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Evaluación de la actividad genotóxica del extracto metanólico de Gynosis verrucosa
mediante el ensayo Micronúcleos con bloqueo de Citocinesis en la línea celular
Astrocitoma cerebral (D-384)
Diana J. Herrera Torres
Director:Dr. Natalia Bailón M.
Universidad Técnica Particular
de Loja
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La muerte por cáncer en 2007 fueron 7.6 millones personas En el 2008, los diagnósticos de cáncer fueron de 1.4 millones de personas.
El cáncer se caracteriza por un crecimiento incontrolado y la propagación de células anormales
DEFINICIÓN
Macdonald F. et al ,2004
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INCIDENCIAPulmón (25%)Próstata (15%)Colon y recto (10%)
En 1997 al 2002Mujeres: cérvix invasor, mama, piel, estomagoHombres: Estómago, próstata, leucemia
Pulmón (26%) Mama (14%)Colon y recto (10%)
Mujeres: mama y cérvix Hombres: próstata y estómago.
Veniecuador, 2005
Aracno, 2006
Brown, 2008 Iriarte, 2008
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TRATAMIENTO Procesos quirúrgicos
Quimioterapia sistémica
Radiación
Novo J., 2005García J., 2003
Navarra, 2007
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AGENTES ANTICANCERIGENOS
2.Epipodofilotoxinas
4.Camptotecinas
1. Alcaloides de la Vinca
3. Taxanos
Desde décadas atrás se han utilizado especies vegetales y microorganismos para obtener principios activos para la fabricación de nuevos medicamentos.
Taxus brevifolia
Catharanthus roseus
Camptotecina cuminata
Podophyllum peltatum
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Carrión, 2007
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Gynoxis verrucosa
Familia: Asteraceae
Nombres Comunes Guángalo, Congona
Parte usada Hojas
Usada alergias, espanto, dermatitis y nervios.
3,4-dihidroxi-bisabola-1,10-dieno
2-(2-(acetoximetil) oxiran-2-il)-5-metilfenil isobutirato
ácido 3,5-dicafeoilquínico flavonoide glicosidado eupalitina
Dehidroleucodina Acetilhanfilina Kauniolida 1 α,10α-epoxy-2α-hidroxikauniolidaCH3
O
OCH3
CH2
O
O
CH3
CH2
O
CH3
O
O
CH3
(S)(Z)
(S) (S)
(Z)
O
O
H
Malangón O. 2007
O
O
OH
O
H
(S)(R)
(S)
OH
OH(S)
O
O
O
O
O
HOOC OH
O
OH
HO
O
OH
O
OH
OH
OH3CO
H3CO
OH O
OR
OH
R =Glucoside
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Gynoxis verrucosa
El extracto metanólico mostró IC50 = 22,06 ± 10,7ug/ml
El extracto metanólico mostró en CHO-K1
Citotóxico a <100ug/ml Citostático a <10ug/ml
Extracto D384 A549 MCF-7 CAKI
Gynoxis verrucosa
22,06±10,7
57,06±2
,61 62,14±1,
6942,73±8,
14
LÍNEA CELULAR TUMORAL HUMANA
DL50 (ug/ml) ENSAYO MTS
(Astudillo A., 2006)
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Micronúcleos con bloqueo de citocinesis (CBMN)
Micronúcleos evalúa la inestabilidad genética, indica rotura cromosómica, en biomonitoreo de exposición a genotóxico y sus efectos en humanos.
Los MN se forman por ruptura directa del ADN
Posibles destinos a la exposición citotóxicos o agentes genotóxicos
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OBJETIVO GENERAL Evaluar la actividad
genotóxica del extracto metanólico de Gynoxis verrucosa mediante el ensayo CBMN en la línea celular Astrocitoma cerebral (D384).
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OBJETIVOS ESPECÍFICOS
• Establecer el efecto citostático mediante Índice de División Nuclear en la línea celular Astrocitoma cerebral (D384).
• Establecer el efecto genotóxico mediante la evaluación de Micronúcleos en la línea celular Astrocitoma cerebral (D384).
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MATERIALES Y METODOS
24 Horas
24 Horas
24 Horas
Siembra TratamientoCultivar células D-384
Evaluación
CosechaTinción
24 Horas
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GRUPOTRATAMIENTO
VehículoConcentraciones
de prueba MMC Citocalasina B
Cont. Positivo MMC ------ ---- 1 uM (5ul) 4.5ug/ml (33 ul)
Concentración 25ug/ml DMSO 25ug/ml (62,5ul) ---- 4.5ug/ml (33 ul)
Concentración 20ug/ml DMSO 20ug/ml (50ul) --- 4.5ug/ml (33 ul)
Concentración 10ug/ml DMSO 10ug/ml (25ul ) ---- 4.5ug/ml (33 ul)
Cont. Negativo DMSO < 0.5% ---- ---- 4.5ug/ml (33 ul)
MATERIALES Y METODOS
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MATERIALES Y METODOS
24 Horas
24 Horas
24 Horas
Siembra TratamientoCultivar células D-384
Evaluación
CosechaTinción
24 Horas
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RESULTADOS Y DISCUSIÓN
DMSO 10 20 25 MMC 1uM0
25
50
75
100Mo Bi Po
Concentración G.v (ug/ml)
% d
e ce
lula
s M
o, B
i, Po
li
Provoca daño puntual que interactúan directamente al ADN, indicando toxicidad.
Figura.3.1. Efecto del extracto G. verrucosa en la proliferación celular T. de DUNETT. *P<0.00001, **P<0.008.
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DMSO 10 20 25 MMC 1uM1.0
1.2
1.4
1.6
1.8
2.0
Concentración G. v (ug/ml)
IDN
El IDN hace referencia a la velocidad de la división celular siendo un indicativo del grado de toxicidad.
Se sabe que extracto en células CHO-K1, 10ug/ml es citostático medido por curva crecimiento clonal (Astudillo, 2006)
INDICE DE DIVISION NUCLEAR
Figura 2. Índice de división nuclear T. de DUNETT. *** P<0.00001; **P< 0.00002; *P<0.00003
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RESULTADOS Y DISCUSIÓN Estableciendo que el efecto puede variar dependiendo de la
naturaleza del estudio .
La diferencia del modelo, la diversa sensibilidad de cada técnica
Antineoplásico Citotóxico No citotóxico
Carboplastino CHO-K1 Linfocitos
Tamoxifeno MCF-7 MDA-MB468
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Frecuencia de Micronucleos
control 10 20 25 MMC 1uM0
10
20
30
40
50
60
70
Concentraciones G. v (ug/ml)
CB
N m
icro
nu
cle
os
/10
00
CB
N
Figura 3. Efecto genotóxico, en las células D384, T. de DUNETT. *P> 0,00001.
FRECUENCIA DE MICRONUCLEOS
Hay un incremento en la frecuencia de MN conforme incrementa la concentración del extracto , por lo que creemos que los datos obtenidos se debe a la presencia de lactonas sesquiterpénicas.
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RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Las lactonas sesquiterpénicas afectan la formación del huso mitótico lo que podría indicar el incremento de micronúcleos.
Se observa una actividad genotóxica por el incremento de la frecuencia de MN a partir de 1ug/ml en linfocitos humanos CBN (Toledo Z., 2007)
Medido por el ensayo cometa se puede evidenciar un incremento en el daño al ADN a partir de 0.01ug/ml. (Vintimilla A., 2007)
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El extracto metanólico de Gynoxis verrucosa a las concentraciones de 10, 20 y 25ug/ml no tiene un efecto citostático en la línea celular de Astrocitoma cerebral D-384 evaluadas mediante el índice de división nuclear.
CONCLUSIONES
El extracto metanólico de Gynoxis verrucosa tiene un efecto genotóxico produciendo un daño significativo en la línea celular de Astrocitoma cerebral D-384 evaluadas mediante la frecuencia de MN a las concentraciones probadas de 10, 20, 25ug/ml en células binucleadas.
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GRACIAS
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GRACIAS
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