laboratorio de bioquimica semestre ii 2014 guia del estudiante

UNIVERSIDAD DE CARABOBO

FACULTAD EXPERIMENTAL DE CIENCIAS Y TECNOLOGA

DEPARTAMENTO DE QUMICA

Unidad Acadmica de Qumica Orgnica

GUA DEL ESTUDIANTE

Laboratorio de BIOQUMICA (QAO-901) Licenciatura en Qumica

Responsables

PROFESOR ARNALDO JOS ARMADO M.

Asistente del Laboratorio

LICENCIADA BEATRIZ MOY

Periodo Lectivo II Semestre 2014

(Diciembre 2014-Abril 2015)

Laboratorio de Bioqumica Gua del estudiante- Semestre II-2014 Profesor Arnaldo Armado/Licenciada Beatriz Moy

2

CONTENIDO

Semana Contenido

Elementos tericos

1

Tema 1. cidos nucleicos (4 h)

Concepto e inters biolgico. Clasificacin. Bases pricas y pirimidnicas. Nuclesidos y nucletidos.

Niveles de estructura en los cidos nucleicos. Estructura de los polinucletidos. cido

desoxirribonucleico (ADN) y su estructura. Desnaturalizacin de ADN. cido ribonucleico (ARN).

Principales tipos de ARN y sus estructuras.

2

Introduccin a la biosntesis de cidos nucleicos. Introduccin a la biosntesis de protenas. Tcnicas de

biotecnologa de cidos nucleicos. Mtodos para trabajar con cidos nucleicos. Herramientas para la

investigacin del ADN. Endonucleasas de restriccin. Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR). El

ADN recombinante y la clonacin. Determinacin de la secuencia de bases de cidos nucleicos.

3

Tema 2. Tcnicas experimentales de anlisis de protenas (2 h)

Tcnicas de purificacin y caracterizacin de protenas. Purificacin de protenas. Centrifugacin.

Liofilizacin. Tipos de cromatografa lquida: exclusin molecular, intercambio inico, afinidad.

Electroforesis. Introduccin a la secuenciacin de pptidos.

Elementos prcticos

4 Prctica N 1. Aislamiento y caracterizacin de ADN (4 h)

Extraccin de ADN. Efecto hipercrmico. Reconocimiento de Fosfato y desoxirribosa en el ADN.

5

Prctica N 2. Anlisis cualitativo y cuantitativo de protenas (4 h)

Reconocimiento y estudios de protenas. Mtodos de purificacin parcial de protena. Estudio de la

desnaturalizacin.

6

Prctica N 3. Reconocimiento y determinacin de actividades enzimticas (4 h)

Reconocimiento y estudios enzimticos en materiales biolgicos. Determinacin cuantitativa de una

actividad enzimtica. Determinacin de KM y Vmax.

7

Prctica N 4. Anlisis cualitativo y cuantitativo de lpidos (4 h)

Extraccin de lpidos totales. Identificacin de lecitinas y colesterol. Determinacin cuantitativa de

lpidos totales y colesterol.

8

Prctica N 5. Anlisis cualtitativo y cuantitativo de carbohidratos (4 h)

Reconocimiento de carbohidratos en una muestra problema. Determinacin cuantitavia de

carbohidratos por espectrofotometra.

9 Practica Especial. Fermentacin.

10 PARCIAL

ndice de prcticas

1. Extraccin y anlisis de ADN de hgado de ratn. 2. Anlisis cualitativo y cuantitativo de lpidos en yema de huevo. 3. Analisis proteico de granos y cereales. 4. Anlisis proteico y enzimtico de bromelina de pia. 5. Anlisis cualitativo y cuantitativo de azcares en bananas


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INTRODUCCIN

El objetivo de esta gua es el de orientar al alumno de la asigantura Laboratorio de Bioqumica

de la Licenciatura en Qumica de la Facultad de Ciencias y Tecnologa de la Universidad de

Carabobo, en la realizacin de las prcticas. Se ha diseado para ello un esquema de prcticas

que permitir al alumno, mediante la revisin de la bibliografa, disear procedimientos para

cumplir con los objetivos planteados en cada prctica.

El laboratorio de bioqumica est enfocado hacia el reconocimiento y la determinacin

de biomolculas (carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos) en diferentes muestras

biolgicas. Adicionalmente, se plantea una prctica de enzimas, que permite al estudiante de

bioqumica estudiar y entender cmo se realiza un proceso enzimtico.

Para cada una de las prcticas se les plantea los objetivos que se deben lograr y se les

proporciona las referencias bibliogrficas que deben consultar. En algunos casos se les plantea

disear los diferentes procedimientos a emplear, y en otros se les proporciona el procedimiento

completo para que realicen cada experiencia.


4

PRCTICA N 1. CIDOS NUCLEICOS

Extraccin de ADN de hgado de ratn

Los cidos nucleicos constituyen macromolculas fundamentales para las clulas, pues ellas son

las encargadas de la transmisin de la informacin gentica de generacin en generacin. El

ADN, es la molcula donde se encuentran codificados todos los genes (genoma) que una clula

puede expresar, mientras que el ARN se involucra en los procesos de trascripcin y traduccin

de la informacin biolgica.

En clulas eucariotas, a diferencia de las procariotas, los nucleicos se encuentran

compartamentalizados, el ADN se encuentra bsicamente en el ncleo, asociado a histonas,

constituyendo nucleoproteinas que conocemos como cromosomas. El ARN se encuentra

mayoritariamente en el citoplasma, (ARNr) constituyendo partculas ribonucleoproteicas, los

llamados ribosomas. Otros tipos de ARN se encuentran formando ribonucleoprotenas solubles

en el citoplasma (ARNm) o prcticamente desprovistos de protenas (ARNt).

En los cloroplastos y mitocondrias de clula eucariticas, se encuentran ADN especfico para

cada uno de estos organelos, adems de ribosomas. Estas molculas de ADN son crculos

covalentemente cerrados, estructura tpica del ADN bacteriano. Los ribosomas tambin se

asemejan en muchos aspectos estructurales y funcionales a los bacterianos (tamao, inhibicin

por antibiticos y valor de coeficientes de sedimentacin de los ARN ribosomales).

El contenido de ADN por clula es constante para todas las clulas del mismo organismo

mientras que el contenido de ARN varia de acuerdo al tejido y a la condicin fisiolgica de la

clula. Por ejemplo, el contenido de ADN por clula de ratn es de 4,6 picogramos, equivalente

a 3 x 1012 daltons o 4,6 x 109 pares de bases. (B. Lewin, Gene Expresin. Eucaryotic

Chromosomes. J. Wiley and Sons Ltd. 1974. p.7).

OBJETIVOS

1. Aislar ADN del hgado de ratn.

2. Evidenciar algunas propiedades fsicas de los cidos nucleicos, tales como viscosidad,

absorcin de luz ultravioleta, efecto hipercrmico.

3. Evidenciar mediante reacciones qumicas los diferentes constituyentes de la molcula de

ADN.

4. Determinar cuantitativamente el contenido de ADN por gramo de hgado, en base a su

capacidad de absorber luz en la regin ultravioleta del espectro electromagntico.


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PROCEDIMIENTO

I. EXTRACCIN DE ACIDOS NUCLEICOS

Esta prctica se efectuar segn el protocolo planteado por Rendina, G. (1974) Tcnicas de

Bioqumica Aplicada. Editorial Interamericana. P.p. 90.

II. CARACTERSTICAS DE LAS MOLCULAS AISLADAS

a. Absorcin de Luz y pureza del ADN

Diluya 1.0 mL de la solucin de ADN, con 5 mL de NaCl 0.9%, determine la absorbancia a 260 nm

y ajuste la absorbancia a 1-2 Unidades/mL. Debe preparar un volumen mnimo de 6 mL. Luego,

determine la absorbancia a 280 nm.

Anote sus valores y calcule el cociente A260 / A280. Qu indica este cociente?

b. Efecto Hipercrmico

Disponga de 1 tubo de ensayo y adicione 3 mL de la solucin diluida de ADN preparada

anteriormente. Caliente por 10 minutos en agua hirviente y determine la absorbancia a 260 nm.

A qu se debe el incremento en absorbancia despus del calentamiento?

c. Determinacin Cualitativa de ribosa:

Disponga de 1 tubo de ensayo y adicione 1 mL de la solucin diluida de ADN preparada.

Realice la reaccin de Bial descrita en la prctica de carbohidratos de esta gua,

Qu otra determinacin cualitativa o cuantitativa podra realizar para identificar o cuantificar

los componentes de la molcula de ADN?

III. CALCULOS A EFECTUAR

Tomando en consideracin:

a) Peso de hgado extrado

b) Volumen (mL) de homogenato procesado

c) Diluciones efectuadas

d) La absorbancia determinada

Calcule:

a) Contenido de ADN (mg) por gramo de hgado

b) Nmero mximo de clulas por gramo de hgado

c) Peso de una clula heptica.

Nota:

50ug de ADN nativo por mL equivalen a 1 unidad de absorbancia a 260 nm.

Incluya las reacciones qumicas implicadas en los diversos experimentos.

Referencia

Rendina, G. (1974) Tcnicas de Bioqumica Aplicada. Editorial Interamericana. P.p. 90.


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PRCTICA 2. PROTENAS

Aislamiento y determinacin de protenas en granos

Investigue sobre:

Solubilidad y precipitacin de las protenas.

Clasificacin de protenas por el criterio de solubilidad.

Reacciones caractersticas de los aminocidos.

Mtodo de determinacin de protenas.

Objetivos

1. Determinar el contenido proteico de diferentes granos (arroz, caraotas, frijoles, lentejas,

arvejas).

2. Realizar el fraccionamiento de los componentes proteicos de las semillas de leguminosas y

cereales, utilizando para ello la diferencia de solubilidades de los diferentes tipos de protenas.

3. Cuantificar cada una de las fracciones proteicas obtenidas utilizando el mtodo de Biuret.

4. Evidenciar la presencia de algunos aminocidos mediante reacciones especficas de

identificacin.

Experimento 1. Aislamiento de protenas y determinacin del contenido proteico de diferentes

granos.

Reactivos: H2O desmineralizada, NaCI al 1%, Etanol al 75%, NaOH 0.1 N, reactivo Biuret, solucin

patrn de albmina de concentracin conocida

Procedimiento:

Colocar en un mortero unos 5 g del grano o cereal seleccionado y triturarlos hasta obtener una

harina fina. En el caso de granos (caraotas, frijoles, entre otros) debe quitarles la concha antes

de triturarlos.

Pesar 2.0 g de muestra (en cada caso ser una de las harinas de: arveja, soya, frjol, haba, trigo,

cebada, etc.); pasarla a un tubo de ensayo, agregar 10 ml de H2O desmineralizada, agitar

manualmente durante 10 minutos y centrifugar la suspensin a 2500 rpm por 3 minutos. Vaciar

el sobrenadante a un cilindro graduado de 25 mL. Al residuo agregar de nuevo otros 10 ml de

H2O desmineralizada y repetir exactamente el proceso anterior. Despus de centrifugar, el

sobrenadante de esta segunda extraccin se adiciona al cilindro que contiene al primer

sobrenadante. Anotar el volumen final. As se tiene separada la fraccin de las albminas.

Sobre el residuo que queda de la separacin de las albminas, se repite ahora todo el proceso

anterior, pero agregando esta vez NaCl al 1%. Despus de centrifugar, los sobrenadantes de la

primera y segunda extraccin con NaCl al 1%, se llevan a otro cilindro graduado de 25 ml y se

completa hasta 20 mL con el mismo NaCI al 1%. Esta es la fraccin de las globulinas.

Sobre el residuo anterior se extrae en idntica forma la fraccin de las prolaminas, usando esta

vez alcohol etlico al 75% y una temperatura de extraccin cercana a 60 C


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Por ltimo sobre el mismo residuo, con la adicin de solucin de NaOH 0.1 N y aplicando el

mismo procedimiento general, se separa la fraccin de las glutelinas.

Recordar: el tratamiento de la harina, con cada uno de los solventes, extrae la fraccin indicada:

Solvente Extractor Fraccin

Agua desmineralizada Albminas

Cloruro de sodio al 1% Globulinas

Etanol al 75% Prolaminas

Hidrxido de sodio 0.1 N Glutelinas

Cuadro 1. Esquema para el fraccionamiento de protenas en granos y cereales.


8

Determinacin cuantitativa de protenas por el mtodo de Biuret.

Se realiza una curva de calibracin con disoluciones estndar de albmina srica bovina (ASB) a

diferentes concentraciones mediante el mtodo de Biuret agregando los contenidos como se

indica en la Tabla 1:

Tubo

Volumen de disolucin estndar de albmina srica

bovina (mL)

Concentracin de la disolucin estndar

(mg mL-1)

Volumen de reactivo de Biuret (mL)

Volumen de agua destilada

(mL)

B 0 0 3 2

1 0.3 0.3 3 1.7

2 0.4 0.4 3 1.6

3 0.6 0.6 3 1.4

4 0.8 0.8 3 1.2

5 1.2 1.2 3 0.8

6 2 2 3 0

Al mismo tiempo que se elaboraba la curva de calibracin, a tubos de ensayo con 2 mL de cada

fraccin se les agrega 3 mL del reactivo de Biuret. Despus de 20 minutos se mide la

absorbancia.

Experimento 2. Reacciones de reconocimiento de aminocidos.

Debe disear un experimento donde se realicen las siguientes reacciones de reconocimiento de

aminocidos para diferentes patrones y para las protenas aisladas en el laboratorio:

Reaccin de Sakaguchi, Reaccin de acre-Rosenheim, Prueba de Biuret, Prueba xantoproteca y

Prueba de sulfidacin.


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PRCTICA N 3. ENZIMAS

Extraccin de bromelina contenida en pia (Ananas comosus). Determinacin del

contenido proteico y la actividad proteoltica en el extracto parcialmente purificado.

Efecto de la concentracin de enzima, concentracin de sustrato, pH y temperatura

sobre la actividad enzimtica

Objetivos

1. Extraer bromelina de la pia.

2. Cuantificar el contenido de protena en el extracto de bromelina.

3. Determinar la actividad enzimtica de la bromelina contenida en la pia.

4. Determinar los efectos de la concentracin de sustrato, pH y temperatura sobre la actividad

enzimtica.

Metodologa experimental

Experimento 1. Obtencin de extractos parcialmente purificados.

Se procede de la siguiente manera: se realizan cortes finos de la muestra (tallo, fruto y follaje

por separado), se pesan 2g de muestra, la cual se coloca en un mortero de porcelana con mazo

para su maceracin, se adicionan 5mL de agua destilada, una vez llevado a cabo el macerado se

decanta a un tubo de ensayo y se coloca en un bao de hielo durante 5 minutos y se agregan

5mL de acetona fra (0-1oC) dejndose reposar hasta observar un precipitado blanco. Se

centrifuga durante 5 minutos a 1000 rpm y se descarta el sobrenadante y el precipitado se

resuspende en 10 mL de solucin amortiguadora (Buffer fosfato) a pH 7. Este extracto se usar

para la determinacin de protenas y para los ensayos de actividad enzimtica.

Experimento 2. Cuantificacin de protenas en los extractos de bromelina obtenidos. Se realiza una curva de calibracin con disoluciones estndar de albmina srica bovina a

diferentes concentraciones mediante el mtodo de Biuret agregando los contenidos como se

indica en el cuadro siguiente:

Tubo

Volumen de disolucin

estndar de albmina

srica bovina (mL)

Concentracin de la

disolucin estndar

(mg mL-1

)

Volumen de

reactivo de Biuret

(mL)

Volumen de agua destilada

(mL)

B 0 0 3 2

1 0,3 0,3 3 1,7

2 0,4 0,4 3 1,6

3 0,6 0,6 3 1,4

4 0,8 0,8 3 1,2

5 1,2 1,2 3 0,8

6 2,0 2,0 3 0

Al mismo tiempo que se elabora la curva de calibracin, a 3 tubos de ensayo con 1 mL de cada

uno de los extractos y 1 mL de agua destilada, se les agrega 3mL del reactivo de Biuret, despus

de 20 minutos se mide la absorbancia a 540 nm. (NOTA: Si los tubos que contienen los extractos


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dan absorbancias fuera de la curva de calibracin, se debe realizar la determinacin

nuevamente tomando cantidades de extracto adecuadas para que las absorbancias se

encuentren en el intervalo de la curva de calibracin)

Experimento 3. Determinacin de la actividad enzimtica

Para la determinacin de la actividad enzimtica se rotulan tubos de ensayo para cada extracto

obtenido y un blanco. A cada tubo rotulado para cada extracto se le adiciona 1,5 mL de

disolucin de casena al 1%, 0,5 mL del extracto y 2 mL de solucin amortiguadora de fosfato 50

mM. Al tubo rotulado como blanco se le aade solo 1,5 mL de disolucin de casena y 2 mL de

solucin amortiguadora. Se colocan los tubos en un bao a 37 C durante 25 minutos, y luego se

les aade 2 mL de disolucin de cido actico 1 M. Al tubo sealado como blanco se le aade

ahora 0,5 mL de extracto. Se centrifugan todos los tubos y toma de cada tubo 5 mL de

sobrenandante y se colocan en tubos donde previamente se han aadido 7,5 mL de reactivo

alcalino. Posteriormente se adicionan 5 mL de reactivo de Folin diluido (1:10). Se espera que

transcurra 1,5 horas y se mide la absorbancia a 700 nm.

Experimento 4. Efecto de la concentracin de sustrato sobre la actividad enzimtica.

Se rotulan 5 tubos y se colocan los volmenes indicados en la tabla siguiente:

Tubo Volumen de extracto

enzimtico (mL)

Volumen de solucin de

casena al 1% (mL)

Volumen de solucin amortiguadora de

fosfato de pH 7 (mL)

Volumen de solucin de cido actico de

concentracin 1M (mL)

1 0,5 0,5 3,0 2

2 0,5 1,0 2,5 2

3* 0,5 1,5 2,0 2

4 0,5 2,0 1,5 2

5 0,5 2,5 1,0 2

Se procede mediante el mismo protocolo descrito anteriormente (Experimento 3).

Para determinar el efecto del pH sobre la actividad enzimtica, se realiza el experimento

utilizando el mismo protocolo descrito anteriormente pero usando soluciones amortiguadoras

de diferentes pH (5, 7, 9 y 11). Se debe realizar un blanco para cada pH.

Para determinar el efecto de la temperatura sobre la actividad enzimtica se realiza el

experimento a diferentes temperaturas: 0 (bao hielo/agua), 25 (temperatura ambiente), 37

(bao termostatado) y 60C (bao de mara en la plancha de calentamiento). Se debe colocar un

blanco para cada temperatura. Nota: debe medir las temperaturas exactas para poder realizar

los grficos respectivos.


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Curva de calibracin para la actividad enzimtica.

Se prepara una solucin patrn de tirosina (200 g/mL) en buffer fosfato. A partir de esta

solucin patrn se preparan las soluciones de trabajo las cuales se centrifugan y colorean de

igual forma que las muestras de los extractos y el blanco.

Tubo Volumen de solucin patrn de tirosina (mL)

Volumen de solucin de

casena al 1% (mL)

Volumen de solucin amortiguadora de

fosfato de pH=7 (mL)

Volumen de solucin de cido actico de

concentracin 1M (mL)

1 0 1,5 2,5 2

2 0,5 1,5 2 2

3 1 1,5 1,5 2

4 2 1,5 0,5 2

5 2,5 1,5 0 2

Clculos

1. Realice el clculo del contenido de protenas en el extracto enzimtico.

2. Calcule la actividad enzimtica especfica.

3. Construya las grficas de Lineweaver-Burk y determina VMx y KM


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PRCTICA 4. LPIDOS Aislamiento de lpidos totales de la yema de huevo y cuantificacin de colesterol

NOTA: DEBE TRAER 1 HUEVO Y HIELO PARA LA REALIZACIN DE LA PRCTICA

Objetivos

1. Aislar los lpidos presentes en la yema de huevo.

2. Determinar el contenido de lpidos totales en la yema de huevo.

3. Separar mediante cromatografa de capa fina los lpidos presentes en la yema de huevo.

4. Realizar el fraccionamiento de lpidos en esteroles y lecitinas.

5. Realizar reacciones de reconocimiento de esteroles y lecitinas.

Experimento 1. Aislamiento de lpidos totales de la yema de huevo.

Siga el procedimiento sugerido por Barreto, J. Chem. Edu. Vol. 82 No. 1, 2005, pg. 103.

Experimento 2. Determinacin de lpidos totales en yema de huevo.

Tome una alcuota de 4 mL del extracto clorofrmico y colquelo en un vaso de precipitados

previamente pesado. Evapore cuidadosamente hasta sequedad (en una plancha de

calentamiento o estufa). Luego de dejar enfriar a temperatura ambiente en un desecador, pese

nuevamente. Determine la cantidad de lpidos en base a 100 g de yema de huevo.

Experimento 3. Fraccionamiento de lpidos

Realice el fraccionamiento de lpidos de la yema de huevo, para obtener as las fracciones de

lecitinas y esteroles. Coloque 2 mL del extracto clorofrmico en dos tubos de centrfuga

Aada 4 mL de acetona fra (a cada tubo)

Deje en fro por 10 minutos

Centrifugue durante 5 minutos a 2000 rpm

Slido Sobrenadante

Lecitinas (Fraccin L) Esteroles (Fraccin E)

Experimento 4. Cuantificacin de colesterol Evapore hasta sequedad la fraccin E obtenida en el experimento anterior. Pese la fraccin.

Deje enfriar y disuelva el residuo en ~2 mL de cloroformo.

A continuacin, emplee algn mtodo de cuantificacin de colesterol. Consulte con el asistente,

previo al experimento para conocer la existencia de los reactivos qumicos necesarios.


13

PRCTICA N 5. CARBOHIDRATOS

Anlisis cualitativo y cuantitativo de azcares en bananas

Objetivos

1. Identificar el carbohidrato presente en una muestra problema mediante diferentes

reacciones de identificacin.

2. Cuantificar el contenido de carbohidratos en una muestra biolgica.

EXPERIMENTO 1. Reacciones de reconocimiento para carbohidratos

REACCIN DE MOLISH

Disponga de 6 tubos de ensayo, agregue a cada uno 1 mL de la sustancia que se indica y 2 o 3

gotas del reactivo de Molish, agite los tubos. Seguidamente, por las paredes de cada tubo,

agregue 1 mL de cido sulfrico concentrado. Observe que ocurre. Anote sus observaciones.

TUBO 1 2 3 4 5 6

SUSTANCIA ALMIDN GLUCOSA SACAROSA LACTOSA AGUA PROBLEMA

REACCIN DE BENEDICT

Disponga de 6 tubos de ensayo, agregue a cada uno 1 mL de la sustancia que se indica y 1 mL

del reactivo de Benedict, agite los tubos. Seguidamente, sumerja los tubos en un bao de agua

hirviente. Observe que ocurre. Anote sus observaciones.

TUBO 1 2 3 4 5 6


REACCIN DE BARFOED


del reactivo de Barfoed, agite los tubos. Seguidamente, sumerja los tubos en un bao de agua

hirviente y controle el tiempo de aparicin de un precipitado. Anote sus observaciones.

TUBO 1 2 3 4 5 6

SUSTANCIA GLUCOSA SACAROSA FRUCTOSA LACTOSA AGUA PROBLEMA

REACCIN DE SELIWANOFF

Disponga de 6 tubos de ensayo, agregue a cada uno 0,5 mL de la sustancia que se indica y 1 mL

del reactivo de Seliwanoff, agite los tubos. Seguidamente, sumerja los tubos en un bao de agua

hirviente. Anote sus observaciones.

TUBO 1 2 3 4 5 6

SUSTANCIA GLUCOSA SACAROSA FRUCTOSA LACTOSA AGUA PROBLEMA

REACCIN DE BIAL


del reactivo de Bial, agite los tubos. Seguidamente, sumerja los tubos en un bao de agua

hirviente. Anote sus observaciones.

TUBO 1 2 3 4 5 6

SUSTANCIA GLUCOSA RIBOSA FRUCTOSA LACTOSA AGUA PROBLEMA

REACCIN DEL CIDO MCICO

Disponga de 6 tubos de ensayo, agregue a cada uno aproximadamente 300 mg de los

compuestos que se indican; luego aada 0,2 mL de agua y 1 mL cido ntrico concentrado,


14

agite los tubos. Seguidamente, sumerja los tubos en un bao de agua hirviente. Despues de 1-2

horas observe al microscopio. Anote sus observaciones.

TUBO 1 2 3 4 5 6

SUSTANCIA GLUCOSA GALACTOSA FRUCTOSA LACTOSA AGUA PROBLEMA

(Usted solo realizar la reaccin del cido mcico con su muestra problema y un patrn)

REACCIN DE LUGOL

Disponga de 6 tubos de ensayo, agregue a cada uno 0,5 mL de la sustancia que se indica y 1-2

gotas del reactivo de lugol, agite los tubos. Observe lo que ocurre. Anote sus observaciones.

TUBO 1 2 3 4 5 6


Disee un cuadro donde seale (para cada carbohidrato utilizado y su muestra problema) con

positivo (+) negativo (-) los resultados de cada reaccin o prueba realizada. Identifique la

muestra problema y discuta los resultados.

EXPERIMENTO 2. Cuantificacin de carbohidratos totales en cambur a diferentes condiciones

de madurez.

Determine el contenido de azcares totales en una muestra de cambur verde, maduro y pasado

de maduro, como se indica en la siguiente referencia bibliogrfica:

S. Todd Deal, Catherine E. Farmer, and Paul F. Cerpovicz. Carbohydrate Analysis: Can We Control

the Ripening of Bananas?J. Chem. Edu. Vol. 79 No. 4 April 2002 p. 479.


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REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS GENERALES

Alemany, M. y Font, S. (1982) Prcticas de Bioqumica. Editorial Alhambra, S.A. Madrid, Espaa.

Primera edicin.

Arzola, C. y Holgun, C. (2006) Manual de Prcticas de Bioqumica. Universidad Autnoma de

Chihuahua. Facultad de Zootecnia.

GUA PRCTICAS BIOQUMICA. 1 Licenciado en Qumica, Curso 2006/07. Universidad de

Huelva, FACULTAD DE CIENCIAS EXPERIMENTALES. Departamento de Qumica y Ciencia de los

Materiales. rea de Bioqumica y Biologa Molecular.

Pavia, D. (1976) Qumica Orgnica Experimental. Primera edicin. EUNIBAR, Barcelona Espaa.

Pginas 77-83, 369-420.

Rendina, G. (1974) Tcnicas de Bioqumica aplicada. Editorial Interamericana, S. A. Mxico.

Primera edicin.

Shriner, R. L.; Fuson, R. C. y Curtin, D. Y. (2001) Identificacin sistemtica de compuestos

orgnicos. Editorial Limusa, S. A. Mxico.

laboratorio de bioquimica semestre ii 2014 guia del estudiante

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