GUÍA DE LABORATORIO N° 1USO DEL MICROSCOPIO

Introducción:Los términos

ObjetivosDemostrar los procedimientos adecuados para el empleo del microscopioPreparar y utilizar un montaje temporalDeterminar la ampliación total del microscopio

MaterialesMicroscopio compuestoLáminas portaobjetoLáminas cubreobjetosGoterosLetras e cortados de diariosTijera

ProcedimientoForma de trasladar apropiadamente el microscopioSe transporta sosteniéndolo con ambas manos, una mano sostiene el brazo del microscopio y la otra la base.Trabajo con el microscopioSe cortan letras “e” de un periódicoMontaje mojado de la letra “e”Coloca la letra sobre el portaobjetosColocar el cubreobjetosCon el gotero colocar una gota de agua por el borde del cubreobjetos. El agua se debe dispersar bajo el cubreobjetosColocar la lámina en la platina, verificando que la letra a se encuentre en posición normal de lectura.Observar al menor aumento y dibujar lo observado en el campoDa una explicación de lo observado en la imagenMirando a través del ocular, mover la muestra hacia la derecha. ¿Qué dirección sigue la imagen?Mover la lamina hacia el lado izquierdo. ¿Qué dirección sigue la imagen?Ahora pase la imagen a mayor aumento. ¿Cómo se observa la imagen?. Con ayuda del micrométrico mejorar la resolución.Localizar el diafragma. Moverlo y registrar los cambios en la intensidad de la luz.Determinación de la ampliación total.

ESTUDIO MICROSCÓPICO DE LA MITOSIS EN EL MERISTEMO RADICULAR DE CEBOLLA

ObjetivosDemostrar los procedimientos adecuados para el empleo del microscopioPreparar y utilizar un montaje temporalDeterminar la ampliación total del microscopio

MaterialesMicroscopio compuestoLáminas portaobjetoLáminas cubreobjetosGoterosLetras e cortados de diariosTijera

1. Preparación del material biológico: raíz de la cebolla (Allium cepa)

            Primero se coloca la cebolla sobre un frasco (vaso) lleno de agua, de tal manera que la parte inferior del bulbo se mantenga en contacto permanente con el nivel del frasco. Hay que evitar que se seque, manteniendo el nivel del agua. A los 2 o 3 días, a temperatura ambiente, las raíces habrán alcanzado unos tres cm. de longitud.

2. Elaboración de la preparación microscópica

            Cuando la raíz ha alcanzado el tamaño adecuado, se corta la parte más fina y terminal (meristemo radicular) con una tijera de punta fina. El fragmento cortado debe tener una longitud de poco más de medio cm. para facilitar su manipulación.Se coloca el trozo de raíz dentro de un vidrio de reloj y se cubre con unas gotas de carmín acético. Se calienta el vidrio hasta que el colorante entra en ebullición y se mantiene durante 15 segundos. Transcurrido este tiempo se retira la raíz con unas pinzas y se coloca sobre el porta. Con un escalpelo se corta la extremidad de la raíz, dejando sólo un fragmento de unos 3 o 4 mm.

            Por último, se deposita encima de la punta de la raíz un cubre y se presiona con la extremidad plana de un lápiz. A continuación se le añade una gota de carmín acético sobre el borde del cubre y se sigue presionando hasta que el colorante no impregne el tejido. Se intenta conseguir una monocapa de células meristemáticas.

3. Observación de las células mitóticas

            Se pone la preparación en el microscopio y se observa al principio con aumento moderado. Se verán células dispersas por todo el campo de observación. Hay que distinguir tres tipos de células:

·         Células de menor tamaño, pero de grandes núcleos  teñidos de rosa. Tienen citoplasma denso y están dispuestas en filas. Son las células meristemáticas, con gran actividad mitótica.

·         Células más grandes, alargadas y con núcleos más pequeños. Corresponden a células ya diferenciadas.

·         Células ovoideas, de núcleos pequeños, pero que se tiñen intensamente. Son las células de la cofia.

Se elige la zona de células meristemáticas y se observará a mayor aumento. Conviene escoger una región en que las células no se hayan teñido demasiado, y que los núcleos presentan los cromosomas de color rojo-violáceo sobre fondo sin pigmentar.

Hay que reconocer células meristemáticas en las distintas fases de la mitosis y realizar un dibujo, indicando el aumento, de cada una de ellas.

OBSERVACIÓN DE CÉLULAS EUCARIONTES

MATERIAL

Microscopio Mechero Bisturí o tijeras de punta fina Pinzas y/o palillos estériles Cebolla Papel de filtro Placa de Petri Frasco lavador Colorante (verde de metilo o azul de metileno) Portas y cubres

PROCEDIMIENTO

A) Células vegetales (Epidermis de cebolla)

1. Se corta la cebolla por la mitad y se separa una de las capas de la misma.2. Marca con el bisturí o con las tijeras una cuadrícula de pequeño tamaño (1 cm de

lado) en la parte interna o cóncava de la capa.3. Separa el fragmento de epidermis con las pinzas y colócalo en el centro del

portaobjetos.4. Coloca el porta en la placa de Petri, añade unas gotas de colorante sobre la

muestra y déjalo actuar durante cinco minutos.5. Lava con cuidado el exceso de colorante y sécalo con un poco de papel de filtro.6. Añade una gota de agua a la muestra.7. Coloca el cubre apoyándolo por un lado y dejándolo caer para que no queden

burbujas.8. Observa la preparación al microscopio, utilizando varios objetivos, realiza un dibujo

detallado de las células e indica el aumento del mismo.

B) Células animales (Epitelio de la mucosa bucal)

1. Raspa suavemente el interior del carrillo con las pinzas o con un palillo (siempre por la parte roma, procurando no cortarse). Coloca la mucosa blanca que se obtiene en el portaobjetos.

2. Realiza una extensión (frotis) deslizando el borde de un porta sobre el que tiene la muestra.

3. Calienta suavemente con el mechero (¡que no llegue a quemar!) la parte inferior del porta que contiene la mucosa.

4. El resto del procedimiento es idéntico al de la epidermis de cebolla.