UNIVERSIDAD TECNOLÓGICA DE LA MIXTECA
MAESTRÍA EN CIENCIAS: PRODUCTOS NATURALES Y ALIMENTOS
INGENIERÍA DE BIORREACCIONES
ARTÍCULO A REVISAR:
Lactose hydrolysis from milk/whey in batch and continuous processes by concanavalin A-Celite 545 immobilized
Aspergillus oryzae galactosidase
Shakeel Ahmed Ansaria, Qayyum Husainb
DORA JHANINA RODRÍGUEZ FERNÁNDEZ
INTRODUCCIÓN
• Importancia de la lactosa.
• El objetivo la inmovilización de la enzima β galactosidasa Aspergillus oryzae sobre el soporte bioafín, Concanavalin A Celite 545.
• Para ello utilizaron dos tipos de sistemas de inmovilización, la primera fue con la absorción de la enzima β galactosidasa sobre el soporte Concavalin A Celite 545 cuyas abreviatura es (AβG) mientras que la segunda fue de absorción de la enzima a través de enlaces cruzados, la abreviatura usada es (CβG).
MATERIALES Y MÉTODOS
Prepararon el soporte Conavalin A
Harina de habas de Jack
(10,0 g) se agitó en 100
ml de tampón* Tris-HCl 0,1 a pH
6,1 durante 2 h a
temperatura ambiente.
eliminación de residuo
insoluble por centrifugación
(a 3000 × g, 20 min en centrífuga
refrigerada).
El sobrenadante
se utilizó como fuente de Conavalin
A
Preparación del soporte bioafin
• Conavalin A enlazado con Celite se usó como matriz bioafin para inmovilizar la β galactosidasa.
suspensión del Celite 545 (5g) en 100mL de
agua destilada por 2h bajo
condiciones de agitación.
Remoción de finas partículas por decantación ( repetición de
3 vece)
incubado del Celite lavado con 45 ml del
extracto de jack bean bajo
condiciones de agitación toda
una noche.
Colección de Conavalin A
enlazado con celite:
Centrifugó a 300g x g, 20 min. Se 2-3 veces con
acetato buffer de sodio, pH 4.5
Entrecruzamiento de Conavalin A-Celite 545 adsorbido β galactosidasa:
Conavalin A.Celite con adsorción de β
galactosidasa, se entrecruzó por 0.5%
(v/v) de glutaraldehído, 2h a 4°C
Se agregó etanolamina 0.01% (v/v) a la mezcla
de enlaces entrecruzados
se incubó a 30°C x 90min
Hidrólisis de lactosa de leche por la enzima β galactosidas en procesos por lotes:
Agitación de la lehe fría
(centrifuga a 8000 x g por
20min)
Remoción de capa grasa.
Almacena a 4°C
Tratamiento de leche agitada con SBG, ABG,
CBG en proceso por lote a 50°C
estimación de hidrólisis con
peroxidasa.oxidasa acoplada al procedimiento
de examen
Hidrólisis de lactosa del suero de leche por la enzima β galactosidas en procesos por lotes
acidificación de lehe agitada con
HCl, pH 4.8
Remoción de caseína por
centrifugación
Tratamiento de suero (500mL) con SBG, ABG,
CBG en proceso por lote a 50°C
estimación de hidrólisis con
peroxidasa.oxidasa acoplada al procedimiento
de examen
RESULTADOS
Actividad obtenida d para las enzima inmovilizada
Influencia de inmovilización de la enzima sobre las constantes cinéticas
Perfil de la actividad para enzima soluble y la inmovilizada
β galactosidasa soluble (SBG), β galactosidasa adsorbida concavaline A-Celite (ABG) y β galactosidasa adsorbida con A-celite entrecruzado (CBG) fueron medidas con buffer con pH (3.0–9.0). Los buffers fueron glycina–HCl (pH 3.0), acetato de sodio (pH 4.0, 4.5), fosfato de sodio (5.0–7.0) y Tris–HCl (pH 8.0, 9.0). La Molaridad fue de cada buffer fue de 0.1 M. la actividada a pH 4.5 fue para control (100%) para el cálculo del porcentaje remanente de la actividad. SG AG
Y CG
Temperature activity profiles for soluble and immobilized β galactosidase
Temperature activity profiles for soluble and immobilized β galactosidase. Activity of soluble and immobilized galactosidase preparations (2.0 U) was assayed in 0.1 M sodium acetate buffer, pH 4.5 at various temperatures (30–80 ◦C) for 15 min. The activity obtained at 50 ◦C was considered as control (100%) for the calculation of remaining percent activity. The symbols show SG AG
CG
Hidrólisis de lactosa
CONCLUSIONES
• Los autores enfatizaron la inmovilización de la enzima Aspergillus oryzae galactosidase sobre un soporte bioafin de bajo costo , Concavalin A-Celite 545.
• Las enzimas inmovilizadas mostraron alta estabilización en contra de varios parámetros físicos y químicos
• Además esta enzima inmovilizada se explotó para la hidrólisis de lactosa a partir de leche y suero de la misma.