Download - BIOQUIMICA FARMACIA DE
BIBLIO
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
TESIS II
“Cuantificación de antocianinas totales y capacidad antioxidante del fruto
de Sambucus peruviana (sauco)”
PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE:
BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA
AUTORES:
CUBA GOMERO, Anthony Lenin
QUEZADA QUIPUSCO, Paola Viviane
ASESOR:
Dr. VENEGAS CASANOVA Edmundo Arturo
TRUJILLO – PERÚ
2019
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DEDICATORIAS
A Dios por guiarme y acompañarme
siempre a lo largo de mi carrera, por ser
mi fortaleza en los momentos de
debilidad y por brindarme grandes
momentos de aprendizaje y felicidad.
Anthony
A mis padres Vilma y Pablo, por ser un
ejemplo para mí, por su apoyo constante,
consejos y su inmenso cariño para ser de
mí una mejor persona cada día.
Anthony
A mis hermanos, por ser parte
importante en mi vida y representar la
unidad familiar, por llenar mi vida de
alegrías.
Anthony
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A Dios por guiarme, brindarme sosiego
y fortaleza en todo el trayecto de esta
aventura llamada vida.
Paola
A Segundo y Gloria, mis padres, por su
constante apoyo y empuje para lograr
mis metas cada día.
Paola
A Karina y Martin, mis hermanos, por
su cariño y apoyo, por llenar mi vida de
constantes muestras de cariño. Los
quiero.
Paola
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AGRADECIMIENTO
A nuestro asesor:
Por su apoyo, consejos y compresión incondicional que nos brindó durante cada momento
de la realización y las veces que lo necesitábamos para poder culminar nuestro trabajo
A nuestros distinguidos miembros del jurado dictaminador, les agradecemos por sus
consejos y recomendaciones que nos sirvió para la culminación de la presentación de
nuestro trabajo.
Gracias por sus conocimientos, experiencias, tiempo y dedicación que nos brindaron para
la realización del trabajo titulado “Cuantificación de antocianinas totales y capacidad
antioxidante del fruto de Sambucus peruviana (sauco)”.
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RESUMEN
El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo determinar el contenido de
antocianinas totales y la capacidad antioxidante del fruto de Sambucus peruviana
“sauco” procedente del centro poblado San José de Porcón, distrito de Quiruvilca,
provincia de Santiago de Chuco, región La Libertad método: La especie vegetal fue
recolectada, seleccionada en su estado fresco y maduro, pesada e identificada en el
Herbarium Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo para luego ser procesada,
se cuantifico antocianinas totales mediante el método de pH diferencial y se evaluó la
capacidad antioxidante mediante el método de DPPH (2,2 difenil-1-picrylhidrazilo). Se
determinó la concentración de antocianinas totales de 7.094 ± 0.07 mg expresados en
cianidina-3- o-glucósido/100 g muestra fresca y la capacidad antioxidante de 31.3736 ±
0.07 mg expresado ácido ascórbico/g fruto fresco.
Palabras Clave: Sambucus peruviana, antocianinas totales, capacidad antioxidante.
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ABSTRACT
The objective of this research was to determine the total anthocyanin content and
antioxidant capacity of the Sambucus peruviana "sauco" fruit from the town of San José
de Porcón, district of Quiruvilca, province of Santiago de Chuco, La Libertad region,
method: The plant species was collected, selected in its fresh, mature, heavy state and
identified in the Herbarium Truxillense of the National University of Trujillo, to be
processed, total anthocyanins were quantified by the differential pH method and the
antioxidant capacity was evaluated by means of the DPPH method (2,2 diphenyl-1-
picrylhydrazyl). Results; The total anthocyanin concentration of 7.094 ± 0.07 mg
expressed in cyanidin-3-o-glucoside / 100 g fresh sample and the antioxidant capacity of
31.3736 ± 0.07 mg expressed ascorbic acid / 100 g fresh sample was determined.
Keywords: elderberry, total anthocyanins, antioxidant capacity.
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ÍNDICE
DEDICATORIA ................................................................................................................................ ii
AGRADECIMIENTO......................................................................................................................... iv
PRESENTACIÓN .............................................................................................................................. v
JURADO DICTAMINADOR ..............................................................................................................vi
RESUMEN ...................................................................................................................................... vii
ABSTRACT .................................................................................................................................... viii
INTRODUCCIÓN ............................................................................................................................. 1
MATERIAL Y MÉTODO ................................................................................................................. 10
RESULTADOS ............................................................................................................................... 18
DISCUSIÓN ................................................................................................................................... 19
CONCLUSIÓN ............................................................................................................................... 21
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................................................... 22
ANEXOS ....................................................................................................................................... .26
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I. INTRODUCCIÓN
El interés en la búsqueda de antioxidantes naturales se ha ido incrementando con el
pasar de los años, estos que han sido obtenidos mayormente de drogas vegetales, y
constituidos por una mezcla de compuestos con elevada diversidad molecular y
funcionalidad biológica1.
Existen actualmente evidencias epidemiológicas que logran sustentar la acción
patogénica de los radicales libres en los distintos procesos biológicos. Los radicales libres
son compuestos químicos altamente reactivos y pueden ser dañinos para las células de
nuestro organismo2.
Se forman naturalmente en el cuerpo, pero un aumento en su concentración puede ser
de alto riesgo para los componentes principales de las células como lo es el ADN,
proteínas y las membranas celulares; dando como resultado enfermedades
inflamatorias, cardiovasculares, cáncer, entre otras que pueden llegar a causar la muerte
en los seres humanos3,4.
El estrés oxidativo es el desequilibrio bioquímico ocasionado por la producción excesiva
de especies reactivas y radicales libres, que provocan daño oxidativo a las
macromoléculas y que no puede ser contrarrestado por los sistemas antioxidantes de
defensa. Esto puede derivar en diferentes enfermedades como diabetes, ateroesclerosis,
procesos inflamatorios, isquemia, cataratas, Parkinson, enfermedad de Alzheimer,
cáncer, etc5.
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Los denominados compuestos fenólicos engloban a todas aquellas sustancias que
poseen varias funciones fenol, nombre popular del hidroxibenceno, los cuales están
unidos a estructuras aromáticas o alifáticas. Los compuestos fenólicos tienen su origen
en el mundo vegetal. Son unos de los principales metabolitos secundarios de las plantas
y su presencia en el reino animal se debe a la ingestión de éstas 6,7. Los fenoles son
sintetizados por las plantas y regulados genéticamente, a nivel cualitativo como
cuantitativo, aunque a este nivel también existen factores ambientales. Además, actúan
como fitoalexinas (las plantas heridas secretan fenoles para defenderse de posibles
ataques fúngicos o bacterianos) y contribuyen a la pigmentación de muchas partes de la
planta (p. ej. los antocianos son los responsables del color rojo, naranja, azul, púrpura o
violeta que encontramos en las pieles de las frutas y hortalizas). Por otro lado, cuando
los fenoles son oxidados, dan lugar a las quinonas que dan un color pardo que muchas
veces es indeseable 6,7.
Los fenoles se encuentran casi en todos los alimentos de origen vegetal. Son alimentos
ricos en fenoles la cebolla, el té, el vino tinto, el cacao, el aceite de oliva virgen, etc. Estas
sustancias influyen en la calidad, aceptabilidad y estabilidad de los alimentos, ya que
actúan como colorantes, antioxidantes y proporcionan sabor 7,8.
Las antocianinas han ganado gran importancia como colorantes naturales en la industria
alimentaria, este tipo de pigmentos son metabolitos de tipo fenólico, pertenecen a la
familia de los flavonoides y son responsables de la mayoría de colores rojos y azules de
las frutas y hortalizas. Una molécula de antocianina está constituida por una aglicona o
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antocianidina, la cual en su estado natural está glicosada por uno o más azúcares. Las
diferencias en el cuerpo de la aglicona se deben al número de grupos hidroxilo y al grado
de metilación de estos grupos 10.
Para evaluar la capacidad antioxidante existen diferentes métodos (ya sea in vitro o in
vivo), siendo uno de ellos el Método DPPH, el cual determina la actividad de captura de
radicales libres, midiendo la inactivación de los radicales en un medio acuoso.
Los compuestos antocianínicos se caracterizan por carecer de electrones debido a su
especial estructura química, la cual las hace muy reactivas frente a radicales libres
presentes en el cuerpo. Lo que conlleva a que pueden ser potentes antioxidantes
naturales11.
Las propiedades que se le otorga a las antocianinas para mejorar la salud están
relacionadas a esta capacidad de actuar como antioxidantes y secuestrar radicales libres
en sistemas biológicos12. Los compuestos antocianínicos pueden donar hidrógenos o
electrones a los grupos de radicales libres o bien atraparlos y desplazarlos en su
estructura aromática13. Se ha demostrado que frutos ricos en antocianinas evidencian
una alta actividad antioxidante contra el peróxido de hidrógeno (H2O2) y contra radicales
peróxidos, (ROO•), superóxido (O2•), hidroxilo (-OH) y oxígeno singulete (1O2)14.
Debido al interés en los pigmentos de compuestos antocianínicos también se ha
incrementado por su color, ya que se podrían utilizar como colorantes naturales8. Las
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antocianinas son responsables muchas veces del color atractivo de muchas frutas y
verduras, como es el caso del sauco 15.
El intenso color rojo-púrpura es una fuente atractiva de colorante de alimentos naturales
para la industria alimentaria y textil, constituyendo una alternativa a los colorantes
alimentarios sintéticos11.
En la actualidad el estudio y el uso de colorantes naturales se ha vuelto muy relevante
debido a que organizaciones internacionales, como la Organización Mundial de la Salud
(OMS), ha debatido el uso de colorantes sintéticos por su directa relación con el
desarrollo de enfermedades degenerativas como algunos tipos de cáncer15.
Los antioxidantes son compuestos químicos, que, por otro lado, contrarrestan el efecto
del estrés oxidativo producido por los radicales libres. Nuestro cuerpo produce algunos
de estos antioxidantes para neutralizar a los radicales producidos en el metabolismo,
pero no son suficientes, por lo que se necesita una fuente exógena de éstos. Los
antioxidantes exógenos se obtienen principalmente de la dieta que se consume
diariamente (frutas, verduras y cereales)3.
El Perú cuenta con una gran diversidad de plantas medicinales lo que nos brinda una
herramienta para encontrar tratamientos alternativos a distintas enfermedades. El
conocimiento de las propiedades medicinales de las plantas se basa en la observación,
la experiencia y el conocimiento profundo del entorno. Transmitido de generación en
generación y enriquecido por la integración cultural de la población nativa y migrante.
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Estos conocimientos debidamente sistematizados deben contribuir a resolver, en parte,
los problemas de la población menos favorecida y que se encuentra alejada de la
modernidad, cuyas posibilidades de curarse son limitadas principalmente por el alto
costo de los fármacos modernos.
Entre las innumerables plantas medicinales con estas propiedades se encuentra
Sambucus peruviana (sauco), una especie arbórea que se cultiva en las partes altas de
los Andes (Perú, Bolivia y Norte de Argentina)10,11.
El sauco es un árbol de 12 metros de alto, con ramas glabras y flores blancas perfumadas,
ornamental por sus flores y frutos y que crece entre los 40 – 3900 m.s.n.m. prefiere
suelos profundos, e textura variable; tolera peligrosidad baja a media y requiere buen
nivel de humedad 11.
El entendimiento de las flores se emplea como sudorífico y contra la viruela, así como
también en las inflamaciones de la vejiga y la próstata. El conocimiento de las hojas se
emplea como galactógeno y antiséptico bucal y el de las flores es usado como
antirreumático, antiséptico, depurativo y sudorífico. La infusión de la raíz en hidropesía,
de los frutos como colutorios, en las afecciones de la boca y el de las ramas floridas
contra el alcoholismo11-13.
Los frutos son bayas esféricas o globosas, negras, de 5 – 6 mm. de diámetro; semillas
pequeñas, en número de 3 – 6 por fruto. Los frutos son jugosos, de sabor agradable y
sabor agridulce; se consumen al estado fresco; sirviendo también para hacer
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mermeladas, tienen función antioxidante, astringente, estimulan el sistema
inmunológico, previenen la formación de cálculos renales, eliminan el colesterol, Sus
flores en infusión se utilizan contra la tos y el asma, así también alivian los estados de
ansiedad y nerviosismo16.
Horna en el año 2012, en su investigación “Estudio farmacognóstico y cuantificación de
flavonoides totales de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. (sauco) proveniente de
la ciudad de Huamachuco” plantea el objetivo de contribuir con el estudio
farmacognóstico y cuantificar los flavonoides totales de la hoja de Sambucus peruviana,
llegando a concluir que los resultados se encuentran dentro de los rangos permisibles de
la Norma Ramal para drogas crudas del MINSAP, así mismo se cuantificó los flavonoides
totales expresados como Quercetina mediante espectrofotometría UV visible a 248 nm,
encontrándose en un porcentaje de 0.4775%17.
Jiménez en el año 2013 en su investigación “Efecto antioxidante in vitro de flavonoides
totales del extracto fluído de hojas de Sambucus peruviana H.B.K. (sauco) frente al 2,2-
difenil-1-picrilhidrazil (DPPH)” tuvo como objetivo determinar la capacidad antioxidante
mediante la cuantificación de flavonoides presentes en la hoja de Sambucus peruviana
H.B.K. cual se le realizó el tamizaje fitoquímico, comprobando la presencia de
flavonoides18.
Rosales en el año 2015 en su investigación “Influencia de la temperatura y velocidad de
aire en la cinética de degradación de las antocianinas del sauco (Sambucus peruviana
H.B.K.) durante el secado por convección” tuvo como objetivo determinar cómo influirá
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en la conservación de las antocianinas frente a la acción térmica de un secado por
convección. Los frutos de sauco (Sambucus peruviana H.B.K.) presentaron un valor de
117,949 mg de cianidina−3−glucósido por 100 g de antocianinas en estado fresco19.
Salamanca en el 2013 en su investigación “Obtención de extracto colorante liofilizado
(antocianina) a partir de sauco (Sambucus peruviana), aplicado en la elaboración de una
bebida funcional de membrillo (Cydonia vulgaris pers.)”. Tuvo resultado como que, la
reducción del tamaño de partículas facilita la extracción de un constituyente deseado
contenido en una estructura compuesta20.
Las antocianinas son una importante alternativa para la sustitución de los colorantes
sintéticos, son abundantes en la naturaleza y también debido a los efectos benéficos
sobre la salud humana21.
Por todo lo expuesto anteriormente, el presente trabajo pretende cuantificar las
antocianinas totales, así como determinar la capacidad antioxidante obtenidas del fruto
de Sambucus peruviana (sauco) proveniente del centro poblado San José de Porcón,
distrito de Quiruvilca, provincia de Santiago de Chuco.
Los recientes trabajos de investigación sobre radicales libres han logrado confirmar que
los alimentos con un alto nivel de antioxidantes tienen una participación esencial en la
prevención de enfermedades neurodegenerativas, cardiovasculares y cancerígenas,
males como el de Parkinson y Alzheimer, así como también inflamaciones y trastornos
ocasionados por el envejecimiento celular. Es por ello que, en los últimos años, la
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búsqueda de nuevos antioxidantes naturales para el control de estas enfermedades, en
las cuales está implicado el daño oxidativo ha tenido un auge en investigación y una
mayor atención de la comunidad científica.
En este sentido, los extractos de plantas y diferentes clases de compuestos fitoquímicos
han demostrado ser una fuente importante de compuestos con marcada actividad
antioxidante, permitiendo el crecimiento acelerado de investigaciones en este campo2.
Por lo anterior, los antioxidantes son un campo de amplio estudio y presentan la
expectativa de brindar nuevas fuentes que sean de utilidad para la salud en la comunidad
se plantea el siguiente problema: ¿Cuál es la concentración de antocianinas totales y la
capacidad antioxidante del fruto de Sambucus peruviana “sauco”?
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OBJETIVOS
Objetivo general:
Determinar el contenido de antocianinas totales y la capacidad antioxidante del
fruto de Sambucus peruviana “sauco”
Objetivos específicos:
Determinar concentración de antocianinas totales mediante el método de pH
diferencial
Determinar la capacidad antioxidante in vitro frente al radical libre 2,2 difenil-1-
pricrilhidrazilo (DPPH°).
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II. MATERIAL Y MÉTODO
2.1 MATERIAL DE ESTUDIO
2.1.1 MATERIAL VEGETAL
- Se utilizó 2 kg del fruto fresco de Sambucus peruviana "sauco” procedente del
centro poblado San José de Porcón, distrito de Quiruvilca, provincia de Santiago
de Chuco, región La Libertad.
2.1.2 MATERIAL Y EQUIPOS DE LABORATORIO
2.1.2.1 MATERIAL DE VIDRIO.
De uso común en el laboratorio.
2.1.2.2 EQUIPOS
Balanza Analítica “OHAUS -GA200”
Balanza mecánica triple brazo “OHAUS– 700/800”
Estufa “MEMMERT” U-40
Horno mufla “FURNACE 1300”.
Cocina eléctrica FINELY
Espectrofotómetro HELWETT PACKARD
2.1.2.3 Reactivos y solventes
2.1.2.3.1 Reactivos
- Acetato de sodio. Merck.
- Ácido cítrico. Merck
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- Ácido clorhídrico. Merck
- Cloruro de potasio. Merck.
- 2,2-Difenil-1- Pricrilhidrazilo (DPPH•). Sigma Aldrich
2.1.2.3.2 Solventes:
- Agua destilada desionizada
- Etanol de 96º GL. CFK
2.2 MÉTODO
2.2.1 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA22,23
2.2.1.1 RECOLECCIÓN
El fruto de Sambucus peruviana (sauco), se recolectó del caserío de San
José de Porcón, del distrito de Quiruvilca a (Altitud: 2750 m.s.n.m. entre
coordenadas geográficas: latitud sur 7°37′25″, latitud oeste 78°02′52″ de
la provincia de Santiago de Chuco, región La Libertad.
2.2.1.2 ALMACENAMIENTO
Para evitar cualquier tipo de alteración que pudiese afectar la
composición del fruto, inmediatamente después de recolectar los frutos,
se almacenó en cajita de Tecnopor a temperatura ambiente, para su
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transporte y finalmente se llevó a refrigeración a 6º C hasta su posterior
utilización.
2.2.1.3 SELECCIÓN
De la muestra total se seleccionaron los frutos maduros libres de
impurezas en óptimo estado para el posterior análisis.
2.2.1.4 IDENTIFICACIÓN Y CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA
Un ejemplar completa de la especie de Sambucus peruviana (sauco), se
llevó al Herbarium Truxillense de la Universidad Nacional de Trujillo y se
obtuvo la identificación y clasificación taxonómica con el registro N°
59748.
2.3 CUANTIFICACIÓN DE ANTOCIANINAS TOTALES POR pH DIFERENCIAL24-26.
2.3.1 OBTENCIÓN DE LAS ANTOCIANINAS TOTALES24
Se pesó 50 g de frutos enteros frescos, se colocó a un balón de 250 mL de
capacidad, luego se adicionó 100 mL de etanol 96°GL y se acidificó con ac. cítrico
al 0,1% y se dejó macerar por 48h. pasado el tiempo se filtró obteniéndose el
extracto etanólico ácido. Posteriormente al marco se agregó 100 mL de etanol
96° GL acidificado con ac. cítrico al 0,1% y se continuó la maceración durante 48
hrs. (dos veces consecutivas). El extracto etanólico ácido obtenido se concentró
a 100 mL de volumen en estufa a 40 °C de temperatura.
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2.3.2 PREPARACIÓN DE SOLUCIONES REGULADORAS25
a. Buffer pH 4, 5: el buffer se preparó de la siguiente manera: 40mL de acetato
de sodio 1M más 24 mL de HCl 1N y 36 mL de agua destilada.
b. Buffer pH 1, 0: el buffer se preparó de la siguiente manera: 12, 5 mL de KCl
0, 2 N más 38, 5 mL de HCl 0,2 N
El pH de los buffers se ajustó a medida que se requirió para obtener valores de
pH final de 1,0 y 4,5.
2.3.3 CUANTIFICACIÓN MEDIANTE MÉTODO DE PH DIFERENCIAL26
a. Preparación de la muestra problema
En una fiola de 100 mL de capacidad, se tomó 10 mL del extracto etanólico
ácido y se diluyó hasta 100 mL de volumen con etanol de 96° GL con ac. cítrico
al 0,1%.
Para la preparación de muestras con buffer se midió 0.4 mL de extracto y 3.6
mL de buffer. El factor de dilución debe ser el mismo para ambas muestras
(pH 1,0 y pH 4,5). La turbidez de la solución final pudo ser corregida midiendo
la absorbancia a 700 nm y sustrayendo este valor de la absorbancia a la
longitud de onda de máxima absorción (520 nm).
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La determinación del contenido de antocianinas está basada en la Ley de
Lambert-Beer:
(A=ε·C·L).
La concentración en mg/L se determinó multiplicando por el peso
molecular (MW) del pigmento:
𝑪(𝒎𝒈/𝒍) =𝑨
𝜺. 𝑳 . 𝑴𝑾. 𝟏𝟎𝟑. 𝑭𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝒅𝒊𝒍𝒖𝒄𝒊ó𝒏
A: absorbancia ε: absorbancia molar o coeficiente de extinción molar. C: concentración molar L: longitud de recorrido en cm, es igual a 1. MW: masa molecular
Para el cálculo del contenido de antocianinas se utilizó el peso molecular
(449.2) y la absorbancia molar (26900) del pigmento antociano (cianidina 3-
o-glucosido) presente en mayor proporción.
La absorbancia se obtuvo sustrayendo el valor obtenido a pH 4,5 del valor
obtenido a pH 1,0.
A = (A510 nm pH 1,0 – A700 nm pH 1,0) – (A510 nm pH 4,5 – A700nm pH 4,5)
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2.4 DETERMINACIÓN DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE IN VITRO24
2.4.1 Según el método descrito por Brand Williams et al.
a. Preparación del Reactivo (Solución 2,2-difenil-1-picrilhidracilo)
Se preparó una solución de DPPH• con etanol de 96° GL a una concentración
de DPPH• 0.1 mM (0.03943 mg/mL)
b. Preparación de la curva de calibración de solución del radical DPPH•
De la solución de DPPH• 0.1 mM se midió volúmenes de 2; 4; 6; 8 y 10 mL; y
se trasvasó a fiolas de 10mL aforándolas con etanol de 96º GL., y se obtuvo
concentraciones de 0,02; 0,04; 0,06; 0,08 y 0.1mM respectivamente. Luego
se realizó un barrido espectrofotométrico con la solución DPPH• 0.1 mM para
encontrar longitud de onda máxima. Posteriormente se realizó las lecturas
en el espectrofotómetro Helwett packard a 520 nm y se obtuvo absorbancias
por triplicado. Se utilizó etanol de 96º GL como blanco. Finalmente se graficó
las concentraciones versus las absorbancias para obtener la curva de
calibración.
c. Preparación de la dilución problema
Del extracto ácido obtenido, se tomó 1 ml, se agregó a una fiola y se aforó
con 100 ml con etanol 96 °GL.
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d. Determinación de los porcentajes de captura del radical DPPH•
En un set de 10 fiolas se adicionó en cada uno de ellos 10 mL de la solución
de DPPH• 0,1 mM. Luego se agregó 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800,
900, 1000 uL del extracto etanólico ácido y se enfrentó a la solución de DPPH•
0,1 mM. Luego cada fiola se agitó y se dejó en reposo durante 30 min.
cubierto por papel aluminio.
Posteriormente se realizó las lecturas en el espectrofotómetro Helwett
packard a 520 nm y se obtuvo absorbancias por triplicado. Como blanco se
utilizó etanol de 96°GL. Finalmente, se calculó el porcentaje de radicales
DPPH• capturados utilizando la siguiente fórmula:
% Captura DPPH =Abs. control − Abs. muestra
Abs. control 𝑥100
Donde:
ABS. control: absorción control
ABS. muestra: absorción de la muestra
Concentración inhibitoria máxima media (IC 50)
Se graficó los porcentajes de captura de radicales DPPH* versus concentraciones del
extracto de Sambucus peruviana. Se utilizó el intercepto y la pendiente de la línea de
regresión lineal para calcular el valor de IC50, aplicando la siguiente fórmula.
m
bIC
5050
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2.5 ANÁLISIS ESTADÍSTICO
Los datos fueron procesados en el programa Microsoft Office Excel 2016. Caracterizados
mediante parámetros estadísticos descriptivos: Media Aritmética ( X ), Desviación
Estándar (δ)
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III. RESULTADOS
TABLA N°01: Concentración de antocianinas totales del fruto de Sambucus peruviana.
(mg/100g de FF) ± D.E
ANTOCIANINAS
TOTALES
7.094 ± 0.07
Leyenda: (FF: Fruto fresco)
(D.E: Desviación estándar)
Fuente: Laboratorio de Farmacognosia.
TABLA N°02: Capacidad Antioxidante de fruto de Sambucus peruviana.
CAPAC. ANTIOX (EAA/ g FF)
CAP. ANTIOX (mg EAA/ g FF)
IC 50
SAUCO ET 70 (ETANOL 70º)
31.2916
31.3736 ± 0.07
15.05ug/g FF
31.4166
31.4125
Leyenda: (EAA: expresado en ác. Ascórbico) (G FF: gramos de fruto fresco) (IC50: Concentración inhibitoria máxima media) Fuente: Laboratorio de Farmacognosia.
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IV. DISCUSIÓN
El presente trabajo de investigación tuvo por objetivo determinar el contenido de
antocianinas totales y la capacidad antioxidante del fruto fresco de Sambucus peruviana.
La especie vegetal fue debidamente identificada y clasificada en el Herbarium truxillense
con código de depósito n° 59748.
En la tabla 1, observamos que la concentración de antocianinas totales fue de 7.094
mg/100g de fruto fresco. En comparación con estudios realizados, según Beltran C. et al,
2010 reportó 450mg/100g de fruto fresco, según Márquez L., 2007 reportó antocianinas totales
de 120,2mg cianidina 3-glucósido/100g muestra. La concentración de antocianinas totales es
menor en el presente estudio.
Las bayas de sauco constituyen una fuente bastante rica de antocianinas, sin embargo la
temperatura influencia negativamente la concentración de antocianinas, la cual actúa en
la degradación de antocianinas y ha sido observada por muchos investigadores. El
aumento de la temperatura conduce a una degradación mucho más rápida de
antocianina, debido a que los pigmentos antocianos son muy termosensibles. El
mecanismo de degradación de antocianinas por influencia del calor ocurre
probablemente debido a la apertura del anillo de catión flavylium, seguido por
conversión a la forma chalcona, que es incolora y es una degradación irreversible. Según
estudios realizados al optimizar la temperatura, la temperatura de 60° C
es ideal para preservar la estabilidad y obtener alto contenido de antocianinas.30
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En la tabla 2, observamos que la capacidad antioxidante fue de 31.3736 ± 0.07 mg
expresados en ácido ascórbico/g fruto fresco presente en el fruto de Sambucus
peruviana (sauco); en comparación con el estudio de Márquez L., 2007 que reporta
112,1mg equivalente en ácido ascórbico /100g, entonces la concentración del presente
estudio es de baja capacidad antioxidante.
El mecanismo de la reducción del DPPH, por varios compuestos naturales y sintéticos
comprenden una transición Redox mediante la cual la molécula antioxidante dona un
electrón o toma de hidrogeno equivalente (H+) al radical libre. La actividad antioxidante
es un parámetro que determina que tanto el compuesto antioxidante evita que su
sustrato se oxide. Si el valor es cercano a cien, la actividad antioxidante del compuesto
en cuestión es alta. La inhibición de radicales libres varía dependiendo de la
granulometría de las muestras, el lugar de origen, las condiciones climáticas y el
tratamiento de los alimentos.
}
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V. CONCLUSIONES
Se determinó la concentración de antocianinas totales de 7.094 ± 0.07 mg de
cianidia-3-o-glucósido/100 g fruto fresco de Sambucus peruviana (sauco)
mediante el método de pH diferencial.
Se determinó la capacidad antioxidante de 31.3736 ± 0.07 mg ac. ascórbico/g
fruto fresco de Sambucus peruviana (sauco), frente al radical libre 2,2.-difenil –
pricrilhidrazilo (DPPH).
Se determinó el IC50 de 15.05ug/g de fruto fresco de Sambucus peruviana
(sauco).
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ANEXOS
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Anexo 1:
TABLA N°1: Cuantificación de antocianinas por el método de pH diferencial.
SAUCO ET 70
método pH diferencial
pH 1.0 pH 4.5 A C g/100g fruto fresco X ± d.e
515 700 510 700
m1 3.21E-02 7.84E-03 1.49E-02 7.81E-03 0.0172 2.8666 7.167
7.094 ± 0.07 m2 3.13E-02 7.14E-03 1.48E-02 7.60E-03 0.0170 2.8384 7.096
m3 3.18E-02 7.71E-03 1.45E-02 7.17E-03 0.0168 2.8079 7.020
Leyenda: ET 70: etanol 70º m: muestra
±: media, d.e deviación estándar
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Clasificación taxonómica.
Figura 1. Sambucus peruviana (sauco) identificada en el Herbarium Truxillense de la
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Selección de la muestra
a. Recolección y selección de fruto Sambucus peruviana (sauco).
b. Pesado de fruto Sambucus peruviana (sauco).
c. Obtención de antocianinas de fruto Sambucus peruviana (sauco), en
Etanol 96 º y 70º
a
c
b
a
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d. Secado de muestra en estufa. e. Determinación de peso seco de muestra previamente secada en estufa f. Extracto etanólico ácido
estufa
d
. d
e f
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g. Extracción de antocianinas por ozonificación. h. Extracto etanólico a 96º y 70º. i. Pesado de muestra del extracto etanólico.
g
h h
i i
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