María de los Angeles Pajares

Gemma Rodríguez-Tarduchy

Colaboradores

DNA IN A BOTTLE

Material y consejos

Pipetas de plástico

Tubos eppendorf

Vasos de precipitado

Tubos Falcon

Guantes Recipiente para el ADN

Enjuagar antes de reutilizar

Utilizar de forma continuada

NO introducir más de 1ml de DNA y sellar

Obtención de células epiteliales del interior de la boca

Durante 30 segundos rascar CUIDADOSAMENTE con los dientes la parte interna de la boca

Introducir los 3 ml de agua del tubo de tapa azul en la boca. NO TRAGAR. Enjuagar durante 30 segundos. CUIDADOSAMENTE verter el agua nuevamente en el tubo de tapa azul.

Las células epiteliales que recubren el interior de la boca se renuevan

contínuamente, especialmente cuando masticamos y comemos. Las células viejas

de desprenden dejando paso a células nuevas.

Rotura (lisis) de células epiteliales

Añadir 2 ml de buffer de lisis (tubo tapa verde) sobre los 3 ml del eluido de la boca

Eluido

Buffer de lisis

Rotura (lisis) de células epiteliales

Para extraer el ADN del núcleo celular necesitamos romper las membranas plasmática

y nuclear de las células. El buffer de lisis contiene detergentes capaces de disgrerar los fosfolípidos de las membranas y disolver otros componentes celulares como azúcares y grasas

Detalle de una membrana celular

Esquema de las partes de una célula

Degradación de la proteínas “contaminantes”

Añadir 5 gotas de proteasa (tubo eppendorf) al tubo. Tapar y agitar la solución invirtiendo el tubo cuidadosamente varias veces. Incubar los tubos durante 10 minutos a 50ºC.

La proteasa es un enzima con capacidad proteolítica que utilizamos para degradar las proteínas de la mezcla incluidas

las enzimas capaces de degradar el ADN que queremos obtener. La temperatura óptima a la que esta enzima actua

son 50ºC

Proteasa

Condensación del ADN

Añadir MUY LENTAMENTE sobre el tubo colocado en un ángulo de 45º 10 ml de etanol al 95% (tubo tapa azul con pegatina amarilla). Mantener el tubo en la gradilla sin agitar durante 5 minutos.

Las hebras de ADN son tan finas que es imposible visualizarlas en solución. Para observarlas podemos “concentrarlas” precipitando el ADN en presencia de sales y

alcohol. Las sales neutralizan la carga negativa del ADN permitiendo que las moléculas se agreguen unas a otras. El ADN es insoluble en presencia de sal y alcohol

Condensación del ADN

Agitar invirtiendo el tubo 5 veces para ayudar a la agregación del ADN.

Las sales neutralizan la carga negativa del ADN permitiendo que las moléculas se agreguen unas a otras. El ADN es insoluble en presencia de sal y alcohol

DNA in a bottle

Con ayuda de la pipeta transferir el ADN (no más de 1 ml) al tubo de cristal. Cerrar con el tapón de plástico y sellar con pegamento