7/23/2019 Manipulacion y Almacenamiento, Seguridad Del MPTP

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FACTORES INTERVINIENTES

Ratones machos C57 BL/6 de 8 a 10 semanas de edad, peso de 25 a 40 g.

CONTAMINACION AMBIENTAL

El interior de la jaula, las superficies que el animal y/o sus excretas pudieron haber tocado,incluyendo comida y bebederos estn contaminados con MPTP y sus metabolitos.

Dos das despus de la inyeccin, 70% de la dosis de MPTP y sus metabolitos son

recuperados del interior de la jaula, orina y heces, del cual un 15% es MPTP no

metabolizado.

La mayor concentracin de MPTP son encontrados en la bilis y en la orina en forma

ionizada y no voltil, que ser muy absorbido por el BEDDING DE LOS RATONES.

Menos del 0,01% del total de la dosis inyectada de MPTP es detectado como voltil,

originados probablemente de las exhalaciones o por vapor de la orina contaminada.

De lo anterior, los riesgos potenciales de exposicin a MPTP son el contacto directo con

los animales, las superficies internas de la jaula, y el BEDDINGde los ratones.

SALA DEDICADA AL PROCEDIMIENTO Y AREA DENTRO DE LA SALA DEL ANIMAL

Todos los experimentos que incluyen la preparacin de soluciones de MPTP son realizadas

en una sala bajo presin negativa porque los aerosoles de MPTP y sus metabolitos pueden

ser generados de BEDDING, excreciones o pelaje del animal.

Todos los animales deben ser aclimatados por 4 a 7 das antes de la experimentacin con

MPTP para permitir la estabilizacin de monoaminas antes de la inyeccin de MPTP, ya

que la alteracin de niveles de monoaminas pueden afectar la reproduccin de la lesin.

Para animales pequeos (ratones), se necesita un estante para soportar las jaulas y unacampana extractora.

Todo el mobiliario debe ser de acero inoxidable con superficies recubiertas con materiales

absorbentes por una sola cara.

Una seal de PELIGRO- AREA DE USO DE NEUROTOXINA MPTP- ENTRADA RESTRINGIDA

debe estar puesta fuera del saln de procedimiento animal.

Se necesita contenedores claramente etiquetados con DESECHOS PELIGROSOS, un MAO B

inhibidor para exposiciones accidentales al MPTP y la hoja de datos de seguridad del

material (MSDS) en la sala.

Nadie debe salir de la sala durante el periodo de inyeccin.

EQUIPO DE PROTECCION PERSONAL (PPE)

PPE debe ser usado durante todos los procedimientos involucrados con MPTP, incluyendo

5 das post inyeccin.

PPE es fundamental en la experimentacin con ratones, ya que se necesita cantidades mas

elevadas de MPTP.

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PPE consiste de un traje de una pieza con una capucha, muecas elsticas y botas de

material ligero, qumico y biolgicamente inerte, de material no absorbente y resistente a

los rasgones que le profiera proteccin de las partculas areas. Econmicas, ya que deben

ser desechadas despus de una usada.

Un respirador facial con cartuchos HEPA con filtro.

Lentes a prueba de salpicaduras guantes de latex de doble capa sobre nitrilo.

ALOJAMIENTO

Para ratones, las jaulas desechables y accesorias son muy recomendadas, permiten la

incineracin.

Cubrir las jaulas con bonetes filtrantes disminuir significativamente la contaminacin del

ambiente y de los otros animales.

Todas las inyecciones deben ser realizadas in una campana de extraccin en la sala de

procedimientos.

ALMACENAMIENTO Y MANIPULACION DE MPTP

No usar el MPTP con una base libre, solo como hidroclorido u otra sal conjugada no voltil.

Restringido solamente a la sala de procedimientos o rea dentro de la sala de animales.

Nunca transportar soluciones MPTP o viales abiertas de MPTP fuera del saln dedicado.

Debe ser comprado en pequeas cantidades: 10mg o 100 mg en botellas de vidrio

tabicadas.

Deben ser almacenadas en un contenedor sellado al vaco, bloqueadas en un cabina con el

rotulo MPTP- NEUROTOXINA. Debe estar asegurada a una superficie fija dentro de la sala.

Solo los investigadores entrenados pueden manipular MPTP en polvo.

Debe existir una balanza dedicada exclusivamente a la medicin de MPTP. La solucin de MPTP debe ser usada en un da, antes de ser descartada, ya que se oxida a

temperatura normal de la sala.

No autoclave las soluciones de MPTP, ya que liberara vapores.

INYECCION DE MPTP

Realizadas exclusivamente bajo campana extractora.

Cambiar los guantes constantemente en el curso de la inyeccin.

Aproximadamente, la solucin de MPTP debe estar preparada 30 minutos antes de la

inyeccin. Inyectar al animal sobre su jaula, para que algn spray de orina caiga sobre ella y no sobre

la rea circundante.

No presionar al animal ni estresar, ya que el MPTP podra refluir del peritoneo al

ambiente.

Al final de las inyecciones, el material debe ser destruido con una solucin clorada al 1% .

CAMBIO DE JAULA

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El potencial ms grande de exposicin al MPTP es por la jaula y el BEDDING del animal

inmediatamente despus de la inyeccin, seguido de la excrecin de los animales

tratados.

Las jaulas y el BEDDING debe ser remojado con solucin clorada y puestas en bolsas de

peligrosidad, amarradas y enviadas a incineracin.

Los materiales absorbentes del estante deben ser remojadas por 10 minutos en solucinclorada y enviarla a desechos peligrosos.

TEJIDO ANIMAL

Peligro potencial durante la recoleccin de tejido de los animales muertos 5 das despus

de la administracin de MPTP.

Los ratones deben ser sacrificados bajo una campana extractora.

Todas las superficies, absorbentes o no, deben ser puestas en desechos peligrosos si se

evidencia algn fluido corporal sobre l.

La decapitacin se debe hacer con cuidado, evitando salida de sangre, heces u orina. Todos los instrumentos, incluyendo Petri y los de diseccin, deben ser remojados en

solucin clorada por 10 minutos, enjuagadas, lavadas con detergente y enjuagadas con

agua.

La recoleccin de tejidos se debe manipular con guantes dobles o doble guantes.

Los remanentes del ratn, la sangre y solucin de perfusin deben ser eliminados con

medidas biopeligrosas.

DESCONTAMINACION, LIMPIEZA Y ELIMINACION

La agencia de proteccin EPA recomienda desinfeccin con solucin clorada por 10

minutos a temperatura ambiente.

Rociar los revestimientos con solucin clorada por 10 minutos, despus desechar en

bolsas de peligro.

Si las prendas se contaminan con MPTP, sacarlas inmediatamente, darse una ducha y

enviarlo a servicio mdico.

Los vidrios y metales contaminados pueden limpiarse con solucin acuosa clorada seguido

por un lavado con detergente, enjuague.

PREVENCION, EMERGENCIA MDICA Y SUPERVISION

Los inhibidores de MAO- B previene la conversin de MPTP en su metabolito toxico. Altas dosis de deprenil (cuatro tabletas de 5 mg).

BIBLIOGRAFIA

Serge Przedborski, Vernice Jackson-Lewis. (2001) The parkinsonian toxin 1- methyl- 4- phenyl-

1,2,3,6- tetrahydropyridine (MPTP): a technical review of its utility and safety.76 (Journal of

Neurochemistry). USA.