicios al hombre. Está vinculado a la historia argentina y es emblemático en la construcción de nuestra identidad cultural. Es insustituible para el trabajo en el campo, especialmente en la cría bovina en zonas marginales y un activo fundamen-tal para el deporte (equitación, carreras, polo, etc). La cría del caballo deportivo de Pura Sangre de Carrera, constituye una diversificación productiva de alta rentabilidad y reconocimiento mundial y los caballos de Polo cuentan también con un reco-nocido prestigio mundial. Argentina cuenta con un importante un stock ganadero equino (entre 1.517.000 y 3.560.000) cuya determinación específica se ve afectada por la falta de formu-larios acordes para caballos en los censos agropecuarios. Po-see alrededor de 360.000 caballos deportivos, 80.000 caballos de tradición, 400.000 caballos de trabajo, 30.000 caballos para tiempo libre y paseo y turismo rural/aventura y 15.000 caba-llos de fuerza de seguridad. Es el primer exportador mundial de carne equina, tercer productor de caballos de carrera del mundo, primer productor de caballos de polo y primer produc-tor de embriones. Argentina es también productora de clones y se encuentra entre los cuatro países que está en condiciones de hacerlo. Es por eso que resulta imprescindible mejorar la eficiencia de los procesos productivos, certificar la calidad de los productos obtenidos, aumentar la producción de caballos de todas las disciplinas en calidad y en cantidad, elevar los nive-les de ocupación y capacitación de la mano de obra existente, estimular la actividad deportiva, desarrollar cursos formativos de extensión y capacitación, mejorar sustancial e integralmen-te la sanidad y trazabilidad y promocionar la comercialización de caballos en el mercado nacional e internacional. Para ello es muy importante y estratégico desarrollar un control sanitario acorde con lo que la industria equina es actualmente y lo que puede llegar a ser en el futuro cercano. La Arteritis viral equina (AVE) es una de las virosis que afecta a este proceso. Las he-rramientas normativas que ya existen son completas. Sin em-bargo debe destacarse que el tránsito internacional de caballos se ha incrementado en forma sustancial en los últimos años por lo tanto la posibilidad del ingreso o de la reemergencia de la AVE ha aumentado. Ya lo hemos observado en el brote de AVE ocurrido en el año 2010. El control sistemático es entonces la única herramienta eficiente para impedir o minimizar el ingre-so o la reemergencia de esta enfermedad. El desarrollo de un Plan integral, multidisciplinario y multisectorial de control es lo que va a salvaguardar el caudal genético equino que ya existe en la República Argentina.

MRSV1-3 - PROCEDIMIENTOS SANITARIOS REALIZADOS DURANTE EL BROTE DE ARTERITIS VIRAL EQUINA DEL AÑO 2010. ESTEBAN DURANTE

Programa de Enfermedades de los Équidos, Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENASA), Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

Ante la reemergencia de la Arteritis viral equina (AVE) en la República Argentina, surge la necesidad de una rápida interven-ción del organismo oficial de control, el SENASA. Se sintetizan las acciones realizadas por el mismo con motivo de la aparición de nuevos casos clínicos de AVE, enfermedad que ya había sido diagnosticada con anterioridad y notificada a los organis-mos internacionales oportunamente. El SENASA fue notificado el día 31 marzo de 2010 por el INTA de Castelar del aislamiento

del virus de AVE proveniente de un feto abortado en un esta-blecimiento ubicado en el partido de San Antonio de Areco, pro-vincia de Buenos Aires. A partir de la notificación, el 1° de abril, el SENASA estableció la investigación para detectar el origen del foco, resultando esto en la interdicción del establecimiento y del material reproductivo encontrado. Se procedió a la extrac-ción de suero de la totalidad de los equinos y a la remisión de algunas de las pajuelas de semen encontradas para realizar el diagnóstico de AVE correspondiente. Asimismo, se confeccio-nó una encuesta epidemiológica para la obtención de los datos referentes a signos clínicos, movimientos de equinos, registro de comercialización y uso de material reproductivo, entre otros. Luego de los análisis pertinentes se comprobó la presencia de equinos con serología positiva, el aislamiento del virus y la de-tección del genoma viral de una pajuela de semen debidamente identificada. Las medidas sanitarias se orientaron al seguimien-to de los egresos de equinos desde todos los focos detectados, para establecer la dispersión del evento sanitario. Mediante el rastreo de las pajuelas del semen problema, se identificaron otros establecimientos que habían utilizado el semen, dando origen a nuevas investigaciones. Fueron organizados estudios serológicos, a través de muestreos representativos de distintos predios seleccionados por riesgo o nexo epidemiológico en re-lación a la enfermedad. A partir de la confirmación de la difusión de la enfermedad por fuera de los focos primarios, se decla-ró el Alerta Sanitario. De las investigaciones epidemiológicas surgió la identificación de equinos machos enteros serológica-mente positivos a AVE que fueron interdictos con prohibición de movimiento hasta tanto se resolviera su situación sanitaria mediante la castración, o se determinara si eran eliminadores del virus. Se autorizó la importación de la vacuna contra AVE, y el procedimiento específico de vacunación únicamente para los equinos machos enteros. Luego de analizar el evento sanitario en su conjunto, surgió la necesidad de examinar los requisitos de importación de semen equino con el objetivo de minimizar los riesgos de reintroducción del virus de la AVE a la Argentina. Se destaca que luego del programa de control establecido, no existen denuncias actuales ni evidencias de nuevos casos de la enfermedad.

MESA REDONDA SV N° 2FIEBRE AFTOSA

MRSV2-1 - ENFOQUE FAO PARA EL CONTROL PROGRE-SIVO DE LA FIEBRE AFTOSA (CP-FA) Y SU APLICACIÓN EN LA REGIÓN ANDINA. ANA RIVIERE, A RIVERA, T DIAZ, L DEL BARRIO

Organización de las Naciones Unidas para la Agricultura y la Alimentación. Oficina Regional, Santiago, Chile.

La Fiebre Aftosa es endémica en vastas áreas del mundo y su distribución se mantiene en ecosistemas de Sudaméri-ca (Ecuador y Venezuela), Asia, África. Es muy frecuente que países con ingresos medios o altos han erradicado exi-tosamente la FA, sin embargo países menos desarrollados generalmente carecen de los recursos humanos, técnicos y materiales para cumplir con este objetivo. El enfoque CP-FA ha sido desarrollado por FAO para asistir a los países donde es endémica para reducir su incidencia e impacto. La FAO ha adoptado el enfoque CP-FA como una herramienta meto-dológica para el diseño de programas nacionales de control de FA en los programas regionales y en la estrategia global FAO/OIE para el control de la FA. En particular en la región andina, la FAO está desarrollando un Proyecto para el Control Progresivo de la FA con la financiación de los gobiernos de España e Italia. El Proyecto utiliza la herramienta CP-FA den-tro del marco del Plan Hemisférico de Erradicación de la FA para apoyar a los servicios veterinarios oficiales de los países beneficiarios (Bolivia, Colombia, Ecuador, Perú y Venezuela) en el control progresivo de la enfermedad, fortaleciendo al mismo tiempo la coordinación regional a través de la Comu-nidad Andina (CAN). La comprensión de las características


locales de la infección a virus FA incluyendo su distribución, especies afectadas, factores que facilitan su diseminación, la identificación de poblaciones en riesgo, modelos temporales de distribución de la incidencia así como las características y conocimiento de las cepas virales circulantes es esencial para desarrollar una estrategia de control efectiva que emplea recursos que son limitados eficazmente. Información sobre la situación de FA en países endémicos es esencial para apoyar los análisis de riesgos en el contexto de la preparación y pre-vención de regiones o países reconocidos libres de FA siendo la base el monitoreo adecuado del virus y realizar la vigilancia epidemiológica de forma más eficaz con recursos limitados. El enfoque CP-FA está dividido en 5 etapas, que varían desde una Etapa 0 donde se desconoce la distribución e incidencia de la FA hasta la Etapa 5 donde existe un reconocimiento ofi-cial por parte de la OIE como “país o zona libre sin vacuna-ción” y se concluye el enfoque CP-FA. En la medida que los países avanzan en el control progresivo de la FA, el monitoreo y vigilancia de la FA aumentan en forma importante a lo largo del proceso.

MRSV2-2 - SITUACIÓN DE LA FIEBRE AFTOSA EN AR-GENTINA Y SUDAMÉRICA, EL ROL DEL LABORATORIO EN LOS PROGRAMAS DE CONTROL Y ERRADICACIÓN. EDUARDO MARADEI

Servicio Nacional de Sanidad y Calidad Agroalimentaria (SENA-SA), Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina

Actualmente la República Argentina tiene todo su territorio libre de fiebre aftosa, siendo libre sin vacunación la región pa-tagónica y libre con vacunación el resto del país siendo reco-nocido este estatus por la Organización Mundial de Sanidad Animal – OIE. Para el control de la enfermedad es necesario el compromiso de múltiples actores comenzando con los pro-ductores ganaderos, las autoridades políticas, los institutos de investigación y docencia, los veterinarios privados, industria fri-gorífica, comercializadores de ganado y el servicio veterinario oficial. Un rol central es el que cumplen los laboratorios oficiales que tienen como principales funciones el diagnóstico de la en-fermedad, el control de vacunas y la supervisión de la biosegu-ridad. Con relación al diagnóstico, el laboratorio de fiebre aftosa debe realizar la tipificación, por pruebas inmunoenzimáticas, sobre las muestras de sospechas y el diagnóstico diferencial cuando se concluye que el virus de la fiebre aftosa no es el agente causal de esa sospecha. En caso de confirmarse un diagnóstico de fiebre aftosa es necesario la caracterización antigénica y molecular del virus aislado. Para tal fin la construc-ción del árbol filogenético a partir de la secuencia de la proteína VP1 comparada con aislamientos previos nos permitirá inferir el origen de la cepa actuante. La caracterización con paneles de anticuerpos monoclonales posibilitará observar diferencias en los perfiles de distintas cepas. De relevante importancia es la realización de pruebas de vaccine matching preferentemente por virus neutralización enfrentando el virus aislado con sueros de animales inmunizados con la vacuna de uso habitual. Las pruebas serológicas están orientadas a la detección tanto de anticuerpos contra proteínas de la cápside, como a la detección de anticuerpos contra proteínas no capsidales, pudiendo dife-renciar con estas últimas animales vacunados de infectados, siendo esta la base para los muestreos dirigidos a la detección de actividad viral. Estando basados los planes de control en Sudamérica en la aplicación de vacunas en forma sistemáti-ca, el control de las vacunas utilizadas que aseguren que las mismas son puras, seguras y eficaces es una de las tareas de mayor relevancia que realizan los laboratorios oficiales. Todos los lotes de vacunas producidos son controlados por SENASA para asegurar la correcta inactivación o inocuidad, esterilidad, eficacia y pureza. La eficacia se comprueba para cada uno de los serotipos que componen la formulación de la vacuna por pruebas de ELISA en fase líquida con correlación actualizada con pruebas de protección in vivo.

MRSV2-3 - PROCEDIMIENTOS INTEGRADOS PARA EL CONTROL Y ERRADICACIÓN DE LA FIEBRE AFTOSA EN LA REPUBLICA ARGENTINA. JOSÉ L LA TORRE

Centro de Virología Animal, Instituto de Ciencia y Tecnología Dr. César Milstein, CONICET, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

El éxito en el control y erradicación de la Fiebre Aftosa (FA) en la Argentina se sustenta sobre la aplicación de programas sanitarios, diseñados por SENASA y derivados de un profuso trabajo científico desarrollado y publicado por las instituciones científicas que conforman la Red Interinstitucional de Inves-tigación y Desarrollo en Fiebre Aftosa (RIIDFA). En términos prácticos el control de la FA en la Argentina, se basa funda-mentalmente en la adecuada aplicación de una vacuna de alta potencia y larga duración producida por compañías privadas y controladas por SENASA. La eficacia de la vacunación se monitorea en forma continua a través de la evaluación de la inmunidad poblacional y el control de la circulación viral. En los estudios realizados en la Argentina durante los últimos 20 años se identificaron algunos puntos críticos para asegurar la eficacia de la vacuna, 1) la actualización periódica de las ce-pas vacunales, basada sobre estudios de protección heteróloga “Vaccine Matching”. 2) formulaciones con un contenido apro-piado de antígenos (partículas 140S) 3) aplicación de métodos fisicoquímicos para evaluar la integridad de las partículas 140S y la ausencia de proteínas no estructurales, 4) el uso en las formulaciones de adyuvantes que confieren inmunidad a largo plazo. 5) participación activa de los productores agropecuarios en el proceso de vacunación y control a campo. 6) vacuna-ción obligatoria con coberturas vacunales superiores al 90%. En concordancia con los postulados de las “3R” Argentina ha sido pionera en el desarrollo y validación de metodologías de diagnostico de última generación para la evaluación de la po-tencia de las vacunas a través de la estimación cuantitativa de anticuerpos en la sangre de animales vacunados, eliminando el desafío con virus vivo. Los trabajos realizados permitieron establecer una relación inequívoca entre títulos de anticuerpos por técnicas de ELISA en fase líquida (competitiva-bloqueante) y protección a la descarga viral. A lo largo de 15 años de trabajo se controlaron y correlacionaron aproximadamente 600 series de vacunas, correspondientes a circa 900.000.000 dosis, utili-zando 10.200 animales. El presente trabajo incluirá la discusión acerca de la importancia de la aplicación de las técnicas de bio-logía molecular e inmunología y otros procedimientos tecnológi-cos de avanzada que contribuyeron al control y la erradicación de la enfermedad. Para el logro de estos objetivos resultó fun-damental la integración de los organismos públicos y privados de la Red (RIIDFA) ya que permitió el desarrollo de actividades coordinadas y confluentes al objetivo central: la erradicación de la FA en la República Argentina.

MESA REDONDA SV N° 3LEUCOSIS BOVINA, �ERRAMIENTAS

PARA SU FUTURO CONTROL

MRSV3-1 - LEUCOSIS BOVINA: ALTERNATIVAS DE CON-LEUCOSIS BOVINA: ALTERNATIVAS DE CON-TROL. KARINA TRONO

Instituto de Virología, INTA-Castelar, CICVyA, Buenos Aires, Argentina

El Virus de la leucosis bovina (BLV) se propaga eficiente-mente con un patrón silencioso, debido a que la mayoría de los animales infectados son portadores asintomáticos. Los re-sultados de los últimos años en nuestro laboratorio, muestran que los establecimientos de tambo de Argentina, sobre todo aquellos con un alto nivel de industrialización, tienen niveles elevados de infección con el BLV, superior al 90% de preva-lencia individual en su mayoría. La infección parece propagar-se de manera óptima en aquellos lugares donde se realizan


esfuerzos e inversiones costosas por controlar la iatrogenia o transferencia de patógenos por sangre. Un reciente trabajo de investigación realizado por nuestro grupo pone de manifiesto que alrededor del 10% de los animales nacen infectados, y que no hay progresión de la infección hasta los 12 meses de edad. A partir de entonces, el nivel aumenta paulatinamente hasta alcanzar el 24% a los 2 años, y a los 30 meses, coincidiendo con el ingreso a la lactancia, el nivel se eleva abruptamente al 60%. Estos resultados sugieren que el período periparto y el ingreso al tambo son puntos críticos en la evolución de esta infección. Los estudios de los niveles de infección en sangre o carga proviral muestran que en todos los establecimientos infectados hay una fracción de animales que tiene niveles muy bajos de provirus en sangre, lo que lleva a inferir sobre su me-nor potencial de contagio. La clave para controlar la infección podría estar en estimular la formación de rodeos infectados con bajo nivel de infección en sangre y en consecuencia, menor riesgo de contagio. Para provocar bajos niveles de infección existirían existen varias opciones entre las cuales se encuen-tran: 1- la selección de animales con características genéticas asociadas a una menor predisposición a la infección y/o a la linfocitosis persistente, 2- la selección de animales infectados naturalmente con poca carga proviral, o 3- la utilización de una variante viral competitiva, que provoque una infección de baja carga proviral y genere protección frente al desafío natural. En esta presentación se discuten los avances obtenidos con el uso de la última estrategia mencionada, dentro de un proyecto inte-gral que incluye el diseño y prueba de distintas herramientas de profilaxis adaptables al sistema productivo nacional.

MRSV3-2 - LA ALTERNATIVA DE CONTROL DEL BLV POR MEDIO DE LA SELECCIÓN GENÉTICA DE BOVINOS RESIS-TENTES. EDUARDO N ESTEBAN

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional del Centro de la Provincia de Buenos Aires, Tandil, Buenos Aires, Argentina.

Según datos de 2007 de la Asociación Civil Santafesina de Genética Lechera (ACSAGEN), la Provincia de Santa Fe cuen-ta con más de seiscientas mil vacas lecheras de las cuales aproximadamente el 50% ya estaban infectadas por el Virus de la Leucosis Bovina (BLV) en el año 2003 (Mariño y col.). En 2008, el examen serológico del pool de leches de 1.029 tam-bos de esta provincia mostró que solamente 22 (2,1%) estaban libres del virus o con índices de infección menores al 5% (Es-teban y col., datos no publicados). La dramática diseminación del BLV, no solo en la Provincia de Santa Fe sino en todas las cuencas lecheras de Argentina, es un indicador que desalienta la aplicación de programas de control basados en la detección serológica de animales infectados y su inmediata eliminación del tambo. Una alternativa que hemos planteado para el con-trol del BLV es la utilización de reproductores que posean el BoLA DRB3.2 ISAG 0902 pero no el ISAG 1501 o 03 (Juliarena et al 2008). El 80% de los bovinos ISAG 0902+ infectados con el BLV desarrollan baja carga proviral (BCP) y por su exigua capacidad infectante podrían bloquear o al menos reducir la eficiencia de la cadena de transmisión del BLV en tambos co-merciales. La expansión controlada de estos animales permi-tiría desmantelar la principal herramienta de persistencia del BLV a nivel predial que son los animales de alta carga proviral. Demostrar que este concepto funciona en condiciones natura-les de manejo de tambos comerciales es una tarea compleja, costosa y de avances graduales que ya hemos iniciado. La Cooperativa Tambera Nueva Alpina (COTANA) del Departa-mento Rivadavia de la Provincia de Santiago del Estero es la adoptante de este proyecto. El objetivo es introducir el marca-dor de resistencia al BLV en sus reproductores seleccionados por alta rentabilidad en esa región según el programa Mérito Genético Económico Lechero (MEGEL®). El genotipado BoLA de los 90 animales con el máximo MEGEL de COTANA, mostró una frecuencia del 24,4% de animales ISAG 0902+. Esta fre-cuencia resultó 7,1% más elevada que la hallada en la pobla-ción general Holstein-Argentina (Juliarena et al. 2008). Entre

estos reproductores se destacan 1 toro y 2 vacas homocigotas, los 21 animales restantes son heterocigotas. Estos animales son cruzados ahora en forma controlada a fin de incrementar y diversificar la disponibilidad de reproductores resistentes. En forma complementaria, la existencia de estos animales nos ha permitido el diseño de 3 tambos modelo en la región para: 1) aplicar planes de saneamiento con intervención genética, 2) comprobar si los animales con el marcador de resistencia y BCP son fuente de infección a nivel predial y 3) determinar la dinámica de parámetros productivos por medio del MEGEL durante el avance del plan de control comparándolos con los de tambos de alta prevalencia sin intervención genética.

MESA REDONDA SV N° 4INFLUENZA, AVANCES EN LA

DETERMINACIÓN EN ARGENTINA

MRSV4-1 - NUEVOS AVANCES SOBRE LA INFLUENZA PORCINA EN LA ARGENTINA. CARLOS J PERFUMO

Facultad de Ciencias Veterinarias, Universidad Nacional de La Plata, La Plata, Buenos Aires, Argentina.

Se enumeran los avances logrados sobre la infección por el virus de influenza porcina en la Argentina, así como los estudios en curso. Antecedentes: En conjunto con el Instituto Malbrán se realizó un estudio serológico retrospectivo (2000-2002 en 17 granjas. El 1,8% de las muestras fueron positi-vas a H1 y el 41,2% de las granjas. Cuatro sobre 5 granjas fueron positivas a H3. Se concluye que los subtipos H1 y H3 de influenza A circularon en la población porcina nacional. Por los antígenos utilizados, los virus correspondieron a genotipos humanos o porcinos relacionados con el hombre. En conjunto con el Instituto de Virología de CICV INTA Castelar, se realizó un estudio serológico y virológico trasversal entre 2007 y 2008 en 10 granjas. Los resultados fueron negativos por ambas téc-nicas. Las diferencias de deberían a las técnicas y antígenos utilizados. Infección por H1N1 pdm: El virus es el resultado de una cuádruple recombinación. Se estima que la transmisión al hombre ocurrió varios meses antes de la pandemia y los ancestros del virus, circularon aproximadamente 10 años an-teriores a la infección humana, no detectada en los cerdos en América del Norte, Europa o Asia. Se carece de información en América Central y en América del Sur. El virus carece de los factores de virulencia, presentes en otros subtipos y la tasa de replicación es de 1.4-1.6 (mas alta que el virus gripe esta-cional). En el hombre, se observó una tendencia a reemplazar al virus de influenza estacional y cabe considerar que lo mis-mo ocurrió en los cerdos. Se ha comprobado que el H1N1pdm es estable en su circulación en el hombre, no así en el cerdo. Más del 70% de las granjas porcinas cursaron con cuadros “parecidos a influenza”, sin embargo en sólo 4 se confirmó su diagnóstico. Infección por H3N2 human-like: El H3N2 human-like es común en la población porcina de Europa y Asia, no así en América del Norte y menos aún en America del Sur. El virus aislado circuló en la población humana de USA y Eurasia entre los años 2000 y 2003. Los signos clínicos, fiebre, tos, disnea y pérdida de apetito afectaron al 40% de cerdos 48-55 días persistieron durante 8 semanas en forma cíclica. En la inoculación experimental, el virus se multiplica eficientemente así como se trasmite en cerdos en contacto. El pasaje “in toto” del virus de influenza de una especie a otra, requiere al menos 5 años para su adaptación al nuevo huésped para producir en-fermedad y durante dicho período circula en forma subclínica. La granja estudiada, fue seropositiva a virus humano, 5 años previos al cuadro. Una vez que cruza la barrera interespecies, persiste en esta última por décadas y constituye el reservorio para futuras epidemias. Infección por H1N1pdm recombinan-te: En el cerdo, los virus de influenza de triple recombinación (genes de origen aviar, humano y porcino) presentan los mis-mos genes que codifican las proteínas internas, denominadas �TRIG cassette”. En los TRIG, tanto HA como la NA, son co-múnmente reemplazados. El H1N1pdm sin serlo, se comporta


como un TRIG y en el cerdo, a mostrado gran inestabilidad en las glicoproteínas HA y NA. Así en Italia, Alemania y Tailandia, el H1N1pdm, mantuvo 7 genes originales y sólo sustituyo la NA por la de virus porcinos regionales. En la Argentina, en el año 2010-2011 de cuadros clínicos, se identificaron H1N1 y H1N2 y H3N2 que conservaron 6 genes del H1N1pdm y reemplazaron HA y NA de cepas de influenza humanas. El curso clínico, las lesiones macroscópicas y las lesiones microscópicas son indistinguibles de las producidas por el H1N1pdm-. Estudios financiados por ANPCyT PICT 2005-33987; PICT 2010-0961 y UNLP V184.

MRSV4-2 - INFLUENZA CANINA. ANA BRATANICH

Cátedra de Virología, Facultad de Ciencias Veterinarias, Uni-versidad de Buenos Aires, Ciudad Autónoma de Buenos Aires, Argentina.

El virus de la influenza canina fue reconocido como un nue-vo virus en el 2004 cuando se lo hallo asociado con un brote importante de enfermedad respiratoria en galgos en los Esta-dos Unidos. Este virus se caracterizó como una variante equina H3N8 que ya habría estado circulando no solo en USA sino también en Europa, producto quizás en este último caso, de un salto equino-canino independiente. El canino parece ser un huésped susceptible a cepas de influenza de distinto origen ya que a las de origen equino se han sumado cepas aviares (Ko-rea, H3N2) y humanas (H1N1 pandémico). Con esto hallazgos, el canino ha dejado de considerarse un huésped resistente a las infecciones por el virus de influenza asumiéndose entonces que es necesario un monitoreo de esta especie por su poten-cial rol epidemiológico. El diagnostico de influenza canina suele realizarse por métodos serológicos o por detección directa del agente por real time PCR aunque el periodo en que puede rea-lizarse este último test es muy corto. Por ello, suele preferirse la detección de anticuerpos. Entre las técnicas utilizadas esta la inhibición de la hemaglutinación que se desarrollo en la Cá-tedra de Virología de la Facultad de Ciencias Veterinarias. Se presentaran resultados del análisis de muestras obtenidas de distintos refugios caninos y del Hospital Veterinario de la Facul-tad de Ciencias Veterinarias de la UBA. Asimismo se mostraran las experiencias obtenidas en el aislamiento de una cepa de influenza canina en USA a partir de un brote en un refugio de caninos abandonados.

MRSV4-3 - ESTUDIOS SOBRE INFLUENZA AVIAR EN AVES SILVESTRES EN ARGENTINA. A RIMONDI1, MI CRAIG1, M UHART2, AA PEREZ2, ME ZACCAGNINI1, L LA SALA2, J DE-CARRE1, V OLIVERA1, M DIBÁRBORA1, A VAGNOZZI1, F VERA1, F ROJAS1, H SONG3, EM SORRELL3, DR PEREZ3, ARIEL PEREDA1.

1 Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria INTA-Castelar, Buenos Aires, Argentina, 2 WildlifeConservationSociety. EEUU, 3

Department of Veterinary Medicine, University of Maryland, EEUU.

Los Virus de Influenza Aviar (AIV) se han aislado esporá-dicamente en Sudamérica. Los primeros informes pertenecen a un brote en aves de corral comerciales en Chile en 2002 y su putativo antepasado proveniente de un ave silvestre capturada en Bolivia en 2001. Desde el año 2006 se ha montado un siste-ma de vigilancia epidemiológica activa en aves silvestres, inten-tando proporcionar una mejor comprensión de la ecología del AI en la Argentina. Los servicios veterinarios nacionales en países sudamericanos están avocados principalmente a la vigilancia en aves de corral comerciales y de traspatio. Sin embargo, para pro-porcionar un mejor y más creíble análisis de riesgo de la introduc-ción potencial de AIV a estas poblaciones de aves domésticas es necesario conocer la presencia y la circulación de estos virus en las poblaciones de aves silvestres. Dicho trabajo se realizó a lo

largo del territorio nacional y hasta la fecha, utilizando la técnica de Real Time RT-PCR, se han obtenido 34 detecciones positivas a partir de hisopados cloacales de aves de diferentes especies. A partir de una de esas muestras positivas se lograron 7 aislamien-tos. El análisis filogenético de los 8 segmentos virales sugiere que existe en la parte sur de Sudamérica una ecología particular de virus Influenza en aves silvestres. En todos los aislamientos se observa una alta conservación, incluso a nivel nucleotídico, de los 6 genes internos. El análisis indicaría que una población de virus filogenéticamente relacionada de AIV de Sudamérica pudo haberse desarrollado independientemente, con un mínimo inter-cambio de segmentos, de poblaciones virales presentes en otras latitudes, a pesar de las diversas rutas migratorias transhemis-féricas existentes. En definitiva, este estudio vierte ciertamente mayor conocimiento y comprensión con respecto a la presencia y características moleculares de los virus de influenza Aviar circu-lantes en poblaciones de aves silvestres en Sudamérica.

MRSV4-4 - INFLUENZA EQUINA EN ARGENTINA EN LOS ÚLTIMOS 10 AÑOS. MARÍA BARRANDEGUY

Laboratorio de Virus Equinos, Instituto de Virología, CICVyA INTA-Castelar, Buenos Aires, Argentina.

La Influenza equina (gripe equina) es una enfermedad respi-ratoria aguda, muy contagiosa causada por el virus de Influenza A (subtipo 1: H7N7 y subtipo 2: H3N8). Se caracteriza clínica-mente por la aparición repentina de fiebre, tos seca y profunda seguida de descarga nasal seromucosa de rápida diseminación en la población equina susceptible. En caballos inmunes (vacu-nados o que padecieron la infección previamente) la enferme-dad adquiere características más benignas, pasa desapercibida o se manifiesta con una hipertermia pasajera. La infección se transmite por aerosoles, eliminándose gran cantidad de virus con cada acceso de tos. Es una enfermedad endémica en casi todo el mundo, de alto impacto económico debido a que por su alta contagiosidad provoca la salida de la actividad de gran número de caballos simultáneamente. El diagnóstico se realiza mediante la detección rápida del virus en hisopados nasales por ELISA y RT-PCR y por aislamiento viral. La hemaglutinina (HA) del virus de Influenza es la proteína inmunodominante y los anticuerpos que genera están directamente relacionados con protección. La secuenciación de parte del gen de la HA viral y el análisis com-parativo de la secuencia de aminoácidos deducida es un proce-dimiento recomendado internacionalmente para caracterizar las cepas de virus de Influenza equina circulantes y realizar reco-mendaciones para definir la composición de las vacunas. Los virus de Influenza equina han evolucionado, a partir de 1987, dando lugar a dos “linajes” denominados europeo y americano cuyas cepas prototipo son la A/Eq2/Newmarket/2/93 y la A/Eq2/Kentucky/94 respectivamente. Las bases de esta divergencia no son conocidas pero estarían relacionadas con barreras geo-gráficas que evitan la mezcla de los dos grupos de genes. En nuestro país es obligatorio mantener bajo plan de vacunación a los animales que se trasladan o intervienen en competencias de cualquier tipo por lo que la mayoría de los equinos deportivos se encuentran inmunizados (Resolución Nº 617/05). El último brote de Influenza equina registrado en Argentina, ocurrió en el año 2005 en un club hípico de la ciudad de Buenos Aires que había recibido temporalmente caballos desde Chile. La morbilidad fue baja no superando el 10% de los caballos alojados en el estable-cimiento. Este y otros aislamientos de virus realizados en el país fueron caracterizados de acuerdo a las recomendaciones inter-nacionales. El análisis filogenético realizado revela que las cepas de virus de Influenza equina detectadas en los últimos 20 años en nuestro país pertenecen al “linaje” americano con algunas particularidades regionales que permiten distinguir un “sublinaje” argentino. No se han detectado cepas pertenecientes al linaje europeo en la región.

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