Liceo Naval Almirante Guise Biologa - 2012

Laboratorio: BiologaCriterios: OPD, TM

Identificacin de los pigmentos fotosintticos por cromatografaLa Cromatografa es una tcnica que permite separar las sustancias presentes en una mezcla por su afinidad con un solvente especfico. Mientras mayor afinidad tenga el pigmento por el solvente, ms rpido se mover y mayor distancia recorrer en el papel. En el caso de las hojas nos permitir separar los pigmentos fotosintticos de una planta, el color verde oscuro de una hoja no necesariamente indica cules y cuntos pigmentos hay en ella y sus cloroplastos. OBJETIVOS Conocer la tcnica de cromatografa en papel, sus caractersticas y que influyen en ella. Determinar los pigmentos fotosintticos presentes en la espinaca (hoja verde oscura). HIPTESIS Plantea tu hiptesis previa acerca de los pigmentos presentes en las hojas a estudiar. MATERIALES Papel de cromatografa (filtro) 4 Tubos de ensayo mediano Gradillas para tubo de ensayo Alcohol Solucin de cromatografa (45 mL de ter de petrleo + 5 mL de acetona o 25 mL de ter + 25 mL de benceno) Hojas frescas de espinaca Presillas de papel (clips) Tapones de corcho Lpiz Vaso de precipitados de 500 mL Pinzas PROCEDIMIENTO Preparacin de la cmara de corrida. (Preparar cuatro cmaras) Insertar en clip en la parte inferior de un corcho. Recortar una tira delgada de papel cromatogrfico (al tamao del tubo) y colgarlo del clip (no debe tocar el fondo) Con el lpiz marque 1 cm en la punta inferior del papel de cromatografa y otra a 2 cm del borde superior. Transfiera la marca inferior de un cm al tubo (marcar) Aadir unos mL de la solucin cromatogrfica antes de realizar la corrida (hasta un poco por debajo de la marca) la parte inferior terminal apenas debe tocar el solvente, evitando que el papel toque las paredes. Preparacin del extracto de clorofila Agregue varias hojas a un vaso de precipitado que contenga una pequea cantidad de alcohol hirviendo Una vez descoloridas extraer las hojas Mantener hirviendo el alcohol hasta obtener un concentrado de color verde el extracto de clorofila. Preparacin de las muestras en el papel cromatogrfico Muestra 1 Coloque una hoja de espinaca sobre el papel de cromatografa y transfiera raspando con una moneda pigmento al papel. Reptalo varias veces hasta obtener una lnea oscura de pigmento. Muestra 2 Con un gotero de punta capilar depositar una delgada banda del extracto de clorofila a lo largo de la lnea del lpiz, dejar secar y repetir el procedimiento varias veces (por lo menos seis) Cromatografa Poner los tubos en una gradilla o en un envase donde este derecho Colocar el papel en el tubo con solucin, el papel debe tocarla apenas (la solucin no debe llegar a la lnea de pigmento) Dejar correr la cromatografa hasta que la solucin llegue a 2 cm del borde superior de tubo, se detiene retirando el papel. Marcar hasta donde lleg la corrida y dejar secar el papel Identifique las bandas, orden de los pigmentos, la distancia recorrida por cada pigmento, la distancia total y grafique. CUESTIONES En qu orden aparecen los pigmentos: Clorofila a, Clorofila b, Beta caroteno, Xantfilas. Cul de los pigmentos tuvo ms afinidad (es ms soluble) en el solvente? En que evidencia se basa la respuesta? Determinar el Rf de cada pigmento (Rf = distancia recorrida por el pigmento / distancia recorrida por el solvente) Compare los valores de Rf para cada pigmento y explique los datos. Compare sus resultados con los de sus compaeros Fue el valor de Rf constante para cada pigmento? Tienen todas las plantas los mismos pigmentos? Por qu?

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