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UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUAFACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
CINÉTICA DE CRECIMIENTO DE Saccharomyces cerevisiae
Microbiología de alimentos
Dr. Iván Salmerón
I.Q. Edmundo Juárez Enríquez 213548Q.B.P. Carolina Nájera Domínguez 207445
I.Q. Ana Herrera Ponce 20753123/03/2011
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INTRODUCCIÓN
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Saccharomyces cerevisiae
Clase: HemiascomycetesOrden Saccharomycetales Familia: Sacchacromycetaceae
Biomasa
Etanol
Tamaño: 5-10 micrasReproducción: gemación
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En el transcurso de la fermentación hay 4 fases de crecimiento: • 1) lag o de adaptación • 2) exponencial o log• 3) estacionaria• 4) mortalidad
Introducción
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C6H1206 —» 2 CH3CH2OH + 2 CO2
Introducción
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OBJETIVO
Monitorear el crecimiento de Saccharomyses cerevisiae, con el fin de medir el cambio de diferentes parámetros, como pH, consumo de
azúcar, acidez y unidades formadoras de colonias, así como la duración de cada etapa del crecimiento
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MATERIALESY
MÉTODOS
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• Microbiología III• Alimentos I
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Preparación del Caldo de Crecimiento
• Glucosa 5 g/L• Extracto de Malta 5%• Solución M9• Inóculo 1%
Inoculado el 15 de Marzo
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Acidez y pH• Acidez: valoración de la
muestra con NaOH 0.1 N• % de ácido acético
• Muestra directa en potenciómetro Hanna
Instruments Hi225
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Cuantificación de consumo de sustrato
• Dubois y col. (1956)y = 0.0115x + 0.009
R2 = 0.9822
0.0000
0.2000
0.4000
0.6000
0.8000
1.0000
1.2000
1.4000
0 20 40 60 80 100
Glucosa (μg/mL)
D.O
. (4
92 n
m)
1 mL muestra o estándar
0.6 mL Fenol 5%3.6 mL H2S
492 ג nm
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• Al momento de realizar la cinética de crecimiento, se separó 1 mL de la muestra
• Se centrifugó a 1500 rpm por 5 min
• El sobrenadante se guardó en refrigeración para su análisis al día siguiente
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D.O.
• Determinar la D.O. a 600 nm (Durango, 2007)• Espectrofotómetro PerkinElmer Lambda 25
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UFC• Milles y Misra “ Método de la Gota”
1 mL1 mL 10-1 10-2 10-3
10-4
PDA X 2
37° C12 horas
37° C12 horas
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Cinética de Crecimiento Microlector
• Blanco: caldo de crecimiento• Cinética: caldo de crecimiento inoculado con Saccharomyces
cerevisiae
25 °C24 horasD.O. 595 nm
BioTekGen 5
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Monitoreo de la Cinética Manual
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RESULTADOS
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Frotis
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pH y Acidez
7.15
7.557.65
7.757.82
7.867.88y = 0.0002x
2 - 0.034x + 7.9161
R2 = 0.9855
7
7.2
7.4
7.6
7.8
8
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26
Tiempo (h)
pH
y = -2E-05x3 + 0.0009x2 - 0.004x + 0.0978
R2 = 0.9983
0.00
0.05
0.10
0.15
0.20
0.25
0.30
0.35
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26
Tiempo (h)
% Á
cid
o A
céti
co
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0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
41 42 43 44 45 46 47 48 49 50
Tiempo (h)
D.O
. (60
0 n
m)
Densidad Óptica
y = -0.0003x2 + 0.0363x - 0.0272
R2 = 0.997y = 0.022x2 - 0.1423x + 0.3181
R2 = 1
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26
Tiempo (h)
D.O
. (60
0 n
m)
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Consumo de sustrato
y = 0.0115x + 0.009
R2 = 0.9822
0.0000
0.2000
0.4000
0.6000
0.8000
1.0000
1.2000
1.4000
0 20 40 60 80 100
Glucosa (μg/mL)
D.O
. (49
2 n
m)
y = -0.9944x + 45.159R2 = 0.3165
0
10
20
30
40
50
60
70
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26
Tiempo (h)
Glu
cosa
[µ
g/m
l)] y = -0.3673x + 38.004
R2 = 0.0681
0
10
20
30
40
50
40 44 48 52 56 60 64 68 72 76
Tiempo (h)
Glu
cosa
[µ
g/m
L]
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UFC
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Cuadro 1. Resultados del conteo de UFC por el “método de la gota”, agar PDA, incubación a 37ºC. El conteo se realizó a las 29 horas después de la toma de la primera muestra.
Caja Monitoreo Directo 1:10 1:100 1.1000 1:10000 1.100000
Blanco - - - - - - -
1.10
X
1.2 X X
2.11
X
2.2
3.12
3.2 X
4.13
X
4.2 X
5.14
X
5.2
6.15
6.2
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GRACIAS!!