PRACTICA NRO.1

TEMA: DESCRIPCION, MANEJO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO

COMPUESTO

MATERIAL: Microscopio compuesto, porta objetos, cubre objetos, gotero,

papel lente, pedazo de peridico, pedazo de tela suave.

INTRODUCCION

El microscopio compuesto es un instrumento ptico que permite obtener una

imagen amplificada de un objeto pequeo (clulas, tejidos, microorganismos,

para hacer visibles detalles que no lo son a simple vista.

Es de uso rutinario en los laboratorios de enseanza superior, investigacin; en

el campo de Biologa, Medicina y ciencias afines como la Geologa, que estudia

los minerales y rocas con microscopios con nicoles cruzados y polarizadores,

llamados microscopios petrogrficos.

Es un instrumento de precisin delicado y caro, por lo que es preciso darle un

uso y cuidado adecuados.

El lmite de resolucin del microscopio compuesto es aproximadamente de 200

nanmetros, el que no es suficiente para observar orgnulos celulares, virus y

macromolculas; esto es posible usando el microscopio electrnico cuyo lmite

de resolucin es de 0.5 nanmetros.

La ciencia y arte de distinguir los objetos ms pequeos, se denomina

Microscopia.

OBJETIVOS.

Al finalizar la prctica, el alumno con ayuda de las pautas de la presente gua y

bibliografa sobre el tema, estar en capacidad de:

- Reconocer cada una de las partes del sistema mecnico y ptico del

microscopio convencional.

- Conocer el funcionamiento de cada una de las partes del microscopio.

- Enfocar sin error una imagen, previa iluminacin correcta del campo del

microscopio.

- Realizar la debida limpieza de las partes constitutivas del microscopio,

antes y despus de las observaciones.

DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO COMPUESTO.

Est constituido por dos partes:

A-Parte mecnica.-Constituida por los siguientes dispositivos:

1-El pi, base o estativo.-Es un dispositivo metlico pesado, en forma de

herradura o circular que permite la estabilidad del microscopio.

2-Columna.-Se encuentra en contacto con el pie

3-Tubo ptico.-Cilindro de metal de 16 cm de longitud en cuya parte superior se

dispone la lente ocular y en la parte inferior el revlver, al cual se atornillan los

objetivos. En la parte posterior se encuentra la cremallera, sistema que esta en

conexin con los tornillos.

4-Brazo.-De metal macizo en forma de U abierta que sirve para trasportar el

microscopio. Por su parte superior se une al tubo y por la parte inferior se pone

en contacto con la base, mediante la charnela que permite inclinar el aparato. En

su extremo superior se encuentra el tornillo macro mtrico (Para movilizar el tubo

rpidamente-enfoque grosero)y, en su extremo inferior el tornillo

micromtrico(Para movimientos lentos-enfoque fino).

5-Platina.-Es la plataforma o mesa de trabajo, donde se coloca la muestra, puede

ser redonda o cuadrada, inmvil, o mvil mediante el carro. Posee una abertura

central denominada apertura de platina, que deja pasar los rayos luminosos que

vienen del espejo o de la luz incorporada. Tiene pinzas para fijar la lmina porta

objetos que contiene la muestra a observarse.

6-El revlver.-Dispositivo metlico giratorio, posee varias roscas, donde se

atornillan las lentes objetivo, que al girar deben disponerse en reten, indicando

que se encuentra en posicin de observacin.

B-Parte ptica.-Las propiedades pticas de las lentes provienen de los

fenmenos de refraccin que sufren los rayos luminosos que las atraviesan.

Est constituida por:

1- Lentes Oculares.-Soportadas por cilindros rectos, cortos y huecos, y se

colocan en la parte superior del tubo ptico, interiormente tienen dos lentes, uno

a cada extremo y entre ambos hay un diafragma; la lente superior se llaman lente

ocular y la lente inferior lente de campo. Tiene aumentos de 10x o 5x. Debe su

nombre a que el observador coloca su ojo cerca de la lente ocular. Su funcin es

aumentar la imagen producida por la lente objetivo. La imagen producida por el

ocular es virtual y derecha.

2- Lentes objetivos.- La calidad de un microscopio depende de la calidad de la

imagen dada por el objetivo: estas lentes son de construccin complicada y se

requieren clculos difciles para decidir la curvatura y la

Combinacin de las lentes que la componen. Llevan este nombre por estar cerca

del objeto, del que debe conocerse:

a-El aumento b- Distancia focal c- Apertura numrica d- Distancia de trabajo

e- Profundidad de foco f- Campo de visin.

El aumento de un objetivo puede calcularse, dividiendo la longitud ptica del tubo

(160 mm) ente la distancia focal. El objetivo de ms uso en la biologa es de 4

mm de distancia focal, o sea: 160/4=40 x

Distancia focal es la distancia que separa el foco, del plano principal de la lente

que corresponde casi al centro de la misma.

Apertura Numrica (AN= n sen u) Esta expresin es la de mayor importancia en

microscopa. Donde n= ndice de refraccin del medio interpuesto entre el objeto

y la lente frontal del objetivo; u=1/2 de la abertura angular del objetivo. Su valor

est indicado en la montura del objetivo, junto con el aumento. La calidad del

objetivo es tanto mayor cuanto ms elevada es su apertura numrica, cuanto

mayor sea la apertura numrica, mayor ser el poder de resolucin del objetivo

y tanto ms finos los detalles que podr revelar.

Poder de resolucin de un microscopio, es la capacidad del microscopio de

distinguir dos puntos vecinos como unidades. Dos puntos luminosos forman

imgenes separadas cuando existe entre ellos una distancia mnima ``r,

llamada lmite de resolucin, si la distancia es menor que ``r, formaran una sola

imagen, es decir se confundirn. ``r tiene un valor diferente para cada objetivo,

y se calcular por la siguiente formula: r= 0.61 /AN Siendo 0.61 la minina

distancia a que pueden estar separados dos puntos, para que sus imgenes se

vean como separados y, = longitud de onda de la luz utilizada den la iluminacin

Distancia de trabajo, es el espacio libre entre el objetivo y el objeto. Es menor a

medida que el objetivo tiene mayor aumento.

Profundidad de foco, es el poder de resolucin en el plano vertical, y expresa la

cualidad de un objetivo de poder presentar perfectamente detallados los diversos

planos de una preparacin sin variar la posicin de enfoque. A medida que

aumenta la apertura numrica de un objetivo, disminuye el nmero de planos del

objeto que puede considerarse en foco. La imagen producida por el objetivo ser

real e invertida.

TABLA DE VALORES PARA OBJETIVOS TIPOS

Aumento del

objetivo

Distancia Focal

A.N Distancia de trabajo

Profundidad de Foco

Campo de visin

10x 16 mm 0.20-0.30 4-8 mm 10 u 1-2 mm

40x 4 mm 0.65-0.85 0.2-0.6 mm

1-2 u 0.25-0.50mm

100x 2 mm 1.2-1.3 0.11-0.16mm

0.5 u 0.1-0.2 mm

3 - Espejo, orienta los rayos luminosos en direccin del objeto; posee dos

superficies, una plana y otra cncava. Cuando la fuente luminosa es el sol se

utiliza el espejo plano o el cncavo; al u usar el espejo plano se elimina del campo

visual imgenes perjudiciales, como barras de las ventanas, etc. Cuando se

utiliza luz artificial, el espejo cncavo permite una iluminacin ms intensa. En

los microscopios modernos el sistema de iluminacin es incluido.

4 Condensador, se encuentra debajo de la platina, tiene como funcin

condensar y enfocar la luz sobre el objeto; tiene en su parte inferior un diafragma

iris, cuyo dimetro se puede variar mediante una palanca horizontal, el tamao

del diafragma iris controla la iluminacin del objeto.

5 Portafiltro, se localiza debajo del diafragma iris, consiste de un anillo de metal,

en el que puede colocarse un vidrio despulido o de color. El filtro de color azul o

el filtro luz-da reduce el exceso de color rojo y amarillo que produce el filamento

de una ampolleta corriente..

USO DEL MICROSCOPIO:

1- Trasladar el microscopio, cogindolo del brazo con la mano derecha y

sosteniendo la base con la mano izquierda, en forma horizontal.

2- Limpiar con un lienzo suave la parte mecnica del microscopio.

3- Limpiar con papel lente la parte ptica del microscopio, tratando de retirar

el polvo, la humedad, la grasa, muy perjudiciales para el sistema ptico.

4- Enfocar con el objeto de 10x, orientado el espejo cncavo de modo que

refleje la mayor cantidad de luz hacia el condensador y, con el diafragma

completamente abierto, hasta observar el campo del microscopio

completamente iluminado en forma homognea. El espejo debe estar

colocado a 20 o 30 cm de distancia de la fuente de luz.

5- Colocar la preparacin en la abertura de la platina, de tal modo que reciba

los rayos luminosos, provenientes del espejo, diafragma y condensador.

6- Mientras se mira por el ocular hacer descender el tubo ptico, con el

tornillo macromtrico, hasta que el objetivo este a unos 0.5 cm de

distancia de la preparacin, hasta que aparezca la imagen.

7- Luego se enfoca la imagen con el tornillo micromtrico.

8- Una vez ubicada la estructura que ms nos interesa, observar con el

objetivo de mayor aumento, para lo cual se gira el revlver, teniendo la

preocupacin de alejar el tubo ptico a fin de no daar la preparacin por

una mala manipulacin.

9- Una vez la muestra ir graduando el diafragma, hasta observar los detalles

estructurales externos e internos.

10- Al terminar las observaciones, limpiar las lentes con papel lente y dejar el

microscopio con el objetivo de menor aumento en el eje ptico, cubrirlo

con su funda y guardarlo.

PRACTICA NRO. 2

TEMA: ORGANISMOS VIVINETES EN AGUA ESTANCADA.

MATERIAL: Agua estancada que contenga en lo posible representantes del

reino mnera (espirilos), reino protista (protozoos), reino animalia (rotferos,

pluricelulares).

Microscopio compuesto

Porta y cubre- objetos

Gotero

Lugol

Pinzas, estiletes

Papel lente, papel secante

Lienzo suave

OBETIVOS:

Conocer la gran biodiversidad que existe en un pequeo ecosistema como son

las aguas estancadas, donde prosperan organismos que nos son visibles a

simple vista, y para ser visualizados precisa el uso de los instrumentos pticos.

PROCEDIMIENTO:

Coloque una gota d agua estancada de la superficie del fondo del recipiente

(de boca ancha ) en un porta-objetos , luego cubra con una laminilla en una

ngulo de 45, para evitar la formacin de burbujas de aire ,que obstaculice su

observacin.

Observe al microscopio

El movimiento del organismo

Los medios de locomocin, forma y numero

Describa las morfologas del organismo

Dibuje los organismos observados

PRACTICA N 3

TEMA: LA CELULA VEGETAL

MATERIAL:

1. bulbo de la cebolla allium cepa

2. fruto de aji capsicum frutescens

OBJETIVO:

Observar y conocer la estructura y las organelas de la clula vegetal

PROCEDIMIENTO

A. 1.- PREPARACIN HMEDA: corte del bulbo en 4 partes, luego se

separa por si sola en capas o catafilos de cuya superficie cncava corte

una porcin pequea (5mm) de la delicada epidermis que la cubre. Con

una pinza colocarla rpidamente en una gota de agua evitando la

formacin de pliegues y luego coloque los cubre objetos.

Use el diafragma para reducir la cantidad de luz que pasa a travs de la

preparacin .

INFORME:

Observe a 10xy40x

Dibuje e indique las estructuras observadas a 40x 2.- PREPARACIN HMEDA CON COLORANTE: en la preparacin

anterior aada una gota de azul de metileno en el borde del cubreobjetos

INFORME:

Observe a 10xy40x

Dibuje las clulas teidas con azul de metileno sealando las estructuras mas visibles(ncleo, nuclolo, vacuola)

B. haga una preparacin hmeda, con un corte superficial de endocarpio de

aj.

INFORME:

Identifique y dibuje (40x) lamina media, membrana primaria, membrana secundaria, canal y poros de la pared celular.

PRACTICA N4

TEMA: conclusiones citoplasmticas

MATERIALES: colorante azul de metileno lugol, porta cubre objetos, gotero,

hoja de afeitar, pinza, papel lente, papel lente absorbente.

1. Tubrculo de papa - solanum tuberosum

2. Raz de zanahoria daucus carota

3. Bulbo de ajo allium sativum

4. Peciolo de begonia begoania sp

OBJETIVOS: reconocer la diferentes inclusiones citoplasmticas tpicas de la

clula vegetal, como los tipos de plstidios (leucoplastos: amiloplastos,

proteinoplastos; cromoplastos: caroteno, xantofila, licopeno). Y el contenido

vacuolar (drusas, oxalatos, etc.). Los plastidios faltan en las bacterias,

cianofceas y hongos.

a. Preparacin: hacer una preparacin hmeda con raspado interno de la

papa.

Observe y dibuje: granos de almidn, la posicin de los hilios y las

estrillas.

b. Preparacin: realice un corte longitudinal en la parte externa de la raz de

la zanahoria y haga el montaje del agua.

c. Preparacin: haga una preparacin hmeda con un corte delgado del

catafilo de ajo.

Observe y dibuje: cristales de oxalato de calcio (sales de cidos

orgnicos) y las maclas

d. Preparacin: haga una preparacin hmeda con un corte transversal del

peciolo de la hoja de la begonia.

Observe y dibuje: las drusas que son cristales de oxalatos de calcio en

forma de rasa nutica.

PRACTICA N0 5

TEMA: LA CELULA ANIMAL

MATERIAL:

A. Colorante verde Janus o azul de metileno

B. mucosa bocal

C. porta objetos

D. cubre objetos

E. palillos de dientes

F. papel lente

G. papel absorbente

H. gotero.

OBJETIVO: conocer la estructura de la clula animal (tejido epitelial de la

mucosa bucal) y establecer diferencias entre esta y la clula vegetal.

METODO DE PREPARACION:

Con el extremo ancho de un palillo de dientes frote ligeramente la cara de su

mejilla en una sola direccin, agite el palillo en una gota de agua y deje secar

5 minutos. Agregar una gota de Verde Janus o Azul de metileno y deje pasar 3

minutos .Lave la muestra con un pequeo chorro de agua para eliminar el

exceso de colorante y deje secar 5 minutos. No coloque cubreobjetos.

Observar a 10 xy busque a una o dos clulas que estn completas y bien

planas, cambien al objetivo de 40x para dibujar.

INFORME:

-Dibuje la clula animal, indicando sus partes.

-Describa la forma y nmero de las mitocondrias.

-Cul es la funcin del tejido epitelial, membrana celular, mitocondrias,

vacuolas y nuclolos?

-Establezca diferencias entre clula vegetal y animal.

PRACTICA NO 6

TEMA: MITOSIS

MATERIAL:

A. Races de cebolla

B. Hoja de afeitar

C. Placas Petri

D. Porta Objetos

E. Cubre Objetos

F. Estilete

G. Pinza

H. Mechero

I. Solucin de orcena actica a 1.5%

J. Microscopio Compuesto

OBJETIVOS:

Reconocimientos del proceso mittico en las plantas, cuya multiplicacin

celular se produce en los tejidos meristemticos apicales (En este caso el

pice, de la raz de la cebolla), laterales o intercalares, dando por resultado el

crecimiento en altura o en grosor de la planta.

PROCEDIMIENTO:

1. En una placa Petri coloque unas gotas de orcena actica y agregue las

puntas de las races. Mantenga la placa Petri sobre el fuego y

agitndola, espere que hierva la orcena.

2. Coloque las races en otro Petri, con una pinza retire una punta de raz

de 2mm de largo y colquela en una lmina porta objeto con una gota de

orcena fra, coloque la laminilla y deje reposar durante 5 minutos, luego

utilizando el dedo pulgar presione el material.

3. Observe al microscopio las diversas fases de la mitosis y dibuje a 450

aumentos.