Determinación de coliformes:Método del NMP.

Determinación de coliformes:Método del NMP.

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-112-SSA1-1994.

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-112-SSA1-1994.

M.C. Luis Ramiro Caso Vargas.M.C. Luis Ramiro Caso Vargas.

ColiformesColiformes

• Estan constituidos por un grupo heterogéneo de bacterias (varios géneros y especies)

• Algunas especies constituyen un problema de salud bastante grave.

• Son organismos “indicadores de contaminación fecal” en el agua.

• Estan constituidos por un grupo heterogéneo de bacterias (varios géneros y especies)

• Algunas especies constituyen un problema de salud bastante grave.

• Son organismos “indicadores de contaminación fecal” en el agua.

¿Por qué usar coliformes?¿Por qué usar coliformes?

• Buscar por microorganismo específicos lleva mucho tiempo y recursos.

• Los coliformes regularmente se encuentran asociados con fuentes de patógenos que contaminan el agua.

• El análisis de coliformes en agua potable es relativamente sencillo, económico y eficiente.

• Buscar por microorganismo específicos lleva mucho tiempo y recursos.

• Los coliformes regularmente se encuentran asociados con fuentes de patógenos que contaminan el agua.

• El análisis de coliformes en agua potable es relativamente sencillo, económico y eficiente.

¡La definición es importante!¡La definición es importante!• Bacilos Gram negativos.

• No esporulados.

• Aerobios o anaerobios facultativos.

• fermentan la lactosa a 35 °C con la producción de ácido y gas.

• ¡¡ Todo esto Bajo las condiciones de la norma !!

• Bacilos Gram negativos.

• No esporulados.

• Aerobios o anaerobios facultativos.

• fermentan la lactosa a 35 °C con la producción de ácido y gas.

• ¡¡ Todo esto Bajo las condiciones de la norma !!

Prueba de coliformes totalesPrueba de coliformes totales

1. Prueba presuntiva• Caldo Lauril Triptosa (CLT).• Caldo Mc. Conkey.• Caldo lactosa.• Medio EC.

2. Prueba confirmativa:• Medio EC.• Medio bilis lactosa (BLVB)

1. Prueba presuntiva• Caldo Lauril Triptosa (CLT).• Caldo Mc. Conkey.• Caldo lactosa.• Medio EC.

2. Prueba confirmativa:• Medio EC.• Medio bilis lactosa (BLVB)

Día 1 (Prueba presuntiva)Día 1 (Prueba presuntiva)Día 1 (Prueba presuntiva)Día 1 (Prueba presuntiva)

1. Preparación del material.

2. Realizar diluciones seridas de la muestra de agua hasta 10-3 en agua peptonada.

3. Realiazar 5 pases de 1 ml. de cada una de las diluciones (10-1, 10-2, 10-3) a tubos con 9 ml. de caldo Lauril sulfato y campanas Durham.

4. Dejar incubando de 24 a 48 hrs. a 35°C.

1. Preparación del material.

2. Realizar diluciones seridas de la muestra de agua hasta 10-3 en agua peptonada.

3. Realiazar 5 pases de 1 ml. de cada una de las diluciones (10-1, 10-2, 10-3) a tubos con 9 ml. de caldo Lauril sulfato y campanas Durham.

4. Dejar incubando de 24 a 48 hrs. a 35°C.

Día 2 (prueba confirmativa)Día 2 (prueba confirmativa)Día 2 (prueba confirmativa)Día 2 (prueba confirmativa)

1. Realizar pases con alíquotas de 1ml. de cada los 5 tubos por dilución a tubos con medio EC y campanas Durham.

2. Dejar incubando de 24 a 48 hrs. a 35°C.

1. Realizar pases con alíquotas de 1ml. de cada los 5 tubos por dilución a tubos con medio EC y campanas Durham.

2. Dejar incubando de 24 a 48 hrs. a 35°C.

Procedimiento:Procedimiento:

Paso 1

Paso 1

Paso 2Paso 2

Realizar dilucionesRealizar dilucioneshasta 10hasta 10-3-3

10-1

10-2

10-3

1 2 3 4 5

1 2 3 4 5

1 2 3 4 5

10-1

10-2

10-3

Sembrar de cada dilución por quintuplicado.

Sembrar de cada dilución por quintuplicado.

1 ml1 ml

1 ml1 ml

1 ml1 ml

1 ml1 ml

1 ml1 ml

1 ml1 mlMuestraMuestra

Transferir hacia tubos con caldo EC.

Transferir hacia tubos con caldo EC.

Ca

ldo

La

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l Su

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o L

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Ca

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EC

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1010-1-1 1010-1-1 1010-1-1 1010-1-1 1010-1-1

11

11 22 33 44

11 22 33 44

55

55

Tubo DurhamTubo Durham

Producción de Producción de GasGas

Análisis de resultadosMNP

Análisis de resultadosMNP

Tubos

Dilución

10-1 10-2 10-3

1 X X

2 X

3 X

4 X X X

5 X X

33 22 11

¿Qué tanto es tantito? NOM-127-SSA1-1994 -SSA1-1994 ¿Qué tanto es tantito?

NOM-127-SSA1-1994 -SSA1-1994