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Medios de cultivo y Esterilizacin
Prctico 2
Curso de Microbiologa 2010 Facultad de Agronoma
Cultivo de los microorganismos
Medios de cultivo
Solucin acuosa con las sustancias necesarias para que las clulas generen energa y realicen biosntesis
Requerimientos nutricionales componentes del medio de cultivo: Fuente de energa Fuente de C, N, H, O Fuente de P, S, Ca, K Micronutrientes Factores de crecimiento
Clasificacin de los medios de cultivo:
Segn su naturaleza: Lquido Slido Semislido
Segn su composicin: Medio definido-sinttico Medio indefinido-complejo
Segn su uso: Medio mnimo Medio enriquecido Medio selectivo Medio diferencial
Medio PCA
Extracto de levadura 2.5 g Glucosa 1 g Triptona 5 g
Agua 1 litro Agar 15 g pH 7
Extracto de levadura 2 g Glucosa 20 g Fosfato insoluble 2 g Agar 18 g Agua destilada 1 litro
Extracto de papa 4 g Glucosa 20 g Agar 15 g Agua destilada 1 litropH 5.6
Solubilizadoresde fosfato
PDA
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TY
Triptona 5 g Extracto de levadura 3 g CaCl2 2H2O 0.6 g Agua destilada 1 litro Agar 18 g pH 6.8
CALDO TY: igual al anterior pero sin el agar
Medio EMA
Manitol 10 g K2HPO4 0.5 g MgSO4.7H2O 0.2 g NaCl 0.1 g Extracto de levadura 1 g Rojo congo 10 ml Agua destilada 1 litro Agar 18 g
Esterilizacin
Mtodos de esterilizacin:a) Calor:
calor seco calor hmedo
b) Agentes qumicos: gases (xido de etileno), glutaraldehdo, formaldehdo
c) Filtracin:Filtros de membranaCmara de flujo laminar
d) Radiacin: radiacin ionizante y no ionizante
Es la completa destruccin o eliminacin de toda forma de vida
a) Calor seco
Mecanismo de accin Procesos de oxidacin y desnaturalizacin de protenas
Control del proceso Indicador biolgico esporas de Bacillus subtilis
Aire caliente Se consigue esterilizacin a 170C, 60 minutos o 160C a120 minutos
Usos: Esterilizacin de materiales resistentes al
calor, sustancias no miscibles en agua (inyectables oleosos, siliconas, vaselina lquida), polvos
Incineracin: Flameado (>500 C) Incineracin
Esterilizacin por calor
Horno elctrico
a) Calor hmedo
Procesos: Vapor saturado a presin mayor que la atmosfrica
(Autoclave) Tindalizacin
Mecanismos de accin: Desnaturalizacin de protenas Destruccin de cidos nucleicos
Esterilizacin por calor
Autoclave
Vapor saturado a temperaturas mayores de 100C (precaucin: eliminacin total del aire)
Esterilizacin de materiales termoestables (salvo productos oleosos y polvos)
Descontaminacin de desechos biolgicos
Condiciones: 121C durante15 min., con cargas iniciales bajas 121C durante 30 min., con cargas iniciales altas
Indicadores: Fsicos: temperatura y/o presin Qumicos Biolgicos: Geobacillus stearothermophilus
Vlvula de escape
Manmetro
Caja de controles
Termmetro
Entrada devapor
Desage
Esterilizacin por calor
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Ciclo tpico de un autoclave
Esterilizacin por calor
Tindalizacin
100C 30 minutos, 3 das sucesivos Proceso discontinuo con perodos de incubacin
intercalados Usos: esterilizacin de productos de baja resistencia
trmica, cuando no existe otra opcin
Esterilizacin por calor
Otros procesos de control por calor hmedo
Pasteurizacin LHT (low temperature holding) 30 minutos a 62.8C HTST (high temperature short time) 15 segundos a
71.6C Solo destruye patgenos (Coxiella burnetti,
Mycobacterium tuberculosis, etc.) y reduce flora de deterioro
Usos: leche, lcteos, jugos de fruta UHT (Ultra high temperature)
140-150C durante pocos segundos Proceso continuo Necesita envasado asptico
NO ESTERILIZANTESb) Filtros de membrana
Se emplea para materiales sensibles al calor: medios de cultivo, azcares, soluciones de antibiticos, etc.
Esterilizacin por Filtracin
b) Cmara de flujo laminar
Protege la muestra, el operador y el medio ambiente Filtros HEPA (High Efficiency Particulate Air) Remocin de hasta el 99.97% de partculas mayores a
0.3 micrones de dimetro
Esterilizacin por Filtracin
d) Radiacin
Esterilizacin por radiacin
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Alta energa, baja longitud de onda Gran poder de penetracin Produce e-, radicales hidroxilo (OH) e hdrido (H) que
degradan cidos nucleicos y protenas No requieren altas temperaturas 2 tipos Rayos gamma (160Co 137Cs)
Rayos betaUsos: esterilizacin de suministros mdicos, industria alimentaria, turba para inoculantes
Radiacin ionizanteEsterilizacin por radiacin
Radiacin no ionizante
Baja energa, sin poder ionizante Sin poder penetrante Mxima eficiencia biocida a 260 nm Mecanismos de accin:
Sitio blanco ADN Formacin de dmeros de timina
Usos: Desinfeccin de superficies Desinfeccin de aire y agua
Esterilizacin por radiacin