Download - Cromatografía I
La cromatografía es una técnica que permite la
separación de los componentes de una mezcla por
la influencia de:
Retencion: Efecto producido sobre los
componentes de la mezcla por una fase
estacionaria (sólido o líquido) anclado a un
soporte sólido.
Desplazamiento: Efecto ejercido sobre los
componentes de la mezcla por una fase
móvil (líquido o gas).
Para poder decidir cuál será el solvente elegido para la separación de los componentes, se lleva a cabo la preparación de 40 ml de 4 solventes diferentes:
Diclorometano Metanol Diclorometano:metanol
(30:1)
Diclorometano:metanol
(3:1)
Simultáneamente se lleva
a cabo la preparación
de las láminas con sílica.
Éstas son sembradas con
una pipeta Pasteur
donde se recoge la
mezcla de colorantes a
separar y se deposita en
una línea hecha
anteriormente con lápiz.
A continuación se sumerge una lámina dentro
de cada vaso de precipitados. Se tapan los
mismos con un vidrio reloj para evitar
la evaporación
El solvente elegido será aquel que haya separado correctamente los componentes.
Luego de dejar reposar
las láminas, se las extrae y
se realiza la elección del
solvente a utilizar en la
columna cromatográfica.
Como se nombro
anteriormente, el mismo
será el que mejor haya
separado los
componentes de la
mezcla.En este caso, el solvente
elegido será:
Diclorometano:Metanol
(3:1)
Para preparar una columna
cromatográfica se coloca una bureta
sostenida con un pie universal.
Dentro de ella se
coloca una torunda de
algodón con la ayuda
de una varilla de vidrio.
Sobre el algodón se
coloca, con embudo,
una tapa de gaseosa
de sílica en gel.
Evitar a través de pequeños golpes la formación de burbujas de aire.
Se procede a
humedecer el
interior de la
columna con el
solvente
elegido para
colocar 0,5 ml
de la mezcla
de colorantes.
Luego, se vierte
el solvente
dentro de la
columna hasta
superar el
centímetro por
encima de la
sílica.
Una vez colocado el solvente y la mezcla, se
abre el robinete y se da por comenzado el
proceso de separación de componentes.
Mantener constante el volumen de solvente durante todo
el proceso.
En el momento en
que el eluato 1llega
al fin de la columna,
se lo recoge en un
tubo de ensayos.
Luego colocar Ácido
Acético al solvente
para aumentar su
polaridad y recoger el
eluato 2 (polar) en
otro tubo de ensayos.
En una lámina se coloca la siembra de testigo 1 con el eluato 1.
En otro lámina se coloca la siembra de testigo 2 con el eluato 2.
Se colocan las dos láminas en un vaso de precipitados con el
solvente y tapado con un vidrio reloj.
Al observar que los componentes eluyen de igual forma, se
confirma la utilización de Rojo de Metilo y Azul de Metileno.