ESCUELA PROFESIONAL DE BIOLOGA

PRCTICA N 02

Determinacin de Coliformes Totales y Fecales en CaballaASIGNATURA:Microbiologa de los Alimentos II

DOCENTE:Blgo. Daz Zapata Alberto

INTEGRANTES:Arias Matos Lisbeth

Aycachi Inga Rmulo

Chafloque Millones Alex M.

Culqui Lozada Liliana

CICLO:2008 - I

Lambayeque, 20 de junio de 2008.

I. Introduccin:

Existen diversos mtodos para cuantificar el nmero de microorganismos presentes en muestras lquidas y slidas. Dentro de las tcnicas ms comunes se encuentra el recuento directo por microscopia de fluorescencia, as como los procedimientos basados en diluciones en serie, haciendo crecer microorganismos en medios de cultivo sintticos slidos o lquidos, como el recuento en placa de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) o la estimacin por el mtodo del Nmero Ms Probable (NMP).

El mtodo del nmero ms probable fue descrito por McCrady en 1915 y actualmente sigue siendo ampliamente utilizado. En un principio este mtodo fue empleado para estimar el nmero de microorganismos en muestras de alimentos y aguas. Sin embargo, se ha demostrado que tambin puede ser aplicado para la determinacin de microorganismos aerobios y anaerobios en lodos, sedimentos marinos y suelos contaminados, por tanto este mtodo es aplicable para estimar el nmero de microorganismos en muestras de suelo y agua, tanto para bacterias aerobias como anaerobias.

Los Coliformes Fecales son un subgrupo de los Coliformes totales, capaces de fermentar la lactosa a 44 C en vez de 37 C como lo hacen los totales.

Aproximadamente el 95% del grupo de los Coliformes presentes en heces estn formados por Escherichia coli y ciertas especies de Klebsiella. Ya que los Coliformes Fecales se encuentran casi exclusivamente en las heces de los animales de sangre caliente, se considera que reflejan mejor la presencia de contaminacin fecal. stos ltimos se denominan termotolerantes por su capacidad de soportar temperaturas ms elevadas. Esta es la caracterstica que diferencia a Coliformes Totales y Fecales. La capacidad de los Coliformes fecales de reproducirse fuera del intestino de los animales homeotrmicos es favorecida por la existencia de condiciones adecuadas de materia orgnica, pH, humedad. Desde hace mucho tiempo se han utilizado como indicador ideal de contaminacin fecal. Su presencia se interpreta como una indicacin de que los organismos patgenos pueden estar presentes y su ausencia indica que el agua o el alimento estudiado se hallan exentos de organismos productores de enfermedades.En alimentos, la identificacin de una concentracin elevada de Coliformes Fecales en un alimento es indicador de su contaminacin y por tanto su mala manipulacin, de ser esto as, se debe declarar al alimento en cuestin como No Apto para el Consumo Humano.La Organizacin Mundial de la Salud indica que la problemtica de la contaminacin de mares y ros por aguas servidas y desages a puesto en alto riesgo a la poblacin acutica de directo consumo humano, estando entre ellos los peces. La contaminacin producida tambin contamina la carne de dichos animales, estando por tanto contaminados en su mayor parte desde su fuente de extraccin. Es por tanto de mucha importancia en la actualidad pruebas que descarten la presencia de microorganismos contaminantes tan peligrosos como son los Coliformes Fecales.

II. Objetivos: Detectar bacterias coliformes totales y fecales.

Detectar si la muestra trada es apta para el consumo humano.

III. Materiales:

Muestra: Intestinos de Caballa fresca Medios de cultivo: Caldo Brilla (presuntivo), agar MacConkey, agar Endo, Caldo EC. Tubos de dilucin

Pipetas

Placas de Petri

Mechero Bunsen

Estufa

Gradillas

Anzas microbiolgicas calibradas

IV. Procedimiento:a. Coliformes totales: Preparamos diluciones hasta 10-3.

Sembramos tres tubos por cada dilucin.

Los resultados se dan en por gr.b. Coliformes fecales:

V. Resultados:

VI. Conclusiones:

VII. Referencias:

ANALISIS MICROBIOLOGICO DEL AGUA (2005) Obtenido el 07 de febrero de 2008 en http://www.ubu.es/investig/aulavirtual/trabajos_05/Analisis_microbiologico_del_agua.pdf ANALISIS MICROBIOLOGICOS (2004) Obtenido el 07 de febrero de 2008 en http://www.ine.gob.mx/publicaciones/libros/509/analisis2.pdf FACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICAS (1989). Medios de Cultivo en Microbiologa: Manual de Laboratorio. Editora Tricelm S.A. 3 Edic. Lima.

FUENTES, A. F. y otros (2005). Calidad Sanitaria de Alimentos Disponibles al Pblico de la Ciudad de Sonora, Mxico. Revista Salud Pblica y Nutricin. Vol. 6 N 3. Obtenido el 01 de febrero de 2008 en http://www.respyn.uanl.mx/index.html L. ORTIZ, M. (2003) Material didctico de Microbiologa de Alimentos: Recuento de enterobacterias. Obtenido el 01 de febrero de 2008 en http://www2.uah.es/farmacia/programas/microbiologia/material_didactico_de_microlimentos.htm MICROBIOLOGIA APLICADA: Manual de Laboratorio (2006) Coliformes totales y Fecales en agua de consumo humano. Obtenido el 07 de febrero de 2008 en http://www.ine.gob.mx/publicaciones/libros/509/analisis2.pdf THATCHER, F. S. y D. S., CLARK (1993) Anlisis Microbiolgico de los Alimentos. Edit. Acribia. Zaragoza.

VIII. Anexos:

Los valores mnimos permisibles usados en Mxico, por ejemplo, nos dan los sgtes. valores de referencia para diversos alimentos:

Especificaciones microbiolgicas establecidas para diversos alimentos.NOMBRE DEL PRODUCTODETERMINACIONESLIMITE MXIMO PERMISIBLE

Ensaladas verdes, crudas o de frutas *Mesofilos aerobios UFC/g

Coliformes totales NMP/g150,000

100

Salsas y purs cocidos *Mesofilos aerobios UFC/g

Coliformes totales NMP/g5,000

50

Alimentos cocinados a base de carne de mamferos, aves, pescados *Mesofilos aerobios UFC/g

Coliformes totales NMP/g150,000

menos de 10

Aguas preparadas *Mesofilos aerobios UFC/g

Coliformes totales NMP/g

Coliformes fecales NMP/g150,000

100

Negativo

Queso fresco **Coliformes fecales NMP/g100

Mohos y levaduras (UFC/g)500

Salmonella en 25 gAusente

Staphylococcus aureus (UFC/g)1000

Listeria monocytogenes en 25 gNegativo

Zumos, nctares, bebidas a base de frutas y verduras no pasteurizadas ***Mesofilos aerobios UFC/g

Coliformes totales NMP/g100,000

100

*NOM-093-SSA1-1994 ; ** NOM-121-SSA1-1994; *** Lmites microbiolgicos de la ICMSF (International Commission on Microbiological Specifications for Foods).

La Norma Venezolana para Lcteos da como valores lmites los sgtes. valores:

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10-1

10-2

10-3

Diluciones

3 g de muestra

+

27 mL agua pept.

9 mL AP

9 mL AP

Caldo Brilla

1 mL

1 mL

1 mL

Incubar a 37 C x 24 - 48 h

SEMBRAR (Escoger de tubos positivos)

Agar ENDO

Agar MacConkey

AISLAMIENTO

IDENTIFICACION

10-1

10-2

10-3

De los tubos positivos del Caldo Brilla

Caldo EC

0.1 mL

0.1 mL

0.1 mL

Incubar a 42.5 C x 24 - 48 h

SEMBRAR (Escoger de tubos positivos)

Agar ENDO

Agar MacConkey

AISLAMIENTO

IDENTIFICACION

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