Fundamento de Fundamento de los análisis los análisis químicos en el químicos en el material biológico.material biológico.

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IIsani sani peña peña

yyolanda Trinidadolanda Trinidad

Los resultados de las investigaciones cualitativas y cuantitativas Los resultados de las investigaciones cualitativas y cuantitativas que se realizan en los líquidos del cuerpo, así como en que se realizan en los líquidos del cuerpo, así como en excreciones y otros sistemas orgánicos, solo pueden ser excreciones y otros sistemas orgánicos, solo pueden ser clínicamente útiles si los procedimientos analíticos son realizados clínicamente útiles si los procedimientos analíticos son realizados con la mayor exactitud posible esto implica el uso de los métodos con la mayor exactitud posible esto implica el uso de los métodos adecuados e instrumentos confiables.adecuados e instrumentos confiables.

El analista no solamente debe conocer perfectamente la técnica El analista no solamente debe conocer perfectamente la técnica correspondiente al método de análisis que ha de realizar, sino que correspondiente al método de análisis que ha de realizar, sino que además es esencial que tenga una buena base química además es esencial que tenga una buena base química instrumental, así como conocimientos de cada uno de los instrumental, así como conocimientos de cada uno de los aspectos técnicos de los procedimientos analíticos.aspectos técnicos de los procedimientos analíticos.

Debe conocer los principios químicos de los métodos usados, lo Debe conocer los principios químicos de los métodos usados, lo que implica conocimiento de las reacciones químicas y el efecto que implica conocimiento de las reacciones químicas y el efecto que puede provocar las diversas variables internas y externas.que puede provocar las diversas variables internas y externas.

Fundamentos de los métodos analíticos .Fundamentos de los métodos analíticos .

Los análisis químicos que se realizan en los fluidos biológicos tienen Los análisis químicos que se realizan en los fluidos biológicos tienen como finalidad aislar o separar un solo componente para determinar como finalidad aislar o separar un solo componente para determinar sin interferencia y con exactitud, utilizando procedimientos sin interferencia y con exactitud, utilizando procedimientos específicos.específicos.

Análisis cualitativos :identifican por medio químico los constituyentes Análisis cualitativos :identifican por medio químico los constituyentes que se encuentran en una mezcla (muestra).que se encuentran en una mezcla (muestra).

Análisis cuantitativo: miden la cantidad de un constituyente especifico Análisis cuantitativo: miden la cantidad de un constituyente especifico que se encuentra en una muestra.que se encuentra en una muestra.

Los fundamentos para cuantificar los componentes bioquímicos son Los fundamentos para cuantificar los componentes bioquímicos son un poco complejos y generalmente consiste en:un poco complejos y generalmente consiste en:

a)a) Separación de grupos funcionales orgánicos dentro de la estructura Separación de grupos funcionales orgánicos dentro de la estructura de los compuestos bioquímicos.de los compuestos bioquímicos.

b)b) Separación y determinación de iones.Separación y determinación de iones.

Los métodos analíticos se realizan mediante un proceso que Los métodos analíticos se realizan mediante un proceso que conlleva varias etapas:conlleva varias etapas:

1. 1. Obtención del sistema (muestra):elegir y obtener el liquido Obtención del sistema (muestra):elegir y obtener el liquido biológico o excreción en el cual el componente va a ser medido.biológico o excreción en el cual el componente va a ser medido.

2.2. Separación: eliminación de las proteínas y asilar la especie Separación: eliminación de las proteínas y asilar la especie química que va a reaccionar química o como parte de la misma.química que va a reaccionar química o como parte de la misma.

3. 3. Reacción química especifica: adicionar reactivos químicos Reacción química especifica: adicionar reactivos químicos específicos que desarrollan reacciones químicas con los grupos específicos que desarrollan reacciones químicas con los grupos funcionales orgánicos o con los iones. Que pueden ser de funcionales orgánicos o con los iones. Que pueden ser de diferentes tipos, dependiendo de las moléculas reaccionantes diferentes tipos, dependiendo de las moléculas reaccionantes (reducción, oxidación, hidrólisis, etc.).(reducción, oxidación, hidrólisis, etc.).

4.4. Medición de producto de la reacción: medir en el instrumentos Medición de producto de la reacción: medir en el instrumentos correspondiente la manifestación de la reacción química correspondiente la manifestación de la reacción química producida, la cual dependerá del tipo de reacciones que llevo a producida, la cual dependerá del tipo de reacciones que llevo a cabo. La manifestación puede ser:cabo. La manifestación puede ser:

• Cambio de colorCambio de color• Cambio de pHCambio de pH• Cambio de temperaturaCambio de temperatura• Aparición de energía luminosaAparición de energía luminosa• DesplazamientoDesplazamiento• Otros.Otros.

5.5. Determinación de resultados: realizar operaciones o cálculos Determinación de resultados: realizar operaciones o cálculos correspondientes al tipo de medición realizar para obtener el correspondientes al tipo de medición realizar para obtener el valor correspondientes a la cantidad del constituyente valor correspondientes a la cantidad del constituyente investigado.investigado.

Medición del producto de la Medición del producto de la reacción reacción

Existen diversos tipos de métodos que con diferentes fundamentos Existen diversos tipos de métodos que con diferentes fundamentos permiten la cuantificación de los componentes bioquímicos del permiten la cuantificación de los componentes bioquímicos del material biológico.material biológico.

Los fundamentos que se aplican más frecuentemente son:Los fundamentos que se aplican más frecuentemente son: EspectrofotometríaEspectrofotometría TitulaciónTitulación Cromatografía Cromatografía ElectroforesisElectroforesis InmunodifusiónInmunodifusión NefelometríaNefelometría BioluminiscenciaBioluminiscencia PotenciometríaPotenciometría Fotometría de emisión de llamaFotometría de emisión de llama Fotometría de absorción atómicaFotometría de absorción atómica Otros.Otros.

EspectrofotometríaEspectrofotometría

La mayoría de las determinaciones químicas cuantitativas de los La mayoría de las determinaciones químicas cuantitativas de los componentes de los fluidos biológicos se hicieron comunes componentes de los fluidos biológicos se hicieron comunes después que se empezaron a realizar los métodos después que se empezaron a realizar los métodos fotocolorimétricos.fotocolorimétricos.

Generalmente el fundamento de estos métodos es agregar una Generalmente el fundamento de estos métodos es agregar una solución desconocida (muestra), un reactivo de composición solución desconocida (muestra), un reactivo de composición conocida, se producirá una molécula, siempre y cuando exista una conocida, se producirá una molécula, siempre y cuando exista una especie química definida.especie química definida.

El color que se origina en la reacción estará en relación directa con El color que se origina en la reacción estará en relación directa con la concentración y ésta la encontramos realizando las lecturas en la concentración y ésta la encontramos realizando las lecturas en los aparatos fotocolorimétricos correspondientes,los aparatos fotocolorimétricos correspondientes, en base a la luz en base a la luz transmitida o absorbida por la solución colorada.transmitida o absorbida por la solución colorada.

La luz que incide en la solución coloreada se propaga en ondas.La luz que incide en la solución coloreada se propaga en ondas.

Longitud de ondaLongitud de onda de la luz se define como la distancia entre dos de la luz se define como la distancia entre dos picos adyacentes, cuando la luz recorre su camino de manera picos adyacentes, cuando la luz recorre su camino de manera ondulatoria. ondulatoria.

La longitud de onda son las que determinan el color de la luz, es La longitud de onda son las que determinan el color de la luz, es decir, cada longitud de onda es una banda en particular el espectro, decir, cada longitud de onda es una banda en particular el espectro,

que corresponde a un color determinado.que corresponde a un color determinado.

El término fotometría nos dice que: foto = Luz y metría = MedidaEl término fotometría nos dice que: foto = Luz y metría = Medida

La diferencia entre el fotómetro y el espectrofotómetro consiste La diferencia entre el fotómetro y el espectrofotómetro consiste en que:en que:

a)a) El fotómetro utiliza filtro para aislar parte del espectro.El fotómetro utiliza filtro para aislar parte del espectro.

b)b) El espectrofotómetro además de filtro utiliza un El espectrofotómetro además de filtro utiliza un espectroscopio o Mono cromador, que limita el espectro para espectroscopio o Mono cromador, que limita el espectro para obtener una verdadera luz monocromática, o sea, una luz de obtener una verdadera luz monocromática, o sea, una luz de acuerdo a la longitud de ondas seleccionadas. Ese acuerdo a la longitud de ondas seleccionadas. Ese espectroscopio está constituido por un prisma o una red de espectroscopio está constituido por un prisma o una red de difracción.difracción.

La determinación de los resultados se logra realizando previamente La determinación de los resultados se logra realizando previamente las lecturas en el instrumento correspondiente.las lecturas en el instrumento correspondiente.

La lectura se realiza en base a la luz transmitida: Transmitancia La lectura se realiza en base a la luz transmitida: Transmitancia (%T) o en base a la luz absorbida: (%T) o en base a la luz absorbida: Absorbancia (Abs ó D.O).Absorbancia (Abs ó D.O).

Para llegar a los resultados no solamente basta con leer, además Para llegar a los resultados no solamente basta con leer, además de obtener las lecturas es necesario la aplicación matemática de las de obtener las lecturas es necesario la aplicación matemática de las leyes de Beer y Lambert cuyos enunciados son:leyes de Beer y Lambert cuyos enunciados son:

““La concentración de una sustancia es directamente proporcionar La concentración de una sustancia es directamente proporcionar al color producida y a la cantidad de la luz absorbida e al color producida y a la cantidad de la luz absorbida e inversamente proporcional al logaritmo de la luz transmitida”inversamente proporcional al logaritmo de la luz transmitida”

Clasificación de los Métodos Según Clasificación de los Métodos Según los Volúmenes de Muestralos Volúmenes de Muestra

Dependiendo de la cantidad de muestra que utilicen, los métodos Dependiendo de la cantidad de muestra que utilicen, los métodos utilizados para determinar los componentes bioquímicos de los utilizados para determinar los componentes bioquímicos de los líquidos biológicos se clasifican en:líquidos biológicos se clasifican en:

Macrométodos:Macrométodos: utilizan volúmenes de muestra de 1,0 ml o utilizan volúmenes de muestra de 1,0 ml o más.más.

Micrométodos: Micrométodos: utilizan de 0,1-0,9 ml de muestra. (décimas).utilizan de 0,1-0,9 ml de muestra. (décimas). Ultramicrométodos:Ultramicrométodos: utilizan de 0,01-0,09 ml (10-90 ul) de utilizan de 0,01-0,09 ml (10-90 ul) de

muestra (centésimas)muestra (centésimas) Métodos de Nanolitros: Métodos de Nanolitros: utilizan volúmenes de 0,001-0,009 ml utilizan volúmenes de 0,001-0,009 ml

e incluso menores (milésimas).e incluso menores (milésimas).

un procedimiento usual en el laboratorio cuando se dispone de un procedimiento usual en el laboratorio cuando se dispone de una pequeña cantidad de muestra, es usar la mitad de la una pequeña cantidad de muestra, es usar la mitad de la cantidad especificada en la técnica, completarla diferencia con cantidad especificada en la técnica, completarla diferencia con agua (diluir) aplicar la técnica específica y luego multiplicar el agua (diluir) aplicar la técnica específica y luego multiplicar el resultado final por 2.resultado final por 2.

no es aconsejable subdividir más la muestra por varias razones, no es aconsejable subdividir más la muestra por varias razones, alguna de ellas son:alguna de ellas son:

1.1. La sensibilidad disminuye, producto de dispersiones de menor La sensibilidad disminuye, producto de dispersiones de menor escala en el espectrofotómetro.escala en el espectrofotómetro.

2.2. Los patrones y blancos se vuelven más críticos al acercarse Los patrones y blancos se vuelven más críticos al acercarse el valor de sus lecturas al de la muestrael valor de sus lecturas al de la muestra

3.3. Todos los errores que se cometen en la técnica se multiplican Todos los errores que se cometen en la técnica se multiplican en proporción con el factor de diluciónen proporción con el factor de dilución

4.4. La disminución en las concentraciones de proteínas pueden La disminución en las concentraciones de proteínas pueden originar cambios de pH, lo que podría invalidar las lecturas originar cambios de pH, lo que podría invalidar las lecturas finalesfinales

Gracias Por su atención!!!