Protección contra el estrés oxidante � ANTIOXIDANTES
� Directos Ácido ascórbico
� Indirectos Sulforafano � Bifuncionales α- mangostina Curcumina Ácido alfa lipoico (ALA) Acido norhidroguayarético (NDGA) Resveratrol)
Larrea tridentata
Antioxidantes directos • Actividad redox
• Se consumen durante las funciones antioxidantes
• Necesitan ser regenerados
• Son de corta duración
• Pueden tener efectos pro-oxidantes
Antioxidantes indirectos
• Puede presentar o no actividad redox.
• Funcionan a través de la inducción de proteínas citoprotectoras que actúan catalíticamente (es decir, no se consumen).
• Tienen una vida media larga.
• Es poco probable que tengan efecto pro-oxidante.
α-Mangostina
• Garcinia mangostana (GM). Árbol tropical de sudeste de Asia.
• Xantona
• Propiedades: antioxidante, antiinflamatoria, fungicida, antibacteriana, entre otras.
α-mangostina O
O
OHOH
OHO
Sistema generador
Sistema detector
- Fluorescencia
- Absorbencia
- Bioluminiscencia
ESTUDIO DE LA CAPACIDAD ATRAPADORA DE ERO
Peroxinitrito
O
Cl H
O
O
CH3O
O
CH3
O
OH
Cl-OH
O
Cl H
OHOH
O
OH
Cl
DCDHFDA DCDHF
ONOO-
O
Cl
OH
O
OH
O
Cl
DCF
Medio b·sico OxidaciÛn
Excitación: 488 nm Emisión: 525 nm
• Oxígeno singulete
Excitación 410 nm Emisión 455 nm
HOCl + H2O2 → 1O2 + HCl + H2O
O O
OO+ 1
O2O
O
difenilisobenzofurano (DFBF) o-‐dibenzoilbenceno
EVALUACIÓN DE LA PRODUCCIÓN DE ERO
H2O2, OH●,
ROO•
Carboxi-DHFDA
λexitación=488 nm, λemisión= 530 nm
Carboxi-DCF
Renal MDA content
nmoles/m
g protein
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
Ct α-‐M CDDP CDDP+α-‐M
*
**
A Renal protein carbonyl content
nmoles DNPH
/mg protein
0
1
2
3
4 *
**
Ct α-‐M CDDP CDDP+α-‐M
B
Renal GSH content
mmol/m
g protein
0
10 30
35
40
45
50
Ct α-‐M CDDP CDDP+α-‐M
*
** C Urinary H2O2 excreHon
nmol/24 h
0
100
200
300
400
Ct α-‐M CDDP CDDP+α-‐M
*
*,**
D
EFECTO PROTECTOR DE LA α-MANGOSTINA EN EL DAÑO RENAL INDUCIDO POR CISPLATINO
EFECTO DE LA α-MANGOSTINA
O
O
OHOH
OHO
α-MANGOSTINA
ERO
O2•-
ONOO-
1O2
atrapa
Daño renal (cisplatino)
aumento Insuficiencia renal
• La α-mangostina induce la expresión de HO-1 de manera dependiente de la concentración y del tiempo
Protección contra el estrés oxidante � ANTIOXIDANTES
� Directos Ácido ascórbico
� Indirectos Sulforafano � Bifuncionales α- mangostina Curcumina Ácido alfa lipoico (ALA) Acido norhidroguayarético (NDGA) Resveratrol)
Larrea tridentata
Enzimas inducibles vía Nrf2 NADPH quinona óxidorreductasa
(NQO1) Glutatión reductasa (GR)
Glutatión peroxidasa (GPx) Glutatión S-transferasa (GST)
γ-Glutamato cisteína ligasa (γGCL)
Superóxido dismutasa
Hemo oxigenasa-1 (HO-1). Catalasa (CAT)
Tiorredoxina reductasa (TrxR) Peroxirredoxina (Prx)
Ferritina Tiorredoxina (Trx)
Superóxido dismutasa (SOD) 6-fosfogluconato deshidrogenasa
(6PGD)
Glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH) Enzima málica
Respiración mitocondrial
Tiempo (s)
Oxí
geno
(nm
ol)
mitocondrias
Malato/glutamato Succinato
ADP
CCCP
Estado 3
Estado 4
ESTUDIOS IN VITRO. Células LLC-PK1
Efecto protector del SFN en la muerte celular inducida por cisplatino
Participación de las enzimas NQO1 y GCL en la protección por SFN
Fig. 2. Inducción de la traslación del factor transcripcional Nrf2 del citoplasma al núcleo de células LLCPK1 tratadas con SFN por 3 h.
Guerrero-‐Beltrán et al., 2010
Campo claro
Hoechst
Nrf2
Control SFN 10 µM SFN 25 µM
POTENCIAL DE MEMBRANA MITOCONDRIAL: JC-1 (5,5’,6,6’-tetracloro-1,1’,3,3’ yoduro de
tetraetilbenzimidazolcarbocianina)
Células sanas Mitocondria Agregados
Fluorescencia roja
Células dañadas, apoptóticas Citoplasma Monómero
Fluorescencia verde