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Colecta y Preservación de Colecta y Preservación de macroalgas marinasmacroalgas marinas
Cindy Fernández- Brian Wysor
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Pasos Pasos
1- Colecta
2-Transporte de muestras
3- Identificación
4- Preservación de organismos
A- Muestras húmedas B- Silica gel C- Secas- Colecciones de herbario
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Antes de salir al campoAntes de salir al campo• Se requieren de permisos de colecta e investigación para
la colecta de cualquier organismo marino, que se obtienen en los Ministerios de Ambiente de cada país: ANAM (Panama), MINAE (Costa Rica), MAERN (El Salvador), MARENA (Nicaragua)
• La exportación de organismos requiere un permiso aparte
• La colecta debe tomar en cuenta dejar duplicados en los herbarios locales para incrementar el conocimiento.
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1- COLECTA1- COLECTA
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MaterialesMateriales
• Valde• Bolsas previamente numeradas• Cámara• Cincel• Martillo• Cuchillo • Tabla acrílica• Lápiz• GPS
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Colecta de MuestrasColecta de Muestras• A la hora de colectar algas hay que tomar en cuenta diferentes
factores ambientales.
• Una buena colección debe buscar amplia combinación de sitios:
1- Sustrato: Fondos rocosos, arenosos, coralino, raíces de mangles, madera, flotando
2- Profundidad: Zona intermareal, Submareal
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Colecta de Muestras: TipsColecta de Muestras: Tips
• No sobrecolectar ! : Gasto de tiempo + algas olorosas
• Colectar suficiente material para preservar apropiada-mente
• Muestrear a varias profundidades y diferentes sustratos
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2- TRANSPORTE2- TRANSPORTE• Transportar las algas con suficiente agua de mar
• Evitar exposición al sol
• Mantener muestras con aireación si se procesan después
• Si el laboratorio esta largo fijar las muestras en formalina al 4% en agua de mar con un buffer (bicarbonato de calcio cda/litro)
• Nota: El material en formalina no sirve para análisis genéticos
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3-IDENTIFICACIÓN3-IDENTIFICACIÓN
Obtener guías de identificación según el sitio de estudio
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MaterialesMateriales
• Cámara• Computadora para
ingresar datos-Libreta• Pinzas• Tijeras• Bandejas• Portaobjetos-
Cubreobjetos• Microscopio
(micrométrico)• Regla• Lápiz
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En el laboratorio…En el laboratorio…
• Separar muestras por especie
• Tomar en cuenta los duplicados por espécimen:
- 1 formalina, - 1 silica gel (Si hay interés en análisis molecular)
- 2-4 secas
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La identificación requiere de múltiples La identificación requiere de múltiples estrategias: estrategias:
- Tinciones
- Cortes: longitudinales y transversales
- Descalcificación con HCl al 10%
- Hidratación: muestras secas
- Examinación bajo microscopio
Azul de anilina
Corte transversal
Corte longitudinalDescalcificación
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IdentificaciónIdentificación• Examinar el material fresco
siempre es lo mejor, sin embargo una buena preservación en formalina funciona
• Elaborar una base de datos
• Elegir un código para cada muestra
• Colocar números consecutivo a los especimenes
• Fotografiar !
Base de Datos
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4- PRESERVACIÓN4- PRESERVACIÓN
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A-HúmedasA-Húmedas
• Formalina 4%
- Se ven mejor los tejidos- Conservan color- Tóxico
• Alcohol 90%
- Se pueden utilizar para análisis moleculares
- Disuelve pigmentos: algas quedan blancas
- No tóxico
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MaterialesMateriales
• Frascos-Viales• Etiquetas• Lapiz• Formalina 4%• Alcohol 90%• Guantes
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B- Silica gelB- Silica gel
• Trabajo Molecular:
- La extracción de ADN es mejor si se utiliza material fresco
- La integridad del ADN se conserva al secar rápidamente la muestra
- El silica gel promueve un secado rápido
- Especímenes fijados en fomalina no pueden ser utilizados para este tipo de análisis
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MaterialesMateriales
• Silica gel• Marcador negro
indeleble• Bolsas pequeñas• Papel toalla• Etiqueta
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Pasos para preservación en silica gelPasos para preservación en silica gel
1- Tomar un trozo del alga 2- Secarlo en papel toalla3- Envolverlo en papel toalla seco4- Colocarlo dentro de una bolsa
(Colocar código) 5- Agregarle el silica gel
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C- Muestras SecasC- Muestras Secas
• Requisitos: Paciencia y Estilo
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MaterialesMateriales
• Cámara• Computadora para ingresar
datos-Libreta• Pinzas• Tijeras• Portaobjetos-Cubreobjetos• Microscopio (micrométrico)• Regla
• Lápiz• Bandejas• Papel fabriano• Cartón• Prensa Herbario
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Montaje de muestrasMontaje de muestras
Hay varias técnicas para colocar un alga sobre el papel.
Un técnica es colocar el alga en una bandeja con agua de mar y con un pincel o aguja ir extendiendo el talo.
Desventaja: El secado el muy lento
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Otra técnica…Otra técnica…
• Colocar el alga en el papel, agregar unas gotas de agua
• Extender el alga con un pincel o aguja
• Eliminar el exceso de agua con un gotero.
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Montaje de las muestrasMontaje de las muestras
* Nota: Se pueden colocar otras capas de papel o telas secantes
cartón
periódico
muestra
cartón
periódico
Montaje básico para secar las muestras incluye:
1- Colocar muestra en papel fabriano
2- Colocar papel encerado (para que no se pegue la muestra
3- Capa de papel periódico a ambos lados
4- Capa de Cartón a ambos lados
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PrensadoPrensado
• Apilar varias muestras seguidas
• Prensar
• La Prensa se puede colocar cerca de una fuente de calor o de aire para un secado más rápido
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EtiquetaEtiqueta
Debe Contener:
- Nombre Especie con Autor
- Localidad de colecta (Nombre, coordenadas)
- Hábito del alga: sustrato, profundidad, epífita
- Nombre de quien colecta- Nombre de quien
identifica la especie- Fecha de colecta- Nombre del Herbario- Número del Herbario- Preservación: fresca,
formalina, alcohol
Etiqueta de herbario
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EjemplosEjemplos
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Metas de una ColecciónMetas de una Colección
• Referencia de los especímenes
• Historia de la investigación
• Poner a disposición de la comunidad científica la información para comparaciones morfológicas-genéticas futuras
• Cuantificación de la biodiversidad
• Información de la distribución y ecológia de las especies
• El rastreo de la información de los especímenes debe ser ágil.
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Al FinalAl FinalBase de Datos Fotografías: Campo-Morfología
Muestras Genética Colección de referencia (húmeda-seca) para futuro
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AgradecimientosAgradecimientos
Fotografías de:• Tropical Phycology Course 2008:
http://striweb.si.edu/taxonomy_training/past_courses/2008/2008_phycology.html
• Cindy Fernández G.• Lennert Tyberghein• Juan José Alvarado