cromatografia

CROMATOGRAFÍA

Andrea Cortés

Maestría Ciencias BiomédicasUniversidad del Norte

HISTORIA

1850 F.F. Runge

Descubrió que los cationes orgánicos se separan por

migración cuando se depositaba una disolución que los contenía sobre un material

poroso (papel).

1906 TswetCon cromatografía en columna

separó extractos vegetales coloreados, y le dio el nombre.

1930 Lederer Separa colorantes de yema de huevo

1940 Extensión mundial

La cromatografía se diseñó originalmente para separa sustancias

de peso molecular bajo, como los azúcares y los aminoácidos, y hoy es una herramienta en la purificación

de proteínas.

Se pueden separar dependiente de propiedades moleculares (tamaño,

forma y peso), o determinadas afinidades de unión.

HISTORIA

Las separaciones se consiguen mediante la distribución de los componentes de una mezcla entre la fase fija y la fase móvil.

Fase fijaEstá inmovilizada sobre partículas de soporte, o en la pared interior del tubo contenedor o columna.

Fase móvilLa muestra que está siendo separada/analizada y el disolvente, que se mueven por el interior de la columna.

La separación entre dos sustancias empieza cuando una es retenida más fuertemente por la fase estacionaria que la otra, que tiende a desplazarse más rápidamente en la fase móvil.

FASES DE CROMATOGRAFÍA

PRINCIPIOS DE CROMATOGRAFÍA

1.-La adsorciónEs la retención de una especie química por parte de los puntos activos de la superficie de un sólido quedando delimitado el fenómeno a la superficie que separa las fases o superficie interfacial.

2.- La absorciónEs la retención de una especie química por parte de una masa, y debido a la tendencia que esta tiene a formar mezcla con la primera, absorción pura, o a reaccionar químicamente con la misma, absorción con reacción química, considerando ambas como un fenómeno másico y no superficial.

“Método usado principalmente para la separación de los componentes de una muestra, en el cual los componentes son distribuidos entre dos fases, una de las cuales es estacionaria, mientras que la otra es móvil. La fase estacionaria

puede ser un sólido o un líquido soportado en un sólido o en un gel (matriz). La fase estacionaria puede ser empaquetada en una columna, extendida en

una capa, distribuida como una película, entre otros.”

DEFINICIÓN DE CROMATOGRAFÍA

TIPOS DE CROMATOGRAFÍA

CROMATOGRAFÍA DE GASES

La Fase Móvil es un Gas (Gas Portador o Acarreador)La Fase Estacionaria puede ser un sólido (Cromatografia Gas-Solido) o una

Pelicula de liquido de alto punto de ebullicion (Generalmente Polietilen-Glicol o Silicon) recubriendo un solido inerte (Cromatografia Gas-Liquido).

Cromatografía de Gases. Tomado de: [http://www.datuopinion.com/cromatografo-de-gases] Marzo 2015

http://www.datuopinion.com/cromatografo-de-gases


• Análisis cuantitativos y semicuantitativos.• Exactitud relativamente buena.• CGS vs CGL (+)• Cromatografo debe:

1. Proporcionar un flujo constante del gas transportador (fase móvil).2. Permitir la introducción de vapores de la muestra en la corriente de

gas.3. Contener la longitud apropiada de fase estacionaria.4. Mantener la columna a la (secuencia de) temperatura apropiada.5. Detectar los componentes de la muestra.6. Proveer un señal legible proporcional a la cantidad de cada

componente.

Universidad de Alicante. Cromatografía de gases. [Universidad de Alicante. Cromatografía de gases. [http://rua.ua.es/dspace/bitstream/10045/8247/4/T3gascromat.pdf] Marzo 2015


- Inyector. Muestra líquida - > Gas- Columna. Longitud <2 - 50m. Acero inoxidable, vidrio, silice fundido.



- Horno. Modular la temperatura de la columna. Punto de ebullición de la muestra. 0.1C/min hasta 50C/min.

- Detectores.- Adecuada sensibilidad.- Buena estabilidad y - reproducibilidad- Respuesta lineal para los analitos- Intervalo de temperatura amplio.- Tiempo de respuesta corto- Alta fiabilidad y manejo sencillo- No destrucción de la muestra


CROMATOGRAFÍA DE AFINIDAD

Ideada por Porath en 1967, usando un péptido o proteína unida covalentemente a un ligando y se utiliza para la separación de moléculas proteicas.

Universidad Javeriana. Cromatografía [http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/cromatografia.htm] Marzo 2015.

http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/cromatografia.htm


Utiliza una afinidad de unión no covalente entre la proteína y una

molécula especial (el ligando).El ligando está unido de forma

covalente a una matriz insoluble, que se coloca en una columna.

La proteína que interesa se separan alterando las condiciones que

afectan a la unión (pH o concentración salina).


Teknokroma. Cromatografía de afinidad. http://www.teknokroma.es/UserFiles/HPLC/603-606.pdf

http://www.teknokroma.es/UserFiles/HPLC/603-606.pdf

Uribe Acevedo, R. Cromatografía. Universidad de Antioquia. 2013.

McKee, T. McKee, J. Bioquímica. 3a Edición. Mc GrawHill. 2003

Cromatografía. Tomado de: [http://www.textoscientificos.com/quimica/cromatografia]. Marzo 2015.

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Universidad Javeriana. Cromatografía [http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/cromatografia.htm] Marzo 2015.

BIBLIOGRAFÍA

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http://www.javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/cromatografia.htm

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