![Page 1: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/1.jpg)
1
Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos y de amida (6.5 - 9 ppm), y de protones de carbono alfa y metínicos (< 5.8 ppm). Int. J. Biol Macromol (2001) 29; 99-105
Desnaturalización de proteína
![Page 2: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/2.jpg)
2
1H RMN de insulina. Región de los protones de residuos aromáticos con diferentes concentraciones de ion cinc agregado. Los números indican las veces en exceso que se encuentra el Zn2+.
Unión de ligando a proteína
![Page 3: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/3.jpg)
3
Zhuang, Z, et al (2002) Biochemistry, 41, 11152-11160
NMR de 4-Hidroxibenzoil-CoA tioesterasa
Unión de ligando a proteína
![Page 4: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/4.jpg)
4
1H RMN de la proteína nucleocápside HIV-1 (Bombarda, E. et al (2001) J Mol Biol 310, 659). Los diferentes puntos representan los protones del C de la Cys36 (▲), Cys39 (● y ♦) y Cys49 (■)
Propiedades de aminoácidos en proteínas
![Page 5: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/5.jpg)
5
H2PO4- HPO4
2- + H+
pKa = 6.8
Determinación de pH intracelular
![Page 6: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/6.jpg)
6
buffer
Metabolismo de glucosa en E. coli
FDP = fructosa 1,6-bisfosfatoL = lactatoA = acetatoE = etanolS = succinatoB = buffer
Glucosa 13C-1 50 mM a t = 0
![Page 7: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/7.jpg)
7
Cinética enzimática en mitocondrias intactas
fosfato inorgánico (1), fosfocreatina (2), fosfatos , y (3-5) del ATP y fosfatos y del ADP (6-7).
Creatina + ATP creatina fosfocinasa fosfocreatina + ADP Creatina + ADP creatina fosfocinasa fosfocreatina + AMP
![Page 8: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/8.jpg)
8PNAS, 92: 4748
Calbindina
![Page 9: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/9.jpg)
9
Obtención de estructuras de proteínas por RMN
Requisitos
[Proteína] ~ 1 mM0.5 mLestable por al menos 24 h a temperatura ambientemonoméricac < 10 ns
secuencia de aminoácidosMasa molecular... a confirmar
![Page 10: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/10.jpg)
10
Distribución de pesos moleculares de
proteínas resueltas hasta 1997
![Page 11: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/11.jpg)
11
20 40 1400
200
400
600
800
1000
1200
1400N
úm
. de
est
ruct
ura
s
Masa molecular (kDa)
152 kDa a abril de 2010PDB ID: 2P80
Distribución de pesos moleculares de proteínas resueltas hasta 2010
![Page 12: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/12.jpg)
12
Ribonucleasa
a 40 mHz
JACS (1957) 79:3289
El inicio de la historia
![Page 13: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/13.jpg)
13
Ribonucleasa
a 56.4 mHz
JBC (1962) 237:1807
![Page 14: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/14.jpg)
14
Ribonucleasa
a 60 mHz
Science (1967) 157:257
![Page 15: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/15.jpg)
15
Espectros de 1H RMN de:
nucleasa de estafilococo (156 aminoácidos)
Inhibidor pancreático básico de tripsina (58 aminoácidos)
Magainina 2 (23 aminoácidos)
![Page 16: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/16.jpg)
16
Lisozima
![Page 17: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/17.jpg)
17
![Page 18: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/18.jpg)
18
Asignación de resonancias para grupos laterales
![Page 19: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/19.jpg)
19
Magainina 2 con asignación de señales para una valina
![Page 20: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/20.jpg)
20
Acoplamiento entre protones de amida y protones de C
![Page 21: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/21.jpg)
21
Ec. de Karplus J() = Acos2() - Bcos() + C
3JH,HN() = 6.4cos2(-60º) - 1.4cos(-60º) + 1.9
C
C
N
C
C
N
C
R H
O
O
H
HR
HR
H
hélice ( = -57º), 3JH,HN = 3.9 Hz hélice 310 ( = -60º), 3JH,HN = 4.2 Hz hoja antiparalela ( = -139º), 3JH,HN = 8.9 Hz hoja paralela ( = -119º), 3JH,HN = 9.7 Hz
i i + 1
φ
Medida de acoplamientos y estructura secundaria
![Page 22: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/22.jpg)
22
Los núcleos intercambian constantemente su magnetización a velocidades que dependen de la sexta potencia de su distancia. Si se miden las velocidades del intercambio de magnetización se obtiene un conjunto de distancias internucleares. Este intercambio de magnetización se conoce como efecto nuclear Overhauser (NOE).
Efecto nuclear Overhauser
![Page 23: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/23.jpg)
23
Correlación a través del espacio
![Page 24: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/24.jpg)
24
Correlación a través del espacio
![Page 25: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/25.jpg)
25
NOESYregión NN
Hélice entre los residuos
89 y 101
![Page 26: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/26.jpg)
26
Contactos lejanos y estructura terciaria
sin asignación de secuencia
con asignación de secuencia
![Page 27: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/27.jpg)
27
El resultado…
Lisozima (1E8L)
![Page 28: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/28.jpg)
28
Los resultados…
Lisozima (1E8L)
![Page 29: 1 Cu-Zn SOD sometida a diferentes concentraciones de SDS. 1 H RMN, en a sin SDS y en b con 5% de SDS. Los espectros muestran las regiones de protones aromáticos](https://reader035.vdocumento.com/reader035/viewer/2022062315/5665b4291a28abb57c8faca7/html5/thumbnails/29.jpg)
29
Bibliografía