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FACULTAD DE MEDICINA HUMANA Y CIENCIAS DE SALUD
ESCUELA PROFESIONAL DE ESTOMATOLOGÍA
TESIS
EFECTO ANTIBACTERIANO DEL ACEITE ESENCIAL
DEL EUCALYPTUS GLOBULUS (EUCALIPTO) FRENTE A
CEPAS DE PORPHYROMONA GINGIVALIS. ESTUDIO IN
VITRO. TACNA - 2017
PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE CIRUJANO
DENTISTA
PRESENTADO POR:
BACHILLER: DIAZ RAMIREZ, JAQUEDITH DEL PILAR
ASESOR: MG. RODRÍGUEZ SALAZAR, DAVID YERET
LIMA – PERÚ
2018
1
TESIS
EFECTO ANTIBACTERIANO DEL ACEITE ESENCIAL
DEL EUCALYPTUS GLOBULUS (EUCALIPTO) FRENTE
A CEPAS DE PORPHYROMONA GINGIVALIS. ESTUDIO
IN VITRO, TACNA ,2017
BACHILLER: JAQUEDITH DEL PILAR DIAZ RAMIREZ
ASESOR: MG. RODRÍGUEZ SALAZAR, DAVID YERET
ÁREA DE INTERÉS: BIOLOGÍA ESTOMATOLOGICA
EJE TEMÁTICO: MICROBIOLOGIA EN
ESTOMATOLOGIA
LIMA – PERÚ
2018
2
A mis padres Israel y Vilma, quienes
con cariño y con esfuerzo me han
acompañado en este proceso.
3
A mi asesor David Rodríguez, se le
agradece por su contribución para el
desarrollo de esta tesis
4
RESUMEN
En el presente estudio se demostró el efecto antibacteriano del aceite esencial
del Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a cepas de Porphyromona gingivalis.
Estudio in vitro, Tacna, 2017. Donde se obtuvo el aceite esencial del
Eucalyptus globulus (Eucalipto) mediante la destilación por arrastre de vapor.
Se utilizaron los métodos de Kirby Bauer, para determinar el grado de
sensibilidad en función al tamaño de los halos de inhibición que se obtuvo
aplicando el aceite esencial de Eucalyptus globulus frente a la cepa de
Porphyromona Gingivalis mediante la siembra por difusión; la concentración
mínima inhibitoria (CMI) y la Concentración mínima bacteriana (CMB). Se
demostró que la cepa de Porphyromona Gingivalis presenta sensibilidad al
aceite esencial de Eucalyptus globulus presentando un halo de inhibición
superior a 14 mm. La CMI para Porphyromona gingivalis fue de 8.144 mg/ml. Y
la CMB fue de 8.653 mg/ml. Se demuestra que el aceite esencial de Eucalyptus
globulus “eucalipto” si presenta acción antibacteriana In Vitro frente a la cepa
de Porphyromona gingivalis.
Palabras clave: Eucalipto, Pophyromona Gingivalis, aceite esencial.
5
ABSTRACT
To determine the antibacterial effect of the essential oil of Eucalyptus globulus
(Eucalipto) against strains of Porphyromona gingivalis. In vitro study, Tacna,
2017. The essential oil of Eucalyptus globulus (Eucalyptus) was obtained by
steam distillation. We used the methods of: a) Kirby Bauer, to determine the
degree of sensitivity according to the size of the inhibition halos that was
obtained by applying the essential oil against the Porphyromona Gingivalis
strain by diffusion sowing b) Minimum inhibitory concentration (CIM) C)
Minimum Bacterial Concentration (CMB). It was demonstrated that the
Porphyromona Gingivalis strain presents sensitivity to Eucalyptus Globulus
essential oil by means of a halo of inhibition greater than 14 mm. The MIC for
Porphyromona Gingivalis was 8,144 mg / ml. And the CMF was 8,653 mg / ml.
The essential oil of Eucalyptus Globulus "eucalypto" if it presents antibacterial
action In Vitro against the Porphyromona Gingivalis strain.
Keywords: Eucalyptus, Pophyromona Gingivalis, Essential oil.
6
ÍNDICE pág.
DEDICATORIA
AGRADECIMIENTO
RESUMEN
ABSTRACT
ÍNDICE
ÍNDICE DE TABLAS
ÍNDICE DE GRÁFICOS
INTRODUCCIÓN 11
CAPÍTULO I. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
1.1. Descripción de la problemática. 13
1.2. Formulación del problema. 15
1.3. Objetivos de la investigación. 16
1.4. Justificación de la investigación. 16
1.4.1 Importancia de la investigación. 16
1.4.2 Viabilidad de la investigación. 17
1.5. Limitaciones de la investigación. 17
CAPÍTULO II. MARCO TEÓRICO
2.1. Antecedentes de la investigación. 18
2.2. Bases teóricas. 21
2.2.1. Bacterias periodontopatógenas 21
2.2.2. Eucalyptus Globulus 25
2.3. Definición de términos básicos. 28
7
CAPÍTULO III. HIPÓTESIS Y VARIABLES DE LA INVESTIGACIÓN
3.1. Hipótesis general y derivada. 30
3.2. Variables; definición conceptual y operacional. 30
CAPÍTULO IV. METODOLOGÍA
4.1. Diseño metodológico. 32
4.2. Diseño muestral. 32
4.3. Técnicas e instrumentos de recolección de datos y confiabilidad. 33
4.4. Técnicas de procesamiento de datos. 35
4.5. Técnicas estadísticas utilizadas en el análisis de la información. 41
CAPÍTULO V. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN
5.1. Análisis descriptivo, tablas de frecuencia, gráficos. 42
5.2. Comprobación de hipótesis. 51
5.3. Discusión. 52
CONCLUSIONES 56
RECOMENDACIONES 57
FUENTES DE INFORMACIÓN 58
ANEXOS 62
Anexo N° 01: Carta de presentación.
Anexo N° 02: Constancia de laboratorio.
Anexo N° 03: Protocolo de conservación del aceite esencial.
Anexo N° 04: Eliminación de desechos biológicos.
Anexo N° 05: Certificado del aceite esencial.
Anexo N° 06: Tabla de recolección de datos.
8
Anexo N° 07: Matriz de consistencia.
Anexo N° 08: Fotografías.
9
ÍNDICE DE TABLAS
Tabla N°1. Actividad antibacteriana del aceite esencial de
Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a Porphyromona gingivalis
por el método de difusión en disco (Kirby Bauer).
Tabla N°2. Grado de sensibilidad que presenta la cepa de
Porphyromona gingivalis frente al aceite esencial de Eucalyptus
globulus (Eucalipto).
Tabla N°3. Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del aceite
esencial del Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a la cepa de
Porphyromona gingivalis.
Tabla N°4. Concentración Mínima Bacteriana (CMB) del aceite
esencial del Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a la cepa de
Porphyromona gingivalis.
Tabla N°5. Acción antibacteriana del aceite esencial de
Eucalyptus globulus frente a Porphyromona gingivalis.
pág.
43
45
47
49
51
10
ÍNDICE DE GRÁFICOS
Gráfico N°1. Actividad antibacteriana del Aceite Esencial de
Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a Porphyromona gingivalis
por el método de difusión del disco (Kirby Bauer).
Gráfico N°2. Grado de sensibilidad que presenta la cepa de
Porphyromona gingivalis frente al aceite esencial de Eucalyptus
globulus (Eucalipto).
Gráfico N°3. Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del aceite
esencial del Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a la cepa de
Porphyromona gingivalis.
Gráfico N°4. Concentración Mínima Bacteriana (CMB) del aceite
esencial del Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a la cepa de
Porphyromona gingivalis.
pág.
44
46
48
50
11
INTRODUCCIÓN
La presente investigación titulada” Efecto antibacteriano del aceite esencial del
Eucalyptus globulus, sobre la cepa de Porphyromona gingivalis. Estudio in
vitro. Tacna 2017” tuvo como finalidad determinar la efectividad antibacteriana
del aceite esencial del Eucalyptus globulus, sobre la cepa de Porphyromona
gingivalis.
El legado de la Medicina tradicional peruana, las plantas medicinales, siguen
siendo la primera instancia de consulta y tratamiento en el Perú, en cual
presenta una flora variada calculada aproximadamente en 80,000 especies, ya
que contamos con 28 climas de los 32 existentes en el planeta, y 84 de las 103
zonas de vida reconocidas en la tierra.1
Las plantas medicinales y la medicina tradicional han sido reconocido por la
Organización Mundial de la Salud (OMS) que reconoce su importancia en los
sistemas de salud en muchos países en vías de desarrollo, instando a los
estados y miembros a hacer estudios de las plantas medicinales utilizadas por
los curanderos tradicionales y la población para determinar aquellos que
tengan un efecto satisfactorio, de manera de incluirlas en la Farmacopea
Nacional.2
Frente a este problema nos formulamos esta pregunta:
¿Cuál será el efecto antibacteriano del aceite esencial del Eucalyptus globulus,
sobre la cepa de Porphyromona gingivalis Estudio in vitro Tacna 2017?
A continuación, describiremos la estructura detallada del presente trabajo de
investigación que comprende así:
CAPÍTULO I: Se planteó el problema de la investigación, así como se
describieron los objetivos de la investigación la cual se formuló ante la
necesidad de conocer el efecto antibacteriano del aceite esencial del
Eucalyptus globulus, sobre la cepa de Porphyromona gingivalis Estudio in vitro
y así mismo su justificación, donde describimos la importancia y la viabilidad de
la investigación, por último, las limitaciones del orden metodológico, en la
búsqueda de información y en el tiempo.
12
CAPÍTULO II: Comprende los antecedentes internacionales y nacionales del
mismo modo las bases científicas teóricas de la investigación que incluye los
conceptos básicos de la investigación.
CAPÍTULO III: Se describieron la definición, identificación y clasificación de
variables descritas en la matriz de operacionalización de variables.
CAPÍTULO IV: Así mismo se describió la metodología: el diseño metodológico,
el diseño muestral, matriz de consistencia, las técnicas e instrumentos de
recolección de datos, validez y confiabilidad, del mismo modo técnicas de
procesamiento de la información y las técnicas estadísticas utilizadas en el
análisis de la información.
CAPÍTULO V: Se presentó el análisis y discusión, realizando el análisis
descriptivo, las tablas de frecuencia y los gráficos por último la discusión.
Así mismo se presentó a las conclusiones y recomendaciones obtenidas
producto de nuestra investigación.
Por último, mencionaremos las fuentes de información consultadas y el grupo
de anexo que se realizó en nuestra investigación.
13
CAPÍTULO I
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
1.1 Descripción de la realidad problemática
Las plantas medicinales, como parte del legado de la Medicina tradicional
peruana, herencia de tiempos precolombinos, siguen siendo la primera
instancia de consulta y tratamiento en el Perú, en cual presenta una flora
variada calculada aproximadamente en 80,000 especies, ya que contamos con
28 climas de los 32 existentes en el planeta, y 84 de las 103 zonas de vida
reconocidas en la tierra.1
El uso de las plantas medicinales y la medicina tradicional ha sido reconocido
por la OMS que reconoce su importancia en los sistemas de salud en muchos
países en vías de desarrollo, instando a los estados y miembros a hacer
estudios de las plantas de manera de incluirlas en la Farmacopea Nacional.2
Por Resolución Ministerial en 1989, se logró aprobar el listado de recursos
terapéuticos vegetales para ser usado en los centros asistenciales del Seguro
Social de Salud (EsSALUD), sin embargo no logró el impacto necesario en los
profesionales de la salud para su utilización debido, entre muchas causas, al
desconocimiento de la acción terapéutica acompañada de una experiencia
clínica confiable con un soporte de control toxicológico de las plantas
medicinales mencionadas que generó mucha desconfianza entre los galenos.3
La medicina tradicional tiene importancia por sus grandes aportes a la medicina
moderna, los pobladores dan solución a muchos de los problemas de
subsistencia y conservación de la salud física y mental, aplicando
conocimientos adquiridos de sus antepasados acerca de las plantas con
actividad terapéutica. La abundancia y gran diversidad de estas plantas en
forma silvestre y su fácil comercialización por los bajos costos que tienen,
posibilitan su adquisición por las personas más necesitadas y para sustituir a
los medicamentos de síntesis de altos costos. Actualmente es material básico
para la formulación de nuevas drogas o para formular modelos de compuestos
farmacológicamente activos.4
14
Las plantas medicinales han sido consideradas a través de los años como el
origen o punto de partida del desarrollo de los medicamentos, ya que han
contribuido grandemente al descubrimiento de nuevas sustancias con actividad
biológica y a la producción de fitofármacos siendo muy peculiar su uso en
forma de droga seca, extracto acuoso o decocción. Es la fuente de
medicamentos más económica y de mayor disponibilidad para la mayoría de
los países. Reportes de OMS indican que el 80 % de la población mundial
conoce de las ventajas y uso del manejo de medicamentos elaborados a base
de plantas medicinales en la atención primaria de salud, pero también indican
que los estudios existentes sobre dichas plantas son insuficientes para aceptar
su uso de forma masiva, por lo cual ha orientado protocolos científicos para el
desarrollo de fitofármacos, de manera que los ensayos farmacodinámicos y
toxicológicos siempre antecedan a la experimentación clínica.5
Actualmente el uso de colutorios o enjuagues bucales comerciales como
agentes antimicrobianos se han utilizado con frecuencia en la consulta
odontológica.6
Se ha demostrado la gran actividad antimicrobiana que presentan los
enjuagues a base de aceites esenciales, que no han demostrado efectos
adversos (manchas extrínsecas a nivel dental, lesiones a nivel de tejidos
blandos y reducen la flora bacteriana total.7
El término aceite esencial, o esencia, presenta muchas dificultades cuando se
busca una definición que generalice este concepto. Existen definiciones desde
el punto de vista químico, botánico y desde una perspectiva industrial. Todas
coinciden en aspectos como su insolubilidad en agua, que pertenecen al
metabolismo secundario de las plantas, que están formadas por varios
compuestos químicos de estructura diferente y que en su composición poseen
algún terpenoide.8
La mayoría de los compuestos con actividad antibacteriana encontrados en
especies vegetales, son compuestos fenólicos, terpenos, alcoholes alifáticos,
aldehídos, cetonas, ácidos e isoflavonoides; los cuales en su mayoría son
15
identificados como metabolitos secundarios, enzimas hidroliticas (glucanasas,
citinasas) y proteínas.9
Las hojas del Eucalyptus globulus (Eucalipto) contienen aceite esencial
principalmente cineol, fravonoides, taninos y ácidos, los cuales proporcionan al
eucalipto de acción expectorante, antimicrobiana, analgésica, balsámica,
antibacteriana, febrífuga, diurética, cicatrizante, antirreumático, vermífuga,
antiviral, rubefaciente, antiséptica, depurativa, descongestiva, antiespasmódica,
fluidificante, vulneraria y antiinflamatoria es así como esta planta se ha utilizado
tradicionalmente como remedio natural para restablecer la salud.8
Las enfermedades gingivales son una amplia familia de patologías diferentes y
complejas, que se encuentran confinadas a la encía y son el resultado de
diferentes etiologías. El interés por las alteraciones gingivales se basa no tanto
en su gravedad, sino en su enorme prevalencia entre la población. Las
enfermedades gingivales forman un grupo heterogéneo, en el que se pueden
ver problemas de índole exclusivamente inflamatoria, pero también alteraciones
de origen genético, traumático o asociadas a alteraciones sistémicas. La
gingivitis es la primera forma de enfermedad periodontal y se define como una
condición inflamatoria de los tejidos gingivales que están alrededor del diente.10
Uno de los métodos preventivos del control de patologías dentales está dirigido
al control de la formación de la placa dental, para así lograr reducir la presencia
del agente patógeno, por lo que se está realizando estudios sobre sustancias
naturales que posean propiedades farmacológicas antibacterianas.11
La finalidad en la presente investigación es conocer y demostrar
científicamente el efecto antibacteriano in vitro del aceite esencial de
Eucalyptus globulus (eucalipto) frente a la bacteria patógena Porphyromonas
gingivalis.
16
1.2 Formulación del problema
1.2.1. Problema Principal
¿Cuál será el efecto antibacteriano del aceite esencial del Eucalyptus globulus,
sobre la cepa de Porphyromona gingivalis. Estudio in vitro. Tacna 2017?
1.2.2. Problema Secundario
- ¿Cuál será el grado de sensibilidad que presenta la cepa de Porphyromona
gingivalis al Aceite esencial de Eucalyptus globulus (eucalipto) mediante la
técnica de difusión en disco?
- ¿Cuál será la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del Aceite esencial de
Eucalyptus globulus (eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona
gingivalis?
- ¿Cuál será la Concentración Mínima Bacteriana (CMB) del Aceite esencial
de Eucalyptus globulus (eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona
gingivalis?
1.3 Objetivo de la investigación
1.3.1. Objetivo General
Evaluar el efecto antibacteriano del aceite esencial del Eucalyptus globulus,
sobre la cepa de Porphyromona gingivalis. Estudio in vitro. Tacna 2017.
1.3.2. Objetivos Específicos
- Determinar el grado de sensibilidad que presenta la cepa de Porphyromona
gingivalis frente al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)
mediante la técnica de difusión en disco.
- Determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del aceite esencial de
Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona
gingivalis.
- Determinar la Concentración Mínima Bacteriana (CMB) del aceite esencial
de Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona
gingivalis.
17
1.4 Justificación de la investigación
De no haberse realizado este trabajo de investigación no se tendria información
especifica sobre el efecto antibacteriano del aceite esencial de Eucalyptus
globulus (Eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona gingivalis.
1.4.1 Importancia de la investigación
El resultado del presente estudio de investigación es de importancia para la
comunidad odontológica tanto para docentes como estudiantes, ya que se le
brindar un aporte experimental evaluando el efecto antibacterial de una planta
medicinal (el eucalipto) frente a una bacteria relacionada con enfermedades
gingivales como periodontales que están catalogadas entre las afecciones más
comunes del género humano, se les ofrece una alternativa que va de acuerdo
con las posibilidades económicas para el paciente u odontólogo y que está al
alcance ambiental para su uso como alternativa medicinal.
Es de importancia también para la industria farmacéutica porque se establece
posibles parámetros referenciales que pueden ser utilizados para la
preparación, formulación y venta de productos a base del aceite esencial de
eucalipto que se puede utilizar en casos de gingivitis.
1.4.2 Viabilidad de la investigación
La investigación fue viable ya que se contó con los recursos para ejecutarla.
El análisis se realizó en el laboratorio de Química de la Facultad de
Microbiología – Biología de la Universidad Nacional Jorge Basadre Ghromann,
se coordinaron los horarios para la realización de los procedimientos.
La presente investigación se realizó a través del estudio in vitro del aceite
esencial del eucalipto se cuantifico y demostró los beneficios como un buen
potencial antibacteriano para su buen aprovechamiento de este recurso, a la
vez ampliar los conocimientos útiles de dicho producto.
1.5 Limitaciones de la investigación
El presente trabajo tuvo limitaciones en la disponibilidad del laboratorio, por
motivos académicos de la universidad en lo cual se pidió el permiso necesario.
18
Se acudió semanas antes para poder obtener y reactivar el microorganismo
patógeno, se tuvo limitaciones también en el momento de conseguir los medios
de cultivos el cual se mandó a pedir de la ciudad de Arequipa donde se retrasó
el pedido.
19
CAPÍTULO II
MARCO TEÓRICO
2.1 Antecedentes de la investigación
Antecedentes Internacionales
Montamayel F et al. (2013) Determinaron la actividad antibacteriana de los
extractos de plantas incluyendo ajo y extractos de eucalipto contra bacterias
cariogénicas, Streptococcus mutans y Lactobacillus acidophilus, evaluaron el
efecto de diferentes concentraciones de extractos alcohólicos de eucalipto y ajo
sobre S.mutans y Lactobacillus acidophilus, se prepararon 72 agar Muller
Hinton de sangre de oveja, se determinó el perfil de sensibilidad de las
bacterias de acuerdo con el método de Bauer-Kirby. Cuatro medios de cada
grupo fueron considerados como controles. Las zonas de inhibición se midieron
después de 24 h de incubación a 37ºC en la presencia de 5% de CO2. La
interpretación de la resistencia se comparó con los medios que contenían
antibióticos Ambas bacterias, S.mutans y Lactobacillus acidophilus, fueron
resistentes al extracto de eucalipto pero sensible al extracto de ajo. El diámetro
de la zona de inhibición aumentó a medida que la concentración de extracto de
ajo aumentado. Además, ambas bacterias eran susceptibles a penicilina y
eritromicina. Sin embargo, S. mutans fue más sensible a la eritromicina,
mientras que Lactobacillus acidophilus fue más sensible a penicilina. Parece
que el extracto de ajo tiene un efecto antibacteriano potencial contra agentes
cariogénicos tales como S. mutans y Lactobacillus acidophilus in vitro, mientras
que el extracto de eucalipto no tuvo ningún efecto. Sin embargo, necesitamos
más pruebas científicas basadas en ensayos clínicos aleatorios con el fin de
investigar la actividad antimicrobiana del ajo contra estas bacterias in vivo y su
efecto en la prevención o reducción de caries dental.12
Ayala A. (2016). Hicieron una investigación del efecto antibacteriano del aceite
esencial de margarita (Calendula officinalis) y jengibre (Zingiber officinale) vs.
Clorhexidina al 2% sobre cepas de Porphyromona gingivalis: estudio in vitro.
Proyecto de investigación presentado como requisito previo a la obtención del
20
título de Odontóloga. Carrera de Odontología. El propósito del presente trabajo
de investigación fue determinar la actividad antibacteriana de los aceites
esenciales de Margarita (Calendula officinalis) y Jengibre (Zingeber officinale)
sobre cepas de Porphyromonas gingivalis, una de las bacterias que con mayor
frecuencia se presentan en la enfermedad periodontal. Los aceites se
obtuvieron mediante el método de arrastre de vapor, fueron colocados en los
medios de cultivo por medio de sensidiscos observándose lo siguiente: la
eficacia antibacteriana del aceite de esencial de Margarita obtuvo un promedio
de 5mm de halo inhibitorio, Jengibre obtuvo 11.5mm de halo inhibitorio, siendo
mayor el efecto antibacteriano del aceite esencial de Jengibre, pero menor al
halo inhibitorio de la sustancia de control Clorhexidina al 2%, de 22mm.13
Bonilla D et al. (2016) El estudio realizado en Bogotá, evaluó el efecto del
aceite esencial de Rosmarinus officinalis sobre Porphyromonas gingivalis
cultivada in vitro El objetivo de este estudio fue determinar la susceptibilidad in
vitro de Porphyromonas gingivalis ATCC 33277 frente al aceite esencial de
Rosmarinus officinalis. Para la evaluación de la actividad antimicrobiana del
aceite esencial se utilizó el método cuantitativo de dilución en agar, descrito por
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) para bacterias anaerobias. El
aceite esencial de R. officinalis demostró una concentración mínima inhibitoria
(CMI) contra Porphyromonas gingivalis ATCC 33277 de 1000 μg/ml. Estos
resultados sugieren que el aceite esencial podría ser útil como un agente
antibacteriano en preparaciones de uso oral.14
Antecedentes Nacionales
Lagos R., René E. (2013) Determinación de la actividad antibacteriana in vitro
del aceite esencial de Thymus vulgaris L. “Tomillo” frente a Porphyromonas
gingivalis causante de gingivitis. Metodología: Mediante el método de difusión
en disco (Kirby Bauer), se conoció el grado de sensibilidad en función al
tamaño del halo de inhibición; por el método de dilución en medio líquido se
encontró la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y por difusión en agar se
encontró la Concentración Mínima Bactericida (CMB) del aceite esencial.
Resultados: Se determinó que Porphyromonas gingivalis mostró ser muy
21
sensible al aceite esencial. La CMI para Porphyromonas gingivalis es 0,31
mg/ml y CMB es 0,37 mg/ml. Conclusión: El aceite esencial de Thymus vulgaris
L. “Tomillo” presenta actividad antibacteriana sobre Porphyromonas gingivalis
causante de gingivitis.15
Juscamaita E. (2015) Realizaron un estudio para determinar el efecto inhibidor
del aceite esencial del Eucalyptus globulus en comparación al gluconato de
clorhexidina al 0,12% y el enjuague bucal Colgate Plax® en la inhibición
bacteriana del Streptococcus mutans. La investigación fue de tipo experimental,
transversal, prospectivo y analítico, de nivel explicativo, llevándose a cabo en
laboratorio. La población estuvo conformada por cepas de Streptococcus
mutans (ATCC 25175) y la muestra por 40 placas Petri. El medio de cultivo que
se empleó fue Agar Sangre y se realizó pozos con un sacabocado estéril de
6mm.de diámetro en cada una de las placas Petri. Seguidamente, se procedió
a verter el aceite esencial de Eucalyptus globulus al 25%, 50% y 100%,
gluconato de clorhexidina 0,12% y enjuague bucal Colgate Plax® y Tween 20.
En los resultados se determinó que la concentración al 25%, 50% y 100% del
aceite esencial de Eucalyptus globulus presentó halos de inhibición promedio
de 6,88 mm., 9,61 mm. y 12,65 mm. a las 24 horas y de 6,88 mm., 9,53 mm. y
11,90 mm.a las 48 horas respectivamente, siendo menor que el halo de
inhibición del gluconato de clorhexidina al 0,12% y el enjuague bucal Colgate
Plax® a las 24 y 48 horas frente a la cepa de Streptococcus mutans (ATCC
25175).16
Mendéz K. (2016) Evaluar el efecto sinérgico antibacteriano in vitro de los
aceites esenciales de Eucalyptus globulus y Origanum vulgare sobre
Escherichia coli. Se empleó el método de destilación por arrastre de vapor para
obtener los aceites esenciales de Eucalyptus globulus y Origanum vulgare. Una
cepa silvestre de Escherichia coli fue expuesta a estos aceites esenciales al
5%, 25%, 50%, 75%, 100% para obtener la concentración mínima bactericida
(CMB) de los mismos. Posteriormente, se evaluó la interacción sinérgica de
ambos aceites a concentraciones mínimas bactericidas mediante el método de
difusión de discos modificado, utilizando a Ciprofloxacino como control positivo
y a Tween 80 como control negativo; se realizaron cinco repeticiones para cada
22
caso. Se determinó la CMB de 75% tanto para el aceite de Eucalyptus globulus
como de Origanum vulgare (equivalente a una concentración de 0.69 g/ml y
0.71 g/ml para cada uno de ellos respectivamente); sin embargo, todas las
concentraciones de los aceites esenciales ensayadas tuvieron un notable
efecto antibacteriano. Según la escala de Duraffourd, la cepa de E. coli en
estudio es muy sensible a la combinación de ambos aceites a concentraciones
mínimas bactericidas. Existe efecto sinérgico antibacteriano in vitro de los
aceites esenciales de Eucalyptus globulus y Origanum vulgare sobre
Escherichia coli.17
2.2 Base teóricas
2.2.1. Bacterias periodontopatógenas
Desde el siglo pasado se han acumulado una cantidad de evidencias sobre la
etiología de la periodontitis, pero pocos microorganismos, han sido hasta ahora
denominados patógenos periodontales, los cuales, están relacionados con la
iniciación y progresión de la enfermedad. Aunque hay más de 300 especies
que se aíslan en los sacos periodontales, solo un pequeño porcentaje de ellas
se consideran etiológicamente importantes. El grupo de Bacilos Anaerobios
Gram Negativos mayormente relacionados en la etiología de la enfermedad
periodontal comprende los Géneros Porphyromonas, Prevotella, Bacteroides y
Fusobacterium, los cuales están ubicados dentro de la familia Bacteroidaceae,
según Bergey's Manual of Systemic Bacteriology (1994). La clasificación de
estas bacterias ha sido difícil y por ello a lo largo de los años han emergido
numerosas reclasificaciones taxonómicas, que posiblemente continúen en el
futuro.18
Porphyromonas gingivalis
- Descripción
Porphyromonas gingivalis es un bacilo Gran negativo pequeño (cocobacilos),
no móvil, anaerobio estricto, asacarolítico, que forma colonias uniformes de
coloración verdosas, pardas o negras debido a la hemina que almacena en la
superficie celular. Las células de Porphyromonas gingivalis tienen un diámetro
de 0,5 - 0,8 um por 1,0 -3,5 um de largo.18
23
- Función de la Porphyromonas gingivalis en la salud bucal
Entre la especie de mayor importancia en las infecciones primarias de los
conductos radiculares está Porphyromonas gingivalis, coloniza en forma tardía
o secundaria la cavidad bucal, proceso que es facilitado por la presencia de
otras especies bacterianas, colonizadores primarios, que proporcionan sitios de
unión y nutrientes, y que contribuyen a reducir la tensión de oxígeno a niveles
óptimos para su crecimiento.18
Algunas especies de Porphyromonas poseen actividad proteolítica, como, por
ejemplo, Porhyromonas gingivalis y Porphyromonas macacae, Cuando crecen
en complejos carbohidratados (excepto Porphyromonas gingivalis asacarolítica)
y proteínas, los principales productos de fermentación son n-butirato,
propionato y acetato, y en menor cantidad iso-valerato, iso-butirato, succinato y
fenilacetato, estos productos finales explicarían muchos de los malos olores
asociados con infecciones orales. Porphyromonas gingivalis es un importante
miembro de la microbiota periodontal, involucrado tanto en la progresión de la
periodontitis, como en los procesos de destrucción de hueso y tejido.18
La Porphyromona gingivalis, puede también producir severas infecciones
extraorales, incluyendo mediastinales, de planos faciales, cerebro y abcesos
pulmonares, enfermedades cardiacas, parto prematuro y bajo peso al nacer, es
comúnmente detectada en pacientes jóvenes con gingivitis, y pacientes adultos
con periodontitis, usando métodos inmunológicos y de biología molecular
(PCR). Esta especie también se ha encontrado en placas supragingivales
maduras, de pacientes jóvenes con o sin destrucción periodontal, sugiriendo
que es un patógeno de tipo oportunista, para el cual no está claro aún, si es de
origen endógeno o exógeno.19
- Clasificación científica
El género Bacteroides, agrupó en su primera clasificación, un conjunto de
bacterias heterogéneas, con características de ser anaerobios obligados, gram
negativo, no esporulados y de forma bacilar, con la aplicación de nuevas
técnicas de identificación a base de biología molecular, como el ADN–ADN
hibridación, y estudio de sus características bioquímicas, se pudo identificar un
24
grupo homogéneo de especies a partir de los bacteroides, llamados ahora
Porphyromonas, que en sus inicios estuvo formando por 3 especies, P.
gingivalis, P. asaccharolyticus y P.endodontales. Estas especies presentaban
la característica de ser no fermentadores, utilizar como sustrato el nitrógeno y
obtener su energía a partir de tripticasa y peptona. Estudios posteriores a base
de la secuencia de rRNA de 16S, han alejado más genealógicamente del
género Bacteroides, conociéndose en la actualidad alrededor de 12 especies,
habiendo una, P. Catoniae, que es sacarolítica.20
- Factores de virulencia
Porphyromonas gingivalis produce un gran número de enzimas, proteinasas y
productos finales de su metabolismo que son activos contra un amplio espectro
de proteínas del hospedero, y está provista de mecanismos para evadir las
defensas de éste. Dichos compuestos corresponden a inhibidores de
proteinazas, inmunoglobulinas, proteinazas que contienen hierro, proteínas
bactericidas, proteínas de matriz extracelular, y proteínas íntimamente
envueltas en funciones fagocíticas, tales como fijación de complemento y
coagulación. La mayoría de las actividades enzimáticas de Porphyromonas
gingivalis son asociadas a la proteinasa cisteína, la cual le proporciona ventajas
metabólicas, ya que le otorga la capacidad de utilizar largas proteínas del
hospedero para su crecimiento y desarrollo. Una de las características de
virulencia significativas de Porphyromonas gingivalis es este gran número
enzimas hidrolíticas, proteolíticas y lipolíticas, que son producidas
esencialmente por todos los tipos de Porphyromonas gingivalis conocidos.
Varias de estas proteinasas asociadas a Porphyromonas gingivalis (capaces de
hidrolizar péptidos unidos) parecen ser funcionalmente importantes en
el medioambiente in vivo. Estos factores de virulencia in vivo, si actúan en el
hospedero, pueden jugar un rol significativo en la progresión de la periodontitis.
Dentro de las proteinasas de Porphyromonas gingivalis se consideran a las
colagenasas y a las aminopeptidasas como críticas en la patogénesis de la
bacteria. Existen proteinasas específicas como arginina y lisina proteinasa,
producidas por Porphyromonas gingivalis.
25
Existen unas proteínas bacterianas que actúan como factor de virulencia
llamada hemaglutininas. Porphyromonas gingivalis produce por lo menos cinco
de ellas. Cuando se expresan en la superficie bacteriana, pueden promover la
colonización mediante la unión de bacterias a receptores (usualmente
oligosacáridos) en células humanas. Existe una relación entre la capacidad de
hemaglutinación y la actividad proteolítica de Porphyromonas gingivalis, lo que
se ha dilucidado mediante análisis genéticos.1
- Fisiopatología
P. gingivalis es considerado un colonizador secundario, comensal del surco
gingival, que llega por contagio o transmisión por individuos infectados, por
medio de la saliva principalmente. Su capacidad de adherirse principalmente
por sus fimbrias perítricas tipo II, así como por sus vesículas de membrana,
hemaglutininas, cápsula, le permiten dar el primer paso en la colonización del
surco, poder adaptarse e invadir las células epiteliales en un periodo
aproximado de 20 minutos, pudiendo replicarse dentro de ellas y diseminarse a
las células de alrededor. Esta característica de invadir la célula, le da la
capacidad de evadir las defensas del huésped. Así también su capacidad de
degradar diversas proteínas, componentes del surco gingival, ligamento
periodontal y hueso alveolar, además de alterar la respuesta innata y específica
del anfitrión. A todo esto, se suma un factor huésped, que, ante la presencia de
esta bacteria, activa una diversidad de respuestas que pueden incrementar el
proceso inflamatorio, presente en el surco, haciendo crónico el proceso de
destrucción del periodonto.20
- Cuadros clínicos
P. gingivalis es un importante miembro de la microbiota periodontal,
involucrado tanto en la progresión de la periodontitis, como en los procesos de
destrucción de hueso y tejido. También, puede producir severas infecciones
extraorales, incluyendo mediastinales, de planos faciales, cerebro y abcesos
pulmonares, enfermedades cardiacas, parto prematuro y bajo peso al nacer.21
26
2.2.2. Eucalyptus globulus (Eucalipto)
El Eucalyptus globulus es un árbol de hojas perennes, de gran porte,
perteneciente a la familia de las mirtáceas, originario de Australia, aunque
difundido ampliamente por todo el mundo, dada su fácil adaptación a cualquier
hábitat y su crecimiento rápido. No obstante, requiere temperaturas que no
sean muy extremas.24
La planta se cultiva en la península ibérica desde finales del siglo XVIII, época
en que se inició la importación desde sus lugares de origen. La floración se
produce al final de la estación cálida y primeras semanas del otoño, dando
lugar a conjuntos florales que fructifican en forma de cápsulas que encierran
varias semillas. Las hojas son largas, estrechas y ligeramente curvadas,
puntiagudas y de borde entero. Se recolectan cuando han alcanzado su
madurez.25
- Taxonomía
Reino: Plantae
División: Magnoliophyta (Angiospermas)
Clase: Magnoliopsida (Dicotiledóneas)
Orden: Myrtales
Familia: Myrtaceae
Género: Eucalyptus 24
- Características
El Eucalyptus Globulus, es la especie más conocida en el mayor número de
países del mundo. Es un árbol de buen porte y forma, usado de manera
ornamental por su follaje plateado, es fácil de reconocer por el penetrante olor
a alcanfor de las hojas al estrujarlas.24
- Propiedades
Las hojas son anticatarrales, son anticatarrales, balsámicas y expectorantes.
Presenta poder antiséptico además de febrígo. Reduce los niveles de azúcar
27
en el plasma sanguíneo. Por su poder antiséptico y su agradable aroma se usa
en multitud de preparados industriales para evitar los resfriados.26
- Contraindicaciones
En caso de inflamaciones gastrointestinales, de las vías biliares o insuficiencia
hepática. En paciente gestante o lactante, puesto que puede estimular las
enzimas hepáticas.27
- Reacciones adversas
El eucalipto suele ser bien tolerado, y sólo en ocasiones especiales puede
producir reacciones adversas. Estas pueden ser: digestivas (náuseas, vómitos
o diarreas), neurológicas / psicológicas. Puede ser neurotóxico por acelerar el
metabolismo hepático de algunos anestésicos, analgésicos y tranquilizantes.
Su aceite esencial no puede ser aplicado directamente sobre la cara de niños
pequeños o lactantes. Se considera que la ingestión de 30 ml de su aceite
esencial es letal. Los síntomas tóxicos son rápidos: dolor abdominal, vómitos
espontáneos, problemas respiratorios, depresión respiratoria, taquicardia,
convulsiones y delirio. No se recomienda tomarlo durante el embarazo y la
lactancia.28
- Efecto antibacteriano
El extracto de diversas variedades de eucalipto ha demostrado inhibir el
crecimiento de bacterias como la pseudomonas aeruginosa. No se ha podido
establecer una correlación entre esta actividad y el contenido en cineol y otras
sustancias componentes del eucalipto. Sin embargo, otros autores ligan
directamente el contenido en cineol con la actividad antibacteriana. La planta
ha mostrado una acción inhibitoria del crecimiento de algunos otros gérmenes
in vitro (hemofilus influenza, parainfluenza y estreptococo neumoniae), así
como frente a una gama de gérmenes habituales de las infecciones
respiratorias. Respecto del estafilococo dorado meticilin resistente, el eucalipto
posee un cierto grado de actividad inhibitoria. Las aplicaciones medicinales del
eucalipto podrían tal vez ampliarse si se estudia ampliamente la inhibición del
28
virus de Epstein-Barr inducida por diversos euglobales procedentes del
E.globulus. 28
- Uso humano
Para usos medicinales se utilizan las hojas frescas para hacer aceite esencial
de eucalipto y para inhalaciones, y las secas para infusiones.
Su esencia es un ingrediente común en cualquier producto para aliviar los
síntomas del resfriado y la gripe. Se usa como desinfectante y antiséptico para
tratar varios procesos virales, afecciones respiratorias (tos, bronquitis,
neumonía, asma) e infecciones de la piel. Es un excelente descongestionante
de los bronquios y pulmones, y un eficaz expectorante. El aceite esencial
diluido se aplica como linimento para el pecho y los senos paranasales (en
caso de sinusitis).
- La fitoterapia
La fitoterapia es la ciencia que estudia la utilización de los productos de origen
vegetal con finalidad terapéutica, ya sea para prevenir, para atenuar o para
curar un estado patológico. Las plantas han sido utilizadas desde épocas
primitivas en el tratamiento de enfermedades. La mayoría de éstas presentan
efectos fisiológicos múltiples debido a la presencia de más de un principio
activo.22
- Plantas medicinales
Como planta medicinal se conoce a cualquier planta que en uno o más de sus
órganos contienen sustancias que pueden ser utilizadas con finalidad
terapéutica o que son precursores para la síntesis químico-farmacéutica. La
etnobotánica trata del conocimiento botánico de las plantas por parte de las
comunidades indígenas y comprende una estrecha relación entre las plantas y
las personas que lo utilizan. El uso de las plantas es de gran utilidad, ya que de
ellas son obtenidas innumerables sustancias químicas, en la actualidad existen
plantas que poseen compuestos químicos antibacterianos y antifúngicos, las
cuales pueden utilizarse en el campo de Odontología.23
29
2.3. Definición de términos básicos
Aceite esencial: Un aceite esencial es una mezcla de varias sustancias
químicas biosintetizadas por las plantas, que dan el aroma característico de
algunas flores, árboles, frutos, hierbas, especias, semillas y a ciertos extractos
de origen animal.27
También denominada esencia. Producto de las plantas que comunican a los
órganos que las contienen, olor agradable. Químicamente son mezclas
complejas de sustancias volátiles, generalmente líquidas, que pueden
extraerse por destilación, por arrastre o por vapor de agua. Tienen propiedades
como: Antisépticos, digestivos, antiespasmódicos y sedantes. 32,33
Asacarolítico: No fermentan hidratos de carbono simples.19
Cepa bacteriana: Todos los organismos descendientes de un cultivo puro, por
tanto, con fenotipo y genotipo definidos. 35
Fenotipo: Es cualquier característica o rasgo observable de un organismo,
como su morfología, desarrollo, propiedades bioquímicas, fisiología y
comportamiento.31
Halo de inhibición: Zona alrededor de un disco de antibiótico en un
antibiograma en el que no se produce crecimiento bacteriano en una placa de
agar inoculada con el germen. Es una medida de la potencia del antibiótico
frente al germen.28
Inhibición bacteriana: Se manifiesta con la formación del halo de inhibición
bacteriano alrededor de pozos que contienen sustancias antibacterianas en un
agar con cultivos microbiológicos en placas Petri. 34
Microorganismo: Es un ser vivo, o un sistema biológico, que solo puede
visualizarse con el microscopio. 29
Serología: Es el estudio que permite comprobar la presencia de anticuerpos en
sangre. Es una prueba fundamental a la hora de realizar donaciones de sangre
y transfusiones. 30
30
CAPÍTULO III
HIPOTESIS Y VARIABLES DE LA INVESTIGACIÓN
3.1 Formulación de hipótesis principal y derivadas
3.1.1. Hipótesis Principal
El Aceite Esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto) posee una acción
antibacteriana In Vitro sobre la cepa de Porphyromona gingivalis.
3.1.2. Hipótesis Derivadas
- La Porphyromona gingivalis presenta una alta sensibilidad frente al aceite
esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto) mediante la técnica de difusión
en disco.
- La Concentración Mínima Inhibitoria (CIM) del aceite esencial de Eucalyptus
globulus (Eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona gingivalis es de 0,019
mg/ml.
- La Concentración Mínima Bacteriana (CMB) del Aceite esencial de
- Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona gingivalis
es de 0,020 mg/ml.
3.2 Variables, dimensiones y definición conceptual y operacional
3.2.1. Variable independiente
Efecto antibacteriano del Aceite esencial del Eucalyptus globulus (Eucalipto).
Definición: Capacidad del Aceite Esencial del Eucalyptus globulus (Eucalipto)
de inhibir el crecimiento bacteriano que se desarrolla en un medio dado
3.2.2. Variable dependiente
Cepa de Porphyromona gingivalis.
Definición: Especie bacteriana que desempeña un papel preponderante en el
desarrollo de enfermedades periodontales.
31
VARIABLE TIPO DE
VARIABLE DIMENSIÓN
(ES) INDICADOR
ESCALA DE
MEDICIÓN
UNIDAD DE MEDIDA
Efecto antibacteriano del aceite esencial de Eucalyptus Globulus(Eucalipto)
Independiente Inhibición Bacteriana
Tamaño del halo de Inhibición (Según Duraffourd y Lapraz)
Nominal
- Nula (-) 0 a 8mm
- Sensible (+) 9 a 14 mm
- Muy sensible (++) 15 a 19 mm
- Sumamente sensible (+++) 20mm a mas
Cepa de Porphyromona gingivalis
Dependiente Crecimiento de la cepa
Turbidez Nominal
Escala de Mc Farlad
UFC Razón
N°de colonias(0-30)
32
CAPÍTULO IV
METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN
4.1 Diseño metodológico
4.1.1. Tipo de Investigación
- Experimental: Las variables fueron sometidas a experimentación en
condiciones controladas, y posteriormente se describió las causas por las
que se producen los resultados.
- Prospectivo: Los datos fueron recogidos por el investigador a propósito del
estudio
- Transversal: La recolección de datos se realizó sólo una vez.
- Analítico: El estudio en bivariado y las variables son causa efecto.
4.1.2. Nivel de Investigación
Experimental
4.2. Diseño Muestral
4.2.1. Población
La población estuvo conformada por Cepas de Porphyromona gingivalis, las
cuales fueron sembradas mediante difusión.
4.2.2. Muestra
Diseño experimental con 25 placas Petri, 5 tratamientos con 3 discos de
repetición por placa Petri y un disco de control por placa Petri. Para la prueba
de sensibilidad.
Se utilizó10 tubos con caldo BHI con Porphyromona gingivalis. Para el control
de crecimiento mínimo inhibitorio.
Y por último 3 placas Petri con agar de Mueller Hilton con Porphyromona
gingivalis para crecimiento mínimo bacteriano.
- Criterios de inclusión:
Cepa liofilizada de la “Porphyromona gingivalis”
33
- Criterios de exclusión:
Cepas que no pertenezcan al grupo de “Porphyromona gingivalis”
4.3 Técnica e instrumento de recolección de datos, validez y confiabilidad
4.3.1. Técnicas
Las hojas de eucalipto fueron obtenidas de la provincia de Tarata – Tacna para
después procedió a la obtención del aceite mediante la técnica de arrastre por
vapor.
Se realizó la reactivación de la cepa bacteriana.
Se preparó de los medios de cultivo.
Prueba de sensibilidad para conocer el CMI Y CMB.
4.3.2. Instrumentos
Para llevar a cabo el procedimiento utilizaremos unos cuadros para la
recolección de datos, que consta la cantidad de discos y repeticiones que se
empleó para el análisis de este trabajo.
a. Materiales de laboratorio para extraer el aceite esencial
- Hojas de Eucalyptus Globulus
- Estufa.
- Balón de fondo plano.
- Equipo de destilación
- Vaso de precipitado.
- Agua destilada.
b. Material y equipos para la preparación de los medios de cultivo
- Balanza.
- Agua destilada.
- Probetas.
- Pipetas.
- Vasos de precipitado.
34
- Autoclave.
- Refrigeradora.
- Placas Petri.
- Tubos de ensayo.
- Hornilla eléctrica.
- Agar Mueller Hinton.
- Asas de siembra
- Alcohol.
- Mechero
- Encendedor.
c. Materiales para la prueba de sensibilidad antimicrobiana
- Agujas hipodérmicas de 18 G. descartables.
- Puntas para micropipeta.
- Aceite esencial de Eucalytus
- Agua destilada.
- Pipetas.
- Micropipeta.
- Pinzas estériles.
- Placas Petri con agar.
- Cepa de Porphyromona Gingivalis
- Mechero Bunsen.
d. Material digital
- Cámara digital SAMSUNG
- Lap top
- Impresora
e. Infraestructura
Laboratorio de microbiología de la Facultad de Biología de la Universidad
Nacional Jorge Basadre Grohmann.
35
4.4 Técnicas de procesamiento de datos
La ejecución experimental de la presente investigación se realizó en el
laboratorio de la Universidad Jorge Basadre Grohmann, se presentó la
documentación necesaria para el permiso de ejecución de esta investigación.
Se obtuvo las hojas de eucalipto de la provincia de Tarata, se dejaron secar en
un cuarto oscuro por un tiempo de 3 semanas.
Extracción del aceite: El eucalipto se agrupa en porciones de 250 gr
aproximadamente y se procesa a cortar las hojas. La obtención del aceite
esencial se realizó por el método de destilación por arrastre de vapor de agua.
El equipo de destilación estuvo compuesto por un sistema de doble balón, uno
de los cuales contuvo agua destilada (700ml) y fue sometido a calor directo;
mientras que en el segundo (capacidad 1000ml) contuvo 250 gramos de
eucalipto, el cual fue el que recibía los vapores de agua, para que luego el
vapor producido arrastre los aceites esenciales hasta el refrigerante. Este
cambio de temperatura hace que el vapor se condense y se vuelva
nuevamente liquida (agua-aceite). El producto destilado se recibió en un
depósito estéril y cerrado, observándose un estado bifásico entre agua y aceite
esencial, por la diferencia de densidades. Y utilizando las pipetas Pasteur se
separó el aceite esencial para luego almacenarse en un tubo de vidrio con tapa
rosca cerrado herméticamente y envuelto en papel aluminio para protegerlo de
la luz del ambiente. Los aceites esenciales fueron almacenados a temperatura
ambiente y en oscuridad hasta su utilización.
Densidad del aceite:
Donde:
d= densidad (g/ml)
m= masa (g)
v= volumen (ml)
w1= peso probeta (g)
36
w2= peso probeta con aceite (g)
Vol. Aceite= Volumen de aceite (ml)
Vol. Aceite= 0,2 ml
Reactivación de la cepa
Se utilizó un microorganismo patógeno de importancia clínica, proporcionada
por el Ministerio de Salud-Tacna (Minsa): Porphyromona gingivalis. Se llevó a
un caldo con BHI donde se reactivó por 24 horas por 37°C. Luego se cultivó en
probetas con agar Mueller Hilton por 24 horas a 37°C.
Evaluación de la actividad del aceite esencial de Eucalytus globulus.
La actividad antibacteriana del aceite se evaluó por el método de Kirby Bauer
(difusión en discos).
La preparación de la dilución en los primeros ensayos se usaron volúmenes de
aceite esencial puro (2,5ul – 12,5ul) para la determinación de los halos de
inhibición por el método de difusión en disco (Kirby Bauer). Para ello se
utilizaron 3 discos con aceite y un disco de control positivo para la
Porphyromona gingivalis es decir a este disco no se adicionó el aceite esencial
para verificar su crecimiento en el medio de cultivo (Agar Mueller Hinton). luego
de la incubación a 37°C por 24h se observó en la lectura de las placas la
37
formación de halos. Los volúmenes y concentraciones del aceite esencial puro
fueron:
Preparación de los discos
Se impregnaron discos de papel filtro de 6 mm de diámetro previamente
desnaturalizados en un vaso Beaker con capacidad de 100ml que contiene
agua destilada H2O esterilizada aproximadamente 80ml por vapor húmedo (15
minutos) a una presión de 20 barr 121°C. Luego desechamos destilada y se
acomoda los discos en las paredes del vaso llevándolo posteriormente al calor
seco (30 minutos a 180°C). Estos discos son colocados en las placas Petri con
una cantidad determinada de aceite esencial. Para esto se utilizaron 5
ACEITE ESENCIAL DE Eucalyptus Globulus (Eucalipo)
Volumen (ul) Concentración [] (mg/ul)
2,5 1, 90875
5,0 3, 8175
7,5 3, 7262
10 7,635
12,5 9, 5437
38
tratamientos con 3 discos con aceite esencial y un disco sin aceite para el
control positivo de la bacteria y 5 repeticiones por cada tratamiento.
Preparación de las placas
Se preparó el medio para la prueba de sensibilidad. Se empleó el medio Agar
Mueller Hinton, se preparó el medio como indica la casa comercial (34g en
1000ml) posteriormente se deja secar por 30 minutos.
Inoculación de las placas
Se inoculo la placa de Agar Mueller Hinton, utilizando la suspensión
estandarizada del agente bacteriano Porphyromona gingivalis a una
concentración de 1,5 x 108 UFC/ml. Se depositó 100 ul del inoculo bacteriano
sobre la superficie del agar de cada placa correspondientemente, mediante la
técnica de siembra por difusión hasta que el inoculo quede distribuido de modo
homogéneo. Se dejó secar durante 15 minutos a temperatura ambiente.
Procedimos a incorporar los discos de 6 mm de diámetro de papel Wathman
N°42 previamente esterilizados (“Discos de sensibilidad sin antibióticos”), luego
se incorporó en aceite esencial en las diferentes concentraciones, 2,5 ul; 5 ul;
7,5 ul; 10 ul; 12,5 ul,15 ul, se dejó secar durante 10 minutos para su mejor
impregnación. Cada disco fue tomado con una pinza estéril y se colocó sobre la
superficie del agar, se presionó suavemente para asegurar el contacto con el
medio. Se colocaron 3 discos con aceite esencial y un control negativo (disco
sin aceite esencial) en cada placa con Agar Mueller Hinton con su respectiva
concentración. Se emplearon un total de 25 placas para esta prueba.
Las placas fueron incubadas a 37°C durante 24-48 horas para ver los halos de
inhibición.
Lectura de las placas
Posterior al periodo de incubación, se midieron los halos de inhibición de
crecimiento con el vernier en unidades de milímetros. La lectura se realizó
midiendo los halos de inhibición sobre el crecimiento del microorganismo
39
alrededor del disco. El diámetro de los halos de inhibición fue positivo para
actividad antibacteriana del aceite esencial sobre el microorganismo estudiado.
Para interpretar los resultados se tomó como referencias la clasificación de
DURAFFOURD y LAPRAZ (1983).
Determinación de la actividad mínima inhibitoria
Se utilizó la concentración donde hubo mayor halo de referencia para esta
prueba. El agente bacteriano que se utilizó en el trabajo se cultivó en viales de
Agar Mueller Hinton para su mantención; para luego ser activadas y
enriquecidas en caldo BHI, se homogenizo las colonias y se incubaron a 37°C
por el lapso de 2-4 horas y posteriormente observarla cada 30 minutos, hasta
llegar a una concentración de 1,5 x 108 UFC/ml y comparada con el tubo 0,5
de la escala de Mc Farland.
Preparación de la solución Madre
Se preparó una solución madre de 30000 ul totales: 100 ul de Aceite Esencial
con 100 ul de Dimetilsulfóxido 10% (DMSO) y 28000 ul de caldo infusión
40
cerebro corazón (BHI). La concentración final se obtuvo a partir de la densidad
obtenida: 7,635 mg/ml.
Preparación de la Concentración mínima inhibitoria (CMI) para Porphyromona
gingivalis:
Se colocaron 10 tubos de 15 x 125 mm a los cuales se les agregó lo siguiente:
N° DE
TUBO
VOLUMEN
INICIAL
(SOLUCIO
N MADRE)
[] INICIAL
DE
SOLUCIO
N MADRE
BHI BACTERI
A
VALOR
FINAL [] FINAL
T1 300 22,905 2400 300 3000 7,635
T2 310 23, 668 2390 300 3000 7,889
T3 320 24, 432 2380 300 3000 8,144
T4 330 25, 195 2370 300 3000 8,398
T5 340 25,959 2360 300 3000 8,653
T6 350 26, 722 2350 300 3000 8,907
T7 360 27,486 2340 300 3000 9,162
T8 370 28, 2495 2330 300 3000 9,416
T+ 0 2700 300 3000 0
T- 300 0 2700 0 3000 0
Nota: Se trabajó con 8 concentraciones y un control positivo, el cual no
contiene solución madre (DSMO + ACEITE ESENCIAL) pero si la bacteria
Porphyromona gingivalis y el negativo, el cual, si contiene solución madre, pero
no contiene la bacteria.
Incubación
Se lleva a incubación por espacio de 24 horas a 37°C. Los diferentes
tratamientos se compararon con: Control Positivo (2700 ul BHI + 300 ul
Solución bacteriana) y Control Negativo (300 ul Solución Madre + 2700 ul BHI).
41
Lectura
Al cabo de las 24 horas se observa la turbidez de los tubos que índico
desarrollo bacteriano. El tubo que no presente turbidez indica la ausencia del
crecimiento bacteriano que se compara al tubo de control negativo, que se
designa como la concentración mínima inhibitoria (CMI).
Determinación de la Concentración Mínima bacteriana (CMB)
Se tomaron los tubos que no presentan turbidez (Tubo N°3, 4 y 5); de cada uno
de ellos se resembro 100 ul de solución por diseminación en placas de Agar
Mueller Hinton. Las placas fueron incubadas a 37°C por 24-48 horas,
transcurrido este tiempo se contó el número de unidades formadoras de
colonias (UFC) presentes para cada concentración del aceite esencial.
Eliminación de Desechos Biológicos
En la ejecución del estudio que se realizara en el laboratorio de la universidad
Jorge Basadre Grohmann los desechos biológicos serán eliminados siguiendo
con lo establecido en el Manual de Bioseguridad en Laboratorios de Ensayos,
Biomédicos y Clínicos elaborado por el Comité de Bioseguridad del Instituto
Nacional de Salud.
4.5 Técnicas estadísticas utilizadas en el análisis de la información
Se utilizó el programa Excel para el vaciado de los datos encontrados en la
prueba experimental, se realizará el análisis de la información mediante
cuadros y gráficos.
42
CAPÍTULO V
ANÁLISIS Y DISCUSIÓN
5.1 Análisis descriptivo, tablas, gráficos, dibujos, fotos, tablas, etc
Se realizó un estudio “in vitro” de la actividad antibacteriano del aceite esencial
de Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a la cepa Porphyromona gingivalis;
para lo cual se trabajó con 5 tratamientos con 3 discos y 5 repeticiones. Así
mismo se determinó la sensibilidad de Porphyromona gingivalis frente al aceite
esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto).
Se determinó que el aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)
presenta acción inhibitoria frente a Porphyromona gingivalis desde una
concentración de 7,635 mg/ul. Mientras que desde una concentración de 8,653
mg/ul ya existe una acción bactericida.
Los resultados obtenidos en las diferentes pruebas han sido agrupados en
tablas y gráficas para su mejor interpretación.
43
TABLA N° 1
Actividad antibacteriana del Aceite Esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)
frente a Porphyromona gingivalis por el método de difusión del disco (Kirby
Bauer)
Fuente: Propio del investigador
Se observan los promedios de halos de inhibición producidos por las diferentes
concentraciones del aceite esencial de Eucalyptus globulus frente a la cepa
Porphyromona gingivalis mediante el método de difusión del disco (Kirby
Bauer). Como resultado se observa que el volumen 10 a una concentración de
7,635 nos da un halo de inhibición de 14,66 mm. Por lo cual indican que la
cepa de Porphyromona gingivalis es sensible a una concentración de 7, 635 al
Aceite Esencial de Eucalyptus globulus.
ACEITE ESENCIAL DE Eucaliptus Globulus (Eucalipto)
ACEITE ESENCIAL DE
Eucaliptus Globulus (Eucalipo)
N° Disco
Placa 1
Placa 2
Placa 3
Placa 4
Placa 5
Promedio final de
Halos(mm)
Total Final
Vol (ul)
[] (mg/ul) Halos(mm)
Halos(mm)
Halos(mm)
Halos(mm)
Halos(mm)
2,5 1, 90875 1 10 9.5 10 10 9.5 10.0 10.10
2 9 10 10 9 10 10.0
3 10 10 9 9.5 10 10.3
5,0 3, 8175 1 10.5 11 10.5 11 11.5 11.1 11.23
2 11 11 11 11 10 11.2
3 12 11.5 9 10.5 11 11.4
7,5 3, 7262 1 12 13 12.5 12.9 12 12.7 12.79
2 12 12 12 12 12.8 12.6
3 13 12 12 12.5 13.2 13.1
10 7,635 1 14 14 14.2 14.7 14.6 14.5 14.66
2 14 14 14.5 14.1 14.5 14.6
3 14.5 14 14.8 14 14 14.9
12,5 9, 5437 1 14 13 13 14 14 13.8 14.21
2 14 13.5 14 14 14 14.3
3 14 14.1 14 13.5 14 14.5
44
GRÁFICO N°1
Actividad antibacteriana del Aceite Esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)
frente a Porphyromona gingivalis por el método de difusión del disco (Kirby
Bauer)
10.1 11.23 12.79 14.66 14.21
0.00
2.00
4.00
6.00
8.00
10.00
12.00
14.00
16.00
1, 90875 3, 8175 3, 7262 7,635 9, 5437
HALOS DE INHIBICIÓN
45
TABLA N° 2
Grado de sensibilidad que presenta la cepa de Porphyromona gingivalis frente
al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)
Fuente: Propio del investigador
Se observa los porcentajes según el grado de sensibilidad donde en la
concentración de 7,635 se presenta un grado de sensibilidad muy sensible, el
grado de sensibilidad que presenta el aceite esencial de eucalipto ante la cepa
de Porphyromona gingivalis es de muy sensible según la escale de Duraffourd
y Lapraz.
GRADO DE SENSIBILIDAD Total
SENSIBLE MUY
SENSIBLE
CONCENTRACIONES 1,908 n 5 0 5
% 20.0% 0.0% 20.0%
3,817 n 5 0 5
% 20.0% 0.0% 20.0%
3,726 n 5 0 5
% 20.0% 0.0% 20.0%
7,635 n 0 5 5
% 0.0% 20.0% 20.0%
9,543 n 5 0 5
% 20.0% 0.0% 20.0%
Total n 20 5 25
% 80.0% 20.0% 100.0%
46
GRAFICO N°2
Grado de sensibilidad que presenta la cepa de Porphyromona gingivalis frente
al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)
47
TABLA N° 03
Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del aceite esencial del Eucalyptus
globulus (Eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona gingivalis
N° Tubo /
TRATAMIENTOS
[] Aceite Esencial
(mg/ul)
Turbidez
1 7,673 +
2 7, 8895 +
3 8, 144 -
4 8, 3985 -
5 8, 653 -
6 8, 9075 -
7 9, 162 -
8 9, 4165 -
9 Control + +
10 Control - -
Fuente: Propio del investigador
Se observa que las concentraciones de 7,673 mg/ul hasta 7,8895 mg/ul
presentan turbidez (+), lo que indica la existencia del crecimiento bacteriano,
pero a partir de las concentraciones 8,144 mg/ul hasta 9,4165 mg/ul no
presentaron turbidez (-), lo que evidencia que no hubo crecimiento bacteriano.
En el tratamiento N° 3 cuya concentración es 8,144 mg/ul es el CMI, ya que fue
el primer tratamiento donde ya no hubo crecimiento bacteriano. En esta
concentración ya no existe crecimiento bacteriano.
48
0
1Turbidez
GRAFICO N°3
Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del aceite esencial del Eucalyptus
globulus (Eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona gingivalis
49
TABLA N°04
Concentración Mínima Bacteriana (CMB) del aceite esencial del Eucalyptus
globulus (Eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona gingivalis
Fuente: Propio del investigador
En la tabla y grafico N° 04, se muestran solo las concentraciones del aceite
esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto) donde no se evidencio turbidez,
para lo cual se escogió las 3 primeras concentraciones para determinar la
concentración mínima bacteriana (CMB); observándose que en la
concentración de 8,653 mg/ul hay una inhibición absoluta del crecimiento de
Porphyromona gingivalis, mientras que en la concentración 8,144 y 8,3985
mg/ul aún existe crecimiento de colonias UFC. Comprobando que en una
concentración de 8,653 existe una acción bactericida del aceite esencial de
Eucalyptus globulus ante la cepa de Porphyromona gingivalis.
N° Tubo /
TRATAMIENTO
[] (mg/ul) UFC/Placa
T 3 8, 144 4
T 4 8, 3985 2
T 5 8, 653 0
50
GRAFICO N°04
Concentración Mínima Bacteriana (CMB) del aceite esencial del Eucalyptus
globulus (Eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona gingivalis
0
1
2
3
4
5
8, 144 8, 3985 8, 653
UFC/Placa
51
5.2 Comprobación de hipótesis
Los halos de inhibición de cada sustancia se midieron a las 24 horas y se halló
un promedio para comparar la efectividad antibacteriana.
A continuación, se comparó con las repeticiones echas para su mejor eficiencia
en la investigación.
TABLA 05
Acción antibacteriana del Aceite Esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)
frente a Porphyromona gingivalis
HALOS
Suma de cuadrados gl Media cuadrática F Sig.
Entre grupos 74.923 4 18.731 312.535 .000
Dentro de grupos 1.199 20 .060
Total 76.122 24
Fuente: Archivos del investigador.
El estadístico de contraste muestra que el valor de p-valor “Sig. Asintót.” =
0.000 < 0.05 por lo que se acepta la hipótesis presentada, por lo que se
concluye que:
“El Aceite Esencial de Eucalyptus Globulus (Eucalipto) posee una acción
antibacteriana In Vitro sobre la cepa de Porphyromona gingivalis.”
52
5.3 Discusión
Los resultados obtenidos en esta investigación, muestran después de buscar
la sensibilidad bacteriana ante el aceite esencial del Eucalyptus globulus
observamos que el grado de sensibilidad que presenta la cepa de
Porphyromona gingivalis frente al aceite esencial de Eucalyptus globulus
(Eucalipto) mediante la técnica de difusión en disco se observa que la cepa de
Porphyromona gingivalis es sensible a una concentración de 7, 635 del Aceite
Esencial de Eucalyptus globulus, estos datos indican que se verifica un halo de
inhibición de 14,66mm con nivel de sensibilidad de Muy sensible según la
escala de Duraffourd y Lapraz; donde se muestra que el aceite esencial de
eucalipto presentó halos de inhibición de 14,66 ml siendo esto estadísticamente
significativo; por lo anterior se comprueba y se acepta la hipótesis planteada:
que la Porphyromona gingivalis presenta una alta sensibilidad frente al aceite
esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto) mediante la técnica de difusión en
disco.
Así mismo observamos que la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del
aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a la cepa de
Porphyromona gingivalis obtenemos que las concentraciones de 7,673 mg/ul
hasta 7,8895 mg/ul presentan turbidez (+), lo que indica la existencia del
crecimiento bacteriano, pero a partir de las concentraciones 8,144 mg/ul hasta
9,4165 mg/ul no presentaron turbidez (-), lo que evidencia que no hubo
crecimiento bacteriano, esto indica que el método de dilución en medio liquido
se realizó la Concentración mínima inhibitoria (CMI) donde se dejó de presentar
turbidez en una concentración 8,144 y por difusión en agar se encontró la
concentración mínima bactericida(CMB) del aceite que dio como resultado
8,653, entendiendo el párrafo anterior se comprueba y se acepta la hipótesis
planteada: La Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del aceite esencial de
Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona gingivalis es
de 0,019 mg/ml.
Respecto la Concentración Mínima Bacteriana (CMB) del aceite esencial de
Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona gingivalis se
53
observa la concentración de 8,653 mg/ul hay una inhibición absoluta del
crecimiento de Porphyromona gingivalis, mientras que en la concentración
8,144 y 8,3985 mg/ul aún existe crecimiento de colonias UFC. Comprobando
que en una concentración de 8,653 existe una acción bactericida del aceite
esencial de Eucalyptus globulus ante la cepa de Porphyromona gingivalis,
quedando sustentada que La Concentración Mínima Bacteriana (CMB) del
Aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a la cepa de
Porphyromona gingivalis es de 0,020 mg/ml.
Cabe resaltar que no se encontraron antecedentes de algún estudio referente
al efecto antibacteriano del aceite esencial de Eucalyptus globulus frente a
Porphyromona gingivalis, sin embargo, a lo mencionado podemos resaltar que
existen estudios que evalúan diferentes tipos de aceites esenciales que buscan
el efecto antibacteriano de la Porphyromona gingivalis como por ejemplo Lagos
R., René E. en el 2013 quien investigó el aceite esencial de Thymus vulgaris L.
y su objetivo fue determinar la actividad antibacteriana in vitro del aceite
esencial de Thymus vulgaris L. “Tomillo” frente a Porphyromonas gingivalis
causante de gingivitis, realizando la investigación mediante el método de
difusión en disco (Kirby Bauer), se conoció el grado de sensibilidad en función
al tamaño del halo de inhibición; por el método de dilución en medio líquido se
encontró la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) y por difusión en agar se
encontró la Concentración Mínima Bacteriana (CMB) del aceite esencial. Que
con éstos resultados concluyó que la Porphyromonas gingivalis mostró ser muy
sensible al aceite esencial. La CMI para Porphyromonas gingivalis es 0,31
mg/ml y CMB es 0,37 mg/ml; este método con el aceite esencial de Thymus
vulgaris frente a la Porphyromona observando presenta una acción bacteriana
mayor que el Eucalyptus globulus.
Del mismo el estudio realizado por Bonilla D et al. en el año 2016 quién evaluó
el efecto del aceite esencial de Rosmarinus officinalis sobre Porphyromonas
gingivalis cultivada in vitro cuyo objetivo fue determinar la susceptibilidad in
vitro de Porphyromonas gingivalis ATCC 33277 frente al aceite esencial de
Rosmarinus officinalis. Para la evaluación de la actividad antimicrobiana del
54
aceite esencial se utilizó el método cuantitativo de dilución en agar, descrito por
Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) para bacterias anaerobias. El
aceite esencial de R. officinalis demostró una concentración mínima inhibitoria
(CMI) contra Porphyromonas gingivalis ATCC 33277 de 1000 μg/ml. Estos
resultados sugieren que el aceite esencial podría ser útil como un agente
antibacteriano en preparaciones de uso oral, mismo propósito del aceite
esencial del Eucalyptus globulus en nuestra investigación.
Así mismo el estudio realizado por Ayala A. en el año 2016 que investigaron el
efecto antibacteriano del aceite esencial de margarita (calendula officinalis) y
jengibre (zingiber officinale) vs. Clorhexidina al 2% sobre cepas de
porphyromona gingivalis: estudio in vitro cuyo propósito fue determinar la
actividad antibacteriana de los aceites esenciales de Margarita (Calendula
officinalis) y Jengibre (Zingeber officinale) sobre cepas de Porphyromonas
gingivalis encontrando que la eficacia antibacteriana del aceite de esencial de
Margarita obtuvo un promedio de 5mm de halo inhibitorio, Jengibre obtuvo
11.5mm de halo inhibitorio, siendo mayor el efecto antibacteriano del aceite
esencial de Jengibre, pero menor al halo inhibitorio de la sustancia de control
Clorhexidina al 2%, de 22mm.
Existen otros estudios en la que se comprueba la efectividad de la acción
antibacteriana del aceite esencial del Eucalyptus globulus frente a el
Streptococcus mutans por ejemplo Juscamaita E. en el 2015 realizó un estudio
para determinar el efecto inhibidor del aceite esencial del Eucalyptus globulus
en comparación al gluconato de clorhexidina al 0,12% y el enjuague bucal
Colgate Plax® en la inhibición bacteriana del Streptococcus mutans donde se
encontró que la concentración al 25%, 50% y 100% del aceite esencial de
Eucalyptus globulus presentó halos de inhibición promedio de 6,88 mm., 9,61
mm. y 12,65 mm. a las 24 horas y de 6,88 mm., 9,53 mm. y 11,90 mm.a las 48
horas respectivamente, siendo menor que el halo de inhibición del gluconato de
clorhexidina al 0,12% y el enjuague bucal Colgate Plax® a las 24 y 48 horas
frente a la cepa de Streptococcus mutans (ATCC 25175); como también el
estudio realizado por Méndez en el año 2016 que evaluó el efecto sinérgico
antibacteriano in vitro de los aceites esenciales de Eucalyptus globulus y
55
Origanum vulgare sobre Escherichia coli. Determinándose la CMB de 75%
tanto para el aceite de Eucalyptus globulus como de Origanum vulgare
(equivalente a una concentración de 0.69 g/ml y 0.71 g/ml para cada uno de
ellos respectivamente); sin embargo, todas las concentraciones de los aceites
esenciales ensayadas tuvieron un notable efecto antibacteriano. Según la
escala de Duraffourd, la cepa de E. coli en estudio es muy sensible a la
combinación de ambos aceites a concentraciones mínimas bactericidas.
Estableciendo que existe efecto sinérgico antibacteriano in vitro de los aceites
esenciales de Eucalyptus globulus y Origanum vulgare sobre Escherichia coli.
De acuerdo con los resultados obtenidos y basándonos en la información
consultada es sumamente importante esclarecer la acción antibacteriana del
aceite esencial Eucalyptus globulus sobre las cepas de Porphyromonas
gingivalis y recomendar su uso.
56
CONCLUSIONES
1.- Se determinó que el aceite esencial obtenido del Eucalyptus globulus
(Eucalipto) posee actividad antibacteriana frente a la Cepa de Porphyromona
gingivalis.
2.- El grado de sensibilidad que presenta la Cepa de Porphyromona gingivalis
frente al aceite esencial del Eucalyptus globulus (Eucalipto) es sensible a una
concentración de 7.635 mg/ul.
3.- La concentración mínima inhibitoria (CMI) del aceite esencial del Eucalyptus
globulus (Eucalipto) para la Cepa de Porphyromona gingivalis fue de 8.144
mg/ul indicando el tratamiento N°3.
4.- La concentración mínima bacteriana (CMB) del Aceite esencial del
Eucalyptus globulus (Eucalipto) para la Cepa de Porphyromona gingivalis fue
de 8,653 mg/ul indicando el tratamiento N°5 en el cual no se observó formación
de colonias.
57
RECOMENDACIONES
- Se debe tener en cuenta el efecto antibacteriano que presentó el aceite
esencial del Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a la Cepa de
Porphyromona gingivalis, para que sea utilizado en investigaciones futuras
frente a otras bacterias de la cavidad bucal.
- Realizar pruebas “in vivo” para valorar la efectividad y la toxicidad, como
también poder determinar la dosis terapéutica del Eucalyptus globulus
(Eucalipto).
- Elaborar diferentes formas farmacéuticas de acuerdo a la vía de
administración utilizando aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto)
para realizar ensayos clínicos en pacientes con gingivitis o periodontitis.
58
FUENTES DE INFORMACIÓN
1. Brack A, Heinz P.Perú maravilloso. Epenza. Empresa Periodística
Nacional SAC. Lima; 2002
2. Organización Panamericana de la Salud, Organización Mundial de la
Salud. Sistemas de seguros de salud y acceso a medicamentos [Libro
Electrónico]. Argentina: ISALUD; 2001 [Consultado 22/06/17]. Disponible
en:
http://www.paho.org/hq/index.php?option=com_docman&task=doc_view
&gid=16931&Itemid=270&lang=es
3. EsSalud. Perú. Manual de fitoterapia [Libro Electronico]. Perú: Manuales
Mec;2001 [Consultado 12/06/17]. Disponible en:
http://www.bvsde.paho.org/texcom/manualesMEC/fitoterapia/fitoterapia.h
tml
4. Cornejo V. Estudio morfológico-estructural de plantas medicinales de
uso más frecuente en Ayacucho[Tesis]. Perú: Universidad San Cristóbal
de Huamanga; 1986.
5. Tillan C. Plantas medicinales. Revista cubana N°2. 2002; 7(2) :37-44.
6. Umaña K, Quesada R. Enjuagues bucales vs enjuagues naturales.
Revista Odontología Vital. 2009; 2(11):24-33.
7. Aguilera, M. Sensibilidad del Streptococcus Mutans a tres enjuagues
bucales comerciales (Estudio in vitro). Imbiomed, 2011: 7-13.
8. Van ginkel, A. Apuntes del Máster y Diplomatura de posgrado de la UAB
“Plantas Medicinales y Fitoterapia. Módulo 2. Cultivo de plantas
medicinales. Tecnología y Producción; 2003: 50-55.
9. Hernández P. Actividad inhibitoria y letal de los extractos de ajo para
Escherichia Coli y Listeria Innocua. [Tesis]. Cholula, Puebla, México:
Universidad de las Américas Puebla; 2003.
10. Kinane D. Causation and patogénesis of periodontal disease.
Periodontology 2000. 2001; 25; 8-20.
11. Cuenca E, Serra L. Guía per a la prevención y el control de los
materiales bucodentales. Barcelona; 1994.
59
12. Montamayel F, Hassanpour S, Mohammad A, Javad S. Efecto
antibacteriano del eucalipto (globulus Labill) y ajo (Allium sativum)
extractos sobre cariogénicos orales bacterias. Journal of Microbiology.
2013; 1(2): 12-17
13. Ayala D. Efecto antibacteriano del aceite esencial de margarita
(Calendula officinalis) y jengibre (zingiber officinale) vs. Clorhexidina al
2% sobre cepas de Porphyromona gingivalis: estudio in vitro. [Tesis].
Quito: Universidad central Ecuador. Facultad de Odontología; 2016.
14. Bonilla D, Mendoza Y, Campo E, Ozkarina M, Rojas P, Calle J. Efecto
del aceite esencial de Rosmarinus officinalis sobre Porphyromonas
gingivalis cultivada in vitro. 2016;45(2).
15. Lagos La Rosa E. Determinación de la actividad antibacteriana in vitro
del aceite esencial de Thymus vulgaris L. “Tomillo” frente a
Porphyromonas gingivalis causante de gingivitis [Tesis]. Perú:
Universidad nacional Jorge Basadre Grohmann. Facultad de ciencias de
la salud; 2012.
16. Juscamaita E. Efecto inhibidor del aceite esencial de eucalyptus globulus
(eucalipto) comparado con el gluconato de clorhexidina al 0,12% y el
enjuague bucal colgate plax® sobre la cepa de streptococcus mutans.
estudio in vitro [Tesis]. Lima: Universidad Norbert Wiener. Facultad de
Odontologia; 2015.
17. Mendéz Kattia. Efecto sinérgico in vitro de aceites esenciales de
Eucalyptus globulus y Origanum vulgare sobre Escherichia coli [Tesis].
Trujillo: Universidad de Trujillo.Facultad de medicina; 2016.
18. Holt J, Krieg N, Sneath P, Staley J. Bergeys Manual de Bacteriología
Determinativa. Prevalencia de Porphyromonas gingivalis y estado de
salud periodontal. Novena edición. Estados Unidos: J Clin Microbiol;
1998 Nov; 36 (11): 3239–3242.
19. Río M. Actividad biocida de un propolis chileno frente a Porphyromonas
gingivalis: estudio in vitro. [Tesis]. Chile: Universidad de Chile. Área de
microbiología; 2006.
60
20. Donald R. Treponema denticola patógeno en procesos periodontales y
pulpares. Odontología Sanmarquina. 2012; 15(2):38-41.
21. Rivero V. Prevalencia de recesión gingival y factores asociados a la
higiene bucal en estudiantes del postgrado de la Universidad científica
del Sur. Revista científica Odontológica. 2015; 3(1):288-296.
22. Vela I. Efecto de la aplicación tópica de un enjuagatorio en base a xilitol,
flúor y manzanilla (Ortodent) en un grupo de pacientes con Síndrome de
Down. [Tesis para la obtención del título de Especialista en
Odontopediatría]. Ecuador: Universidad San Francisco de Quito; 2007.
23. Diccionario de la lengua española (22. ª Edición), Real Academia
Española, 2001.
24. Ara A, Cien plantas medicinales escogidas. Guía terapéutica. Edaf;
2015: 41-43.
25. Gonzales E. Estudios clínicos realizados en Facultad de Odontología de
la Universidad de Medicina de Nova Jersey y en la Universidad de
Manchester. Madrid; 2017.
26. Montesdeoca V. Elaboración y control de calidad de comprimidos
fitofarmacéuticos de ajenjo (Arthemisia absinthium L.), Romero
(Rosmarinus officinalis L.) y Manzanilla (Matricaria chamomilla L.)
[Tesis]. Ecuador: Escuela Superior Politécnica de Chimborazo; 2010.
27. Cruz P. Elaboración y control de calidad del gel antimicótico de
Manzanilla (Matricaria Chamomilla), Matico (Aristiguietia glutinosa) y
Marco (Ambrosia Arborescens) para neo-fármaco [Tesis]. Ecuador:
Escuela Superior Politécnica de Chimborazo; 2009.
28. Becerra K. Efecto antibacteriano in vitro de los extractos acuoso y
etanolico de Eucalyptus globulus l (eucalipto) en diferentes
concentraciones sobre la cepa de lactobacilluss [Tesis]. La libertad –
Perú: Colegio Odontológico del Perú; 2010.
29. Ingraham J, Ingraham C. Introducción a la microbiología [Libro].
Culiacán: Reverte; 1998.
30. Arcila C. El orégano: propiedades, composición y actividad biológica de
sus componentes. Alan. 2004; 54(1): 100-111.
61
31. Lovati S, Castellani F. Alimentos y Plantas Medicinales. 1ra ed. NORMA
S.A. Colombia; 1994:7-146.
32. Bandoni, A. Los recursos vegetales aromáticos en Latinoamérica, su
aprovechamiento Industrial para la producción de aromas y sabores.
Edit. UNLPCYTED. 2000: 110-220.
33. Lahlou M. Métodos para estudiar la fitoquímica y la bioactividad de los
aceites esenciales. J. Phytother Res; 2004.18: 435-448.
34. Velazco J. Manual práctico de bacteriología clínica. Venezuela:
Universidad de los andes; 2008: 34- 35.
35. Departamento de microbiología y parasitología. Glosario de
microbiología y parasitología. México: Universidad nacional de México.
Facultad de Medicina; 2017.
62
ANEXOS
63
Anexo01: Carta de presentación
64
Anexo N° 02:Constancia de laboratorio
65
Anexo N° 03: Protocolo de conservacion del aceite esencial
66
Anexo N° 04: Eliminacion de desechos biologicos
67
Anexo N° 05: Certificado del aceite esencial
68
Anexo N° 06: Tabla de recolección de datos
Placa
1
Placa
2
Placa
3
Placa
4
Placa
5
Placa
12
Volumen
(ul)[] (mg/ul)
Halos
(mm)
Halos
(mm)
Halos
(mm)
Halos
(mm)
Halos
(mm)
Halos
(mm)
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
1
2
3
ACEITE ESENCIAL DE
Eucaliptus Globulus
(Eucalipo) N°
Discos
Contr
ol(m
m)
ACEITE ESENCIAL DE Eucaliptus Globulus (Eucalipo)
Kirby Bauer - Metodo de difusion
69
Anexo N° 07: Matriz de consistencia
EFECTO ANTIBACTERIANO DEL ACEITE ESENCIAL DEL Eucalyptus Globulus (EUCALIPTO), FRENTE A CEPAS DE
Porphyromona Gingivalis. ESTUDIO IN VITRO, TACNA ,2017
Formulación del problema Objetivos de la
investigación
Hipótesis Variables Metodología Población y
Muestra
Problema principal: Objetivo General: Hipótesis General: Variable Independiente
Efecto antibacteriano del
Aceite esencial del Eucalyptus
Globulus(Eucalipto)
Tipo de Investigación
Experimental
Prospectivo
Transversal
Analítico
Población
Cepas de
Porphyromona
Gingivalis
¿Cuál será el efecto
antibacteriano del aceite
esencial del Eucalyptus
globulus, sobre la cepa de
Porphyromona gingivalis.
Estudio in vitro. Tacna 2017?
Evaluar el efecto
antibacteriano del aceite
esencial del Eucalyptus
globulus, sobre la cepa
de Porphyromona
gingivalis. Estudio in vitro.
Tacna 2017.
El Aceite Esencial de
Eucalyptus Globulus
(Eucalipto) posee una
acción antibacteriana In
Vitro sobre la cepa de
Porphyromona gingivalis.
Problemas secundarios: Objetivos específicos: Hipótesis específicas: Variable dependiente Nivel de
Investigación
Experimental ¿Cuál será el grado de
sensibilidad que presenta la cepa de Porphyromona
Determinar el grado de sensibilidad que presenta la cepa de
La Porphyromona gingivalis presenta una alta sensibilidad frente
70
gingivalis al Aceite esencial de Eucalyptus globulus (eucalipto) mediante la técnica de difusión en disco?
Porphyromona gingivalis frente al aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto) mediante la técnica de difusión en disco.
al aceite esencial de Eucalyptus Globulus (Eucalipto) mediante la técnica de difusión en disco.
Cepa de Porphyromona
gingivalis.
¿Cuál será la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del Aceite esencial de Eucalyptus globulus (eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona gingivalis?
Determinar la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del aceite esencial de Eucalyptus globulus (Eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona gingivalis.
La Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del aceite esencial de Eucalyptus Globulus (Eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona gingivalis es de 0,019 mg/ml.
Muestra
La muestra
que se
evaluará será
en Cuarenta
placas Petri
¿Cuál será la Concentración Mínima Bacteriana (CMB) del Aceite esencial de Eucalyptus globulus
(eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona gingivalis?
Determinar la Concentración Mínima Bacteriana (CMB) del aceite esencial de Eucalyptus globulus
(Eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona gingivalis.
La Concentración Mínima Bacteriana (CMB) del Aceite esencial de Eucalyptus Globulus (Eucalipto) frente a la cepa de Porphyromona gingivalis es de 0,020 mg/ml.
71
ANEXO 8: FOTOGRAFIAS
Esterilización de los discos
Fig. 1. Se observa los discos con
agua destilada para llevar a la
autoclave.
Fig. 2. Se observa los discos sin agua,
los discos han sido separados en las
paredes del vaso, posteriormente
llevado al vapor seco.
Fig. 3. Cepa de Porphyromona
Gingivalis
Fig. 1. Se observa los discos con agua
destilada para llevar al autoclave
72
Fig. 4. Activación de la Cepa Fig. 5. Preparación del agar mueller hinton
Fig. 6. Esterilización de las placas Petri. Fig. 7. Se observa el llenado de las placas Petri
con agar mueller hinton.
Fig. 8. Colocación de los
discos en distintos
volúmenes.
Fig. 9. Colocación del aceite en los discos.
73
LECTURA DE LOS HALOS PARA DETERMINAR LA SENSIBILIDAD
Fig. 10. En las placas Petri con agar, colocar la
solución con la bacteria y realizar el método
de difusión.
Fig. 11. Colocar los discos con el aceite
esencial. Se coloca tres discos con aceite y un
disco de control (sin aceite esencial).
Fig. 12. Envueltos en papel estéril , se lleva a
incubación por 24 horas a 37° C
Fig. 13. En una concentración de 2,5 existe un
halo de 10,10 Fig. 14. En una concentración de 5 existe un
halo de 11,23.
74
Concentración mínima inhibitoria.
Fig. 14. En una concentración de 7,5 existe un
halo de 12,79 Fig. 15. En una concentración de 10 existe un
halo de 14,66
Fig. 16. En una concentración de 12,5 existe
un halo de 14,21
75
Fig. 17. Se observa los 10 tubos los cuales
contienen caldo BHI mas la solución madre con el
aceite, control negativo y control positivo.
Fig. 18. Encontramos que a partir del tubo
numero 3 ya no presenta turbidez, este tubo
se comprara con el control positivo y el
control negativo.
Fig. 19. Se selecciona tres tubo a partir del
tubo que no presento turbidez. (Tubo 3,4,5)
Fig. 20. Se realiza la colocación de la sustancia
de cada tuvo que no presento turbidez (Tubo
3,4,5)
76
Fig. 21. Se cierra las placas y se coloca el
número de cada tubo en cada placa.
Fig. 22. Se realiza la incubación para conocer
la concentración mínima bactericida por 24
horas a 37° C.
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Fig. 23. Observamos formación de colonias
aproximadamente 4 formaciones. Tubo N°3
Fig. 24. Observamos 2 unidades formadores
de colonias. Tubo N°4
Fig. 25. No se observa formación de colonias. Tubo N°5.
El cual es seleccionado como la concentración mínima bactericida.