MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS EN MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS EN LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA DE LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA DE RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) POR CALCIO RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) POR CALCIO

EXTRACELULAR EN GLÁNDULAS PARATIROIDES. EXTRACELULAR EN GLÁNDULAS PARATIROIDES. ESTUDIOS “ESTUDIOS “IN VITROIN VITRO”.”.

Cañadillas S, Almadén Y, Canalejo R, Rodríguez ME, Quintero A, Pérez J, Rodríguez M.

Unidad de Investigación, Unidad de Investigación, Servicio de Nefrología. Servicio de Nefrología.

CÓRDOBACÓRDOBA

INTRODUCCIÓN

PLA2

ARNmVDR

PTH

PTH PTH

PTH

PTH

PTH

PTH PTH

PTH

PTH

NúcleoNúcleo

G

CaCa2+2+

ERK1/2MAPKAA

CaiCaRCaR

CÉLULA PARATIROIDEA

HIPÓTESIS

PLA2

ARNmVDR

PTH

PTH PTH

PTH

PTH

PTH

PTH PTH

PTH

PTH

NúcleoNúcleo

GCai

AA

CaCa2+2+

ERK1/2MAPK

??

CaRCaR

OBJETIVO

Evaluar si el efecto del AA sobre la secreción de PTH y sobre la expresión génica de VDR es dependiente de la

actividad de ERK1/2-MAPK.

G

CaRCaRPLA2

Cai

AA

ARNmVDRPTH

PTH PTH

PTHPTH

PTHPTH PTH

PTHPTH

NúcleoNúcleo

??ERK1/2MAPK

G

CaRCaRPLA2

Cai

AA

ARNmVDRPTH

PTH PTH

PTHPTH

PTHPTH PTH

PTHPTH

NúcleoNúcleo

??ERK1/2MAPK

DISEÑO EXPERIMENTAL

CaCa2+2+

[Ca2+] = 0.6mM +AA (20μM)

AA exógeno

Inhibidor de ERK1/2

(PD98059)

IRMA

RT-PCR GENESCAN

DISEÑO EXPERIMENTAL

PTH secretada

Expresión ARNmVDR

[Ca] 0.6mM [Ca] 1.5mM [Ca] 0.6mM +AA +PD

[Ca] 0.6mM +AA

1. Participacion de la actividad ERK1/2-MAPK en la inhibicion de la secrecion de PTH por AA.

% PTH vs máxima (0.6mM)

Ca=0.6mM Ca=1.5mM Ca=0.6mM+AA + PD (50μM)

Ca=0.6mM+AA (20µM)

a p<0.01 vs 0.6mM

b p<0.01 vs 0.6mM+AA

c p<0.01 vs 1.5mM

1 hora

0

20

40

60

80

100

120

aa

b c

Sin ERK

2. Participacion de la actividad ERK1/2-MAPK en la regulación de la expresión de ARNmVDR por AA.

Ca=0.6mM Ca=1.5mM Ca=0.6mM+AA + PD (10µM)

Ca=0.6mM+AA (20µM)

[Ca] 0.6mM [Ca] 1.5mM [Ca] 0.6mM +AA +PD

[Ca] 0.6mM +AA

%ARNmvdr / β-actina vs Ca=0.6mM

a p<0.01 vs 0.6mM

b p<0.01 vs 0.6mM+AA

c p<0.01 vs 1.5mM

6 horas

0

40

80

120

160

200

240

a

a

b c

Sin ERK

PLA2

ARNmVDR

PTH

PTH PTH

PTH

PTH

PTH

PTH PTH

PTH

PTHNúcleoNúcleo

G

Cai

CaCa2+2+

PD

PD

PTH

PTHPTH

PTHPTH

PTH

PTHPTH

ERK1/2MAPK

AA

3. Efecto del AA sobre la activación (fosforilación) de ERK1/2-MAPK

Ca=0.6mM Ca=1.5mM Ca=0.6mM+AA

CaRCaRCa2+

PLA2 - AA

ARNmvdr

PTH ERK1/2 MAPK

P

?

Inmunohistoquímica. Ac. Anti-Fosfo-ERK1/2

Ca = 1.5mM Ca = 0.6mM

Ca = 0.6mM + AA

Células positivas ERK1/2-MAPK

activa

En glándulas paratiroides de rata, el efecto del AA sobre: 1) Secreción de PTH 2) Síntesis de ARNmVDR

es dependiente de la actividad ERK1/2- MAPK.

CONCLUSIÓN

MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS EN MECANISMOS INTRACELULARES IMPLICADOS EN LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA DE LA REGULACIÓN DE LA EXPRESIÓN GÉNICA DE RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) POR CALCIO RECEPTOR DE VITAMINA D (VDR) POR CALCIO

EXTRACELULAR EN GLÁNDULAS PARATIROIDES. EXTRACELULAR EN GLÁNDULAS PARATIROIDES. ESTUDIOS “ESTUDIOS “IN VITROIN VITRO”.”.

Cañadillas S, Almadén Y, Canalejo R, Rodríguez ME, Quintero A, Pérez J, Rodríguez M.

Unidad de Investigación, Unidad de Investigación, Servicio de Nefrología. Servicio de Nefrología.

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