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Guía de Trabajos Prácticos para Análisis

Instrumental Espectroscopia-AA-HPLC-GC-

Profesores: Claudia Gimenez

Eduardo Aprigliano

Guía Orientativa para Análisis Instrumental

Departamento de Química Página 2

Trabajo Práctico N°1

Análisis Espectrofotométrica de una solución de Nitrato de Cobalto

OBJETIVO

Utilización del Espectrofotómetro Biotraza UV – visible (Rango 195 a 1000 nm).

Realización de curva de calibración (Abs.vs.λ), (Abs. vs. Conc.).

Medición de muestras problemas.

MATERIALES

Matraces aforados de 100 ml.

Vasos de precipitado de 100 ml., 50 ml., 20 ml.

1 vaso de precipitado de 500 ml.

Pipetas de vidrio.

Frasco lavador (pisetas).

REACTIVOS

Solucione de nitrato de Co de 40000 mg /L (ppm) (40 gr/l)

Equipo:

Espectrofotómetro Biotraza UV – visible (Rango 195 a 1000 nm).

MODO DE USO

1. Encender el equipo.

2. Precalentar por 15 minutos, para estabilizar el equipo.

3. Colocar la longitud de onda con la perilla.

4. Colocar en cada cubeta blanco, estándar 1,2, 3.

5. Abrir la tapa del equipo, insertar blanco + estándar 1, 2,3.

6. Cerrar la tapa.

7. Tire de la barra porta cubetas para que quede en posición de medición (blanco).

8. Presionar el botón 100% transmitancia (T 100 %).

9. Presionar la tecla Modo, donde la pantalla exhibe la Absorbancia (A 0.000).

10. Tire de la barra porta cubetas para que quede en posición de medición muestra

de referencia 40 g/L (40000 mg/L o ppm). La pantalla exhibe la absorción de la

muestra.

11. Presionar la tecla Modo, donde la pantalla exhibe Concentración.

12. Presionar el botón Arriba y Abajo, a los efectos de ingresar la concentración de

la muestra de referencia. Presionar Enter.- (C 40).

13. Pantalla exhibe F (factor) -F 62-.

14. Presionar Modo hasta C.

15. Tire de la barra porta cubetas para que quede en posición de medición. M1

16. Medir la concentración de M1.

17. Tire de la barra porta cubetas para que quede en posición de medición M2




19. Tire de la barra porta cubetas para que quede en posición de medición M3.


21. Retirar las cubetas, limpiar restos de solución.

22. Poner el porta cubeta en su posición de inicio.

23. Cerrar el cobertor.

24. Apagar el equipo.

Se puede medir en modo Absorbancia para realizar la curva de calibración.

CURVA DE CALIBRACIÓN

A partir de solución de Co (NO3)2. 40000 mg/L (ppm) se preparan, tres soluciones de

10000 ppm, 20000 ppm y 30000 ppm. Utilizo 40000 ppm como STD para obtener el

factor.

Diluciones: a partir de la solución madre (40000 ppm) preparar muestras incógnitas de:

M1=10/25 (por duplicado), M2=10/50 (por duplicado), M3= 20/50 (por duplicado),

M4=15/50.

Determinar en forma teórica la concentración esperada. Informar.

Usando la fórmula siguiente:

VI.CI = VF. CF

Podemos calcular, cuanto hay que medir de la solución inicial (dato en línea punteada).

Tener en cuenta que esto sólo se cumple para soluciones diluidas, que cumplan la Ley

Lambert – Beer.

SOLUCIONES A UTILIZAR

10000 ppm. =………ml

20000 ppm. =……….ml

30000 ppm. =……….ml

Se procede a medir cada patrón para obtener la curva de calibración (Abs.vs.Conc.)

MEDIDA mg./L ABSORBANCIA

(U.A)

BLANCO 0 0

SOL 1 10000

SOL 2 20000

SOL 3 30000

SOL 4 40000

M1 10/25

M2 10/50

M3 20/50

M4 15/50




M4=15/50.

REALIZAR CURVA DE CALIBRACION: ABSORBANCIA VS. LONGITUD DE

ONDA.

Realizamos esta mediciones sucesivas desde los 460 nm hasta 600 nm para obser-

var a qué longitud de onda se produce la mayor absorbancia (Co (NO3)2: 510 nm).

Concentración (mg/L) Absorbancia

0 0

10000 0,169

20000 0,341

30000 0,44

40000 0,666



ANALISIS DE LA MUESTRA

Se procederá la medición de las muestras problema.

Muestra Problema N° 1=……………………….. (g/L)


Se expresar el dato en mg/L (ppm).

ppm

X= (y+0,157)/0,160




Análisis Espectrofotométrico de una solución de Sulfato de Cobre

OBJETIVO

Utilización del Espectrofotómetro Biotraza UV – visible (Rango 195 a 1000 nm).

Realización de curva de calibración (Abs.vs.λ), (Abs. vs. Conc.).

Medición de muestras problemas.

MATERIALES




Pipetas de vidrio.


REACTIVOS

Solución de Sulfato de Cobre de 40000 mg /L (ppm) (40 gr/l)

Equipo:



A partir de solución de CuSO4 40000 mg/L (ppm) se preparan, tres soluciones de 10000

ppm, 20000 ppm y 30000 ppm. Utilizo 40000 ppm como STD para obtener el factor.

Diluciones: a partir de la solución madre (40000 ppm) preparar muestras incógnitas de:


M4=15/50Determinar en forma teórica la concentración esperada.

Informar

Usando la fórmula siguiente:

VI.CI = VF. CF

Podemos calcular, cuanto hay que medir de la solución inicial (dato en línea punteada).


Lambert – Beer.



SOLUCIONES A UTILIZAR

10000 ppm. =………ml

20000 ppm. =……….ml

30000 ppm. =……….ml

Se procede a medir en 640 nm cada patrón para obtener la curva de calibración

(Abs.vs.Conc.)


(U.A)

BLANCO 0 0

SOL 1 10000

SOL 2 20000

SOL 3 30000

SOL 4 40000

M1 10/25

M2 10/50

M3 20/50

M4 15/50


M4=15/50.





Se expresar el dato en mg/L (ppm).




Análisis Espectrofotométrico de Ácido salicílico

OBJETIVO

Cuantificar Ácido salicílico a partir de la síntesis de ácido acetil salicílico obtenido en el

laboratorio de química orgánica II

MATERIALES


Vasos de precipitado de 100 ml.

Probetas de 50ml

Pipetas de vidrio.

Tubos de Hemólisis

Micro pipetas

Frasco lavador (picetas).

REACTIVOS

Solución de 0,5 % m/v ligeramente ácido

Equipo:




A partir de una solución de Ácido acetil Salicílico de 1.0g/l, preparar cuatro soluciones

de 20 PPM, 30PPM, 40PPM y 60 PPM.

Usar la fórmula siguiente:

VI.CI = VF1. CF

Podemos calcular, cuanto volumen hay que medir de las soluciones iniciales.


Lambert – Beer. (0.1 a 0.8 de absorbancia)

1 El volumen final serán tubos de 5ml.



Técnica a realizar:

Tubo Bco. Tubo estándar Tubo Mtra.

Estándar ----------- 2 ml -----------

Muestra ----------- ----------- 2 ml

Reactivo FeCl3 2 ml 0.22 ml 0.22 ml

Dejar de 2 a 5 minutos a temperatura ambiente y leer en espectrofotómetro a 560 nm

Se procede a medir cada patrón para obtener la curva de calibración.

MEDIDA PPM ABSORBANCIA

(U.A)

BLANCO 0 0

estándar 1 20

estándar 2 30

estándar 3 40

estándar 4 60

Muestra1

Muestra 2

Muestra 1: Pipetear 1 ml de sc 20PPM más 2 ml sc de 30 PPM

Muestra 2: Pipetear 1 ml de sc 60 PPM más 2 ml de sc de 40PPM

Calcular la concentración teórica y comparar el resultado obtenido en forma práctica


Una vez realizada la curva de calibración por Excel se procederá la medición de las

muestras problema utilizando la fórmula lineal de dicha gráfica.

Muestra Problema N° 1=……………………….. (PPM)


Por ejemplo:

concentración g/l

Absorbancia

blanco 0 0 Muestra problema Soluto total 0,0006 +0,00025= 0,00085 gr Aas

Estándar 1

0,25 0,444

1 ml sc ,,,,,,,0,25g/l

Estándar 2 0,3 0,518 2ml sc……..0,3 g/l

Muestra 0,282214208 0,493



1000 ml,,,,,,,,,0,25 g Aas

1 ml ……………0,00025gr Soluto total 0,0006 +0,00025= 0,00085 gr Aas

1000ml,,,,,,,0,3 gr Aas

2 ml ,,,,,,,,,0,0006 gr Aas Valor Teórico 0,283 gr /l

Valor práctico 0,2822 gr/l

3 ml,,,,,,,,,0,00085 gr Aas 1000 ml ,,,,,,,0,283 gr /l

Curva de Calibración de Ac Salicílico




Análisis Espectrofotométrico de Nitritos en Agua

OBJETIVO

Cuantificar Nitritos a partir de una muestra de agua recolectada de una pecera del labo-

ratorio de Biología.

MATERIALES

Vasos de precipitado de 100 ml.

Pipetas de vidrio.

Tubos de Hemólisis

Micro pipetas

Frasco lavador (picetas).

REACTIVOS

Solución de Acido Sulfanilico:

Se pesan 3.3gramos de Acido Sulfanilico y se diluye con 800 ml de agua destilada ca-

liente y se le agregan 200 ml de Acido Acético Glaciar.

Solución de Acetato de Alfa Naftilamina:

Se pesan 0.5 gr. de Alfa Naftilamina y se diluyen con 100 ml de agua destilada, se pone

a hervir durante 5 minutos y se filtra atraves de un algodón , luego se agregan 200 ml

deAcido Acético Glaciar y se lleva a 1 litro con agua destilada , se debe guardar en una

botella color caramelo.

Equipo:




Dilución del patrón de 1000 PPM:

Realizar diluciones obteniendo concentraciones de 0.4 ppm, 0.6ppm, 0.8 y 1,0 ppm

Usar la fórmula siguiente:

VI.CI = VF2. CF

2 El volumen final será de matraces de 100ml.



Podemos calcular, cuanto volumen hay que medir de las soluciones iniciales.


Lambert – Beer. (0.1 a 0.8 de absorbancia)

Técnica a realizar:

Tubo Bco. Tubo estándar Tubo Mtra.

Estándar 0.4 ppm ----------- 5 ml -----------

Estándar 0.6 ppm ----------- 5 ml -----------

Estándar 0.8 ppm ----------- 5 ml -----------

Estándar 1.0 ppm ----------- 5 ml -----------

Muestra ----------- ----------- 5 ml

Reactivo A 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml

Reactivo B 0.5 ml 0.5 ml 0.5 ml

Dejar 15 minutos a temperatura ambiente y leer en espectrofotómetro a 540 nm


MEDIDA PPM ABSORBANCIA

(U.A)

BLANCO 0 0

estándar 1 0.40

estándar 2 0.60

estándar 3 0.80

estándar 4 1.00

Muestra1

Muestra 2


Una vez realizada la curva de calibración por Excel se procederá la medición de las

muestras problema utilizando la fórmula lineal de dicha gráfica.





Por ejemplo:

concentración PPm

Absorbancia

blanco 0 0 Soluto total 0,0006 +0,00025= 0,00085 gr Aas

Estándar 1 0,4 0,273

Estándar 2 0,6 0,366

Estándar 3 0.8 0.451

Estándar 4 1.0 0.530

Muestra

0,493



Espectroscopia de Absorción Atómica

Pasos a seguir en el encendido del equipo

1. Elegir la opción a la que se va a trabajar (absorción o generador de hidruros)

2. En este caso absorción; y va haber dos opciones por absorción o emisión.

3. Si tenemos lámpara del elemento trabajamos por absorción.

4. Calibrar lámpara del elemento a medir.

5. Si esta seleccionada emisión de llama , se debe comprobar lo siguiente:

6. Contiene la solución aspirada, una elevada concentración del elemento que se

está determinando (normalmente, el estándar más concentrado).

7. Establecer las condiciones recomendadas (alineación del nebulizador, optimiza-

do del quemador en altura y posición lateral, de manera de obtener la mayor

concentración de átomos en estado fundamental. (normalmente en modo AA

antes de las mediciones de emisiones). NO SE USA LAMPARA.

8. Ir a herramientas- condiciones recomendadas y ver cuál es el rango en la con-

centración característica para realizar mi curva de calibración.

9. Ir a herramientas- Crear un método

10. Parámetros-Cargar los valores de estándar elegidos y el modo de lectura (en

concentración o absorbancia)

11. Pasar a la pestaña Lámpara, seleccionar el elemento a trabajar.

12. Y por último ir a la pestaña Analizar.

Como ajustar la velocidad de aspiración

Antes de realizar cualquier medición en el equipo se debe chequear el ajuste del nebuli-

zador:

Aspirar una solución de Cobre 4PPM (Con su respectiva lámpara) .Entonces paso el

blanco con agua y luego ajusto la medición con el nebulizador (perilla roja) hasta llevarlo

a su máxima absorbancia

Esto se realiza porque si la muestra pasa muy rápido no le da tiempo a absorber la

luz.

Tratamiento de la muestra

Como habíamos dicho anteriormente la muestra debe ser atomizada pero para que esto suceda los minerales deben estar en solución

Mostramos aquí dos tipos de digestión

Digestión en base húmeda –Hidrólisis ácida, sistema abierto.

Se toma 1 gramo de la muestra a procesar (ej. Harina, para la medición de hierro)

7 ml de +4 ml –Mechero suave o Manta eléctrica e ir subiendo la tempe-

ratura gradualmente va a liberar humo marrón (se libera el óxido nitroso) y sacarlo an-

tes de que se seque. Si tiene mucha materia grasa se puede filtrar.



Digestión en base seca-Sistema cerrado

Ej. Tomo 1 gr de galletita de agua light o salchicha para medir el contenido de sodio.

En mechero carbonizo de 5 a 6 hs

Luego en Mufla 0-500º C gradualmente /12 hs Mínimo

Una vez que tengo las cenizas blancas le coloco unas gotas de nítrico concentrado con

piceta, luego lo llevo a un volumen de 100 ml con agua bidestilada.

Nota: El tiempo de mechero y mufla va a depender del material que quiero procesar.

¿Cómo realizar una curva de calibración?

Tengo un testigo de Cobre con una concentración de 1000 ppm

Mis condiciones recomendadas que me marca el equipo para Cobre, me indican

un parámetro lineal que va desde 0.5 a 2 ppm

Tengo matraz de 100 ml.

Ahora bien; si ya conocemos el parámetro de concentración que respeta la ley de Beer-

Lambert.

Sabemos que los estándares a preparar tienen que estar dentro de ese rango.

Por ej.

ST.1 – 0.5 ppm

ST.2 – 1.0 ppm

ST.3 – 2.0 ppm

Con la fórmula ya conocida vamos a calcular que volumen de testigo tenemos que to-

mar.

Pasemos a los cálculos:

Entonces mi primer estándar de calibración lo voy a preparar tomando 0.05 ml del tes-

tigo, con 100 ml de bidestilada.

Logrando una concentración de 0.5 ppm.

Realizamos lo mismo para el ST.2 y ST. 3-

Sabiendo los pasos a seguir en el encendido del equipo; Como se realiza una curva de

calibración y teniendo las técnicas de digestión. Estamos en condiciones de realizar me-

diciones de algunos minerales en distintos productos.




Análisis del Cu por Absorción Atómica

OBJETIVO

Determinación de una muestra de Cobre, por método de Absorción Atómica.

MATERIALES Y REACTIVOS




Pipetas de vidrio y Micro pipetas.


REACTIVOS

Soluciones de patrones de Cu. De 1000 mg. /L. (ppm.)

Ácido Nítrico HNO3

H20 Destilada.

Equipo:

Absorción Atómica Perkin Elmer AA200.

Lámpara de Cátodo Hueco de Cu.

Establecer las condiciones recomendadas (ajuste de lámpara, corriente de lámpara, ajus-

te del nebulizador, ajuste del quemador en altura y posición lateral, de manera de obtener

la mayor concentración de átomos en estado fundamental.

Longitud de Onda

(nm)

Ranura (nm) Sensibilidad

(mg/L)

Lineal (mg/L)

324.75 2.7/0.8 1.3 1.6

327.40 2.7/0.8 2.6 1.6

216.51 1.8/1.35 6.5 6.5

249.22 2.7/1.35 100 30

Oxidante Aire

Flujo oxidante (l/min) 10

Flujo de acetileno (l/min) 2.5




A partir de soluciones de Cu de 1000 mg/l. (ppm) se preparan en matraces de 100 ml. +

solución de HNO3 AL 1% P/V. (permite que sea estable la solución).

Según las condiciones recomendadas por el software del equipo, deben estar en el rango

de la linealidad (Ley de Lambert – Beer).

VI.CI = VF. CF

Podemos calcular, con esta fórmula, cuanto hay que utilizar de la solución inicial.

PATRONES A UTILIZAR

0.5 ppm.= 5 mg. /L.= 0.05 ml. De solución (50 μL)

1 ppm. = …………………………………………..

2 ppm. =…………………………………………...

3 ppm. =……………………………………………

4 ppm. =……………………………………………

5 ppm. =…………………………………………....

Para preparar el estándar de 0.5 ppm., debemos hacer una dilución si no contamos con

una Micro pipeta (de 20 μL- 200 μL). Tomar 10 mL. de la solución inicial (1000 ppm.)

colocar la sustancia en el matraz aforado de 100 mL. Llevar a volumen, obtendremos una

solución de 100 mg. /L.

Luego usando la Formula VI.CI = VF. CF

VI= VF.CF/CI= 0.100 mL. 0.5 mg. /L / 100 mg. /L = Vi= 0.0005 L= 0.5 ml.

También podemos partir de una solución de 5 ppm. Hacer el cálculo…………….??



(U.A)

1 0

2 0.5

3 1

4 2

5 5



Muestra N° 3=………………………..

Muestra N° 4=………………………..

Se expresara el dato en mg/L.




Análisis de Na por Emisión Atómica

Objetivo Determinación de SODIO, por método de EMISION, en aguas minerales

DATO TEORICO (EN ETIQUETA): SIERRA DE LOS PADRES:

Na. 219 ppm.

DATO TEORICO (EN ETIQUETA): VILLAVICENCIO:

Na: 128 ppm.

MATERIALES Y REACTIVOS




Pipetas de vidrio y Micro pipetas

Frasco lavador (picetas)

REACTIVOS

Soluciones de patrones de Na. De 1000 mg. /L. (ppm.)

H20 Bidestilada.

Equipo:

Absorción Atómica/ emisión Perkin Elmer AA200

Si esta seleccionada emisión de llama, se debe comprobar lo siguiente:

Contiene la solución aspirada, una elevada concentración del elemento que se está de-

terminando (normalmente, el estándar más concentrado).

Establecer las condiciones recomendadas (alineación del nebulizador, optimizado del

quemador en altura y posición lateral, de manera de obtener la mayor concentración de

átomos en estado fundamental. (normalmente en modo AA antes de las mediciones de

emisiones). NO SE USA LAMPARA.

Longitud de Onda (nm) Ranura (nm) Sensibilidad (mg/L) Lineal (mg/L)

589.00 1.8/06 0.3 0.5

Oxidante Aire

Flujo oxidante (l/min) 10

Flujo de acetileno (l/min) 2.5




A partir de soluciones de Na de 1000 mg/l. (ppm) se preparan en matraces de 100 ml.

Según las condiciones recomendadas por el software del equipo, deben estar en el rango

de la linealidad (Ley de Lambert – Beer).

Podemos calcular, con esta fórmula, cuanto hay que utilizar de la solución inicial.

PATRONES A UTILIZAR

0.3 ppm.= 0.3 mg. /L.= 0.03 ml de patrón/100 ml de solución (30 μL de Patrón /100 ml)

1 ppm. =…………………………………………...

3 ppm. =……………………………………………

5 ppm. =……………………………………………

Para preparar el estándar de 0.3 ppm., debemos hacer una dilución si no contamos con

una Micro pipeta (de 20 μL- 200 μL). Tomar 10 mL. de la solución 3 ppm colocar la

sustancia en el matraz aforado de 100 mL. Llevar a volumen, obtendremos una solución

de 0.3 mg. /L.




REALIZAR CÁLCULO PARA QUE ENTRE EN RANGO 4 ppm conociendo los datos

de la etiqueta:

Usar formula

Muestra N° SIERRA DE LOS PADRES=………………………..

Muestra N° VILLAVICENCIO=…………………………………

Se expresara el dato en mg/L.

Realizar el informe de los datos obtenidos.

MEDIDA mg./L UNIDAD DE

INTENSIDAD

1 0 BLANCO

2 0.3

3 1

4 3

5 5




Análisis de Fe y Na por Absorción- Emisión Atómica.

OBJETIVO

Determinación de Hierro en una Harina 000, por método de Absorción Atómica.

Determinación de Sodio en una galletita light, por método de Emisión Atómica.

Determinación de Sodio en salchichas, por método de Emisión Atómica.

MATERIALES

Matraces aforados de 25 ml. 50 ml. 100 ml.

Vaso de precipitados 20, 50, 100 ml.

Pipetas.

Piceta.

Crisoles,

Triangulo de tierras pipas.

Mechero.

Tela metálica.

Mufla.

REACTIVOS

Acido nítrico.

Acido clorhídrico.

Agua destilada.

Equipo:

Absorción Atómica Perkin Elmer AA200

Lámpara de Cátodo Hueco de Fe.

AA 200 en modo Emisión Atómica.

Análisis de Hierro por Absorción Atómica en Harinas.

Seguimos los mismos pasos que con el Cobre; seleccionamos Hierro en el equipo –

Herramientas –Condiciones recomendadas, y conocemos con que rango lineal trabajar.

Sabiendo estos datos elegimos cuántos estándar de calibración y que concentraciones

queremos realizar. (El equipo me permite cargar hasta ocho estándares).

La concentración del testigo también es de 1000 ppm.



Tratamiento de la muestra:

Tomamos 1 gramo de harina y realizamos la digestión en base húmeda, como vimos

anteriormente.

Si nos fijamos en la información nutricional en el paquete de la muestra que vamos a

trabajar; nos indica la concentración de hierro, en base a ese dato calculamos:

Por ej. El paquete me da una conc. de Hierro de 30 mg/ Kg.

1000 gr. mtra.-------- 30 mg. Fe

1 gr. mtra. ----------- 0.03 mg. Fe

Como lo voy a llevar a un volumen 25 ml de bidestilada.

25 ml sc ---------- 0.03mg Fe

1000 ml sc ------- 1.2 mg / lt Fe

Es decir que el valor que me tendría que dar en mi equipo es de 1.2 ppm.

Y de esta manera estaríamos corroborando que la información que nos da el envase es la

correcta.


Análisis de Sodio en salchichas por método por Emisión Atómica.

Una vez realizada la curva de calibración3 conociendo los rangos de conc. a trabajar,

ídem a técnicas anteriores; pasamos a la preparación de la muestra:

Por ej.

Tomamos 1 gramo de salchicha y realizamos una digestión en base seca y pasamos a los

cálculos:

El paquete me informa que tiene una concentración de sodio de 640mg/ 50 gr de mtra.

Entonces:

50gr.mtra 640mgr Na

1.0 gr mtra. 12.8 mg Na

Como lo voy a llevar a un volumen de 100 ml.

100ml sc. 12.8 mg Na

1000ml sc 128 mg Na / lt sc.

3 Las curvas de calibración a realizar pueden ser altas o bajas; en este caso es una curva alta.

Por ej. No es lo mismo medir sodio en panceta que en zapallo, para este último deberíamos realizar una curva de baja concentración.



Como mi curva va hacer; según indican las condiciones recomendadas hasta 45 ppm,

voy a tener que hacer una dilución para que me entre en la curva de calibración. Es decir

en este caso diluir la muestra 1/5 (128ppm/ 5=25.6ppm) Entra bien, siempre hay que

buscar un valor que este centrado en mi curva de calibración.

Ahora bien, tenemos dos opciones de realizar la lectura:

Pasar la muestra y el valor que me da multiplicarlo por la dilución, en este caso por 5.

O decirle al equipo que le realicé esa dilución y el automáticamente me da el resultado

final.

Si elijo la última opción me tendría que dar como resultado aproximadamente 128 ppm,

de lo contrario 25.6 ppm.

Si es así podría confirmar que tiene 640mg/50g de muestra como indica el envase.


Análisis de Sodio en una galletita light por método de Emisión Atómica.

El envase dice por ej. 530mg/100gr mtra.

Realizar la práctica como hicimos anteriormente yendo previamente a condiciones re-

comendadas, realizar los cálculos para verificar que el resultado entre en la curva de

calibración de lo contrario realizar una dilución a la muestra.

Con el objetivo de afianzar los conocimientos adquiridos en los pasos a seguir en una

curva de calibración, realizar la misma por Excel tomando como dato las absorbancias e

intensidades (en el caso de emisión) y calcular la concentración de las muestras desco-

nocidas.


Análisis de Hierro en zapallo por método de Absorción Atómica.

Investigar qué cantidad de hierro contiene el zapallo. Una vez obtenido el dato

Realizar la práctica como hicimos anteriormente4

, yendo previamente a condiciones

recomendadas, realizar los cálculos para verificar que el resultado entre en la curva de

calibración de lo contrario realizar una dilución a la muestra.

PATRONES A UTILIZAR

1 ppm. = …………………………………………..

2 ppm. =…………………………………………...

5 ppm. =……………………………………………

10 ppm. =……………………………………………

4 En este caso la hidrolisis ácida se realiza tomando 1 gr de pulpa de zapallo, con 8 ml de HNO3 más 2 ml

de H2O2 100 volúmenes en manta.



Cromatografía líquida HPLC Trabajo Práctico N°11

Preparar patrones de tolueno y benceno de 5000ppm, 10000ppm, 15000ppm, y 20000

ppm, conociendo los datos que figuran en las botellas de dichos reactivos:

Por ej.

Benceno 0.88kg/lt =880.000 ppm

Tolueno 0.86kg/lt = 860.000ppm

Tengo matraz de 25 ml y conociendo la fórmula

Calculamos que volumen tomar para realizar dichas concentraciones.

Una vez realizadas, hacemos las inyecciones en el HPLC con dichas variables:

En las inyecciones realizadas nos quedara un gráfico de este tipo; va a estar dado en

función de tiempo en unidad de segundos y señal de respuesta en mili voltios, a mayor

concentración, mayor señal en mv.

Donde el tiempo de retención va a cambiar modificando algunas de las variables (ej.la

conc. del solvente en la fase móvil).

Una vez obtenidos los valores de área para cada concentración, por el programa Excel o

el software clarity realizamos la curva de calibración para cada sustancia (tolueno y

benceno).

Nos aseguramos que cumpla la ley de beer-lamber.

Caudal: 0.8

Presión: 3000 PSI

Columna:

Solvente: MeOH/ (70:30)

Temperatura: 30 ºC

mv Área (mv.s) T

(seg)

4 2



Por ej. TOLUENO

Donde el eje de la abscisa representa los valores de la concentración en PPM y el eje de

las ordenadas representa a los valores obtenidos de dicha área. Recordemos la guía ante-

rior cómo hacer para sacar la fórmula y el coef. R que me marca la linealidad de la fun-

ción.

Hacer lo mismo para el benceno y luego se les dará una muestra problema de concen-

tración desconocida.

Sabiendo que dicha muestra se encuentra el tolueno y el benceno

Calcular en que concentración se hallan e identificar cual de los picos encontrados en

distinto tiempo de retención, representan a cada una de las sustancias.

Para calcular ambas concentraciones el área obtenida llevarla a la formula que nos da

Excel; en este ejemplo sería y=2,079x.

Donde y= área muestra problema, X=??? nuestra concentración desconocida. Entonces

despejamos X de dicha fórmula y nos da la conc. a saber.

Por último cambiar la concentración del solvente (fase móvil) a 50:50 e inyectar cual-

quiera de las muestras anteriores, observar que pasa y sacar sus conclusiones.

Conc.

PPM

área(mv.s)

0 0

5000 11054,1

10000 21447,1

15000 30541,8

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