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INSTITUTO TECNOLÓGICO DE SONORA
EFECTO DE LA VÍA DE APLICACIÓN DE UNA VACUNA INACTIVADA OLEOSA SOBRE LA RESPUESTA INFLAMATORIA LOCAL Y SU CORRELACIÓN CON LA
RESPUESTA HUMORAL CONTRA LA ENFERMEDAD DE NEWCASTLE Y BRONQUITIS INFECCIOSA EN AVES DE POSTURA.
TESIS
QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE
MÉDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA
PRESENTA
MARÍA DOLORES ROSS RAMÍREZ
CIUDAD OBREGÒN SONORA MARZO DEL 2002
EFECTO DE LA VÍA DE APLICACIÓN DE UNA VACUNA INACTIVADA OLEOSA SOBRE LA RESPUESTA INFLAMATORIA LOCAL Y SU CORRELACIÓN CON LA
RESPUESTA HUMORAL CONTRA LA ENFERMEDAD DE NEWCASTLE Y BRONQUITIS INFECCIOSA EN AVES DE POSTURA.
TEMA DE TESIS QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE MÉDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA
PRESENTA
MARÍA DOLORES ROSS RAMÍREZ
ASESORES M.V.Z. RAMÓN MIGUEL MOLINA BARRIOS _____________________ M.V.Z. SERGIO MANUEL FERNÁNDEZ BARRERAS ____________________ M.V.Z. ANA LAURA MIRANDA ROMERO ____________________
Vo. Bo.
___________________________________ M.A, M.V.Z. CARLOS MARTÍN AGUÍLAR TREJO
COORDINADOR DE LA CARRERA DE M.V.Z.
COMITÉ PRESIDENTE _____________________________________________________ SECRETARIO _____________________________________________________ VOCAL _____________________________________________________
DEDICATORIAS
A mis padres: Roberto Ross Salido y María Audelia Ramírez Rivera, por
haberme dado la vida, por guiarme por el camino correcto, por los consejos, por el
ii
amor que siempre me han brindado, por creer en mí y por apoyarme en todas mis
decisiones.
A mis hermanas: Cande, Margarita, Audelia, Socorro y Rosy; por
apoyarme y motivarme en todo momento de mi formación académica.
A mis sobrinos: Dulce, Francisco, Carolina, Roberto, Nayeli, Daniel, Sofía
y Pablo, para que algún día tengan la satisfacción de alcanzar su meta .
AGRADECIMIENTOS
A DIOS; por poder contar siempre con él y por darme la dicha de llegar a
este punto de mi vida y dejarme concluir este sueño.
iii
A MVZ Ramón M. Molina Barrios; por toda la ayuda brindada para la
elaboración de esta investigación y su amistad.
A MVZ Sergio Fernández Barreras; por el apoyo brindado, sin el cual
difícilmente hubiera logrado esta meta.
A Granja Rancho Grande, por permitir realizar mi trabajo de campo en
sus, instalaciones, mil gracias.
A Mis Grandes Amigas. Georgina Miranda, Alma Vega, Rosario Salazar y
Gabriela Cervantes, por que siempre conté con ellas en las buenas y en las
malas.
A Mis Maestros; por contribuir a mi formación y compartir conmigo de sus
conocimientos y experiencia.
CONTENIDO
RESUMEN .........................................................................................................vii
LISTA DE CUADROS .......................................................................................ix
LISTA DE GRAFICAS ..........................................................................................x
iv
LISTA DE ABREVIACIONES ................................................................................xi
INTRODUCCIÓN ................................................................................................1
REVISIÓN DE LITERATURA ..................................................................................3
I. INMUNIDAD ..........................................................................................3
II. VACUNACIÓN ......................................................................................4
2.1 Tipos de vacuna...........................................................................4
2.2. Vía de aplicación ....................................................................5
III. SEROTIPOS VACÚNALES .................................................................5
IV. ADYUVANTE ......................................................................................6
4.1. Tipos de adyuvantes ...................................................................6
4.2. Acción de los adyuvantes ...........................................................7
V. INFLAMACIÓN .....................................................................................7
5.1. Inflamación aguda .......................................................................8
5.2. Inflamación crónica ....................................................................9
VI. PRUEBAS SEROLOGICAS .............................................................10
6.1.Inhibición de la hemoaglutinación .............................................11
6.2. Ensayo inmunoenzimático ........................................................11
VII. ENFERMEDAD DE NEWCASTLE ...................................................12
VIII. ENFERMEDAD DE BRONQUITIS INFECCIOSA ...........................15
MATERIALES Y MÉTODOS .............................................................................20
RESULTADOS ..................................................................................................23
DISCUSIÓN ......................................................................................................31
CONCLUSIÓN Y RECOMENDACIONES .........................................................34
LITERATURA CITADA ......................................................................................35
v
RESUMEN
María Dolores Ross Ramírez. Efecto de la vía de aplicación de una vacuna
inactivada oleosa sobre la respuesta inflamatoria local y su correlación con la
respuesta humoral contra la enfermedad de Newcastle (ENC) y Bronquitis
infecciosa (BI) en aves de postura.
Asesores: MVZ. Ramón Miguel Molina Barrios, MVZ. Sergio Manuel Fernández
Barreras. y M.V.Z. Ana Laura Miranda Romero
vi
Con el objetivo de encontrar una vía de aplicación de vacunas oleosas con
una mejor respuesta humoral y fácil manejo en aves de postura, se inocularon 3
grupos de 30 aves por diferentes vías: subcutánea en el cuello, intramuscular en la
región pectoral y subcutánea en región inguinal con una vacuna inactivada y
emulsionada en aceite que contenía los virus de Newcastle y Bronquitis
infecciosa. La evaluación serológica se realizó mediante la técnica de inhibición de
la hemoaglutinación para ENC y ELISA para BI, se recolectaron muestras de
sangre de 15 aves a la semana 0, 3 y 5 posvacunación. Se sacrificaron 5 aves a
la 1ra, 2da y 3ra semanas posvacunación de cada grupo para la descripción
macroscópica y microscópica de la respuesta inflamatoria local y su correlación
con la respuesta humoral. Los resultados obtenido son que las lesiones en el sitio
de inyección durante los tres muestreos, presentan una menor respuesta
inflamatoria en el grupo inoculado en región inguinal, no encontrando diferencias
significativas entre los grupos inoculados en cuello y pechuga. Los resultados
serológicos para la prueba de ELISA y BI se correlacionan con los resultados
obtenidos en la aplicación cervical y pectoral con una caída en los títulos de las
aves que fueron vacunadas en la región inguinal. Lo anterior muestra que la
aplicación inguinal aunque es menos traumática para el ave no cumple con el
objetivo de proporcionar una inmunidad fuerte y prolongada. Siendo la región del
cuello la que proporciona una inmunidad fuerte y prolongada para la ENC y BI.
vii
LISTA DE CUADROS
CUADROS Página
1 Comparaciones de las lesiones macroscópicas de la 1ra., 2da. y 3ra. Semana ..................................................................36 2 Comparación de las lesiones microscópicas de la
1ra; 2da; y 3ra semana.....................................................................40
viii
LISTA DE GRAFICAS GRAFICAS Página 1 Resultados serológicos de la prueba de HI para la ENC ...................................................................................................41 2 Resultados serológicos de la prueba de ELISA de la enfermedad de BI....................................................................................43
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LISTA DE ABREVIACIONES Abreviación 1 BI.- Bronquitis infecciosa.
2 ELISA.- Ensayo inmunoenzimático ligado a enzimas.
3 ENC.- Enfermedad de Newcastle.
4 HI.- Inhibición de la hemoaglutinación.
5 S/P.- Coeficiente de la muestra sobre positivo.
6 UHA.- Unidades hemoaglutinantes.
x
xi
INTRODUCCIÓN
En la práctica, no existe un programa de vacunación rígido e infalible que
pueda ser utilizado en parvadas de aves de una determinada región. Los
programas varían de acuerdo con las enfermedades presentes en la zona, el
grado de desafío, la aplicación, el adyuvante, la edad y el serotipo utilizado, por
estas razones, la vacunación es un riesgo programado y por ello, es importante
que este proceso sea planeado y supervisado cuidadosamente.
Para que las vacunas desarrollen la inmunidad esperada y las aves sean
protegidas contra infecciones y enfermedades; deben manejarse ó administrarse
adecuadamente; para supervisar sus efectos es indispensable contar con métodos
objetivos para medir o evaluar la inmunidad de las parvadas.
Las vacunas inactivadas oleosas tienen una alternativa más popular que las
vacunas activas en el control de las enfermedades en las aves. Por acción de
estos inmunógenos se presentan reacciones dando origen a una respuesta
inflamatoria granulomatosa en el sitio de aplicación con proliferación de
macrófagos, células epiteliales y fibroblastos, alrededor de pequeños quistes en el
músculo. Es por esta razón la importancia de encontrar otro sitio de aplicación que
afecte menos ante la reacción inflamatoria y sin alteración de la respuesta
humoral.
Este trabajo pretende establecer la ventaja de la aplicación de vacunas
oleosas en la región inguinal vía subcutánes, facilitando el manejo y reduciendo
los riesgos de la aplicación en la región cervical y pectoral; además cuantificar el
efecto de la vía de aplicación de la vacuna oleosa sobre la respuesta inflamatorio
local y su correlación con la respuesta humoral medida como nivel de anticuerpos
1
contra la enfermedad de Newcastle y Bronquitis infecciosa. Se espera obtener
una mejor respuesta humoral así como encontrar una respuesta inflamatoria local
menor en el sitio de aplicación de la vacuna en la región inguinal que en la cervical
y/o intramuscular.
REVISIÓN DE LITERATURA
I. INMUNIDAD
Existen dos métodos por los que un animal se puede proteger contra una
enfermedad infecciosa, los cuales consisten en la inmunidad activa y pasiva.
2
Ambas se pueden adquirir en forma natural y artificial. La activa natural se
produce como consecuencia de haber padecido una enfermedad clínica,
inaparente o subclínica. La activa artificial implica la administración de antígenos
a un animal, para el desarrollo de una respuesta de tipo protector, que puede estar
mediada por anticuerpos, por células o por ambos. La desventaja es que no se
obtiene la protección de manera inmediata, sin embargo, una vez establecida es
de larga duración y capaz de reestimular dicha respuesta por aplicaciones
repetidas del antígeno o por la exposición a la enfermedad (Tizar, 1997;
Zarzuelo,1982). La pasiva natural se produce mediante los anticuerpos que la
madre haya previamente formado, como consecuencia de haber padecido una
enfermedad inaparente, subclínica o clínica, o de una previa vacunación y que
transmite a sus descendientes a través de la placenta, por el calostro o yema. Las
reproductoras transmiten por la yema una inmunidad pasiva que persiste durante
los 15 - 20 días, pero que en general es insuficiente para proteger a los pollitos de
las enfermedades. La pasiva artificial consiste en la aplicación de antisueros
específicos que se producen en un animal donador y son purificados por métodos
físicos permitiendo una protección inmediata a los animales susceptibles (Halliwell,
1992; Tizar, 1997;Zarzuelo,1982).
II. VACUNACIÓN
Una vacuna ideal debe dar una protección fuerte y prolongada, ser barata,
estable, adaptable a la aplicación en grandes cantidades de aves y
preferentemente debe de estimular una respuesta que se pueda distinguir de la
3
causada por la infección natural, de manera que la vacunación y la erradicación
avancen al mismo tiempo (Tizar, 1997).
Al administrar a un animal un antígeno derivado de un agente infeccioso,
produce una respuesta inmunitaria y se logra una respuesta contra ese agente
infeccioso. Para determinar la eficiencia de la vacunación como método de control
de una enfermedad específica, debe existir la absoluta seguridad en la
identificación del microorganismo causal y se debe determinar si una respuesta
humoral puede proteger contra la enfermedad en cuestión. Para que una vacuna
produzca una reacción efectiva y prolongada contra cierta enfermedad, debe ser
superior a la que produce la infección natural. Antes de utilizar una vacuna
debemos estar seguros de que los riesgos de utilización no superan los que
acompañan a la posibilidad de contraer la propia enfermedad (Calnek,1991;
Folitse et.al; 1997; Tizar, 1997).
2.1. Tipos de vacunas
Para los aislamientos y propagación del virus es necesario replicarlos en
embrión de pollo o cultivos celulares, que debido a su eficiencia y sensibilidad
permiten obtener altos títulos. Las vacunas vivas son aquellas cuyas cepas virales
replicadas son naturalmente apatógenas o de patogenicidad reducida
artificialmente, por lo que su preparación requiere proporcionar el vehículo
necesario para mantener la viabilidad del producto (Calnek, 1991; Zarzuelo, 1982).
Las vacunas inactivadas son; por lo común, producidas del líquido
alantoideo o sobrenadante de cultivos celulares al igual que las vivas, pero con la
diferencia de que los agentes han sido inactivados, por la acción del calor, agentes
químicos (formol, betapropiolactano, etc.), físicos (luz ultravioleta, ultrasonido, etc.
4
) y más frecuente por la acción simultánea de diversos métodos, además se
mezclan con un adyuvante portador (Cajavec et.al; 1995; Calnek, 1991; Zarzuelo,
1982).
2.2. Vía de aplicación
Las vacunas inactivadas se administran por inyección, ya sea intramuscular
o subcutánea. Las vacunas vivas se aplican por instilación intranasal, gotas en
ojo, e inmersión del pico, agua de bebida o aplicación parenteral (Calnek, 1991).
III. SEROTIPOS VACUNALES
En la inmunización contra Bronquitis infecciosa (BI) se emplean virus tanto
vivos - activos como inactivados. Dicho virus de BI presenta varios serotipos y los
principales son Massachussets, Connecticut, Holland, Arkansas, Florida, Iowa y
las nefrotóxicas Haltey, Gray y T. Australiana . Las cepas que se emplean para las
vacunas activas a menudo se atenúan por medio de pasajes seriados en
embriones de pollo. La cepa Massachusetts se usa ampliamente debido a que los
aislamientos iniciales de muchos países son de ese serotipo ( Calnek, 1991).
Las cepas del virus de ENC se agrupan según su patogenicidad de manera
conveniente como velogénica, mesogénica y lentogénicas, basados en la
mortalidad en embriones de pollos en menos de 60 horas, 60 a 90 horas y más de
90 horas de manera respectiva. Los serotipos más importantes son; Doyle, Beach,
Beaudette e Hitchner. Siendo las cepas más benignas; Hitchner B1 y LaSota, las
más utilizadas para las vacunas. Con frecuencia se usan combinaciones de
5
vacunas activas del virus de la Bronquitis Infecciosa con el virus de la
enfermedad de Newcastle ( Calnek, 1991).
IV. ADYUVANTES
El término adyuvante deriva del latín “ayudar, colaborar “ y puede definirse
como aquella sustancia que incorpora o se inyecta simultáneamente con un
antígeno impidiendo la rápida absorción de la vacuna o una mayor respuesta
inmune primaria, con lo cual se logra una mayor cantidad de estímulos antigénicos
y por lo tanto una mayor eficiencia de la vacuna. ( Halliwell, 1992; Zarzuelo,
1982).
4.1. Tipos de adyuvantes
Son varios los adyuvantes que actúan como vehículo y que además sirven
como estimulantes inmunológicos específicos. Los más potentes de éstos
incluyen: Mycobacterias, partículas de bentonita, emulsiones de aceite mineral,
sulfato de berilio, silicón, caolín, carbono, etc. (Haliwell, 1992; Zarzuelo, 1982).
4.2. Acción de los adyuvantes
Colocados dentro de los tejidos, estas sustancias inician la acción de los
leucocitos para remover sustancias extrañas y someterlas a análisis
inmunológicos; pero debido a que éstos no pueden fagocitar eficientemente las
emulsiones de aceite mineral ó partículas de bentonita, se convierten entonces en
macrófagos irritados, produciendo dosis masivas de agentes oxidantes que
6
ocasionan su propia destrucción y con ello la liberación de linfocininas, citocinas y
otros quimiotácticos, los cuales generan la atracción de macrófagos adicionales en
un ciclo suicida que tornan en la formación de fibrosis y granulomatosis. El tráfico
masivo de macrófagos permite, que un número suficiente de células portadoras de
antígeno alcance el torrente circulatorio e inicien una respuesta inmune efectiva
principalmente en el bazo (Paz, 1995).
V. INFLAMACIÓN
La inflamación es un proceso que empieza inmediatamente después de una
lesión subletal al tejido terminado con la destrucción permanente del tejido o con la
cicatrización absoluta del mismo. Es la respuesta de los tejidos a la irritación o a la
lesión, un mecanismo protector de vital importancia, ya que participan factores
defensivos, como las inmunoglobinas, el complemento y las células fagocitarias,
que normalmente están en la corriente sanguínea, pero tienen acceso directo a los
lugares de invasión bacteriana, viral o de lesión tisular. Las inmunoglobinas y los
componentes del complemento se encuentran, en los líquidos tisulares, en
concentraciones mucho menores que en la sangre (Trigo, 1993).
5.1. Inflamación aguda.
Se desarrolla aproximadamente en 30 minutos después que se lesiona o
infecta un tejido, presentándose los signos cardinales (calor local, rubor, edema,
dolor y pérdida de la función), siendo el resultado directo de los cambios en el
comportamiento de los vasos sanguíneos locales, inmediatamente después del
daño hay una constricción transitoria en las arteriolas locales que poco después se
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continúa con una dilatación de los pequeños vasos sanguíneos en el área,
aumentando el flujo sanguíneo hacia la zona dañada significativamente durante
varias horas, disminuyendo poco a poco a sus valores normales. En la dilatación
de los vasos sanguíneos existe un aumento en su permeabilidad, y se exuda un
plasma rico en proteínas al interior de los tejidos, donde produce edema y
tumefacción local.
Después de 3 a 4 horas del comienzo de los cambios vasculares, los
leucocitos (heterófilos, basófilos y monocitos) se adhieren al endotelio vascular. En
caso de que los vasos sanguíneos estén lesionados, las plaquetas pueden fijarse
a las paredes vasculares y liberar factores de la coagulación y vasoactivos,
después los leucocitos emigran hacia los tejidos de los alrededores, a través de
las fenestraciones entre las células endoteliales, en 12 horas los heterófilos,
basófilos, linfocitos y algunos trombocitos llegan a los tejidos inflamados, los
monocitos sanguíneos se mueven con más lentitud y por eso llegan más tarde.
Una vez dentro de los tejidos, las células son atraídas por factores quimiotácticos
hacia los lugares donde se encuentra el antígeno y el tejido lesionado, ahí se
dedican a la fagocitosis, destruyen cualquier sustancia exógena y, en el caso de
los monocitos, eliminan los tejidos muertos, en 36 a 48 horas las células
linfocíticas son las más predominantes (Trigo, 1993; Riddell, 1987).
5.2. Inflamación crónica
Después de varias horas del proceso agudo los macrófagos liberan
fibronectina e interleucina 1, atraen a los fibroblastos. La interleucina promueve la
proliferación de este último tipo celular y esas células comienzan a sintetizar el
colágeno necesaria para reparar cualquier lesión tisular, el colágeno tiende a
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depositarse a lo largo de la lesión y se remodela de forma gradual durante
semanas y meses, a medida que el área retorna poco a poco a la normalidad. Si la
causa de la inflamación se elimina de manera rápida y completa, entonces la
cicatrización seguirá en acontecimiento destacable, sin embargo, cuando el
material nocivo no puede ser destruido, entonces puede seguir un proceso de
larga duración, en esos casos, el estímulo constante y prolongado de tipo
quimiotáctico hace que llegue continuamente nuevos heterófilos, macrófagos y
fibroblastos, y que se depositen un exceso de colágeno en torno al foco de
irritación.
Si el irritante persistente no tiene carácter antigénico (adyuvante) entonces
serán pocos los leucocitos que resultan atraídos hacia la lesión, se formarán en 72
horas células epiteloides y gigantes produciendo granulomas periféricos, capilares
perivasculares que tratarán de destruir el material nocivo. Si la sustancia es tóxica
para los macrófagos, se liberaran las enzimas procedentes de este tipo celular, lo
que llevará a una excesiva lesión de los tejidos y por último, a la formación de
fibrosis y cicatrices.
Si las sustancias exógenas son inmunógenas, entonces la respuesta inflamatoria
inicial puede ser similar a la reacción de hipersensibilidad retardada, estas
reacciones granulomatosas crónicas causadas por reacciones frente a un cuerpo
extraño o respuestas de tipo inmunitario, pueden aumentar de tamaño y afectar a
algunos tejidos normales. En 7 a 14 días algunos irritantes inmunológicos causan
agregación linfoide con centros germinativos conocidos como nódulos linfoide
(Trigo, 1993; Riddell, 1987).
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VI. PRUEBAS SEROLOGICAS
La efectividad de los programas de vacunación puede medirse o evaluarse
mediante seguimientos serológicos. Existen diferentes métodos para evaluar la
respuesta de las aves, como resultado de la vacunación. Algunos de estos
métodos pueden ser: Aislamiento de virus (en cultivo celular, en embrión de pollo),
identificación del virus(inmunofluorescencia, hemoaglutinación) y titulación de
anticuerpos específicos(neutralización viral por reducción de placas, virus
neutralización en embrión de pollo, inhibición de la hemoaglutinación). ( Villegas,
1996; Calnek, 1991).
6.1. Inhibición de la hemoaglutinación
La hemoaglutinación es inhibida por anticuerpos específicos contra las
hemoaglutininas presentes en algunos virus, esto se debe a que los anticuerpos
inhibidores bloquean el sitio de unión de los virus con los glóbulos rojos. La prueba
de inhibición de la hemoaglutinación se utiliza como método para identificar un
virus específico y para determinar la presencia de anticuerpos inhibidores de la
hemoaglutinación. Las pruebas de IH se pueden realizar de dos maneras
generales.
Método ALFA. Consiste en realizar diluciones seriadas de una suspensión
de virus y agregar una cantidad constante de suero a cada tubo. Método BETA.
En este procedimiento se mantiene constante la cantidad de virus que se agrega a
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cada tubo mientras el suero problema se diluye en forma seriada (Beard,1992;
Tizar, 1997; Yamanaka et.al; 1993).
6.2. Ensayo inmuno enzimático
La vigilancia serológica es una herramienta esencial en la industria avícola.
El ensayo inmuno enzimático (ELISA) es un sistema ampliamente aceptado y
usado en la vigilancia de enfermedades aviares. La técnica es simple, segura,
sensible y rápida, detecta anticuerpos contra la mayoría de los patógenos, y ha
permitido que la prueba analice los resultados computarizados, que ha hecho
posible formular evaluaciones a gran escala de los protocolos de vacunación. Es
un sistema heterogéneo, en donde el antígeno o anticuerpo primero se fija a un
soporte inerte y luego se hace reaccionar con el antígeno o anticuerpo
correspondiente, que estará marcado con una enzima, se lava el conjugado que
no reaccionó y se mide la capacidad de hidrólisis de la enzima sobre su
correspondiente substrato incoloro a un producto coloreado por medio de un
equipo computarizado (Cervantes, 1995; Linnea, 1994; Merino, 1999; Mutalib y
Boyle,1994 ;Villegas, 1996).
VII. ENFERMEDAD DE NEWCASTLE (ENC)
Definición: Es una enfermedad viral altamente contagiosa que afecta
varias especies aviares, manifestándose por signos respiratorios, digestivos y
nerviosos en la mayoría de las aves de cualquier edad. En el hombre llega a
producir conjuntivitis unilateral.
Sinónimo: Neumoencefalitis aviar, Seudopeste y peste aviar.
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Etiología: Es causada por un Paramixovirus cuya característica principal
es la capacidad de aglutinar los glóbulos rojos de ciertas especies animales como:
anfibios, reptiles, aves, ratón, cobayos y humano.
Virulencia: No presenta diferencias antigénicas marcadas, pero sí en el
grado de patogenicidad; con base a esto, las cepas se han clasificado, según el
tiempo que tardan en matar el embrión de pollo: Lentogénica, en 96 horas o más;
mesogénicas, en 76 horas a 96 horas; velogénicas, en 24 horas a 72 horas.
( Beard, 1992; Calnek, 1991; Rojo, 1991;).
Transmisión: Se transmite principalmente por aerosoles y contacto directo,
pero también son importantes el agua y el alimento contaminados, así como el
personal de la granja y el equipo. También existe la transmisión a partir de
portadores sanos. (Beard, 1992; Calnek, 1991; Rojo, 1991;)
Difusión: Su difusión es rápida tanto de ave a ave, como en la parvada, ya
que fácilmente se difunde por agua, alimento y aire contaminados.
Periodo de incubación: El periodo de incubación varía de 2 a 15 días,
dependiendo de: la cantidad del virus, el tipo de cepa, la edad del animal, y la
susceptibilidad de la especie.
Tipos de presentación: Por el tipo de presentación, la enfermedad de
Newcastle se clasifica en:
Doyle, causadas por cepas velogénicas vicerotrópicas o asiáticas.
Beach, causada por cepas velogénicas.
Beaudette, causada por cepas mesogénicas.
Hitchner, causada por cepas lentogénicas.
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Morbilidad: De 50 a 100 %. Mortalidad: De 10 A 100%.
Ambos parámetros varían según la cepa y el estado inmune de la parvada.
Signos :
Tipo Doyle: es la más común en México y produce signos como:
Respiratorios: Disnea, estornudos, estertores traqueales y estertores bronquiales.
Digestivos: Diarrea verdosa profusa, a veces sanguinolenta.
Nerviosos: Incoordinación, espasmos tónico – clónico ( tic), tortícolis, opistótonos,
epistótonos y parálisis.
Además pueden aparecer aves muertas, sin signos aparentes y en algunos casos,
baja de postura hasta cero.
Tipo Beach o neumoencefalitis: Produce signos como:
Respiratorios: Disnea, estornudos, estertores traqueales y estertores bronquiales.
Nerviosos: Incoordinación, espasmos tónico – clónico ( tic), tortícolis, opistótonos,
epistótonos y parálisis. En algunos casos, baja de postura hasta cero.
Tipo Beaudette: Produce un cuado respiratorio y sólo producirá signos nerviosos
en aves menores de cuatro semanas de edad.
Respiratorios: Disnea, estornudos, estertores traqueales y estertores bronquiales.
Tipo Hichner: Produce solamente cuadro respiratorio como:
Disnea, estornudos, estertores traqueales y estertores bronquiales.
Lesiones:
Tipo Doyle: Conjuntivitis, traqueítis catarral, congestiva o hemorrágica,
aerosaculitis catarral, petequias y sufusiones en la grasa coronaria y abdominal,
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hemorragias en el proventrículo, ruptura de yemas, edema facial, opacidad de la
córnea, úlceras botonosas en el intestino delgado, las tonsilas cecales y el recto.
Tipo Bech: Conjuntivitis, traqueítis catarral, aerosaculitis catarral, petequias y
sufusiones en la grasa coronaria y abdominal, hemorragias en el proventrículo,
congestión generalizada, ruptura de yemas.
Tipo Beaudette: Conjuntivitis, traqueítis catarral, aerosaculitis catarral y ruptura de
yemas.
Tipo Hitchner: Conjuntivitis, traqueítis catarral, aerosaculitis catarral.
Diagnóstico diferencial:
Por el cuadro respiratorio con: Bronquitis infecciosa ( en casos de enfermedad de
Newcastle tipo lentogénico), laringotraqueítis ( en casos de la enfermedad de
Newcastle tipo velogénico), coriza infecciosa y enfermedad respiratoria crónica.
Por el cuadro nervioso, puede confundirse con: Encefalomielitis aviar,
encefalomalacia y enfermedad de Marek.
Por la lesión en el proventrículo, puede confundirse con: Aflatoxicosis, Infección de
la bolsa de Fabricio, síndrome de mala absorción y enfermedad de Marek.
Diagnóstico de laboratorio:
Aislamiento del virus en: Cultivo celular y/o embrión de pollo.
Identificación del virus por: Inmunofluorescencia y/o hemoaglutinacón.
Titulación de anticuerpos específicos como: Neutralización viral por reducción de
placas y/o Inhibición de la hemoaglutinación.
Tratamiento: No existe. Se recomienda el uso de antibióticos de amplio
espectro a fin de evitar complicaciones bacterianas.
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Control: Vacunación como medida de control, Calendario de vacunación
adecuado a la zona. Vacunación sobre brote. Las cepas que se utilizan para
vacunaciones primarias son de tipo lentogénicas de virus vivo que se conocen
como: Hitchner B1, F (Asplin) y V4.
Para vacunas secundarias se utilizan las cepas mesogénicas de virus atenuado
como: Strain H, Mukteswar y Komarov. Roakin es de cepa de virus vivo y LaSota
es de tipo lentogénica de virus vivo.
Vía de aplicación: Puede ser oral, ocular, aspersión, intramuscular y
subcutánea. (Baez, 1994; Beard, 1992; Calnek, 1991; Rojo, 1991).
VIII. BRONQUITIS INFECCIOSA
Definición: Es una enfermedad respiratoria viral aguda, altamente
contagiosa de las aves, caracterizada por estertores traqueales, tos y estornudos;
en aves adultas suele haber un descenso en la producción de huevo, las aves
jóvenes mueren a causa de manifestaciones respiratorias o renales.
Etiología: La enfermedad es producida por un coronavirus que presenta
diferencias antigénicas y en su patogenicidad. Las cepas más conocidas son:
Massachusetts, Connecticut, JMK, Arkansas, Georgia, Gray, Holte, T.
Australiana, Doorrn, D 207, Delawer, Florida, New Hampshire.
Las cepas llegan a presentar reacciones antigénicas cruzadas entre sí, y en
algunos casos sólo en un sentido; por ejemplo: la cepa Massachussets protege
contra la Connecticut, pero ésta no protege contra aquélla. En la actualidad se
conocen más de veinte cepas.
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Transmisión: La enfermedad se transmite en forma horizontal por
aerosoles de gallinas enfermas o portadoras, así como por corriente de aire,
personas, equipo contaminado.
Difusión: Es muy rápida, tanto en los animales de una misma caseta como
los de una caseta a otra. En 24 a 48 horas, casi el 100 % de las aves presentan
signos respiratorios.
Periodo de incubación: El periodo de incubación varía de 18 a 36 horas,
según la dosis y cepa de que se trate.
Cuadro clínico: Se presenta como un cuadro respiratorio, aunque lesiona
también los aparatos urinarios y reproductivo; la intensidad de signos de cada
sistema depende, en gran parte, de la edad de las gallinas y de la cepa viral. En
todos los casos, el virus inicialmente ataca al aparato reproductor y es el agente
que con más frecuencia desencadena la enfermedad respiratoria crónica
complicada.
Presentación: La presencia de la bronquitis varía con la cepa.
Massachusetts, Connecticut, JMK, Georgia, Arkansas afectan al aparato
respiratorio y Gray, Holte, T. Australiana al aparato urinario.
Cuando el virus de Bronquitis infecciosa infecta a pollitas de 1 a 14 días de
edad, les produce un daño irreversible (atrofia) en el oviducto, pero dicha lesión
será evidente hasta que las gallinas tengan edad para romper la postura. Cuando
infecta aves adultas, lesiona el ovario y el oviducto, causando descenso de
postura y alteraciones del cascarón y de la clara.
Morbilidad: De 100 %.
16
Mortalidad: Menor del 5 % si no se complica.
Signos: Depresión, pérdida de peso y apetito.
Respiratorios: disminuye su severidad conforme avanza la edad del animal;
estornudos, estertores traqueales, tos, disnea, descarga nasal, con polvo pegado
a las fosas nasales y ojos llorosos.
Reproductivos: La producción disminuye entre 10 % y un 50 % por cuatro
semanas, y luego sube durante cuatro semanas sin llegar a lo normal, mala
calidad del cascarón (delgado, rugosos, despigmentado, deforme), albúmina
acuosa, sin diferenciación con la albúmina espesa, baja la fertilidad y la
incubabilidad del huevo.
Renales: Disminuye su severidad conforme avanza la edad del animal,
deyecciones blancas (por la presencia de uratos), deshidratación, plumas
manchadas de blanco alrededor de la cloaca (en jóvenes) y poliuria.
Lesiones:
Respiratorias: Exudado seroso o catarral en fosas nasales, senos y tráquea,
aereosaculitis con exudado catarral y opacidad de los sacos y tapones caseosos
traqueobronquiales.
Reproductivas: Atrofia del oviducto, quistes ováricos y ruptura de yema en la
cavidad abdominal.
Renales: Nefromegalia, palidez del riñón, túbulos y uréteres distendidos y
presencia de cristales de ácido úrico en riñón y uréteres.
Diagnóstico diferencial: La enfermedad puede confundirse clínicamente por el
cuadro:
17
Respiratorio: Enfermedad de Newcastle tipo Hitchner (requiere forzosamente
laboratorio para su diferenciación); coriza infecciosa, laringotraqueítis aviar y
enfermedad respiratoria crónica.
Reproductivo: En cuanto a la baja de postura puede confundirse con: Enfermedad
de Newcastle tipo Beaudette, Beach o Doyle, síndrome de la baja de postura y
deshidratación.
Renal : Infección de la bolsa de Fabricio (en jóvenes); Micotoxicosis,
deshidratación e intoxicación por sulfas.
Diagnóstico de laboratorio:
Titulación de anticuerpos específicos: Precipitación en gel agar, anticuerpos
fluorescentes, inhibición de la hemoaglutinación, fijación del complemento,
hemoaglutinación, virus neutralización en embrión de pollo.
Aislamiento del virus: Cultivo celular, cultivo de órganos y embrión de pollo
Tratamiento: No existe. Se recomienda administrar antibiótico de amplio
espectro para prevenir infecciones bacterianas.
Prevención: La medida de prevención y control es calendario de
vacunación adecuado a la zona. No se vacune sobre brote, por la rapidez con que
se difunde la enfermedad. Las cepas utilizadas son Massachusetts y Connecticut
combinadas o únicamente Massachusetts.
Vía De Aplicación: La vía de aplicación puede ser por aspersión, ocular y
oral. (Baez, 1994; Beard, 1992; Calnek, 1991; Rojo, 1991).
18
MATERIALES Y MÉTODOS
LOCALIZACIÓN DEL SITIO EXPERIMENTAL
El estudio se llevó a cabo en una granja avícola de gallinas de postura
comercial localizada en el kilómetro 13 de la carretera al Quiriego, comisaría de
Fundición; Municipio de Navojoa, Sonora. Las pruebas serológicas; inhibición de
la hemoaglutinación (HI) y ensayo inmuno enzimático (ELISA) fueron realizadas
por el personal del laboratorio Pecuarius, los sacrificios se realizaron en la sala de
necropsias y los estudios histopatológicos en el laboratorio de Anatomía
patológica, ambos del Instituto Tecnológico de Sonora.
METODOLOGÍA
Se utilizaron 90 aves de la línea Dekalb-XL, de 14 semanas de edad; a las
cuales se les había aplicado una vacuna comercial atenuada que contenía
antígenos contra la enfermedad de Newcastle y Bronquitis Infecciosa a la 1ª
semana de edad por vía ocular y a la 6ª semana de edad la vacuna de Bronquitis
Infecciosa por vía ocular.
19
Se formaron 3 grupos C, P e I (nominados así por la relación del sitio de
aplicación) de 30 aves cada uno de 14 semanas de edad a los que se les aplicó
una vacuna comercial inactivada y emulsionada en aceite mineral que contenía
los virus de enfermedad de Newcastle cepa LaSota y Bronquitis infecciosa
serotipo Massachusetts; (además contiene la bacteria Haemophillus
paragallinarum, cuya respuesta no se evaluó en este trabajo), a una dosis de 1 ml
por ave. Al grupo C se le aplicó la vacuna en el cuello por vía subcutánea, al
grupo P intramuscular en la pechuga y el grupo I recibió la vacuna en la región
inguinal por vía subcutánea.
15 aves de cada grupo fueron sangradas por medio de la punción cardíaca
a través de la entrada del tórax, para realizar pruebas en la semana 0, 3 y 5 post-
vacunación. Los títulos contra la enfermedad de Newcastle fueron medidos por la
prueba de HI y los títulos contra la enfermedad de Bronquitis Infecciosa por la
prueba de ELISA utilizando los kits IDEXX1. Estas pruebas se realizaron por el
personal capacitado del laboratorio Pecuarius, por ser el laboratorio que utiliza la
empresa.
Se sacrificaron 5 aves a la 1ª, 2ª y 3ª semana post-vacunal de cada grupo
en donde primero se realizó una descripción detallada de las lesiones
macroscópicas. Se recolectaron muestras de los tejidos lesionados, una porción
de piel del cuello, músculo pectoral y piel de la ingle, se guardaron en frascos
limpios previamente identificados y fueron llevados hasta el laboratorio de
histopatología. Posteriormente se fijaron con formol amortiguado al 10% para su
procesamiento histológico, con inclusión de parafina y utilizando la tinción de
Hematoxilina y eosina y la tinción tricrómica de Masson, los tejidos procesados se
20
observaron al microscopio óptico y se describieron los detalles histopatológicos
característicos de las lesiones observadas.
VARIABLES A ANALIZAR
* Títulos de anticuerpos contra la enfermedad de Newcastle medidos por la prueba
de Inhibición de la Hemoaglutinación (HI).
* Títulos de anticuerpos contra la enfermedad de Bronquitis infecciosa medidos
por la prueba de ELISA.
* Grado de lesión de acuerdo al tiempo y vía post-inoculación, asociado con la
región de aplicación.
* Correlación del sitio de aplicación con la respuesta humoral.
Análisis estadísticos.
Para la expresión de los resultados se utilizaron parámetros de tendencia central y
medidas de dispersión, se expresaron en cuadros y gráficas. Para el análisis
estadístico se utilizó la prueba de análisis de varianza (Daniel, 1996), para evaluar
las posibles diferencias significativas entre los diferentes tratamientos, utilizando el
programa Epistat.
21
RESULTADOS
Las principales características macroscópicas encontradas a la inspección
de las lesiones en el sitio de aplicación son mostradas en el Cuadro No. 1.
A la primer semana, se observó:
En las aves del grupo C inyectadas en el cuello se detectó una respuesta
subaguda moderada caracterizada por exudado serofibrinoso moderado, edema
ligero y líquido amarillo difuso, afectando tejido subcutáneo tráquea, esófago y
timo.
En las aves del grupo P de aplicación en la región pectoral presenta una
respuesta subaguda moderada, caracterizada por exudado serofibrinoso ligero en
fascia muscular, en músculo presenta líquido amarillo.
En las aves del grupo I que recibieron la vacuna en el sitio inguinal se
observó una respuesta subaguda ligera, caracterizada por exudado serofibrinoso
ligero en tejido subcutáneo y fascia muscular, líquido amarillo difuso.
A la segunda semana se observó:
A las aves que se les aplicó la vacuna en la región cervical se detectó una
respuesta subaguda severa caracterizada por exudado serofibrinoso moderado,
una respuesta granulomatosa difusa ligera, fibrosis ligera que involucra a tejido
graso, tráquea, esófago y timo.
En las aves del grupo P de aplicación en la región pectoral se detectó una
respuesta subaguda, moderada, caracterizada por exudado serofibrinoso ligero en
22
fascia muscular, una respuesta granulomatosa focal moderada con adherencias,
hemorragias petequiales ligeras de fascia y músculo pectoral.
En la región inguinal se localizó exudado serofibrinoso escaso en tejido
conjuntivo y fascia muscular, lesión granulomatosa difusa ligera en tejido
conjuntivo, inflamación aguda moderada.
A la tercera semana se observó:
Las aves inyectadas en la región del cuello presentaron una respuesta
crónica severa, caracterizada por exudado serofibrinoso severo, con respuesta
granulomatosa difusa severa, adherencia severa que involucra tejido subcutáneo,
tejido graso, tráquea, esófago y timo.
En aves vacunadas en el sitio pectoral se observó una respuesta crónica
severa; con ligero exudado serofibrinoso en fascia muscular, con una lesión
granulomatosa difusa ligera.
La aplicación de la vacuna en la región inguinal presentó ligero exudado
serofibrinoso en tejido conjuntivo y fascia muscular, lesión granulomatosa difusa
ligera en fascia muscular, inflamación crónica, moderada.
23
CUADRO No. 1 Comparaciones macroscópicas de la 1ra. , 2da. Y 3ra. Semana.
Semana Región Exudado Serofibrinoso
Líquido Amarillo
( Vacuna)
Reacción Granulomatosa
Aderencias Duración Gravedad
Cuello Moderado Presente Ausente Ausente Subaguda Moderada Pectoral Ligero Presente Ausente Ausente Subaguda Moderada
1 ra.
Inguinal Ligero Presente Ausente Ausente Subaguda Ligera Cuello
Moderado
Ausente
Difusa Ligera
Ligera
Subaguda
Severa
Pectoral
Ligero
Ausente
Focal Moderada
Hemorragia Ligera
Subaguda
Moderada
2 da. Inguinal
Ligero
Ausente
Difusa Ligera
Ausente
Aguda
Moderada
Cuello
Severo Ausente Difusa Severa
Severa Crónica
Severa
Pectoral
Ligero Ausente Difusa Ligera
Ausente Crónica
Severa
3 ra.
Inguinal
Ligero Ausente Difusa Ligera
Ausente Crónica
Moderada
Tejido inflamado según el sitio de aplicación. • Cuello: piel, tejido conjuntivo, tráquea y esófago. • Pectoral: piel y músculo. • Inguinal: piel y músculo.
24
Las principales características microscópicas de las lesiones en el sitio de
aplicación son presentadas en el Cuadro No. 2.
Durante la primer semana se observó:
Los cortes de piel de la región del cuello presentan una reacción
inflamatoria severa caracterizada por linfocítos, monocitos, heterófilos moderada,
infiltrado linfocitario en tejido conjuntivo de fascias, infiltrado perivascular ligero,
vascularización, reacción granulomatosa multifocal ligera con exudado caseoso y
formación de espacios dilatados.
Los cortes de músculo pectoral presentan, una respuesta inflamatoria
moderada a severa en fascias, caracterizada por linfocitos, monocitos, heterófílos
ligero, infiltrado linfocitario multifocal en músculo, infiltrado perivascular ligero,
con vascularización, reacción granulomatosa multifocal ligera, formación de
espacios dilatados y fibrosis ligera.
Los cortes de piel y músculo en ingle presentan una respuesta inflamatoria
moderada a severa, caracterizada por linfocitos, monocitos, heterófilos ligera en
fascia, infiltrado linfocitario en fascia muscular, vascularización, reacción
granulomatosa multifocal difusa ligera con exudado caseoso y formación de
espacios dilatados.
A la segunda semana se observó:
Los cortes de piel tráquea y esófago del cuello presentan una reacción
inflamatoria severa caracterizada por linfocitos, monocitos, heterófilos moderada,
infiltrado linfocitario en tejido conjuntivo de fascias, infiltrado perivascular ligero,
vascularización, reacción granulomatosa multifocal de ligera a moderada, con
exudado caseoso, formación de espacios dilatados y fibrosis ligera.
25
Los cortes de músculo pectoral, presenta una reacción de ligera a
moderada en fascia muscular caracterizada por linfocitos, monocitos moderados,
infiltrado linfocitico en músculo, con infiltrado perivascular ligero, vascularización,
reacción granulomatosa multifocal ligera y fibrosis ligera.
Los cortes de músculo de la región inguinal, en fascia presenta reacción
ligera a moderada caracterizada por linfocitos, monocitos moderados, con infiltado
linfocítico en músculo formando nódulos linfocíticos, infiltrado perivascular ligero,
vascularización.
A la tercera semana se observó:
Los cortes de cuello que incluyen piel, tráquea, esófago, presentan una
reacción moderada a severa caracterizada con linfocitos, monocitos moderados,
infiltrado linfocitico en tejido conjuntivo, con infiltrado perivascular ligero,
vascularización, reacción granulomatosa multifocal ligera y fibrosis severa.
En los cortes de músculo pectoral, presentaron en fascia una reacción
ligera caracterizada por linfocitos, monocitos, heterófilos, infiltrado linfocítario en
músculo formando nódulos linfoides, infiltado perivascular ligero, vascularización y
espacios dilatados.
Los cortes de músculo inguinal en fascia presentaron reacción ligera a
moderada caracterizada por linfocitos, monocitos, infiltrado linfocitario en músculo
formando nódulos linfoides, infiltrado perivascular, vascularización y espacios
dilatados.
CUADRO No. 2 Cuadro comparativo de las principales lesiones microscópicas de la 1ra; 2da; y 3ra semana. Semana Región
R.I
C
I.P
I.L
N.L
V
R.G
E.C
E.D
F
26
Cuello Severa Linfocítos Monocítos Heterófilos
Ligero + - + Ligera
+ + -
Pectoral Moderada a
Severa
Linfocítos Monocítos Heterófilos
Ligero + - + Ligera
+ + Ligera
1 ra.
Inguinal Moderada a
Severa
Linfocítos Monocítos Heterófilos
-
+ - + Ligera
+ + -
Cuello Severa
Linfocítos Monocítos Heterófilos
Ligero + - + Ligera a Moderado
- + Ligera
Pectoral Ligera a Moderada
Linfocítos Monocítos
Ligero + - + Ligera
- - Ligera
2 da.
Inguinal Ligera a Moderada
Linfocítos Monocítos
Ligero + + + - - - -
Cuello Moderada a Severa
Linfocítos Monocítos
Ligero + - + Ligera
- - Severa
Pectoral Ligera
Linfocítos Monocítos Heterófilos
Ligero + + + - - + -
3 ra.
Inguinal Ligera a Moderada
Linfocítos Monocítos
Ligero + + + - - + -
R.I : Reacción inflamatoria. V: Vascularización. C: Caracterizada por. R.G: Reacción granulomatosa multifocal. I.P: Infiltrado perivascular. E.D: Espacios dilatados. I.L: Infiltrado linfocítico. F: Fibrosis. N.L: Nódulos linfoides. +: Presente. E.C: Exudado Caseoso. -: Ausente.
27
Los resultados de la prueba de HI para ENC se muestran en la gráfica N°1.
Los cuales muestran títulos similares antes de la aplicación de la vacuna; sin
embargo para la tercer semana la aplicación en el cuello mostró un título promedio
de (196) con una diferencia significativa (P< 0.01) con respecto a los resultados de
la aplicación inguinal y pectoral, para la quinta semana la diferencia se hizo aun
mayor (340), demostrando una variación de más del 100% con respecto a las
otras vías. Mientras que en las otras vías se mantuvieron en resultados constantes
(P>0.07).
GRAFICA No. 1 Resultados serológicos de la prueba de HI para la ENC. Para los 3 grupos por diferente vía de aplicación.
05 0
1 0 01 5 02 0 02 5 03 0 03 5 04 0 0
0 3 5
S E M A N A
UH
A C u e l loP e c to r a lI n g u in a l
28
Resultados serológicos para la prueba de BI por la prueba de ELISA se
muestran en la gráfica N° 2. En la semana 0 mostraron títulos menores en Las
aves inoculadas en la región pectoral, sin embargo los resultados a la tercera
semana post-inoculación mostraron resultados similares y mejores para la
aplicación cervical y pectoral encontrándose una diferencia no significativa con la
aplicación inguinal que mostró títulos menores. El coeficiente de variación para los
tres tipos de aplicación fue similar. Para la semana quinta post-inoculación la
aplicación en el cuello y en la pechuga continuaron mostrando resultados
semejantes con diferencias no significativas (P< 0.01) sin embargo la aplicación
inguinal mostró una disminución importante con respecto a los anteriores (P<
0.25) mediante la prueba de comparación de medias.
GRAFICA No. 2 Gráfica comparativa de los resultados serológicos de la prueba de ELISA para la enfermedad de BI.
05000
100001500020000250003000035000
0 3 5
SEMANA
TÍTU
LO
CuelloPectoralInguinal
DISCUSIÓN
29
Con relación a los cambios macroscópicos y microscópicos de las lesiones
presentes en el sitio de inyección se encontró en la primera semana post-
inoculación, las lesiones locales de los tres gurupos (C, P, I) mostraron
características similares, con una menor respuesta en el sitio de aplicación
inguinal, siendo más significativo en pechuga y cuello, este resultado concuerda
con lo publicado en una comparación de vacunas con diferentes adyuvantes con
aceite vegetal y animal con la finalidad de remplazar las vacunas emulsionadas en
aceite mineral, no encontró diferencias significativas en la prueba de HI, teniendo
una reacción tisular menor con la vacuna emulsionada con los aceites animal o
vegetal que la inducida por las vacunas emulsionadas en aceite mineral. (Henry,
1993).
En la segunda semana se observó una respuesta inflamatoria severa en las
aves del grupo C de vacunación en cuello, una respuesta moderada en la región
pectoral con una reacción granulomatosa distribuida entre las fascias, sin embargo
las aves que recibieron la aplicación en ingle la lesión fue ligera a moderada,
siendo semejante a un estudio realizado por Yamanaka et.al; (1993). que investigó
los cambios macro y microscópicos presentes en el sitio de inyección, obteniendo
reacciones caracterizadas con proliferación de macrófagos, células epiteliales y
fibroblastos, alrededor de pequeños quistes en el músculo. También se observó
infiltración de linfocitos y células plasmáticas, obteniendo lesiones granulomatosas
más severas, con la formación de abscesos. Esta reacción inflamatoria local esta
relacionada proporcionalmente con la respuesta inmune que se desarrolla a la
aplicación de inmunógenos, lo mismo indica Folitse, Halvorson e Ivanandan (1998)
en un estudio de combinación de vacunas con la finalidad de encontrar un sistema
de vacunación simple para provocar un nivel alto y duradero de anticuerpos.
Estudio el nivel de la respuesta de anticuerpos medidos por la prueba de HI y el
grado de protección contra cepas virulentas del virus de ENC. Los resultados
obtenidos indicaron que la administración simultanea de vacunas inactivadas y
emulsionadas en aceite y vacunas vivas inducen una respuesta mayor de
anticuerpos, sin embargo no obtuvo una diferencia significativa en protección entre
los diferentes grupos vacunados. Corroborando con información parecida Mutalib
30
y Boyle, (1994) al evaluar la influencia de inoculación sobre la respuesta inmune
con relación al sitio de aplicación de las vacunas inactivadas sobre la respuesta
inmune en aves, no encontró diferencias en los títulos de anticuerpos contra ENC
o BI entre los varios grupos de aves.
En los resultados obtenidos a la tercera semana posvacunación mostraron
que la respuesta inflamatoria local en la región del cuello o pectoral continuo
siendo severa mientras que en la región inguinal se mostró moderada casi
inespecífica estos resultados correlacionan con los resultados serológicos
obtenidos para la prueba de ELISA y BI que mostró resultados similares entre las
aplicaciones cervicales y pectorales y una caída en los títulos de las aves
inoculadas en la región inguinal. Mutalib y Boyle, (1994) al igual no encontró
diferencias en vacunaciones intramusculares. Maas (1999) realizo un estudio
donde utilizó diferentes vacunas diluidas obteniendo respuestas diferentes pero los
grupos de aves quedaron protegidos contra la ENC.
Los resultados encontrados en la respuesta local muestran la asociación
con los resultados obtenidos en las pruebas serológicas contra la enfermedad de
ENC y BI que mostraron menor respuesta humoral por la vía inguinal que por las
otras aplicaciones. Un estudio realizado por Deguchi, et.al; (1998) donde se aplicó
vacunas en el músculo de la pierna, pechuga y en el músculo del hombro,
encontrando mayores títulos mediante la prueba de HI en la vacuna subcutánea
en el hombro y en pierna.
Estos resultados muestran que la aplicación inguinal aunque es menos
traumática para el ave no cumple con el objetivo de proporcionar una inmunidad
fuerte y prolongada. Estos estudios sobre la influencia del sitio de aplicación para
vacunas de Newcastle y Bronquitis infecciosa, han demostrado que la aplicación
subcutánea en la región cervical produce los títulos más elevados que la
aplicación intramuscular en pechuga y subcutanea en pierna, aunque la reacción
inflamatoria local es mas severa.
La hipótesis de este estudio no se cumplió debido a que la aplicación
inguinal muestra un deficiente desempeño serológico tanto para la vacuna contra
BI y ENC. Este estudio demuestra que la relación entre la respuesta inflamatoria
31
local y los de anticuerpos detectables en suero es directamente proporcional, por
lo que es poco probable lograr una respuesta menos severa con una respuesta
serológica mejor.
CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
La aplicación cervical de vacunas inactivadas oleosa contra ENC y BI, es el
mejor sitió de aplicación, mostrando buenos títulos de HI en la respuesta a la
32
ENC y así como para BI mediante la prueba de ELISA la aplicación pectoral
mostró ser una buena opción para la vacunación contra BI; sin embargo en la
evaluación de la respuesta a ENC mostró un pobre desempeño.
La aplicación de vacunas oleosas en la región pectoral produce lesiones
cicatrizales que influyen sobre la comercialización futura de las aves de desecho.
Es necesario realizar estudios más extensos que confirmen los resultados
encontrados en esta investigación, así como probar otro tipo de adyuvantes.
LITERATURA CITADA Baez A. 1994. Patología de las aves. Editorial Trillas. México. Beard, C. W. 1992. Serological Procedures. A laboratory manual for the isolation
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