electroforesis
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Electroforesis en gel
Elena Pacheco
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Electroforesis es…
Cuando se aplica una carga eléctrica a una solución:
•Las moléculas con carga positiva se desplazan hacia el electrodo negativo.
•Las moléculas con carga negativa se desplazan hacia el electrodo positivo.
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Utilidad
Las moléculas se desplazan según su tamaño
separar DNA/RNA/proteínas
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La electroforesis puede ocurrir
Libre en disolución
En un medio de soporte
Papel Gel
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Electroforesis en gel
El gel funge como una matriz porosa.
A través del gel migran las moléculas.
Se tiñe con un colorante que se une a los ac. nucleicos o a las proteínas.
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Las moléculas (fragmentos) pequeñas migran más que las pesadas pues atraviesan la matriz con mayor facilidad.
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Según lo que se desee separar se utilizan dos tipos de gel
Ac. Nucléicos Proteínas
Agarosa Poliacrilamida
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Gel de agarosa
Polisacárido de poros pequeños.
Según el tamaño de la molécula a separar se utilizan distintas concentraciones.
Colorante: bromuro de etidio.
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Gel de poliacrilamida
Polímero entretejido de poros grandes.
Permite la migración de grandes moléculas.
Colorante: azul de Coomassie.
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Aplicaciones
Es una de las herramientas más utilizadas en biología molecular.
Detecta proteínas y ácidos nucleicos según su tamaño.
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Ventajas
Sencilla.
Bajo costo.
Efectiva.
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Desventajas
Sólo separa por tamaño.
Colorantes carcinogénicos.
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Fuentes:
Nelson, D.L., Cox, M.M.(2008) Lehninger. Principles of biochemistry, 5ª ed. USA.
Mathews, C.K., van Holde, K.E., Ahern, K.G. (2002)Bioquímica. 3ª ed. España.