informe del 5_ laboratorio de microbiología sanitaria i

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2013UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIAINGENIERIA DE HIENE Y SEGURIDAD AMBIENTALALUMNO: ZUMAETA YNGA JHONY .DDOCENTE: TELLO CEBREROS, JORGE

ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA Y ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS

INDICE

OBJETIVO 3

FUNDAMENTO TEORICO 4

PROCEDIMIENTO 8

RESULTADOS 9

CONCLUSIONES 10

RECOMENDACIONES . 11

CUESTIONARIO .. 11

TALLER .. 14

BIBLIOGRAFIA .. 1

1. OBJETIVO:

ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA

Demostrar el efecto de diferentes concentraciones de cristal violeta sobre bacterias Gram positivas y gram negativas.

Tambin es demostrar como las concentraciones en que se diferencia cada crisol varia el crecimiento de microorganismos

Hacer la tincin gram para determinar si dicha bacteria es cocos o bacilos segn los pasos que habamos hecho con anterioridad

Otro tambin es saber a qu tipo de agrupacin pertenece dicha bacteria

ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS

Demostrar la accin oligodinmica de algunos metales

Determinar el por qu no presenciamos crecimiento cerca a la moneda pero si lo hubo alrededor, mientras ms lejano a la moneda ms crecimiento se notara

Tener bien presente los pasos a seguir ya que cualquier error nos podra llevar a unos resultados errneos.

Denotar las diferencias de cada grupo para ver las diferencias y similitudes y as poder saber en qu se equivoco cada grupo.

2. FUNDAMENTO TEORICO:


Los colorantes del grupo trifenilmetano presentan una marcada accin bacteriosttica selectiva sobre las bacterias Gram positivas, en diluciones que aparentemente no afectan a las Gram negativas. Esta propiedad se aprovecha mediante la incorporacin de alguno de esos colorantes en medios de cultivo con el fin de facilitar el aislamiento de bacterias Gram negativas.

Entre los colorantes usados con estos propsitos estn: cristal violeta, fucsina bsica, verde brillante y verde malaquita.


Los iones de algunos metales pesados en altas diluciones son capaces de ejercer una accin txica sobre las bacterias y otros microorganismos. Si se coloca una moneda o un trozo de cobre debajo o sobre un medio de cultivo slido recin inoculado con un microorganismo, luego de incubar se puede observar que no hay crecimiento en la zona alrededor del metal. Esta es la zona oligodinmica; con frecuencia las colonias en el borde del halo de inhibicin son de mayor tamao que en el resto de la placa, debido a que tuvieron una mayor disponibilidad de nutrientes que no fueron utilizados en la zona sin crecimiento.

Accin oligodinmica, son activos en muy bajas concentraciones (ppm). Inactiva especficamente enzimas claves al reaccionar con grupos SH. Son muy txicos y su actividad disminuye con la existencia de fluidos biolgicos.

3. PROCEDIMIENTO:


Primero tuvimos que haber preparado el agar nutritivo:

Primero pesamos y trituramos el agar nutritivo. Vertimos el agar en un vaso precipitado y agregar 375ml de agua y mover con la bagueta. Continuamos con la dilucin del agar, como no se disuelve todo aumentamos la temperatura para aumentar la solubilidad de la solucin y despus de ello los separamos en 25 tubos de prueba de 15ml y tapamos los tubos con algodn Despus se colocan los tubos en una canastilla y luego se coloca en el autoclave. Esterilizar los materiales a usar en el horno. Esterilizacin del Agar en el autoclave a 121C por 15 min.

Una vez obtenido el agar nutritivo comenzamos con las soluciones del cristal.

Para la solucin 1/10000, transferimos 1 ml del cristal violeta de una concentracin de 1/1000 a un tubo de 9 ml de agua

Para la solucin 1/100000, transferimos 1 ml de cristal violeta de una concentracin de 1/10000 a un tubo de 9 ml de agua

Para la solucin 1/1000000, transferimos 1 ml de cristal violeta de una concentracin de 1/100000 a un tubo de 9 ml de agua

Luego mezclamos las diluciones con el agar nutritivo, tomamos 3 tubos de ensayo y echar 9 ml de agua destilada, ayudados con una pipeta de 1ml. Sacar con una pipeta y una bombilla 1ml del cristal violeta (0.1%) y echarlo en el tubo N1. Proceder a sacar 1ml del tubo N1 con pipeta de 1ml y echarlo en el tubo N2. Proceder a sacar 1ml del tubo N2 ayudado de una pipeta limpia de 1ml y echarlo en el tubo N3.

Flameamos el tubo con agar nutritivo y echamos en una placa petri, este primer tubo se echara en la placa N1 que no contiene colorante y nos servir de control.

Luego vertir el agar fundido en las tres placas petri restantes y mezclar bien el colorante con el agar rotando suavemente la placa, para obtener una distribucin uniforme de colorante.

Cuando ha solidificado el agar, dividir las placas en dos regiones iguales y nombrarlos A y B.

Divisin de las placas en zonas A y B para inocular con los microorganismos.

Incubar las placas a 37C durante 48 horas.

ACCION OLIGODINAMICA DE LOS METALES PESADOS Limpiamos la moneda de diez cntimos dentro de una solucin cuya concentracin es del 10% de acido ntrico

Lavar la moneda con agua para quitarle lo acido

Colocar la moneda en el centro de la placa petri

Tomar un tubo con agar nutritivo fundido mantenido a 45c

Inocular el tubo con agar con una gotita del cultivo, tomada con el asa del inoculador

Rotar el tubo alrededor de la palmas para tener una distribucin uniforme

Verter el agar dentro de la placa petri que contiene la moneda

Dejar que solidifique el agar, invertir la placa e incubarla a 37 C por 48 horas

4. RESULTADOS :

ACCION BACTERIOSTATICA DEL CRISTAL VIOLETA Grupo N 1Grupo N 2Grupo N 3Grupo N 4Grupo N 5

DilucinABABABABAB

1/10000++--++++++

1/100000++--++++++

1/1000000++--+++-++

(+) Hay crecimiento (-) No se puede determinar

Haciendo la tincin identificamos con el microscopio si es gran positiva o gran negativa y tambin determinar el grupo al que pertenece

GrupoColonia AColonia B

N 1Gram positivoEstafilococosGram positivoDiplobacilos

N 2------------

N 3Gram negativoDiplobacilosGran negativoDiplobacilos

N 4Gram negativoEstreptobacilosGran positivoDiplococos

N 5Gram negativoCocosGram negativoDiplobacilos

Crecimiento

Cristal VioletaDilucinEschirichia ColiBacillus Subtilis

1/10000--

1/100000+-

1/1000000++

ControlSin colorante++


GruposCrecimiento

Grupo N 1Hubo crecimiento escaso alrededor de la moneda

Grupo N 2Experimento fallido

Grupo N 3Hubo crecimiento escaso alrededor de la moneda

Grupo N 4Experimento fallido

Grupo N 5Hubo crecimiento abundante y uniforme alrededor de la moneda

GRUPO N1, 2, 3, 5:

5. CONCLUSIONES:


Una de nuestras conclusiones a la que podamos llegar es como varia la cantidad de microorganismos en las diluciones utilizadas

Tambin llegamos a la conclusin de algo que ya sabamos por medio de la teora, por ejemplo que en 1/10000 no bamos a notar ninguna de las dos bacteria (Escherichia Coli y Bacillus Subtilis), en cambio que en 1/100000 bamos a notar solo el crecimiento de la Escherichia Coli y que en 1/1000000 iba haber crecimiento de ambos.

A esa conclusin fuimos capaces de llegar, ya que utilizamos la tincin gram y combinado con el microscopio (objetivo 97) para determinar a la bacteria, no solo para saber si era cocos o bacilus, sino que tambin para poder afirmar que agrupacin pertenece.


Se observa la accin oligodinmica de los metales pesados, ya que se nota que el crecimiento de microorganismos en un cultivo, es afectado por la presencia de metales pesados. por lo que se logra diferenciar tres zonas: la zona oligodinmica, zona de estimulacin y de crecimiento normal.

Se pudo notar un crecimiento de bacterias pero alejados de la moneda de diez cntimos en las zonas de estimulacin y de crecimiento normal

Se diferencian tres zonas: la zona oligodinmica (que es una zona despejada donde no aparecen colonias), zona de estimulacin (zona angosta donde se presenta un crecimiento abundante) y la zona de crecimiento normal (se presenta en todo el resto del agar).debido a eso las cantidades diminutas de iones metlicos estimulan el crecimiento mientras que concentraciones mayores producen inhibicin.

6. RECOMENDACIONES:


Al extraer el agar nutritivo de la autoclave debemos mantenerlo a una temperatura de 45 C para evitar que se solidifique, ya que si este se solidifica perjudicara en los resultados del experimento.

Se debe esterilizar correctamente el inoculador antes de usarlo para extraer el cultivo.

Tener cuidado cuando se utiliza el acido ntrico en la limpieza de la moneda, evitar el contacto directo con este, haciendo uso de instrumentos adecuados como guantes, mascarillas para no respirara el gas del acido , ya que este puede causar quemaduras o irritaciones en los ojos,etc.

La realizacin del estriado en las zonas A y B de cada placa deben tratar de realizarse en forma uniforme para poder notar las posibles diferencias entre las placas conteniendo diluciones del cristal violeta y la placa correspondiente al control (1/1000). Y con la menor cantidad de microorganismo posible.


Cuando desinfectamos la moneda de diez cntimos nos hizo falta la seguridad de que en el momento de que nosotros pongamos en las placas petri siga estando estril ya que en el trayecto estuvo expuesto al aire

Otro tambin fue nuestras manos, las cuales no estaban desinfectadas y as cogimos la moneda de diez cntimos, es por eso que notamos un leve crecimiento de microorganismos.

7. CUESTIONARIO

1. Explicar qu es un agente bacteriosttico.

Unefecto bacteriostticoes aquel que aunque no produce la muerte a una bacteria, impide su reproduccin; la bacteria envejece y muere sin dejar descendencia. Un efecto bacteriosttico est producido por sustancias bacteriostticas. Estas sustancias son secretadas por los organismos como medios defensivos contra las bacterias.

2. Qu es una accin bacteriosttica selectiva?, Indique algunas aplicaciones prcticas de este fenmeno.

3. A qu se debe la accin oligodinmica? Indique algunas aplicaciones:

ACCION OLIGODINAMICA: Es la propiedad que tienen ciertos metales, especialmente la plata, de ejercer efectos letales sobre las bacterias COMPUESTOS DE PLATA: en cantidades pequesimas. El mecanismo de accin de la plata est estrechamente relacionado a la interaccin de los iones plata con grupos suldhidrilo (SH-), y esta actividad antimicrobiana va a depender de la acumulacin intracelular de bajas concentraciones de iones plata, que interactan con las enzimas, protenas y cidos nucleicos produciendo cambios estructurales en la pared celular bacteriana, membranas y cidos nucleicos afectando su viabilidad.

8. BIBLIOGRAFIA:

PELCZAR, Michael J. et al. Microbiologa. Mexico, Ed. Mc GrawHill, 1982.

FRAZIER, W.C. y D.C. Westhoff, Microbiologa de los Alimentos

THATCHER, F. S. y D. S Clark. Anlisis microbiolgicos de los alimentos. Espaa. Acribia, 197

Bacteriologa A. J. Salle 4ta edicin ao 1960

MICROBIOLOGIA, Autor: Thomas D. Brock, Michael T. Madigan Sexta Edicin 1991

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