���������������� �������� I.- INTRODUCCIÓN: La sangre está constituida básicamente por dos fases, una líquida y otra celular, que participan en funciones de termorregulación, homeostasis, defensivas, hemostasia y transporte de nutrientes, oxígeno y productos de desecho metabólico: 1.-Líquida o Plasma (Agua, hidratos de carbono, proteínas, lípidos, sales minerales, electrolitos, hormonas, vitaminas, enzimas…). 2.-Celular (células sanguíneas): (fig.1)

• Eritrocitos, hematíes o glóbulos rojos. • Leucocitos o glóbulos blancos. • Plaquetas.

A nivel práctico, el hemograma completo es aquella prueba que nos da información sobre la cantidad y cualidades de las diferentes poblaciones celulares de la sangre en base a una serie de datos numéricos y sus correspondientes valores de referencia (fig2.), gráficas (en caso de disponer de un contador celular automático) y observación microscópica de un frotis sanguíneo de calidad: Serie roja:

• Recuento total del número de eritrocitos. • Concentración de hemoglobina. • Hematocrito. • Índices eritrocitarios. • Recuento de reticulocitos (pacientes anémicos).

Serie blanca:

• Recuento total del número de leucocitos. • Recuento diferencial de las poblaciones leucocitarias.

Serie plaquetar:

• Recuento total del número de leucocitos. • Índices plaquetarios.

Frotis sanguíneo de calidad: verifica los valores numéricos del hemograma y lo

complementa dando una información adicional en relación al diagnóstico, pronóstico o tratamiento (comentario hematológico).

LEUCOCITO (Neutrófilo)

PLAQUETAS

HEMATÍES

LEUCOCITO (Linfocito) Fig.1.- Células sanguíneas en un frotis de sangre de perro (1.000x).

Un hemograma nos informa sobre el estado puntual (en ese momento) de la sangre (como ejemplo, la vida media de un neutrófilo en sangre es de 8 horas) por lo que se pueden apreciar cambios importantes en 24 horas, fundamentalmente en animales enfermos. La información proporcionada en pocas ocasiones nos dice la etiología del proceso de enfermedad, pero sí sus consecuencias a nivel sistémico (detecta anormalidades y estados patológicos).

Fig. 2.- Modelo de un hemograma completo (con datos numéricos y valores de referencia) emitido por un sistema informático centralizado.

II.- RECUENTOS CELULARES Y CONTADORES HEMATOLÓGICOS: Un hemograma puede realizarse manualmente o bien utilizando sofisticados contadores automáticos: Método manual: Permite realizar de forma económica la determinación directa del hematocrito así como recuentos del número de eritrocitos, leucocitos y plaquetas, sin embargo, si el número de muestras a procesar diariamente es elevado, no sería viable. Los sistemas utilizados son el Unopette con lectura en cámara de Neubauer (recuentos celulares) asociado a centrifugación en microcentrífuga de sangre recogida en capilar y lectura del hematocrito. Contadores automáticos: En términos generales un contador automático aspira sangre total (recogida en EDTA o Heparina), la diluye a una determinada proporción y la distribuye hacia 3 canales de lectura: 1.- Determinación de la concentración de hemoglobina por colorimetría previa lisis de los eritrocitos. 2.- Recuento de glóbulos rojos y plaquetas. 3.- Recuento de leucocitos y fórmula diferencial. Los métodos de lectura empleados para los recuentos celulares son diferentes según la tecnología del contador, siendo la impedancia y el láser los métodos más utilizados actualmente en los aparatos de hematología clínica y en menor medida el QBC (Cuantitative buffy coat). • Impedancia: Las células diluidas en una suspensión de electrolitos son alineadas y pasan a

través de una apertura en la cual fluye una corriente eléctrica (fig.3). Cada partícula que pasa por la apertura produce un cambio en la corriente o impulso eléctrico. El número de impulsos se corresponde con el número de partículas (recuento celular), mientras que la magnitud del mismo es proporcional al volumen de la partícula (tamaño celular). Los datos recogidos, son representados en un histograma.

• Láser: Miden el tamaño y la complejidad interna de las células en función de la dispersión,

en diferentes ángulos, de la luz que incide sobre ellas (fig.4). Suelen ir asociados a otra metodología como la impedancia, citoquímica, fluorescencia… Los datos recogidos, son representados en un escatergrama.

Fig.-3. Esquema del recuento por impedancia de plaquetas y eritrocitos. Imagen cortesía de Roche Diagnostics (Sysmex XT200 iV).

• QBC (Cuantitative buffy coat): basa los recuentos celulares en la separación de las

diferentes poblaciones en función de su densidad tras la centrifugación de la sangre, asociado a la emisión de fluorescencia en presencia de acridina naranja en células que contengan DNA/RNA.

De forma general, los contadores realizan determinaciones directas del número de glóbulos rojos, blancos y plaquetas, concentración de hemoglobina y volúmenes corpusculares, mientras que valores como el hematocrito (Hct), hemoglobina corpuscular media (HCM), concentración media de hemoglobina corpuscular (CMHC) y la amplitud de distribución de los eritrocitos (RDW) son parámetros calculados. Cada sistema en función de su complejidad tecnológica, tiene sus ventajas y/o desventajas y se recomienda, en caso de que la clínica veterinaria disponga de un contador, leer siempre el manual de instrucciones, con el fin de entender cómo funciona y realizar un buen uso del mismo (correcta conservación o mantenimiento). Gráficas: Histogramas: Gráfica en el que el número de partículas contadas se indica en el eje de ordenadas (Y) y la distribución por tamaño en el de abscisas (X). Gráfica típica para la representación de eritrocitos y plaquetas.(Fig.5).

Fig.-4.Esquema del funcionamiento del sistema láser en un contador hematológico Sysmex XT200 iV. Imagen cortesía de Roche Diagnostics.

Fig.-5.Histograma típico del recuento de glóbulos rojos. Sistema hematológico Sysmex XT200 iV. Imagen cortesía de Roche Diagnostics.

Escatergramas: Representación gráfica mediante la cual se refleja no sólo el volumen celular sino la complejidad interna de la célula en función de la dispersión que esta produce cuando incide sobre ella diferentes métodos de lectura. (Fig.6)

III.- INTERPRETACIÓN DEL HEMOGRAMA: De forma práctica, a la hora de enfrentarnos a un hemograma, lo vamos a estructurar en 4 partes: Serie roja, serie blanca, serie plaquetar y cometario hematológico (frotis de sangre):

HEMOGRAMA

SERIE ROJA

SERIE BLANCA

SERIE PLAQUETAR

Comentario hematológico (frotis de sangre)

Fig.-6. Escatergrama típico del recuento diferencial de leucocitos. Sistema hematológico Sysmex XT200 iV. Imagen cortesía de Roche Diagnostics.

Constituida por los glóbulos rojos, eritrocitos o hematíes, su principal función es transportar el oxígeno unido a la hemoglobina desde los pulmones a todas las células del organismo y el CO2 de la respiración celular desde los tejidos a los pulmones. El hemograma nos da información a cerca del recuento de eritrocitos, la concentración de hemoglobina, el hematocrito y los índices eritrocitarios: • RECUENTO DE ERITROCITOS: Número de glóbulos rojos expresados en millones/µl. Es un parámetro medido (no

calculado). En los contadores hematológicos suele venir expresado como RBC (red blood cell).

Aves y reptiles presentan eritrocitos nucleados por lo que los contadores convencionales no son válidos para realizar recuentos en estas especies.

• HEMOGLOBINA (Hb): Es la proteína que transporta el oxígeno y su concentración se mide en g/dl.

• HEMATOCRITO (HTC):

Es el volumen que ocupan los eritrocitos respecto al volumen total de sangre, expresado en porcentaje (%).

Htc del 50% Volumen total Volumen de eritrocitario sangre

SERIE ROJA

Valores fisiológicos:

Perro : 5.5-8.5x106/µl Gato: 5.0-10x106/µl

Valores fisiológicos:

Perro : 12-18 g/dl Gato: 8.0-15 g/dl

Los aparatos de hematología lo calculan en función del volumen corpuscular medio y del recuento eritrocitario:

En condiciones normales, la hemoglobina es la tercera parte del valor del hematocrito (+ 3),

de forma que si no se cumple esta relación, debemos buscar posibles alteraciones preanalíticas (ver comentario hematológico) como lipemia, hemólisis, escasa sangre en relación al volumen total de EDTA…, comprobar que no haya habido una incorrecta aspiración de muestra (coágulos…) y si fuera posible debemos realizar medición directa del valor hematocrito (microcentrífuga y capilar de hematocrito).

CONCEPTOS DE ANEMIA y POLICITEMIA

VCM x Nº Eritrocitos Htc= ------------------------------ (%)

10

Valores fisiológicos:

Perro : 37-55% Gato: 24-45%

DEFINICIÓN DE ANEMIA

� Disminución del nº de eritrocitos en sangre circulante. � Disminución del hematocrito. � Disminución de la concentración de hemoglobina.

(Por debajo de los valores fisiológicos)

Insuficiente para satisfacer las demandas de O2 de los tejidos.

DEFINICIÓN DE POLICITEMIA o ERITROCITOSIS � Aumento del nº de eritrocitos, hematocrito o hemoglobina por

encima de los valores fisiológicos. � Clasificación:

I.- Relativa (sin alteración de la eritropoyesis): - Deshidratación (hemoconcentración) - Contracción esplénica por estrés.

II.- Absolutas (por aumento de la eritropoyesis).

- Alteración en médula ósea: Policitemia vera. - Incremento síntesis eritropoyetina: Neoplasia o enfermedad

renal, hipoxia tisular (enfermedades cardiorespiratorias…).

• INDICES ERITROCITARIOS:

Nos informan a cerca del volumen medio de los eritrocitos, su contenido en hemoglobina y la diferencia de tamaño entre los eritrocitos:

Volumen corpuscular medio (VCM):

Da información sobre el volumen o “tamaño” medio de los eritrocitos expresado en fentolitros (fl). Es un parámetro de medición directa por los contadores automáticos, pero puede ser calculado manualmente en función de la siguiente relación:

Alteraciones: � Macrocitosis: Aumento del VCM.

- Errores preanalíticos: en sangres viejas los hematíes tienden a hinchar produciendo, a su

vez, falsos aumentos del hematocrito. - Raza: Macrocitosis hereditaria del Caniche. - Anemias regenerativas por incremento del número de precursores eritrocitarios

(policromatófilos). - Mielodisplasia (infección por el virus de la leucemia felina en gatos).

� Microcitosis: Disminución del VCM. - Raza: Chow chow, Shar Pei, Akita, Shiba Inu). - Anemias por deficiencia de hierro. - Shunts portosistémicos.

En patologías como la anemia hemolítica inmunomediada, hay presencia de eritrocitos microcíticos o esferocitos (resultado del ataque del sistema inmune sobre los hematíes) pero el VCM es elevado. La explicación se debe a la presencia simultánea de precursores eritrocitarios o policromatófilos (macrocíticos) que intentan regenerar la anemia. Fig.7.

Eritrocito Macrocítico o Policromatófilo Eritrocito microcítico

o esferocito

Eritrocito Normocítico

HTC (%) VCM= ------------------------------ x 10

Nº Eritrocitos

Valores fisiológicos:

Perro : 60-76 fl Gato: 39-55 fl

Fig.7.- Eritrocitos de diferente tamaño. Frotis de sangre (1.000x).

Concentración media de hemoglobina corpuscular (CMHC) y Hemoglobina corpuscular media (HCM): Dan información sobre el contenido en hemoglobina de los eritrocitos expresado en picogramos (pg). Son parámetros calculados en función de las relaciones siguientes:

Alteraciones:

� Hipercromía: Aumento del CMHC/HCM: - Un hematíe no puede contener más hemoglobina de la fisiológica, por lo que la

hipercromía se debe a artefactos como lipemia, hemólisis o presencia de cuerpos de Heinz (oxidación de la hemoglobina).

� Hipocromía: Disminución del CMHC/HCM:

- Disminución de la síntesis de hemoglobina: Anemias ferropénicas (el hierro es un

componente fundamental de la hemoglobina). - Anemias regenerativas por incremento del número de precursores eritrocitarios o

policromatófilos (presentan menor proporción de hemoglobina).

Ancho de distribución de la serie roja o red-cell distribution width (RDW):

Índice que informa a cerca de la anisocitosis eritrocitaria (diferencias entre volúmenes eritrocitarios) expresado en %.

• RECUENTO DE RETICULOCITOS:

Los reticulocitos son eritrocitos que no han alcanzado la madurez definitiva y presentan un menor contenido en hemoglobina (20%) y restos de mitocondrias y ribosomas.

• Con tinciones habituales aparecen como eritrocitos de mayor tamaño (macrocitos) y de

color gris azulado y reciben el nombre de policromatófilos. • Con tinciones supravitales (azul de metileno o azul de cresil brillante) se tiñen los restos

de ribosomas de su interior a modo de un punteado azul (reticulocitos punteados) o a modo de una retícula azul (reticulocitos agregados).

Hb (g/dl) CMHC = ------------------ x 100

Htc (%)

Hb (g/dl) HCM= ---------------------- x 10

Nº Eritrocitos

Valores fisiológicos:

Perro : 12-16 % Gato: 14-18 %

Al ser precursores de los eritrocitos maduros, su recuento da una idea del grado de regeneración de una anemia y por tanto de la respuesta de la médula ósea (fábrica de los eritrocitos).

Clasificación de las anemias según la respuesta de la médula ósea (reticulocitosis):

ANEMIAS

Regenerativas

No Regenerativas

HEMORRÁGICAS HEMOLÍTICAS MEDULARES EXTRAMEDULARES

Anemias regenerativas

Perro : > 60.000 reticulocitos/µl Gato: > 50.000 reticulocitos/µl

� Insuf. Renal crónica � Insuf. Hepática crónica � Inflamación crónica � Hipotiroidismo � Carenciales

� Inmunomediada � Infeccioso-parasitarias � Lesión oxidativa � Fragmentación eritrocitos � Congénitas

� Infecciosas: Leishmania, ehrlichia, FelV/FiV…

� Fármacos (quimioterapia) � Inmunomediadas � Neoplasia o metástasis