BIOLOGA DE ANIMALES III Semestre 2015-2 8-04-15FECUNDACION IN VITRO Karla Paola Garca !r"#$ !arlos A%&r's G(l G)me#$ Sa%&(*el Mart+%e#,IntroduccinIntroduccinEl -roceso &e .ert(l(#ac()% es/ e% t'rm(%os 0e%erales/ el co%tacto e%tre el )1"lo 2cel"lare-ro&"ctorao0ametoco% (%.ormac()% 0e%'t(ca-ro1e%(e%te &el -ro0e%(tor .eme%(%o3 4 eles-ermato#o(&e 20ameto co% (%.ormac()% 0e%'t(ca &e or(0e% masc"l(%o3, Al e%co%trarse estas &osc'l"las 5a-lo(&es/ -asa% -or -rocesos &e reco%oc(m(e%to es-ec.(cos -ara ca&a es-ec(e 2Gao etal/ 16873 4 em-(e#a% "% -roceso &e ."s()% co% el 8"e (%te0ra% la (%.ormac()% &e am*as -artes/ sereact(1a el meta*ol(smo &e s%tes(s &e -rote(%as 4 se lle1a a ca*o la -rol(.erac()% cel"lar,Al mome%to &e s" &esc"*r(m(e%to/ se -e%sa*a 8"e los es-ermato#o(&es era% a%(males-arast(cos 8"e 1(1a% e% elseme%/ ."e 5asta *asta%te t(em-o &es-"'s 8"e se &eterm(%) 8"ec"m-le%"%-a-el (m-orta%tee%los-rocesosre-ro&"ct(1os&elases-ec(es/ "%(%1est(0a&orllama&o 9ert:(0 *"sca*a "% or0a%(smo a-ro-(a&o -ara real(#ar o*ser1ac(o%es 4 &e esta .ormalle0) al er(#o &e mar Toxopneustes lividus/ 8"e te%a la 0ra% 1e%ta;a &e ser altame%te comIB3 e% los a%(males est?% &(r(0(&os -r(%c(-alme%te a -o&er &esarrollar %"e1as tec%olo0as -ara am-l(ar los co%oc(m(e%tos so*re los -rocesos (%1ol"cra&os e% el com-le;o .e%)me%o &e la re-ro&"cc()% as como (m-leme%tar *(otec%olo0as e% los a%(males &om'st(cos/ &e (m-orta%c(a comerc(al 4 es-ec(es s(l1estres -ara me;orar la e.(c(e%c(a re-ro&"ct(1a 4 0e%'t(ca &e &(c5as es-ec(es,i!tesisAl real(#ar las -re-arac(o%es &eo1oc(tos 4 es-ermato#o(&es/ s( se lle1a ca*o la .ec"%&ac()% in vitro/ e%to%ces se -o&r? o*ser1ar e% &(c5as -re-arac(o%es la -rese%c(a &e c(0otos los c"ales -rese%tara% &(.ere%c(as mor.ol)0(cas e% com-arac()% co% el o1oc(to %o .ec"%&a&o/ como -"e&e ser la -rese%c(a &e la mem*ra%a &e .ec"%&ac()% 4 la &(1(s()% cel"lar 2m(tos(s3, "etodologaMater(al*(ol)0(coF Se o*t"1(ero% 7 alme;as c5ocolatas &e "% resta"ra%te "% &a a%tes 4 se lesma%t"1o e% a0"a &e ac"ar(o, Poster(orme%teseesco0(ero%&os&eellas/ sea*r(ero%co%a4"&a&e"%*(st"r 4see;erc()-res()% -ara lo0rar s" a-ert"ra, H%a 1e# a*(ertas/ se (&e%t(.(c) la 0)%a&a,H%a 1e# (&e%t(.(ca&a la 0)%a&a &e las &os alme;as/ ca&a "%a se e=tra;o e% "%a ca;a Petr( 4 semaceraro% -ara(&e%t(.(car los 0ametos masc"l(%os 4 .eme%(%os e% el m(crosco-(o &e l"#, Para la .ec"%&ac()% in vitrose tom) "%a 0ota &e ca&a "%a &e las ca;as Petr( 4 se me#claro% e%"% -ortao*;etos -ara 1erlo al m(crosco-(o &e l"#, E% "%a ca;a Petr( a-arte se me#cl) el macera&o&ela0)%a&a&elmac5o45em*ra4 tam*('% seo*ser1aro% alm(crosco-(o,Poster(orme%tese es-er) ao*ser1ar la.ec"%&ac()%,Fig#$ Diagra%a de fecundacin invitroGarca !r"# Karla Paola&esultados De%tro &e las se(s alme;as c5ocolatas co% las 8"e se co%ta*a/ se lo0r) se-arar a "%a 5em*ra 4 "% mac5o/ -ara o*te%er los 0ametos se a*r() a las alme;as 4 se e=tra;ero% las0)%a&as 2>(0"ra 13 las c"ales se maceraro% 2>(0"ra 23/ &e las 0)%a&as macera&as se 5(c(ero% -re-arac(o%es -ara o*ser1arlas al m(crosco-(o )-t(co a 40= 2>(0"ra E3 4 as -o&er &(.ere%c(ar a los 0ametos 2o1oc(tos 4 es-ermato#o(&es3, H%a 1e# (&e%t(.(ca&os/ se ela*oraro% -re-arac(o%es co% los o1oc(tos 4 es-ermato#o(&es -ara 8"e se lle1ara a ca*o la .ec"%&ac()% in vitro, e% estas -re-arac(o%es se o*ser1) 8"e e.ect(1ame%te e% al0"%os o1oc(tos se lle1) a ca*o la .ec"%&ac()% in vitro 4 se -"&o o*ser1ar ta%to la ca-a 5(al(%a alre&e&or &el 5"e1o as como la mem*ra%a &e .ec"%&ac()% e (%cl"so e% al0"%os casos el (%(c(o &e la &(1(s()% cel"lar la c"al or(0(%ar(a -oster(orme%te al c(0oto &e &os c'l"las 2>(0"ra 43,Figura 1: Se muestran las alme&as a'iertas( #A% hem'ra ) #A*1% macho. Tam'ien se se+alan las ,nadas #-% de un color ca./*verdoso. Figura 2:Macerado de las ,nadas en ca&as 0etri( #A% hem'ra ) #A*1% macho, se puede distinuir un cam'io en el color del macerado, en el caso de la hem'ra es m1s o'scuro. Figura 3: 0reparaciones reali2adas con los macerados( #A% hem'ra3 se muestran los ovocitos con un tama+o considera'le, #A*1% macho3 se muestran los espermato2iodes de menor tama+o 4ue los ovocitos ) redondos. Figura 4: 0reparaciones de ovocitos ) espermato2oides, en los cuales se llevo a ca'o la .ecundacion in vitro en alunos ovocitos( #A% cioto a 5!x3 en el cual se puede o'servar la capa hialina 4ue cu're la super6cie del huevo, asi como la mem'rana de .ecundacion, #A*1% ciotos a 1!x3 en los cuales se o'serva tam'ien la capa hialina e incluso en alunos de ellos se o'serva una .orma de 7pera8 4ue dara paso a la division celular.Discusion' Pr(merame%te -o&emos &(st(%0"(r 8"e la re-ro&"cc(o% e% las alme;as es a%(so0Mm(ca/ 4a 8"e los0ametos so% &(st(%tos/ am*os so% re&o%&os -ero los es-ermato#o(&es so% &e me%or tama@o 8"elos o1oc(tos,S( *(e% el -roceso &e la .ec"%&ac(o% e% las alme;as c5ocolatas 2Megapitaria squalida3%o es *(e%co%oc(&o/ se -"e&e com-arar &(c5o -roceso co% el4a est"&(a&o e% otros or0a%(smos mar(%osco% .ec"%&ac(o% e=ter%a como es el caso &el er(#o &e mar, Po&emos &ec(r 8"e s( se lle1o a ca*o la .ec"%&ac(o% in vitro 4a 8"e se o*ser1o la -rese%c(a &e lamem*ra%a &e .ert(l(#ac(o% 4 la ca-a 5(al(%a ro&ea%&o al 5"e1o, E% los er(#os &e marF "%a 1e# 8"elos es-ermato#o(&es se "%e% a la #o%a -el"c(&a t(e%e l"0ar la reacc(o% acrosom(ca e% la c"al lase%#(mas acrosom(cas a*re% "%a 1(a &e -e%etrac(o% 8"e -erm(te 8"e el es-ermato#o(&e se "%a ala mem*ra%a -lasmat(ca &el o1oc(to -ara .ec"%&arlo/ -oco &es-"es &e la .ec"%&ac(o%se -ro&"cela reacc(o% cort(cale% la c"alla e%tra&a &eles-ermato#o(&e e% la la mem*ra%a -lasmat(ca 1aacom-a@a&a &ela."s(o% &e 0ra%"los cort(cales co%lamem*ra%a-lasmat(ca &elo1"lo/ estos0ra%"los l(*era% s" co%te%(&o 4 "%a e%#(ma l(*era&a &estr"4e los rece-tores &e loses-ermato#o(&es s(t"a&os e% la ca-a 1(tel(%a/ -oster(orme%te la ca-a 1(tel(%a se se-ara &el o1"lo4las-rote(%as-roce&e%tes&elos0ra%"loscort(calesseasoc(a%co%lamem*ra%a1(tel(%atra%s.orma%&ola e% "%a c"*(erta -rotectorallama&a mem*ra%a &e .ec"%&ac(o%, Al m(smo t(em-ootro mater(al colo(&al -roce&e%te &e los 0ra%"los cort(cales 1a c"*r(e%&o la s"-er.(c(e &el 5"e1o 4.orma "%a mem*ra%a tra%s-are%te llama&a ca-a 5(al(%a 2E-el/16L83, S( *(e% %o -"&(mos o*ser1ar to&os estos -rocesos (%1ol"cra&os e% la .ormac(o% &e la mem*ra%a&e .ec"%&ac(o% 4 la ca-a 5(al(%a &e1(&o a 8"e se &a% &e ma%era ra-(&a/ s( se o*ser1aro% am*asestr"ct"ras e% los c(0otos o*te%(&os e% las -re-arac(o%es &e o1oc(tos 4 es-ermato#o(&es,Otra cosa 8"e se -"&o o*ser1ar e% las -re-arac(o%es ."e la .orma &e N-eraO &el o1"lo/ esta .ormase &e*e a 8"e se esta*a lle*a%&o a ca*o la &(1(s(o% cel"lar 2m(tos(s3/ -ara &ar l"0ar a "% c(0oto &e&os cel"las 4 as(s"ses(1ame%te 2-roceso &e se0me%tac(o%3, S(% em*ar0o %o se -"&o se0"(ro*ser1a%&o la &(1(s(o% 5asta 8"e se com-letara 4 se .ormara% las &os cel"las, Conclusion' A -esar &e la (m-orta%c(a comerc(al &e la alme;a c5ocolata 2Megapitaria squalida)/ se co%oce m"4-oco so*re s" *(olo0a/ 4 cas( %a&a so*re s" re-ro&"cc()%/ s" .ec"%&ac(o% es e=ter%a -ro-(a &ea%(males ac"?t(cos/ e% la c"al los (%&(1(&"os la%#a% al a0"a s"s 0ametos,Me&(a%te los -roce&(m(e%tos &e la .ec"%&ac()% (% 1(tro 2>IB3 se -"e&e o*te%er ma4orco%oc(m(e%to so*re el -roceso &e la .ec"%&ac()% e% este caso e% las alme;as c5ocolatas, La >IBtam*('% es "%a 5erram(e%ta (m-orta%te e% elme;oram(e%to &e la e.(c(e%c(a re-ro&"ct(1a &e losor0a%(smos &e (m-orta%c(a comerc(al " otrases-ec(es, E% el-rese%te tra*a;o se -"&o real(#arla .ec"%&ac(o% (% 1(tro &e &(c5as alme;as/me&(a%te lareal(#ac(o% &e -re-arac(o%es co% o1oc(tos 4 es-ermato#o(&es o*te%(&os &e las 0)%a&as&e "%mac5o 4 "% 5em*ra/ se o*ser1aro% las &(.ere%c(asmor.ol)0(cas&el o1"lo &es-"es &e la.ec"%&ac(o% -or el es-ermato#o(&e as( como el (%(c(o &el -roceso &ese0me%tac(o% e% la c"al 5a4"%a ser(e &e &(1(s(o%es m(tot(cas, &eferencia' El -roceso &e la .ec"%&ac(o%, Da1(& E-el, I%1est(0ac(o% 4 !(e%c(a/16L8, No, 17F72-LE,&E(U)*ADO(H%a 1e# 8"e se a*r(ero% las alme;as/alte%er las 0)%a&as m"4 -arec(&as/ se t"1(ero% 8"e o*ser1ar alm(crosco-(o al0"%as m"estras -ara 1er(.(car la -rese%c(a &e 0ametos masc"l(%os 4 .eme%(%osres-ect(1ame%te, Se o*ser1) 8"e "%a &e las alme;as 25em*ra3 te%a "%a 0)%a&a &e color 1er&e -astoso 4osc"ro/ m(e%tras 8"e la otra 2mac5o3 -rese%ta*a "%a colorac()% ca.' m?s clara,E% el macera&o &e las 0)%a&as se o*ser1a 8"e la colorac()% &e los macera&os es l(0erame%te&(.ere%te/ 4a 8"e el macera&o &e la 5em*ra es &e colorac()% m?s osc"ra 8"e la &el mac5o,H%a 1e# o*ser1a&os los 0ametos al m(crosco-(o &e l"#/ se -"&(ero% (&e%t(.(car -or el tama@o/ .orma 4 ca%t(&a&, E% el caso &e los .eme%(%os/ est?% e% me%or ca%t(&a&/ -ero so% m?s 0ra%&es 4 o1ales 8"e los masc"l(%os/ -"es estos so% me%os 0ra%&es -ero e% -ro-orc()%/ so% m?s,9i.1. -,nadas de #Megapitaria squalida).A. Alme&a :em'ra. ;. Alme&a macho.9i.". Macerado de #Megapitaria squalida).A. Alme&a :em'ra. ;. Alme&a macho.9i.os contornos en a2ul, representan la capa de .ecundaci,n 4ue se .orma alrededor del ,vulouna ve2 4ue el espermato2oide penetra al ovocito.DI(CU(I+NEl -roceso &e .ec"%&ac()% es "% -roceso m"4 com-le;o/ como se -"&o o*ser1ar e% la -r?ct(ca,E% elcaso &e %"estro e8"(-o/ "samos alme;as, El"sar este mo&elo *(ol)0(co/ res"lt) &e 0ra%co%1e%(e%c(a -or8"e la e=tracc()% &e 0)%a&as &e estos a%(males es &e s"ma .ac(l(&a& 4 a&em?s/l(*era% "% ele1a&o %