de 0 a 3 cruces (+++) contaminación grado de - uco.es · integridad del adn (grado de...

29
(Corcuera et al., 2004) 61 62 Grado de contaminación: de 0 a 3 cruces (+++) (Mozo Martín, 2009)

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(Co

rcu

era

et a

l., 20

04

)

61

62

Grad

o d

e co

ntam

inació

n:

de 0

a 3

cru

ces (+

++

)

(Mo

zo

Ma

rtín,

20

09

)

63

Técn

icas de tin

ción

:

-T

incio

nes to

tale

s: m

orfo

logía

�A

zul d

e m

etile

no

�R

osa d

e B

engala

�G

iem

sa

(acro

som

a)

-T

incio

nes v

itale

s: v

ivos y

muerto

s

�T

ripán

azul

�E

osin

a-n

igro

sin

a

�T

riple

tinció

n: trip

án

azul, B

ism

ark

marró

n,

Rosa B

engala

(tam

bié

n a

cro

som

a)

Fich

a man

ual o

info

rmatizad

a de cad

a verraco

64

Interp

retación

de resu

ltado

s –o

rigen

de u

n p

rob

lema

% V

ivos

< 7

0%

Motilid

ad<

3Aglu

tin.

Impurezas

Gota

sFla

gelo

s to

rcidos

Acroso

mas

anorm

ales

Estré

s té

rmico

Estré

s té

rmico

Estré

s té

rmico

Estré

s té

rmico

Estré

sté

rmico

Estré

s té

rmico

Fiebre

Fiebre

Fiebre

Fiebre

Fiebre

Fiebre

Recog

idas

muy

seguid

as

Recog

idas

muy

seguid

as

Recog

idas

muy

seguid

as

Recog

idas

muy

seguid

as

Alim

.Alim

.Alim

.Alim

.Alim

.Alim

.

Enf.

Enf.

Enf.

Enf.

Enf.

Mala

filtra

ción

Mala

filtra

ción

Polvo

Contam

. del

prep

ucio

Contam

.bacteria

na

Tem

p.

duran

te

el e

xamen

65

2.Técnicas

decontrastación

utilizadaspara

valorarla

calidaddel

semen:

examen

especial(enlaboratorio

especializado):�

Microscópicos:�

Viab

ilidad

esperm

áticae

integ

ridad

de

mem

bran

asp

lasmáticas

yacro

som

ales:�

Tin

ción

específica

con

fluoro

crom

os:

micro

scopio

de

fluorescen

ciao

con

un

citóm

etrode

flujo

(ver

foto

s)

�P

rueb

asd

eresisten

cia:�

Test

de

resistencia

osm

ótica

(OR

T)

(ver

foto

)y

testh

ipo

-osm

ótico

(HO

ST

)(v

erfo

to)

�T

estd

eterm

orresisten

cia

�T

estd

eco

nserv

ación

�In

tegrid

add

elA

DN

(grad

od

efrag

men

tación

de

lacad

ena

de

AD

Nd

elesp

ermato

zoid

e):T

estS

CD

(Sp

ermC

ho

rom

atinD

ispersio

n)

(ver

foto

)

�B

ioquímicos:

�F

un

cion

alidad

de

los

esperm

atozo

ides

�In

tegrid

add

ep

roteín

ascelu

laresy

plasm

áticas:“marcad

ores

molecu

laresd

eco

ngelab

ilidad

�P

erox

idació

nlip

ídica

�D

etermin

ación

de

acrosin

a

�A

ctivid

adA

spartato

amin

otran

sferasa(A

TT

)

�E

stabilizació

nd

ela

crom

atina

�C

alidad

del

plasm

asem

inal:

marcad

ores

de

lafu

ncio

nalid

add

elas

glán

du

lasacceso

riasy

epid

ídim

o�

ácido

cítrico,fru

ctosa,p

rostag

land

inas,calcio

,zin

c,alfa-glu

cosid

asa

�p

H

�P

resión

osm

ótica

�F

uerza

ión

ica

�P

roteín

asto

tales

�E

nzim

as:activid

adfo

sfatasaácid

ay

alcalina,an

titripsin

a

�P

éptid

os

66

(Bo

ne

t et a

l., 20

09

)6

7

A: %

de a

cro

som

as n

orm

ale

s

después d

e in

cubar e

l sem

en 1

5

min

uto

s a

37 ºC

en u

n d

iluye

nte

isosm

ótic

o

B: %

de a

cro

som

as n

orm

ale

s

después d

e in

cubar e

l sem

en 2

h

a 3

7 ºC

en u

n d

iluye

nte

hip

osm

ótic

o

68

(Bo

ne

t et a

l., 20

09

)

69

Testh

ipo

ósm

ótico

:L

os

espe

rmato

zo

ide

sso

me

tido

sa

un

me

dio

hip

oo

sm

ótic

oin

co

rpo

rara

n

ag

ua

de

lm

ed

iom

ientra

sq

ue

si

el

me

dio

es

hip

ero

sm

ótic

olib

era

rán

ag

ua

ale

xte

rior.

Sila

lula

pre

sen

ta

inta

cta

ssu

sm

em

bra

na

sse

pro

du

cirá

un

aen

trad

ade

ag

ua

de

sd

ee

lm

ed

io

(pa

raeq

uilib

rar

lap

resió

no

sm

ótic

a)

qu

equ

ed

ará

inco

rpo

rad

ae

nla

co

la,

pe

rman

ecie

ndo

ésta

hin

cha

da

y

en

rosca

da

.

�E

stadosanitario

(análisism

icrobiológicos):(fotos)�

Iden

tificación

cualitativ

ay

cuan

titativa

de

gérm

enes

enel

semen

(cultiv

os,

serolo

gía)

�M

edian

tela

aplicació

nde

PC

R(d

etección

de

viru

sy

bacterias)

�B

iológicos:�

Inm

unolo

gía

frente

ad

iverso

san

tígen

os

�T

estde

fecundaciónin

vitro:�

testd

ep

enetració

nheteró

loga

(eno

ocito

sd

eH

ámster)

�test

de

fecund

ación

invitro

ho

loga

(eno

vo

citos

de

ovario

sd

ecerd

ad

em

atadero

)

�Sistem

asde

análisiscom

putarizadodel

esperma

(CA

SA)

�C

itometría

deflujo

:estad

od

elas

mem

bran

assp

z.,D

NA

,v

iabilid

adsp

z.,co

ntar

spz.,

estado

de

lacro

matin

aesp

ermática,

sexaje

de

esperm

atozo

ides

70

(Bo

ne

t et a

l., 20

09

)

71

Elaboración y conservación de dosis sem

inales

�C

álculo del número de dosis sem

inales por eyaculado: (concen

tración ú

til)

A x

10

7x V

A x

V

Nº d

e do

sis (N) =

-----------------=

-----------

3 x

10

93

00

V =

Volu

men

del ey

aculad

o en

cc

A =

Esp

ermato

zoid

es con

tados en

40

cuad

rados (0

,01

mm

3)

mero

de esp

ermato

zoid

es totales p

or ey

aculad

o:

�en

1 m

m3

= A

x 1

00

�en

1 cc

= (A

x 1

00

) x 1

.00

0

�en

semen

puro

(dilu

ción 1

/100): (A

x 1

00) x

1.0

00 x

100 =

A x

10

7

�T

otales en

el eyacu

lado

= A

x10

7x V

�E

l cálculo de la cantidad de diluyente necesario para la preparación de las dosis sem

inales (para dosis seminales de 100 cc):

N x

10

0 =

Vo

lum

en to

tal (vo

lum

en d

e dilu

yen

te + v

olu

men

de ey

aculad

o)

N x

10

0 –

V =

Vo

lum

en d

el dilu

yen

te necesario

a añad

ir

Títu

lo d

e la dilu

ción

(1/1

0 –

1/2

5): v

olu

men

total (N

x 1

00

)/Vo

lum

en

del ey

aculad

o

72

�L

osdiluyentes

debencum

plirdos

objetivosprincipalm

ente:–

aum

entar

elvo

lum

end

eley

aculad

o,

sinafectar

lacalid

adsem

inal,

para

aum

entar

eln

úm

erod

ein

semin

acion

es

–co

nserv

arla

capacid

adfecu

nd

ante

de

los

esperm

atozo

ides

du

rante

elm

ayo

rtiem

po

po

sible

�U

ndiluyente

permite

laconservación

delas

célulasesperm

áticaspor:

–su

apo

rten

utritiv

o(g

luco

sa)

–su

capacid

adtam

n(b

icarbo

nato

sód

ico,citrato

sód

ico,T

RIS

…)

–el

con

trol

de

los

parám

etros

físico-q

uím

icos

(presió

no

smó

tica,p

H,

pK

yfu

erzaió

nica

de

interacció

nco

nel

esperm

atozo

ide

yp

lasma

semin

al)

–la

captació

nd

eio

nes

Ca

++,

Mg

++

yZ

n+

+(su

stancias

qu

elantes

com

oel

ED

TA

)

–el

con

trol

enla

precip

itación

de

lasp

roteín

as

–el

con

trol

de

laacció

nen

zimática

sob

reel

semen

–el

con

trol

qu

eejerce

sob

reel

metab

olism

od

ela

célula

esperm

áticay

lap

reservació

nd

esu

mem

bran

a

–su

con

trol

sob

rela

con

tamin

ación

:la

adició

nd

ean

tibió

ticos

(pen

icilina,

estrepto

micin

a,gen

tamicin

a,etc.)

alo

sd

iluyen

teses

esencial

para

con

trolar

elcrecim

iento

bacterian

oen

elesp

erma

de

verraco

�T

iposde

diluyentes:–

Dilu

yen

ted

eco

rtad

uració

n:

1-3

días

de

con

servació

n

–D

iluyen

ted

em

edia

du

ración

:4

-5d

ías(M

III®

)

–D

iluyen

ted

elarg

ad

uració

n:

6-8

días

de

con

servació

n(M

r-A®

,A

nd

rostar

®,

Po

rci-Star

®)

–D

iluyen

teex

tra-larga

du

ración

:h

asta1

0-1

4d

íasd

eco

nserv

ación

73

Ing

redien

tes B

TS

K

iev M

od

ena

Zo

rlesco

An

dro

hep

Su

strato en

ergético

Glu

co

sa

(anhid

ra), g

/l 3

7,0

0

66

,00

27

,50

11

,70

-

Glu

co

sa

(mo

no

hid

rato

), g/l

--

--

26

,00

Sistem

a tamp

ón

Citra

to s

ódic

o (2

), g/l

6,0

0

3,7

56

,90

1

1,7

08

,00

Bic

arb

on

ato

sódic

o, g

/l 1

,25

1,2

5

1,0

0

1,8

0

1,2

0

ED

TA

(dis

od

io), g

/l 1

,25

3

,70

2

,35

2

,10

2

,40

Clo

ruro

de

po

tasio

, g/l

0,7

5-

--

-

Ácid

o c

ítrico

, g/l

--

2,9

03

,80

-

Tris

bu

ffer (b

ase

), g/l

--

5,6

5

6,5

0-

HE

PE

S, g

/l-

--

--

Estab

ilización

de la m

emb

rana

Cis

teín

a, g

/l -

--

0,1

0-

BS

A (fra

cció

n V

)-

--

-2

,50

An

tibió

ticos

(3)

Ne

om

icin

a s

ulfa

to, g

/l -

--

1,0

0-

Pe

nic

ilina

G (N

a), g

/l 0

,60

0,6

0

0,6

0-

0,6

0

Dih

idro

stre

pto

mic

ina

, g/l

1,0

0

1,0

0

1,0

0-

1,0

0

Co

mp

osició

n d

e varios d

iluyen

tes po

rcino

s(1

) (Flo

we

rs, 2

00

4)

(1) la

s fó

rmula

s d

e lo

s d

iluyente

s s

e h

an o

bte

nid

o d

e in

form

acio

nes o

rigin

ale

s p

ublic

adas e

n a

rtículo

s.

(2) e

l ED

TA

, citra

to s

ódic

o y

otro

s a

gente

s q

uela

nte

sta

mbié

n a

yudan a

la e

sta

biliz

ació

n d

e la

s m

em

bra

nas.

(3) e

l tipo y

la c

antid

ad d

e a

ntib

iótic

os a

gre

gados s

e a

justa

n a

menudo s

egún la

s s

ituacio

nes in

div

iduale

s.

74

�P

araque

elsem

endiluido

mantenga

sucapacidad

fecundantea

lolargo

desu

almacenam

iento(15

ºC)

esindispensable

cumplir

conlas

siguientescondiciones:

�E

lm

ateriald

ebe

estarlim

pio

yesterilizad

o,

sinresid

uos

qu

ímico

s

�U

tilizarag

ua

bid

estilada

�U

tilizard

iluyen

tesd

elarg

aco

nserv

ación

�R

ecoger

exclu

sivam

ente

lafracció

nesp

ermática

�D

iluir

aun

perío

do

inferio

ra

15-3

0m

inuto

sd

esde

lareco

gid

ad

elsem

en(g

rado

de

dilu

ción

óp

timo

1:1

0)

a37

ºC.

Con

centració

np

or

dosis

2-4

x10

9esp

ermato

zoid

esen

100

cc

�D

escend

erlen

tamen

tela

temp

eratura

de

37

ºCa

15

ºC

�C

on

servar

enan

aerob

iosis

a1

5-1

6ºC

�E

vitar

lasoscilacio

nes

de

temp

eratura

du

rante

elp

eríod

od

eco

nserv

ación

.L

atem

peratu

racrítica

enla

cual

sep

rodu

ceu

ndañ

oirrev

ersible

enla

mem

bran

aesp

ermática

seen

cuen

trap

or

deb

ajod

elo

s1

2ºC

�N

oex

pon

erdu

rante

perío

dos

largos

de

tiemp

oa

lalu

zd

irecta

�E

lsem

enalm

acenad

od

ebe

serro

tado

(mezclad

o)

suav

emen

tecad

a12

hco

nobjeto

de

man

tener

alo

sesp

ermato

zoid

esen

susp

ensió

nco

nel

dilu

yen

te

�C

on

trol

de

lad

ilució

ny

con

servació

n:

lasd

osis

semin

alesalm

acenad

asan

tesd

eser

utilizad

asd

eben

serob

servad

asco

nel

micro

scop

io(m

otilid

ad3

y7

0%

)

75

Co

nservació

n en

refrigeració

n:

(Quile

s y

Hevia

, 2008)

Máquin

a d

e

envasado

auto

mátic

o

Aco

nd

icion

amien

to d

e las do

sis semin

ales

Tubos s

old

able

s (8

0-1

00 m

l)

Bote

llas fle

xib

les (6

0-1

00 m

l)

Bols

as (b

liste

rs) (6

0-1

00 m

l)

Unid

ades d

e in

sem

inació

n (d

osis

+ c

até

ter)

(20

cm

)7

6

(30-4

5 m

l)

(30-4

5 m

l)

�Selección�

cuid

ado

sad

elo

sverraco

s“b

uen

os

con

gelad

ores”

ycalidad

de

lasd

osis

semin

ales�

Recogida

dela

fracciónrica

�so

bre

100

ccd

ed

iluyen

teco

mercial

(BT

S,

MR

-A)

yd

espu

ésse

com

pleta

ad

ilució

n1

:2co

nd

iluyen

tea

32

ºC�

Diluyentes

paracongelación

�su

stancias

energ

éticas(g

luco

sa,fru

ctosa,

lactosa)

�crio

pro

tector

(glicero

l)�

pro

teínas

(yem

ad

eh

uev

oo

leche)

�A

ditiv

os:

deterg

ente

sintético

Am

ino

-Na-L

aury

lS

ulfato

(Orv

us

Es

paste-O

EP

)�

Presió

no

smó

tica:alred

edo

rd

e4

00

mO

sm/K

g�

Periodo

deequilibrado

�E

lesp

ermato

zoid

ed

everraco

precisa

recub

rirsed

eun

acap

ap

roteica

qu

eactú

eco

mo

agen

tecrio

pro

tector

enel

mo

men

tod

ela

con

gelació

n,

para

locu

ales

preciso

de

3-4

h(1

ha

22

-23

ºCy

2h

a1

5ºC

)

�C

entrifugación-Dilución

�P

arap

roced

era

lad

ilució

nes

preciso

elimin

arto

talo

parcialm

ente

elp

lasma

semin

al(lo

sefecto

sn

egativ

os

del

plasm

asem

inal

pu

eden

seresp

ecíficos

de

determ

inad

asfraccio

nes

-n

ode

lafracció

nrica

del

eyacu

lado).

Para

ellose

centrifu

ga

10

min

uto

s(3

min

.)a

80

0g

(2.4

00

g)

encen

trífuga

refrigerad

aa

15

ºC

yd

espu

ésse

elimin

ael

sob

renad

ante

�L

ad

ilució

nse

hace

con

dilu

yen

tea

15

ºC(se

añad

eh

asta3

ccp

or

do

sisd

e

lactosa-y

ema)

yd

espu

ésse

equ

ilibra

po

r2

ha

5ºC

.

�A

con

tinu

ación

seañ

ade

lactosa-y

ema

+glicero

l+

OE

Ph

asta5

cc.7

7

Tecno

log

ía de co

ng

elación

del esp

erma p

orcin

o (P

urselet al., 1975; W

estend

orfet al., 1975)

�C

ongelación�

Ha

de

serráp

ida,

con

elfin

de

pasar

elp

un

tocrítico

enel

men

or

tiemp

op

osib

le

�P

araello

elsem

ena

5ºC

deb

ed

ejarsecaer

sob

ren

ieve

carbó

nica

oin

cidir

sob

re

elm

ismo

vap

ores

de

nitró

gen

olíq

uid

o(a

un

os

5cm

sob

reel

nitró

gen

olíq

uid

o)

�p

arap

osterio

rmen

tealm

acenarse

enn

itrógen

olíq

uid

o

�P

resentación(envase)

�E

np

ajuelas

de

0,2

5-0

,5-5

-6m

lo

enen

vases

plan

os

plástico

s(p

et-flatb

ags)

con

gelad

os

envap

ores

de

nitró

gen

olíq

uid

oco

ncap

acidad

de

2,5

-5m

l.

�L

asd

osis

utilizad

asd

eben

con

tener

com

om

ínim

o3

-5-6

x1

09

esperm

atozo

ides

(I.A.

con

ven

cion

al)(d

ismin

uye

eln

úm

erod

ed

osis

po

rey

aculad

o)

(1x

10

9

esper.

enIA

intrau

terina

pro

fun

da)

�E

lco

sted

eestas

do

sises

3-4

veces

eld

ela

do

sisrefrig

erada

�D

escongelación�

La

yel

tiemp

od

ed

escon

gelació

nes

determ

inan

tep

arala

viab

ilidad

y

capacid

add

efecu

nd

ación

de

los

esperm

atozo

ides

�H

ad

erealizarse

rápid

amen

te,in

trodu

ciéndo

selas

do

sisd

irectamen

ted

esde

el

nitró

gen

olíq

uid

oal

bañ

oM

aríaa

42

ºC(5

0ºC

,37

ºC)

du

rante

40

-45

(12,

30

)

segu

nd

os

ya

con

tinu

ación

verter

elco

nten

ido

sob

re60

-70

ml

(80

,3

0)

de

dilu

yen

ted

erefrig

eración

(mejo

resp

ecífico)

(tipo

AC

RO

MA

X,

MR

-AT

HA

,

BT

S)

a1

5ºC

(37

ºC)

�H

ayq

ue

segu

irrig

uro

samen

telas

instru

ccion

esin

dicad

asp

or

elfab

ricante

de

la

do

sis7

8

Técnica aplicada en el IN

IA (m

odificación de Wenstendorf

et al, 1975)�

Ob

tenció

nd

ela

fracción

esperm

áticad

eley

aculad

o

�D

ilució

n1

/3co

nd

iluyen

ted

erefrig

eración

a3

2ºC

�E

qu

ilibració

nd

uran

te9

0m

inu

tos

atem

peratu

raam

bien

te(2

0–

22

ºC)

�E

qu

ilibració

na

15

ºCd

uran

te1

20

min

uto

s

�C

entrifu

gació

na

80

0x

gd

uran

te1

0m

inu

tos

enviales

con

5x

10

9sp

z

�E

limin

ación

del

plasm

asem

inal

�D

ilució

nh

asta3

,5m

lco

nL

actosa

–Y

ema

(A)

�E

qu

ilibració

nd

uran

te1

20

min

uto

sp

arad

ismin

uir

a5

ºC

�D

ilució

nh

asta5

ml

con

Lacto

sa-Yem

a+

glicero

l+

OE

P(B

)

�C

on

gelació

nin

med

iataen

paju

elad

e6

ml

envap

ores

de

nitró

gen

oa

un

aaltu

rad

e5

cm.,

du

rante

20

min

uto

s

�In

trod

ucció

nen

nitró

gen

oliq

uid

o

�D

escon

gelació

n:

�In

trod

ucir

lasp

ajuelas

enb

año

Maria

a4

2ºC

du

rante

40

segu

nd

os

�A

ñad

irla

dosis

de

5m

la

45

ml

de

med

iod

eco

nserv

ación

(dilu

ción

1/1

0)

Co

mp

osició

nd

eL

actosa

–Y

ema

(A):

�L

actosa

...........................8,8

g.

�A

gu

ad

estilada................h

asta8

0m

l

�Y

ema

de

hu

evo

..............20

ml

Co

mp

osició

nd

eL

actosa

–Y

ema

+glicero

l+

OE

P(B

):�

Lacto

sa–

yem

a...............9

3,5

ml

�O

.E.P............................…

1,5

ml

�G

licerol…

……

……

……

5m

l7

9

< 3

% d

e g

lice

rol

Ma

xip

aju

ela

s(5

ml) o

pa

jue

las d

e 0

,5 m

l

Píld

ora

s (1

00

mic

rolitro

s)

Ha

sta

el 5

0 %

resu

ltan

da

ña

dos

(1975)

(1975)

(agente

dete

rgen

te)

(agente

regula

dor

del p

H)

10

0-2

00

pa

jue

las p

or e

ya

cu

lad

o d

e 0

,5 m

l co

n u

na

co

nce

ntra

ció

n d

e 1

x 1

09

esp

erm

ato

zo

ide

s (IA

intra

ute

rina

pro

fun

da

)

80

(Gó

me

z R

incó

n e

t al., 2

00

8)

Tasa

fecundid

ad

Pro

lificidad

Sem

en

refrigerad

o

80-9

0 %

11-1

2

Sem

en

Congelad

o

40-7

0 %

9-1

0

(Bo

larín

et a

l., 20

06

)

81

Po

sible u

tilización

de lo

s ban

cos d

e semen

(Ruvalc

aba

et a

l., 2003):

-C

ontin

gencia

por m

otiv

os s

anita

rios

-T

ransporte

de m

ate

rial g

enétic

o a

larg

a d

ista

ncia

-T

rabajo

s d

e re

cupera

ció

n d

e ra

zas e

n e

xtin

ció

n

-B

aja

tem

pora

l de lo

s m

achos p

or p

roble

mas d

ivers

os

Cau

sas qu

e orig

inan

esta dism

inu

ción

en lo

s resultad

os rep

rod

uctivo

s:-

Cam

bio

s e

stru

ctu

rale

s y fu

ncio

nale

s d

e lo

s e

sperm

ato

zoid

es

-V

iabilid

ad d

ism

inuid

a d

e lo

s e

sperm

ato

zoid

es e

n e

l tracto

genita

l de la

hem

bra

-P

roducció

n d

e e

sperm

ato

zoid

es c

on m

enor v

iabilid

ad

(Co

nd

e e

t al., 2

00

3)

•M

arc

adore

s d

e c

ongela

bilid

ad

(ver ta

bla

)

82

Bo

ne

t et a

l., 20

09

)

-M

arc

ad

ore

s m

ole

cu

lare

s d

e c

on

ge

lab

ilidad

: alg

un

os tra

nsp

orta

do

res d

e

me

mb

ran

a (G

LU

-3) o

de

pro

teín

as (H

SP

90

), alg

un

os e

nzim

as (S

OD

)

-M

arc

ad

ore

s n

o m

ole

cu

lare

s: L

IN y

ST

R

83

�P

recelo:–

la cerda está m

uy

nerv

iosa y

pru

eba a m

on

tar a sus co

ngén

eres

–cu

and

o la cerd

a es mo

ntad

a, no

presen

ta el reflejo d

e inm

ovilid

ad

–la v

ulv

a está edem

atizada-h

inch

ada

–las m

uco

sas vu

lvares

están ro

jas y co

n u

na lig

era mu

cosid

ad p

astosa

–d

ura d

e 2-5

días (m

eno

s en n

ulíp

aras y p

rimerizas)

�C

elo verdadero, la cerda se deja montar por el verraco:

–P

rimer período de verraco (P

V1):

�la v

ulv

a está todav

ía roja, p

ero m

enos h

inch

ada y

con m

oco

op

aco

�la cerd

a perm

anece in

móv

il cuan

do se le co

mp

rime lo

s flanco

s; no sien

do así cu

ando se la o

prim

e el lom

o

�la cerd

a perm

anece m

ás tranqu

ila y se d

eja montar p

or las co

mp

añeras y

por el v

erraco

�du

ración d

e 8-1

0 h

.

–P

eríodo del investigador (PI):

�es el p

eríodo crítico

para llev

ar a cabo la in

semin

ación (en

los p

rimero

s ¾ p

artes de esta fase)

�la v

ulv

a está rosa y

no h

inch

ada, sin

o arru

gad

a, la mu

cosid

ad es m

enos o

paca, m

ás acuosa y

casi transp

arente

�la cerd

a presen

ta el reflejo d

e inm

ovilid

ad tan

to p

ara el verraco

com

o p

ara las man

ipu

lacion

es realizadas p

or el

responsab

le

�en

este perío

do, la cerd

a realiza gen

eralmen

te un m

ovim

iento

de o

rejas a veces m

uy claro

, presen

tando lo

s ojo

s saltones

�la d

uració

n d

e la fase PI está en

tre 32

-40

h.

–Segundo período de verraco (P

V2):

�la cerd

a no p

resenta m

ás el reflejo d

e inm

ovilid

ad a las m

anip

ulacio

nes d

el investig

ador, p

ero sí au

n p

ara el verraco

�la v

ulv

a pu

ede p

erman

ecer todav

ía roja

�las tasas d

e fertilidad

cuan

do se in

semin

a en este p

eríodo so

n m

uy b

ajas.

�P

ostcelo:–

no

hay

reflejo d

e inm

ovilid

ad p

ara el investig

ado

r ni p

ara el verraco

–lo

s sign

os ex

teriores d

e celo so

n d

ispares, p

resentán

do

se a veces u

na lig

era hin

chazó

n d

e la vu

lva q

ue p

or el

con

trario n

o está ro

ja

–en

esta fase no

existe n

ingu

na p

osib

ilidad

de fecu

nd

ación

.84

CN

ICA

S DE

AP

LIC

AC

IÓN

DE

L SE

ME

ND

ET

EC

CIÓ

N D

E C

EL

OS

:Signos de celo (Palo

mo Y

agüe, 1

999)

�O

bserv

ación

de

sign

os

extern

os:

–actitu

din

qu

ieta(n

ervio

sismo

)

–vulv

ah

inch

ada

(edem

a)y

enro

jecida

(hip

eremia)

–em

isión

de

gru

ñid

os

característicos

�O

bserv

ación

del

com

po

rtamien

tosex

ual:

–p

ermite

serm

on

tada

ym

on

taso

bre

otras

hem

bras

–b

úsq

ued

ad

elverraco

�D

esencad

enam

iento

del

reflejod

ein

mo

vilizació

n(p

osició

nríg

ida

–lo

rdo

sis-co

nlas

orejas

erectasy

cola

levan

tada

cuan

do

selas

mo

nta

):–

Por

elverraco

adu

ltorecela

�P

asand

oel

verraco

po

rlas

jaulas

�P

asand

oel

verraco

po

rlo

sp

arqu

es(en

gru

po

sd

eh

embras

redu

cidas)

�P

asand

ola

hem

bra

po

rla

verraq

uera

–P

or

elh

om

bre:

apo

yo

sob

relo

slo

mos

–P

or

estímu

los

simulad

ores

del

verraco

�A

eroso

lesco

nfero

mo

nas

(and

rosten

on

a)

�P

roto

tipo

de

cerdo

85

PAU

TA

S A SE

GU

IR PA

RA

LA

DE

TE

CC

IÓN

DE

L C

EL

O E

N L

A P

CT

ICA

86

(Go

rdo

n, 1

99

9)

Intro

ducir e

l macho e

n g

rupos d

e h

em

bra

s re

ducid

as

Cerd

as

alo

jadas

en

celd

as

indiv

idu

ale

sy

acceso

am

plio

por

laparte

trasera

que

perm

itaverific

ar

lain

movilid

ad

ein

sem

inar

Pasillo

en la

parte

dela

nte

ra p

ara

que e

l verra

co d

e re

cela

pueda

circ

ula

r

-H

acer q

ue e

l verra

co a

vance le

nta

mente

dela

nte

de la

s c

erd

as, u

tilizar b

arre

ras m

óvile

s, p

anele

s…

-C

onducir a

las h

em

bra

s d

udosas o

con p

roble

mas a

l corra

l del m

acho (in

cre

menta

su e

stim

ula

ció

n)

-Ilu

min

ació

n e

n la

s s

ala

s d

estin

adas a

recela

: 16 h

luz (3

50 lu

x) / 8

h o

scurid

ad

(Quile

s y

Hevia

, 2008)

87

(Mo

zo

Ma

rtín, 2

00

9)

�A

partir

del

día

trasel

destete

para

lasm

ultíp

aras(p

osib

ilidad

de

un

ad

etección

desd

eel

destete)

otras

finalizar

eltratam

iento

con

altreno

gest

enp

rimerizas

�D

os

veces

aldía:

mañ

ana

ytard

e,m

edia

ho

radesp

ués

de

laco

mid

a(a

lam

isma

ho

ra)

�%

de

detecció

nd

ecerd

aso

%de

man

ifestación

de

celos:

�P

resión

enel

do

rso:

48

%

�P

resión

+señ

alesso

no

rasd

elverraco

:7

1%

�P

resión

+o

lor

del

verraco

:8

1%

�P

resión

+o

lor

+señ

alesso

no

ras:9

0%

�P

resión

+o

lor

+señ

alesso

no

ras+

visió

nd

elverraco

:9

7%

�L

ad

etección

exig

ecalm

ay

con

centració

n

�N

op

recipitar

alas

cerdas

�E

vitar

ruid

os

88

OV

UL

AC

IÓN

Y O

VO

CITO

S-In

terv

alo

deste

te-c

elo

(refle

jode

inm

ovilid

ad):

3a

7día

s(e

l80

%de

las

cerd

as

entre

eldía

4a

5).

-D

ura

ció

ndel

celo

(inm

ovilid

ad

ante

el

verra

co):

24

a72

h.

Va

riable

en

funció

nde:

raza

,nº

de

parto

,d

ura

ció

n

de

lala

cta

ció

n,in

terv

alo

deste

te-in

icio

celo

,estím

ulo

delverra

co,

elestré

s,

laesta

ció

n…

-R

ela

ció

nentre

elin

terv

alo

deste

te–in

icio

de

celo

yla

dura

ció

ndelcelo

:�

ce

rda

sq

ue

en

tran

en

celo

rápid

am

en

tetra

se

lde

ste

te(<

5d

ías),

tiene

nun

am

ayo

rd

ura

ció

ndel

celo

(ha

sta

4

día

s)

�ce

rda

sq

ue

en

tran

en

celo

con

po

ste

riorid

ad

al7

ºd

íap

ost-d

este

te,

tien

en

un

am

en

or

du

ració

nd

elcelo

(me

no

sde

2d

ías)

-E

lin

terv

alo

inic

iode

celo

-ovula

ció

n:

35-4

5h

(inic

iodel

últim

ote

rcio

del

celo

).V

aría

en

funció

nde

ladura

ció

n

del

celo

:de

10

a85

h.

El

celo

no

es

un

bue

nin

dic

ador

de

laovula

ció

na

unq

ue

en

laprá

ctic

aes

el

únic

o

indic

ador

útil.

-D

ura

nte

los

30

a45

min

.tra

sla

ovula

ció

n,

los

ovocito

salc

anza

nla

unió

nis

tmo-a

mpolla

delovid

ucto

.E

ntre

1h

y1,5

hm

ás

tard

eson

fecundable

s.

Tie

nen

una

via

bilid

ad

de

unas

8-1

2h.

89

(Mozo M

artín

, 2009)

(Garc

ía C

asado e

t al., 2

007)

Ó

ES

PE

RM

ATO

ZO

IDE

S

-A

los

30

min

uto

sdespués

de

haber

sid

odeposita

dos

en

laparte

ante

rior

del

cuello

ute

rino,

los

esperm

ato

zoid

es

alc

anzan

laextre

mid

ad

de

los

cuern

os

ute

rinos

-S

ólo

un

bajo

núm

ero

de

ello

scru

zará

launió

nute

rotu

báric

ay

alc

anzará

nentre

1a

2hora

stra

sla

monta

oIA

el

lugar

de

lafe

cundació

n(is

tmo).

Acontin

uació

nse

activ

ará

nhorm

onalm

ente

poco

tiem

po

ante

sde

laovula

ció

n

-E

ltie

mpo

de

vid

ade

los

esperm

ato

zoid

es

dentro

de

las

vía

sgenita

les

de

lacerd

avaría

en

funció

n

de

su

calid

ad

(de

12

a36

hora

s).

La

pre

dic

ció

ndelm

om

ento

de

laovula

ció

ndebe

esta

ren

un

rango

de

24

h

90

(We

itze, 2

00

8)

-La

conserv

ació

nin

vitroy

pro

longada

del

esperm

aante

sde

laIA

reduce

el

perio

do

de

via

bilid

ad

esperm

átic

ain

vivoy

exig

eun

pro

gra

ma

más

adecuado

de

IA(fig

ura

)

�S

ien

teoría

una

sola

insem

inació

nes

suficien

te,es

difícil

pred

eciren

lap

rácticael

mo

men

toó

ptim

od

eo

vu

lación

(enu

nran

go

de

24

h),

deb

ido

ato

das

lasv

ariables

anterio

res.

�L

aIA

con

semen

refrigerad

od

ebería

realizarseen

trelas

12

a0

hp

revias

ala

ov

ulació

nen

cerdas

jóv

enes

yd

e2

4(2

8)

a0

(-4)

hen

cerdas

adu

ltas.S

ise

hace

un

aso

loIA

,no

más

tarde

de

las2

hsig

uien

tesa

lao

vu

lación

�L

aIA

con

semen

con

gelad

o:

entre

4-0

han

tesd

ela

ov

ulació

n(fig

ura)

�E

ln

úm

erod

eIA

po

rcerd

ad

eberá

serd

e2

a3

con

un

interv

alod

e1

24

ho

ras9

1

MO

ME

NT

O Y

ME

RO

DE

INS

EM

INA

CIO

NE

S P

OR

CE

RD

A

(We

itze, 2

00

8)

92

IA n

ulíp

ara

s: 2

4 h

después

del in

icio

del c

elo

y

poste

riorm

ente

cada 1

2 h

(Weitz

e, 2

000)

(ce

los a

los 5

-6 d

ías

po

std

este

te)

(Ma

rtín R

illo, 1

99

6)

3º IA

93

1ª IA

a la

s 2

4 h

y 2ª 1

2 h

después

1ª IA

a la

s 1

2 h

y 2ª 1

2 h

después

1ª IA

inm

edia

tam

ente

después y 2

ª 12 h

después

1ª IA

inm

edia

tam

ente

después y 2

ª 24 h

después

(De

Alb

a R

om

ero

, 20

04

)

De

tecció

n d

e c

elo

un

a v

ez a

l día

94

�C

on

ósin

limp

iezade

vu

lva

�P

or

imp

ulsió

n

�P

or

auto

insem

inació

nin

div

idu

aló

colectiv

a

�C

on

semen

fríoó

caliente

�S

imple,

bifásica

ótrifásica

�C

on

ósin

estimu

lación.P

or

elm

acho

,física

óbio

quím

ica(sp

rayco

nfero

mo

nas)

�C

on

osin

masaje

cervical

(el“m

eneito

”)

�C

on

ósin

aditiv

os

(cafeína,

ox

itocin

a,estró

gen

os,

pro

staglan

din

aso

plasm

asem

inal

sintético

)

�C

ervical:d

eposició

ndel

semen

enel

cérvix

com

ose

ha

hech

ode

form

atrad

icion

al

�P

ost-Cervical:

dep

osició

nd

elsem

enen

elcu

erpo

del

útero

.E

lm

aterialsem

inal

seab

sorb

ep

or

amb

os

cuern

os

uterin

os

perm

itiendo

lafecu

nd

ación

bilateral

�Intrauterina

profunda:d

epo

sición

del

semen

alfin

ald

eu

no

de

los

cuern

os

uterin

os

(au

no

s5

cmde

lau

nió

tero-tu

bárica).

So

lode

form

aex

cepcio

nal

sep

ued

ep

rod

ucir

lafecu

nd

ación

bilateral

�Intraoviductal:

dep

osita

los

esperm

atozo

ides

enel

ovid

ucto

por

med

iode

técnicas

laparo

scóp

icas9

5

Ap

arato rep

rod

ucto

r de la cerd

a

96

1: c

ue

llo u

terin

o

2: c

ue

rpo

ute

rino

3: c

ue

rno

s u

terin

os

(Mo

zo

Ma

rtín, 2

00

9)

(Gu

zm

án

Gu

erre

ro)

(Ga

rcía

Ca

sa

do

et a

l., 20

07

)

CN

ICA

S D

E IN

SE

MIN

AC

IÓN

AR

TIF

ICIA

L

97

Insem

inació

n cervical clásica:

es la

técnic

a m

ás u

sada q

ue c

onsis

te e

n d

eposita

r el s

em

en d

iluid

o y

refrig

era

do e

n e

l cuello

ute

rino (a

unos 1

5 c

m) p

or g

ravedad o

pre

sió

n (fra

scos) o

aspira

ció

n (b

líste

r).

-3

(2,2

5-2

,75

) x 1

09

esp

erm

at./d

osis

-7

5-8

0-1

00

ml/d

osis

-2

0-2

5

do

sis

/eya

cu

lado

Lim

pie

za

de

la v

ulv

a

Ca

téte

r lub

rifica

do

37

ºC <

15

min

.

Técn

ica rápid

a (sim

ple):

-In

trod

ucció

n c

até

ter

-A

plic

ació

n d

osis

2-3

min

.

Técn

ica lenta

(trifásica):

-In

trod

ucció

n c

até

ter

(ma

nte

ne

r 2 m

in.)

-In

trod

ucció

n 1

0 c

cd

iluye

nte

a 4

2 ºC

-In

trod

ucció

n d

osis

se

min

al (5

min

.), 35

-3

7ºC

-In

trod

ucció

n 2

5-3

0cc

dilu

ye

nte

a 4

2 ºC

(Go

rdo

n, 1

99

9)

98

99

(Garc

ía R

uvalc

aba

et a

l., )

Ca

téte

r Me

lrose

de

ca

uch

o e

ste

riliza

ble

(Se

e, 2

00

3)

10

0

Catéteres estériles d

esechab

les de esp

on

ja y en esp

iral

10

1

Au

toin

semin

ación

(CÁ

NU

LA

GE

DIS

®):té

cnic

aque

perm

itedeposita

rla

cánula

yel

sem

en

aniv

el

del

cuello

ute

rino,

deja

ndo

que

el

sem

en

se

aspire

sin

asis

tencia

ypor

tanto

sin

mano

de

obra

,ahorra

ndo

tiem

po

10

2

1)C

oger e

l gedis

de la

nevera

a 1

5º y g

olp

earlo

2

veces (p

ara

resuspender

el s

em

en s

edim

enta

do)

2) Abrir la

funda h

igié

nic

a s

in to

car la

punta

o

cuerp

o d

el c

até

ter y lu

bric

ar la

punta

3)A

copla

r el c

até

ter y p

resio

nar h

asta

alc

anzar

el c

érv

ix, a

segurá

ndonos q

ue q

ueda b

ien fija

do

(no re

trocede)

4)R

etira

r el a

plic

ador y re

vis

ar la

s IA

ante

riore

s

La

nula

se

deja

inserta

da

10

min

uto

s,

tiem

po

más

que

sufic

iente

pa

rap

erm

itirsu

cale

nta

mie

nto

,de

posic

ión

de

l

sem

en,y

actu

ació

nde

tapón

de

lacánula

.P

oste

riorm

ente

se

puede

retira

rm

anualm

ente

con

tracció

n.

10

3

6-8

Kg

,e

n

nu

lípa

ras

10

-12

Kg

mu

ltípa

ras10

4

nu

la d

e In

se

min

ació

n p

ostc

erv

ica

l:

Tu

bo

de

3,5

mm

de

diá

me

tro y

72

-75

cm

de

lon

gitu

d

Insem

inació

np

ost-cervical

oin

trauterin

a:el

se

me

nse

de

po

sita

en

lap

orc

ión

scra

ne

al

del

cérv

ix,

en

el

cu

erp

od

el

úte

roo

al

co

mie

nzo

del

cu

ern

ou

terin

o.

Esta

técnic

ape

rmite

dis

min

uir

laca

ntid

ad

de

dilu

ye

nte

,la

ca

ntid

ad

de

esp

erm

ato

zo

ide

s(e

lnú

me

rod

eve

rraco

s)

(me

no

rre

flujo

,m

en

ore

sp

érd

ida

s

en

trela

sa

nfra

ctu

osid

ad

es

de

lcé

rvix

,m

en

or

de

fen

sa

ute

rina

)

10

5

Tip

o d

e c

até

tere

s

(Garc

ía R

uvalc

aba

et a

l., )

INC

ON

VE

NIE

NT

ES

:

-E

ntre

nam

iento

de lo

s o

pera

rios

-N

o re

com

endado e

n n

ulíp

ara

s

-R

iesgo d

e le

sio

nes e

n c

érv

ix

-M

ayo

r esta

do s

anita

rio d

el c

até

ter

-M

ayo

r coste

de lo

s c

até

tere

s

10

6

(Mozo M

artín

, 2009)

10

7(M

ozo

Ma

rtín, 2

01

0)

Pro

toco

lo d

e IA P

ostcervical

(Gil P

ascu

al, 2

00

6)

•C

on

o sin

estimu

lación

cervical (agita

ndo e

l caté

ter d

ura

nte

5-1

0s a

nte

s d

e re

tirarlo

)

•S

e a

plic

a ya

en u

n 1

5-2

0 %

de la

s c

erd

as e

n E

spaña (M

artín

Mo

zo

, 20

09

)1

08

10

9

(Gil e

t al., 2

00

9)

IA P

ost-c

erv

ica

l co

n e

stim

ula

ció

n c

erv

ica

l en

po

rcin

o Ib

éric

o

Eq

uip

o d

e 1

3 c

m m

ás c

orto

y c

on

un

fren

o q

ue

evita

qu

e la

nu

la s

e d

eslic

e h

acia

atrá

s, a

lca

nza

nd

o e

l su

elo

y s

e e

nsu

cie

Insem

inació

n in

trauterin

a de m

emb

rana: C

atéter po

stcervical(A

bso

lute

Inse

min

atio

n®)

Caté

ter

tradic

ional,

al

que

se

ha

añad

ido

en

su

extre

mo

ypor

el

inte

rior,

una

son

da

de

gom

a(n

odañ

ael

cuello

ute

rino).

De

posita

el

sem

en

en

tre15

-20

cm

por

en

cim

adel

inic

io

delcuello

ute

rino

11

0

(Ga

rcía

Ca

sa

do

et a

l., 20

06

)

(Lo

ren

zo

Go

nzá

lez y

Ro

sa

s V

alv

erd

e, 2

00

9)

111

Pa

ra IA

po

st-c

erv

ica

l

(Gil P

ascu

al, 2

00

9)

11

2

(Gil P

ascu

al, 2

00

9)

11

3

Estim

ulació

ncervica

l:te

rmin

ad

ala

aplic

ació

nd

ela

do

sis

se

min

al

se

extra

ela

cán

ula

yco

nel

ca

téte

r,au

nfija

do

al

ce

rvix

,se

rea

liza

du

ran

te5

-10

su

nm

asa

jece

rvic

alm

ed

ian

tea

mp

lios

mo

vim

ien

tos

circ

ula

res

(Bo

ne

t et a

l., 20

09

)

11

4

11

5

Técn

icab

ifásicapa

rafa

cilita

rlo

sp

roce

dim

ien

tos

de

IAcon

ve

ncio

nal

y

po

st-c

erv

ica

l(Ga

rcía

Ru

va

lca

ba

eta

l.,)

1.

Co

loca

ció

n d

el c

até

ter

2.

Infu

sió

n d

e 3

0 m

l (co

nve

ncio

na

l) o 1

5-2

0 m

l (po

st-c

erv

ica

l) de

dilu

ye

nte

o d

e P

lasm

a S

em

ina

l Sin

tétic

o (4

2 ºC

)

3.

Ap

lica

ció

n d

e la

do

sis

de

se

me

n. E

n IP

C a

plic

ació

n d

e la

nu

la p

revia

me

nte

.

Este

pro

ce

dim

ien

to e

stim

ula

la re

laja

ció

n y

dila

tació

n d

el c

érv

ix

IA Trad

icion

al

IA P

ost-cervical

Méto

do

de la in

semin

ación

b

ifásica:-

Pla

sm

a s

em

inal (3

0 c

ca 3

7 ºC

)

-D

osis

sem

inal

(Quile

s y

Hevia

, 2007)

11

6

-7

me

se

s y

13

5-1

54

Kg

-E

sp

eso

r de

tocin

o d

ors

al: 1

5-2

0 m

m

-L

on

gitu

d v

ag

ina

-ce

rvix

: má

s d

e 2

5 c

m

Insem

inació

nIn

trauterin

aP

rofu

nd

a:té

cnic

am

ás

experim

en

tal

basada

en

la

intro

ducció

nde

un

asonda

larg

afle

xib

leen

uno

de

los

cue

rnos

ute

rino

s(a

8-5

cm

de

launió

núte

ro-tu

báric

a).

Re

duce

de

form

am

uy

ma

rcad

ala

ca

ntid

ad

de

esperm

ato

zoid

es

necesario

s,

el

riesgo

de

reflu

joy

el

ata

que

de

los

polim

orfo

nucle

are

s.

Inte

resante

en

el

caso

de

sem

en

cong

ela

do

yaplic

acio

ne

sm

uy

concre

tas

(esperm

ato

zoid

es

sexados).

-5

0-150

-30

0-6

00 e

sp

er. X

10

6, se

me

n fre

sco

(un

as 2

0 v

ece

s m

en

os q

ue

en

I. trad

icio

na

l)

-5

ml (8

-20

ve

ce

s m

en

os d

e v

olu

me

n)

-S

em

en

co

ng

ela

do

: 1.0

00

-2.0

00

x 1

06

esp

er. E

n

1,5

a 2

ml. 3

ó 4

pa

jue

las d

e 0

,5 m

l y c

on

0,5

x

10

9e

sp

er.

(Mo

zo

et a

l., 20

08

)

(1,5

m d

e lo

ng

itud

)

11

7

Inco

nven

ientes:

-M

ayo

rp

roba

bilid

ad

de

da

ñar

la

mucosa

delcérv

ixy

delúte

ro

-R

equie

rem

ás

tiem

po

(unos

3-4

min

uto

s)

-M

ayo

rhabilid

ad

por

parte

delopera

rio

-N

oe

sp

osib

lesu

utiliz

ació

nen

cerd

as

nulíp

ara

s

-P

uede

redu

cir

el

tam

año

de

cam

ada

(fecun

dacio

nes

unila

tera

les

obila

tera

les

parc

iale

s)

11

8

(Gu

zm

án

Gu

erre

ro)

(Gu

zm

án

Gu

erre

ro)