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Evaluación del estado de salud del ostión
Laguna de Alvarado, Veracruz
QUE COMO REQUISITO PARA OBTENER EL TÍ
LICENCIADO EN BIOLOGÍA MARINA
Dra. Xóchitl Guzmán Garcí
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BAJA CALIFORNIA SUR
ÁREA DE CONOCIMIENTO DE CIENCIAS DEL MAR
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE BIOLOGÍ
TESIS
Evaluación del estado de salud del ostión Crassostrea virginica proveniente de la
Laguna de Alvarado, Veracruz.
OMO REQUISITO PARA OBTENER EL TÍTULO DE
LICENCIADO EN BIOLOGÍA MARINA
PRESENTA:
Mirelle Dávila Gutiérrez
DIRECTOR:
Dra. Xóchitl Guzmán García
La Paz, B.C.S., Noviembre de
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BAJA CALIFORNIA SUR
ÁREA DE CONOCIMIENTO DE CIENCIAS DEL MAR
EPARTAMENTO ACADÉMICO DE BIOLOGÍA MARINA
1
proveniente de la
oviembre de 2012.
UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE BAJA CALIFORNIA SUR
ÁREA DE CONOCIMIENTO DE CIENCIAS DEL MAR
A MARINA
2
Este trabajo forma parte de los proyectos:
• “Indicadores de Integridad Ecológica y Salud Ambiental (2010-2014)”, del
Laboratorio de Ecotoxicología, Departamento de Hidrobiología de la
Universidad Autónoma Metropolitana. Responsable Dra. Xóchitl Guzmán
García.
• “Diagnóstico Ambiental de la Laguna de Alvarado, Veracruz” del Laboratorio
de Contaminación Marina, Instituto de Ciencias del Mar y Limnología (ICM y
L) de la Universidad Nacional Autónoma de México. Responsable Dr. Alfonso
Vázquez Botello.
Agradezco al apoyo brindado por el ICMyL mediante la beca de apoyo académico de
dicha institución.
3
DEDICATORIA
Quiero agradecer infinitamente a Dios Su por el permiso de concluir este trabajo lindo y
por todas sus innumerables protecciones y orientaciones a mi vida.
Dichoso es el momento en que los hijos pueden dar frutos a sus padres y honrarlos con
el esfuerzo. Por toda la paciencia y tu forma de amarme tan peculiar, Alfredo Dávila
muchas gracias papa; desde donde estés te dedico a ti y a todos mis antepasados y por
supuesto a mi madre, Evangelina Gutiérrez este trabajo que sin ustedes ni siquiera
tendría vida, ni un destino que cruzar y mucho menos una tesis que defender.
Muchas gracias por todo su amor incondicional y cuidado.
4
AGRADECIMIENTOS
Muchas gracias hermanitas Denisse, Lizethe, Gisellita por todo su apoyo y amor.
Gracias a mi sobrinita Samanta por existir y formar parte de mi vida, te quiero mucho.
Gracias a mis cuñaditos, Enrique y Gus por su amor y guía.
Muchas gracias a mis asesores hermosos, especialmente al Dr. Botello y a la Dra.
Xóchitl por todo su apoyo, paciencia, confianza y ánimo brindado.
Muchas gracias Dr. Rangel y Maestra MaryCarmenpor el apoyo y tiempo dedicado.
¡Muchas gracias a Irmita Hernández por toda la paciencia y amor para que lograra esos
cortes majestuosos!.También quiero agradecer a todos mis amigos chulos por tanto
aguantarme, animarme y quererme, cada uno de ellos en su momento:Nelly, Betsy,
Roger House, Eli, Fabiolita, Ilhui, Angie, Magy, Marco,Horte, Javier, Ely N. Gracias a
todo el buen equipo juvenilde ecotoxicología por su animo y apoyo: Pame, Sony, Rafa,
Emilio, Vero, Román, Robert, Carlitos, Mario rostro y a las Lauras lindas. Agradezco a
todas las investigadoras de la UNAM y UAM-I por brindarme apoyo y ser siempre
ejemplo para mi: Dra. Irene, Dra. Paty, Dra. Gu, Dra. Guadalupe Ponce, Dra. Carmen
¡muchas gracias!.
Agradezco infinitamente a la Asociación Mesoamericana de Ecotoxicología y Química
Ambiental (AMEQA) por la oportunidad brindada.
5
CONTENIDO
RESUMEN ................................................................................................................... 6
INTRODUCCIÓN ........................................................................................................ 7
ÁREA DE ESTUDIO ................................................................................................. 12
OBJETIVO ................................................................................................................. 14
OBJETIVOS PARTICULARES: ............................................................................. 15
HIPÓTESIS ................................................................................................................ 16
METODOLOGÍA ....................................................................................................... 16
METODOLOGÍA DE CAMPO ........................................................................................ 16
METODOLOGÍA DE LABORATORIO ............................................................................. 16
RESULTADOS .......................................................................................................... 23
PARÁMETROS FISICOQUÍMICOS ................................................................................. 23
ÍNDICE DE ESTADO ................................................................................................... 24
DATOS MORFOMÉTRICOS .......................................................................................... 25
ORGANISMOS ASOCIADOS ......................................................................................... 25
HISTOLOGÍA ............................................................................................................. 25
GLÁNDULA DIGESTIVA ............................................................................................... 28
FASE EN LOS TÚBULOS DIGESTIVOS ............................................................................. 28
HISTOPATOLOGÍA ..................................................................................................... 34
PARÁSITOS ............................................................................................................... 38
ÓRGANOS REPRODUCTIVOS ........................................................................................ 39
DISCUSIÓN ............................................................................................................... 42
CONCLUSIONES ...................................................................................................... 50
RECOMENDACIONES ............................................................................................. 51
BIBLIOGRAFÍA ........................................................................................................ 52
6
RESUMEN
El monitoreo del impacto ambiental en sistemas acuáticos se realiza con el uso de bioindicadores para conocer la salud del sistema. Este trabajo tuvo como objetivo analizar el estado tisular de ostiones colectados en la laguna de Alvarado, Ver. y su relación con la presencia de contaminantes críticos en la zona. Serecolectaron 44 ejemplares del ostión en la Laguna de Alvarado durante la época de seca y nortes. Se registraron los parámetrosfisicoquímicos de la zona de recolecta; los datos morfométricos de los organismos para calcular el Índice de Estado (IE), organismos asociados, y se realizó el análisis tisular de la glándula digestiva mediante la técnicahistológica tradicional con tinciónH-E. El IE revelo que los organismos se encontraban en condiciones óptimas (seca: 216; nortes: 153). El análisis tisular del tracto digestivo permitió evidenciar la estructura del: esófago, estómago, glándula digestiva, saco del estilete-intestino medio, intestino ascendente e intestino descendente. En la glándula digestiva se observaron lostúbulos primarios y secundarios. Los túbulos primarios se clasificaron en 5 fases de digestión; las de mayor predominancia fue: absorción-desintegración y desintegración. La presencia de gónada femenina (F) fue mayor que la masculina(M) durante las dos estaciones de recolecta. En secas fue: F: 66% y M: 33 % y en nortes: F: 62.5% y M: 37.5%.Los cambios tisulares observados en ostiones recolectados en laépoca de seca fueron: presencia de célulascafés y abundantes secreciones eosinófilas principalmente en intestino. La presencia de procesos inflamatorios se observaron en organismos recolectados en la época de nortes. Algunos factores externos pueden estar relacionados con la aparición de abundantes secreciones eosinófilas en el epitelio intestinal principalmente como un mecanismo primario de defensa. En términos generales los resultados indican que la relación alométrica de los organismos es adecuada, no existen parásitos o lesiones evidentes macroscópicamente, la estructura tisular fue característica y las lesiones aparentan ser de carácter reversible. La glándula digestiva manifiesta procesos de degradación que pueden estar relacionados con la biología del ciclo de vida de la especie o derivadas de la exposición ambiental donde las respuestas celulares y bioquímicas están activas, sin embargo, de acuerdo a nuestros resultados no existen evidencias de efectos deletéreos que pongan en peligro la población ostrícola. Las respuestas tisulares en la glándula digestiva requieren un monitoreo complementario que permita prevenir riesgos en la población ostrícola y humana y en consecuencia pueda utilizarse como herramienta de diagnóstico ambiental.
Palabras Clave: Índice de Estado, histopatología, glándula digestiva, ostión.
7
INTRODUCCIÓN
Las lagunas costeras presentan en México un gran valor ecológico y económico por
poseer una alta productividad biológica, lo que ha permito el desarrollo de importantes
pesquerías (INE, 1980). Sin embargo, al actuar como recipientes de diversas sustancias
químicas de origen antropogénico surgen a menudo problemas de contaminación (Gold-
Bouchot, 2004).
Las lagunas costeras se encuentran en una situación crítica ya que muchas de ellas son
explotadas irracionalmente causando la degradación del ecosistema, pero
desafortunadamente todas en un estado actual o potencial de contaminación.
Particularmente han sido los asentamientos humanos y establecimientos industriales
cercanos a estos cuerpos de agua quienes han producido una incontenible presión
ambiental en toda la franja costera del Golfo de México (INE, 1980; Caso et al., 2004).
Las lagunas costeras de la región del Golfo de México tienen que soportar la presión
que ejerce sobre ellas el desarrollo descontrolado e incluso a veces innecesario de
infraestructura turística el cual introduce elementos de riesgo. Aunado a esto el
crecimiento demográfico ha significado mayores descargas crudas de aguas municipales
e industriales en todos los cuerpos de agua, puesto que toda población costera del Golfo
de México vierte sus desechos sin previo tratamiento; alterando así la calidad del agua
y la estructura de las comunidades bióticas por sus efectos nocivos (INE, 1980; Gold-
Bouchot, 2004).
8
Los ecosistemas marinos han sido objeto de biomonitoreo de la contaminación, el cual
es un método de observación del impacto por factores externos sobre un ecosistema y su
desarrollo dentro de un periodo largo de tiempo, o de diferenciación entre dos
localidades (Markertet al., 2003).
Para realizar un biomonitoreo se ha propuesto utilizar organismos bioindicadores para la
evaluación de la calidad ambiental (Markertet al., 2003). La World Health
Organization (WHO) estableció en 2001 las características deseables que deberá
cumplir un bioindicador validado: ser reproducible cualitativamente y cuantitativamente
a corto y mediano plazo; ser medible; reflejar la interacción del organismo con la
sustancia química de interés; tener bases científicas, especificidad apropiada, y
sensibilidad a la interacción; presentar precisión y exactitud analítica en la medición,
conocer la cinética de formación del biomarcador al igual que su estabilidad; ser común
en individuos dentro de una población o subgrupo con variabilidad (peso, temperatura,
estacionalidad y manipulación) definida dentro de lo normal en poblaciones no
expuestas y ser común entre especies.
En los sistemas acuáticos se han utilizado diferentes organismos bioindicadores, entre
ellos los moluscos bivalvos. Estos organismos se han denominado centinelas dado que
al ser sésiles y alimentarse por filtración reflejan la calidad del sistema donde se
desarrollan (Boening, 1999; Boutetet al., 2002); son capaces de acumular una gran
cantidad de contaminantes y responder significativamente a la exposición (Cajaraville et
al., 2000).
9
El programa de biomonitoreo denominado BEEP (Biological Effect of Environmental
Pollution in Marine Coastal Ecosystem), uno de los más importantes, ha utilizado
moluscos bivalvos como organismos centinelas. Goldberg (1975) fue quien propuso el
concepto “Mussel Watch” como una herramienta para el monitoreo biológico y los
efectos de la contaminación (Zorita et al., 2007).
En el Golfo de México existen 1,910 km de línea de costa en el cual no existe ningún
programa regional de biomonitoreo de contaminantes tóxicos. Solo desde 1995 con
constancia se ha realizado el programa de monitoreo por la empresa Claicas Industriales
del Carmen S.A en Punta Venado, Quintana Roo (Contreras y Castañeda, 2004; Gold-
Bouchot, 2004). En cambio en Europa el mar mediterráneo tiene un área aproximada de
2.5 millones de km2 y contienen cerca de 3.7 millones km3 de agua y cuentan con
programas de biomonitoreo frecuente de los contaminantes (Zorita et al., 2007).
Dentro de los contaminantes críticos en los sistemas acuáticos se encuentran los
derivados de petróleo, los PCBs (bifenilos policlorados y derivados), pesticidas y
metales (Zorita et al., 2007). Existen en el Mediterráneo desde 1975 planes de acción y
algunos programas para la protección dirigidos por la UNEP (United Nation
Environment Programme). Las primeras actividades de monitoreo se desarrollaron en el
Programa de Biomonitoreo MED POL el cual forma parte del MAP (Mediterranean
Action Plan) (UNEP, 1997).
En 1999 la UNEP recomendó una serie de biomarcadores dentro del programa de
monitoreo (UNEP-RAMOGE, 1999). Los biomarcadores son medidas a nivel
molecular, bioquímico o celular los cuales indican que el organismo ha sido expuesto a
10
contaminantes (biomarcador de exposición) y la magnitud de respuesta de los
organismos depende de los contaminantes (biomarcador de efecto) (McCarthy y
Shugart, 1990).
Los biomarcadores de la respuesta biológica se han utilizado para identificar las fuentes
de contaminación y los efectos biológicos de diferentes contaminantes. Es por lo tanto
esencial el uso de diferentes biomarcadores en los programas de biomonitoreo, debido a
que existe un complejo de contaminantes que pueden inducir una variedad de respuestas
biológicas y que no están necesariamente correlacionadas (Viarengo et al., 2000).
La rápida respuesta de los biomarcadores, es usada como una señal temprana del efecto
biológico de los contaminantes ambientales (Farris y Van Hassel, 2007). Diversos
investigadores se han dado a la tarea de categorizar los biomarcadores en función del
nivel de organización biológica a utilizar, por ejemplo a nivel fisiológico y morfológico
se ha propuesto la histopatología (Lasse, 1991).
La histopatología es una ciencia descriptiva que valora las lesiones, siendo un método
muy útil y rápido para identificar los efectos de los contaminantes, especialmente de los
crónicos en varios tejidos y órganos (Bernetet al.,1999). Existen órganos y tejidos que
pueden ser más sensibles a ciertos contaminantes, en el ostión se ha reportado que la
composición de la glándula digestiva puede indicar el estado fisiológico de los
organismos, por lo que es muy recomendable su uso (Guzmán- García, 2001; Guzmán-
García et al., 2007). Además la glándula digestiva es considerada como órgano clave en
la valoración de ambiente contaminados (Zorita et al., 2006).
11
En nuestro país existen algunos estudios de la presencia de contaminantes en los
sistemas acuáticos. Guzmán Amaya et al., 2005 realizaron un monitoreo ambiental de
las lagunas de: Alvarado, Tamiahua y Mandinga del estado de Veracruz, en el cual
cuantificaron la concentración de diversos metales tales como plomo (Pb) , níquel (Ni),
zinc (Zn) , cobre (Cu), cromo (Cr) y cadmio (Cd) en sedimento (total y biodisponible) y
ostión, Crassostrea virginica. En Alvarado encontraron que la concentración de níquel
en el sedimento estuvo por encima de los valores que producen efectos biológicos
(Long et al., 1995). En cuanto al cadmio, cobre y plomo los niveles encontrados
rebasaron el límite que establece Food and Drug Administration (FDA) para moluscos
bivalvos. También observaron que la concentración de plomo en C. virginica estaba
relacionada directamente con la concentración de este metal en sedimento (total y
biodisponible). Cabe destacar que fue en Alvarado donde se encontró el valor máximo
de cobre en C. virginica durante las estaciones de nortes y secas.
El 45% de la producción nacional ostrícola proviene del estado de Veracruz y la laguna
de Alvarado contribuye de manera relevante (Luna et al., 2002), por ello es importante
evaluar el estado de salud del ostión C. virginica mediante biomarcador histopatólogico
para contribuir al conocimiento de las respuestas biológicas por exposición a
contaminantes. Esta información puede coadyuvar en el desarrollo o establecimiento
del plan de manejo y ordenamiento pesquero para proteger el ecosistema, la población
ostrícola y prevenir un impacto en la salud humana por consumo de estos organismos.
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ÁREA DE ESTUDIO
El sistema lagunar de Alvarado (SLA) se encuentra ubicado en la llanura costera del
estado de Veracruz, México entre las coordenadas geográficas 18º43’-18º52’ N y
95º42’-95º57’ W (Fig. 1). Dicho sistema esta compuesto por tres lagunas (Camaronera,
Buen País y Alvarado), conectadas por canales.
Fig 1) Localización geográfica del Sistema Lagunar Alvarado, Veracruz y punto
de muestreo en la Laguna Buen País ( ).
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Una de las características de la zona de Alvarado es que se encuentra rodeada de
manglar (Laguncula riaracemosa, Avicenia germinans y Rhizophora mangle) y pastos
marinos (predominantemente de Ruppia maritima) y una serie de lagunas y ríos que
aportan agua dulce y materia orgánica hacia la plataforma continental, particularmente
durante temporada de lluvias (Pelaéz-Rodríguez et al., 2005; Rocha-Ramírez et al.,
2007). Hay tres estaciones bien definidas: estación húmeda (Junio- Septiembre), Nortes
(Octubre- Enero) y estación seca (Febrero-Mayo).
La temperatura anual es de 25.6 y 26.1 °C y con una precipitación anual de 12.121 mm;
durante la estación seca la Laguna de Alvarado es de tipo polihalino-mesohalino y
durante la temporada de lluvias y nortes es oligohalino (Winfieldet al., 2007).Una de las
principales actividades económicas que se desarrollan en la laguna de Alvarado es la
pesca de robalo, jaiba, camarón y ostión; presentando como principal problemática la
contaminación por escorrentía lo que acarrea diversas sustancias químicas entre ellas
metales procedentes de desechos industriales (ingenios azucareros), aguas negras y
agricultura, además de presentar contaminación por desechos sólidos. Otras de sus
principales problemáticas es el incremento de la erosión y acarreo de sedimentos, así
como deterioro ambiental por embarcaciones pesqueras (Guzmán-Amaya et al., 2005).
En 2005 Guzmán-Amaya et al., realizaron el estudio de la concentración de metales en
ostión Crassostrea virginica, sedimentos totales y biodisponibles en el sistema lagunar
de Alvarado, Tamiahua y Mandinga. En la Laguna de Alvarado encontraron en ostión
metales como Cr, Pb, Cd y Cu rebasando los límites máximos permisibles tanto por la
legislación nacional (NOM-031-SSA1-1993) como internacional (FDA) (Tabla
1).Además fue en la Laguna de Alvarado donde se presentó el valor máximo de Cu y
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por encima del límite máximo promedio de la FAO (Nauen, 1983).Por otra parte en
cuanto al Cr, en 2004 Vázquez-Botello et al., registraron altas concentraciones de este
metal en sedimentos de la laguna de Alvarado. Tales datos sugieren la existencia de
industrias aledañas a este sitio, principalmente aquellas relacionadas con la tenería y los
fertilizantes, los cuales descargan sus desechos en forma de cromatos.
La Laguna de Alvarado también recibe contaminación por plaguicidas organoclorados
provenientes de la agricultura y aguas residuales. En 2010 Palmerín-Ruiz realizó la
evaluación de estos compuestos en dicha laguna encontrando niveles que rebasan la
norma de especificaciones sanitarias en moluscos bivalvos (NOM-032-SSA1-1993) por
lo que consideró que posiblemente exista riego ambiental y de salud pública.
Tabla 1. Concentración promedio de metales en diversas matrices de la Laguna de Alvarado (µgg-1).
Metal Matriz
Límites Permisibles
Sedimentos totales
Ostión V.S.E.B* Ostión
Cr 13.75 10.60 81 13 2
Pb 27.49 9.05 81 1.7 1
Cd <L.D. 4.61 1.2
3.7 1
Cu 17.49 278.00 34 32.5 2
Guzmán-Amaya et al., 2005 1 Niveles críticos µg g-1 para consumo de moluscos bivalvos (FDA, 1993); 2 Límite máximo promedio µg g-1 para moluscos bivalvos (Nauen, 1983) ; *Valor que en sedimento produce efectos biológicos (Long et al., 1995) L.D. Límite de detección; NR: No reportado; Ostión, Crassostrea virginica.
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OBJETIVO
• Evaluar el estado de salud del ostión Crassostrea virginica mediante la
evaluación histopatológica de la glándula digestiva.
OBJETIVOS PARTICULARES:
• Consultar los parámetros fisicoquímicos y contaminantes registrados para la
Laguna de Alvarado.
• Determinar el índice de estado de los organismos a través de sus características
morfométricas.
• Recolectar datos biológicos relevantes y organismos asociados.
• Analizar la composición tisular del tracto digestivo y órganos reproductivos de
los organismos.
• Contabilizar las fases en los túbulos digestivos que conforman la glándula
digestiva.
• Analizar los cambios histopatológicos de la glándula digestiva y del tracto
digestivo.
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HIPÓTESIS
Considerando que existen diversas fuentes de contaminantes puntuales y no puntuales
en la Laguna de Alvarado provenientes de asentamientos humanos, descargas de zonas
agrícolas e industriales; entonces el estado de salud del ostión C.virginica estaría en
riesgo reflejándose en las respuestas tisulares (daño histopatológico) como consecuencia
a la exposición a diversos contaminantes.
METODOLOGÍA
Metodología de campo
Se recolectaron un total de 40 ostiones en la Laguna de Alvarado, Veracruz en la época
de seca y nortes en una estación de muestreo llamada “Laguna Buen País” durante el
2011. Se tomaron los parámetros fisicoquímicos de la laguna con un multianalizador en
la época de seca para registrar salinidad, pH y temperatura y en la de nortes con
termómetro y refractómetro.
Los organismos fueron colectados de forma manual y se conservaron en una hielera
hasta su traslado al laboratorio de Ecotoxicología del Departamento de Hidrobiología en
la Universidad Autónoma Metropolitana Unidad Iztapalapa (UAM-I).
Metodología de laboratorio
Una vez en el laboratorio se tomaron 10 organismos de cada época para medir el índice
de estado, así como13 organismos de época seca y 7 de época nortes para histología.
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Para ello se lavaron las conchas con cepillos y se desinfectaron con cloro. Se dejaron
reposar por 3 min en alcohol 70 % y posteriormente se enjuagaron con agua destilada
Para determinar el índice de estado se tomaron los parámetros morfométricos como
altura, ancho y longitud antero-posterior de las valvas. También se registró el peso total,
valvas y masa visceral de los organismos con ayuda de una balanza digital.
Posteriormente los organismos fueron desconchados y aquellos a procesar para el índice
de estado se colocaron en cajas petri y se dejaron por una semana a 60º C en una estufa
marca Felisa 131 con el objetivo de retirar la humedad y registrar el peso seco del
ostión. También fue necesario medir el volumen del líquido intervalvar con una probeta.
Para el análisis tisular de la glándula digestiva se disectaron los organismos en 3
secciones anterior, media y posterior. Se seleccionó la parte media del tejido y se colocó
en los cassetes.
Fijación de muestras
Se siguió la metodología convencional de la técnica histológica propuesta por Guzmán
et al., 2010. Primeramente se debió detener el proceso autolítico de las células para
conservarlas lo mejor posible, por lo cual se fijaron los tejidos con formalina al 10%por
Primero el ostión completo se dejo en formalina 10% por 9 días. Cada día era palpado el
tejido para monitorear el proceso de fijación, ya que el método se encontraba en un
proceso de estandarización.
18
Procesamiento de muestras
Posteriormentese enjuagaron los tejidos con agua corriente para eliminar lo más posible
el exceso del fijador y se transfirieron a etanol al 70% de 12 a 24 hr.
Deshidratación, aclaración e infiltración del tejido.
Para una mejor observación en el microscopio óptico los tejidos fueron aclarados y
deshidratados en alcohol etílico de concentración diferente, después se aclararon enxilol
y al final se infiltraron con parafina (punto de fusión 45°C).Para ello se utilizó un
procesador automáticos de tejidos(Leica modelo TP1020) el cual cuenta con varias
“cestas en carrusel”en donde el tejido pasaba por cada una de ellas por 1.30 h (Anexo 1)
(Fig. 2)..
Fig 2) Procesador de tejidos (Histoquinette).
Para realizar la inclusión en parafinalos casetes se transfirieron al centro de inclusión de
tejidos (Leica modelo EG11OH) y se generaron unos bloques. Después se llevaron a
una placa de enfriamiento (Leica Modelo EG1140C) para terminar la solidificación de
19
la parafina (Fig. 3). Antes de que se endureciera la parafina se tuvo cuidado de tomar
en cuenta el plano (longitudinales o transversales) al cual se debía orientar el tejido.
Fig 3) Centro de Inclusión y placa de enfriamiento.
Corte de los tejidos en el micrótomo
Los cortes histológicos se realizaron en un micrótomo de rotación(modelo Microm HM
315)a un grosor de 5 µm (Fig. 4). En este paso se debió tomar en cuenta la orientación
del bloque respecto a la cuchilla del micrótomo para no desgarrar los tejidos.
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Fig 4) Micrótomo de rotación para el corte de bloques de parafina
Montaje, desparafinación, rehidratación y teñido
Los cortes obtenidos en forma de listones se depositaban en el baño de flotación e
inmediatamente se tomaron con un portaobjetos (Fig. 5). El corte se colocó en el centro
del portaobjetos y, en caso de requerir mover el tejido se realizaba con mucha
precaución con un pincel fino o pinzas.
Cada submuestra se transfirió a un tren de tinción Hematoxilina-Eosina (H-E).
Previamente se eliminó cualquier resto de parafina al dejarlas por 1 h en la estufa 131 a
60 °C(marca Felisa) (Fig. 6)
El montaje histológico se realizó al colocar unas gotas de resina-xilol a una proporción
50-5 sobre el tejido y se cubrió con un cubreobjetos para su conservación y observación
en el microscopio.
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Fig 5) Baño de flotación y montaje del tejido en portaobjetos.
Fig 6) Tren de tinción H-E.
Análisis de imágenes
Se realizó el análisis celular y tisular de los cortes teñidos con ayuda de un microscopio
(Zeiss) acoplado a una cámara digital (Fig. 7). Siendo la glándula digestiva, el principal
tejido a ser analizado resulta importante describirla en primera instancia. Dicha glándula
se encuentra conformada por túbulos digestivos los cuales están revestidos por
22
unepitelio estratificado mismo que se distingue a partir de un objetivo de 10x en el
microcopio.
Posteriormente con la ayuda de un contador se registró el número de túbulos digestivos
en las diversas fases (clasificación adaptada a partir de los criterios de Kennedy y
Newell (1996) como se indica a continuación:
1: Preparación (la célula comienza a hincharse); 2: Absorción (partículas alimenticias
presentes en la luz del túbulo); 3: Absorción y Desintegración (punto intermedio entre
fase 2 y 4; 4) Desintegración (las células están en un caos completo) y 5:
Reconstrucción (el haz es muy notorio y claro, el epitelio se reduce) (Kennedy y
Newell, 1996) (Fig. 8). Así mismo se registró la presencia de fagocitos observados
como células cafés, secreciones, aspectos inflamatorios o de disrupción de tejido y
eventualmente la presencia de parásitos.
Fig 7) Microscopio óptico acoplado a una cámara digital.
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Fig 8) Fases de digestión en los túbulos de la glándula digestiva. En A, se presenta
el ciclo de los túbulos en estación invernal y en B durante verano según Kennedy y
Newell, 1996
Análisis estadístico
Una vez comprobada la normalidad de los datos semicuantitativos de los túbulos se
realizó un análisis de varianza de una vía (ANOVA) para comprobar si existían
diferencias significativas de las fases en los túbulos digestivos entre épocas.
RESULTADOS
Parámetros Fisicoquímicos
Los parámetros fisicoquímicos registrados en la Laguna de Alvarado correspondieron a
la zona de recolecta conocida como Laguna Buen País tanto para época de secas como
nortes. Los promedios se muestran en la tabla 2.
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Debido a que no se contaba con un multianalizador durante la salida de nortes, el pH no
se registró.
Tabla 2. Parámetro fisicoquímicos registrados en la Laguna Buen País del SLA, Veracruz durante dos épocas.
Zona de colecta
Época Temperatura (°C)
Salinidad (‰)
pH
Laguna Buen País
Seca 29.9 9 7.7
Nortes 28 0 *NR
*NR= No registrado
Índice de Estado
Los organismos se encontraron en óptimas condiciones fisiológicas de acuerdo al índice
de estado. El peso se mantuvo por encima de 120 g para ambas estaciones, que de
acuerdo a la ecuación de Walne (1984) se considera alto. Los promedios se muestran en
la tabla 3.
Tabla 3. Índice de Estado de los organismos colectados en época seca y nortes
Época Vol. Intervalvar (ml) Peso seco (g) Índice de Estado* Seca 5.0 1.08 216 Nortes 3.9 0.60 153
*Índice de Estado 120=peso alto; 90=peso normal; 70-80=peso bajo, Walne (1984)
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Datos morfométricos
Los datos morfométricos registrados para ambas épocas nos brindó la oportunidad de
conocer la condición de los organismos colectados, los cuales presentaron tallas entre 6
y casi 8 cm. Los ostiones de la época de secas tuvieron los promedios más altos tanto
talla como peso que los de nortes como se muestra en la tabla 4.
Tabla 4. Promedios de los datos morfométricos del ostión.
Época Altura Ancho Alto Peso total Peso valvas Peso m.v. (cm) (cm) (cm) (g) (g) (g) Seca 7.87 3.5 5.85 89.1 65.0 9.0 Nortes 6.69 2.68 4.26 58.1 45.3 6.9
Organismos asociados
El porcentaje total de los organismos asociados observados en ambas épocas fueron:
balanos (53%), mejillones (45%), poliquetos (2%) y un cangrejo.
Histología
Órganos y tejidos analizados
Diferentes órganos y tejidos conforman al ostión. La descripción de los órganos
digestivos se menciona a continuación:
Esófago
El esófago discurre desde la boca pasando por la cámara anterior del estómago llamado
caecum (lugar inicial de selección de partículas alimentarias de acuerdo al tamaño). El
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revestimiento epitelial es de tipo estratificado cilíndrico ciliado el cual actúa como un
“engranaje” para hacer pasar las partículas alimenticias (Fig. 9, A).
Saco del estilete-Intestino medio
El complejo saco del estilete-intestino medio está separado por tiflosoles (estructuras
conformadas de epitelio de transición) el cual se puede ver en las imágenes B y C de la
Fig. 9.
Intestino (ascendente, descendente)
El intestino está revestido de epitelio cilíndrico estratificado ciliado soportado por la
lámina basal. Tal estructura presenta tiflosoles separados por una “grieta” que marca la
transición del epitelio tal como se muestra en la imagen D de la Fig. 9. Por otro lado los
restos alimenticios encontrados en “parte de intestino medio” (forma de herradura), en
época seca fue notoriamente de sedimentos como se observa en la imagen D de la Fig
9.
Al comparar tisularmente los organismos en las dos épocas de colecta básicamente la
estructura fue similar, sin embargo, en época de nortes no fue posible observar el
esófago y en algunos casos la gónada.
27
Fig 9) Microfotografías a 10x del sistema digestivo del ostión Crassostrea virginica.
En A, se muestra el epitelio del esófago (1); en B, se muestra el epitelio del saco del
estilete (1); en C, seguimiento del saco del estilete donde se aprecia el tiflosol (1) y
el intestino medio compuesto de epitelio columnar estratificado (2); en D, “parte
del intestino medio”(forma de herradura) en donde se aprecia claramente la
transición tiflosol mayor (1) - tiflosol menor (2) separados por una muesca (flecha)
y alimento (3).
28
Glándula digestiva
El análisis tisular demostró que la glándula digestiva se encuentra constituida por
túbulos primarios y secundarios. Estos túbulos presentan hacia la luz un epitelio que los
reviste, los cuales difieren en forma y tamaño; los túbulos primarios son más pequeños
que los secundarios. El diámetro de los túbulos primarios estuvo entre 115-200 µm y los
túbulos secundarios por arriba de los 300 µm (imágenes A-E de la Fig. 10).
También se observaron dos tipos de células en el epitelio de los túbulos digestivos, uno
situado en la base del epitelio con tinción basófila de tipo triangular y otro con tinción
eosinófila de tipo columnar. Únicamente este último tipo celular se pudo apreciar
claramente en los cortes a 40x en la imagen B de la Fig 10. Se observaron secreciones
con tinción eosinófila principalmente en túbulos en fase 2 y túbulos secundarios (Fig.
10, imagen D).
Fase en los túbulos digestivos
En este estudio la fase denominada 1) preparación no fue posible observarla, solo se
logro observar las fases de los túbulos denominadas: 2) absorción, 3) absorción-
desintegración, 4) desintegración y 5) reconstitución.
De manera complementaria se realizó una descripción de las fases (2 a la 5) de los
túbulos de la glándula digestiva, de acuerdo a lo observado en el presente trabajo y con
base en la clasificación hecha por Kennedy y Newell (1996).
29
Fase 2) Absorción, las partículas alimentarias están presentes en la célula, se caracterizó
por la presencia de cilios hacia la luz del túbulo y tinción eosinófila (Fig. 10, imagen A
y B).
Fase 3) Absorción-desintegración, la célula se encuentra tanto absorbiendo alimento
como a la vez desintegrándose por lo que comienza a perderse epitelio (Fig. 10, imagen
C).
Fase 4) Desintegración, el epitelio que reviste los túbulos comienza propiamente a
desintegrarse por lo que hay una notoria pérdida celular (Fig. 10, imagen D).
Fase 5) Reconstitución, los epitelios comienzan a reconstruirse, los componentes
celulares son mas evidentes así como el lumen del túbulo digestivo. En época de seca
fue frecuente observar túbulos con mayor luz y el epitelio columnar bien delimitado
(Fig. 10, imagen E).
Los ostiones de la época de nortes presentaron las mismas fases en los túbulos
digestivos que en época de secas. Los túbulos de la glándula correspondientes a la época
de nortes se muestran en laFig. 11 (A-C). En la revisión tisular de la glándula tampoco
se presenció la fase de preparación, sin embargo, en esta época la fase de mayor
predominancia fue 3) absorción- desintegración (Fig. 11, imagen C). Algunos
organismos presentaron túbulos más pequeños que en época seca. Cabe destacar que los
túbulos secundarios solían presentar mayores secreciones eosinófilas que los túbulos
primarios tal como se muestra en la imagen D de la Fig. 11.
30
Conteo de fases en los túbulos
Las diferentes fases de los túbulos fueron contabilizadas. Se observó que no siempre
estuvieron presentes las 5 fases, sino fue una mezcla de ellas con aparente
predominancia de las fases 3 y 4. En época seca la fase de absorción se contó en 137
túbulos primarios, la fase de absorción –desintegración en 636; la fase de
desintegración en 652 y reconstitución en 150, tal como se observa en la tabla 5.
En época de nortes el total de túbulos en fase de absorción fueron 104, la fase de
absorción –desintegración 394; la fase de desintegración 323 y la de reconstitución
191, tal como se presenta en la tabla 6.
31
Fig 10) Microfotografía de la glándula digestiva en época seca; se observan
sus diversas fases de digestión y la medida del diámetro, epitelio y luz de los
túbulos. En A (10x), se observa la fase 2; en B (40x), se presenta un aumento de la
fase 2, es notorio la presencia de cilios ( ), así como secreciones eosinófilas
(flecha) y células columnares ( ); en C (10x), se observa la fase 3, absorción-
desintegración; en D (10x), se presentan varios túbulos en fase 4 y un túbulo
secundario (Ts). En E y F (10x), se presentan túbulos en fase 5 con mayor luz que
las fases anteriores y el epitelio más reducido.
32
Fig 11) Microfotografía 10x en donde se muestran las diversas fases en los
túbulos en la glándula digestiva de C. virginica en época nortes. En A, se
esquematiza la fase 2, 4 y 5. También se muestra un túbulo secundario con
secreciones eosinófilas (Ts). En B, un acercamiento de la fase 2 en donde se aprecia
las secreciones eosinófilas ( ) y así como los cilios (flecha). En C, se muestra la
fase 3 con la forma característica “estrellada”. En D, se observan un túbulo
secundario (Ts).
33
Tabla. 5 Fases en los túbulos de la glándula digestiva de la especie C. virginica en época seca. Muestra Fase 2. Absorción Fase 3 *A-D Fase 4. Desintegración Fase 5. Reconstitución
1 11 28 28 52 2 7 39 31 5 3 12 26 82 0 4 10 49 26 2 5 16 44 65 19 6 16 53 69 0 7 3 36 45 19 8 25 88 90 0 9 5 88 70 0 10 12 42 30 2 11 6 48 31 15 12 10 48 50 33 13 4 47 35 3
Total 137 636 652 150 *A-D = Absorción-Desintegración
Tabla. 6 Fases en los túbulos de la glándula digestiva de la especie C. virginica en época nortes. Muestra Fase 2. Absorción Fase 3 A-D Fase 4. Desintegración Fase 5. Reconstitución
1 0 11 31 53
2 0 68 51 64
3 4 81 68 0
4 24 97 57 26
5 20 44 50 14
6 19 46 46 1
7 37 47 20 33
Total 104 394 323 191
34
Los datos semicuantitativos del conteo de los túbulos correspondieron a una población
normal (Secas: p=0.08 Nortes p= 0.14) y mediante un análisis de varianza de una vía
(ANOVA; Fase 2, F (1,18) p=0.34; Fase 3, F (1,18) p=049; F 4, F (1,18) p=0.68; F 5, F (1,18),
p=0.09) se observó que no hay diferencias significativas entre las épocas de colecta con
respecto a las fases en los túbulos analizados.
Histopatología
Durante el análisis del daño tisular de los ostiones en época seca se observaron procesos
inflamatorios, en donde las secreciones eosinófilas eran muy recurrentes en el epitelio
del tracto digestivo (principalmente intestino y túbulos secundarios en todos los
organismos de esta época) las cuales se observaron de color rosa (Fig. 12, imágenes A,
B y C).
Cabe destacar que los epitelios de revestimiento del tracto digestivo en su mayoría se
encontraron degradados (Fig. 12, imágenes A y C). También se observaron células cafés
ubicados principalmente en el tejido conjuntivo cercano a los túbulos digestivos y en
vesículas de diferentes tamaños e intensidades de color café (Fig. 12, D).
35
Fig 12) Microfotografía A 10x de la histopatología del ostión C. virginica en
época seca. En A, B y C se aprecian diferentes niveles del tracto digestivo
presentando el epitelio de revestimiento (1), secreciones eosinófilas ( ), alimento
(sedimento y diatomeas) (2) y solamente en A, se aprecia la lamina basal
claramente ( ). En D, se observa el epitelio del tracto digestivo (1) y
aglomeraciones de células cafés en tejido conjuntivo cerca de túbulos digestivos ( )
( ) .
El epitelio de revestimiento del intestino y “parte de intestino medio” (forma de
herradura) de ostiones de época nortes se encontró muy deformado, tal como se observa
en las imágenes A, B y F de la Fig. 13.
36
En el caso del intestino se identificó pérdida de epitelio, observándose espacios sin
epitelio en algunas partes, algunas veces desde la lamina basal hasta alcanzar los cilios.
Estos a su vez perdieron su distribución uniforme (Fig. 13, imagen A).
Otros cambios tisulares observados en época nortes fueron las secreciones eosinófilas,
las cuales aumentaron a lo largo del tracto digestivo, principalmente en epitelio
intestinal (Fig. 13, B y C).
Del mismo modo que las secreciones eosinófilas también se observó un incremento de
células cafés (Fig. 13, D y E).
En cuanto a la distribución de las células cafés se ubicaron en la periferia del epitelio
intestinal o incluso entre él como se muestra en la imagen D de la Fig. 13.
Respecto a los restos de alimento observados en época nortes se tiñeron de color azul
tal como se muestra en la imagen F de la Fig. 13.
37
Fig 13) Microfotografía de las diversas lesiones encontradas en el tracto
digestivo en época nortes. En A, se muestra el epitelio intestinal desarreglado (1),
los cilios no son uniformes (flecha corta), sin embargo la lamina basal está bien
conservada (flecha larga). En B, se muestra el epitelio del tracto digestivo muy
dañado (1) con abundantes secreciones eosinófilas (flecha) y también se aprecia un
poco de alimento (cabeza de flecha). En C, un aumento del epitelio intestinal con
abundantes secreciones eosinófilas (flecha). En D, se muestran células cafés
(flecha) en la periferia del epitelio del tracto digestivo (1). En E, un aumento de
células cafés formando vesículas. En F, se observa parte del tracto digestivo con
alimento (1) y epitelio (2).
38
Parásitos
Se encontraron parásitos en algún estado de desarrollo en ambas épocas de muestreo
(Fig. 14). El parásito de época de seca no fue posible identificarlo pero se encontraba en
el tejido conjuntivo. En cambio el parásito identificado de época nortes se identifico
como un posible helminto el cual midió de diámetro 318 µm y estuvo embebido en la
gónada masculina.
Fig 14) Microfotografía de parásitos encontrados en ostión en ambas épocas.
En A, se aprecia un parásito no identificado en alguna fase de su desarrollo de
época seca. En B, se observa un parásito helminto (1) entre la gónada masculina
(2), perteneciente a época nortes.
39
Órganos reproductivos
En época seca las gónadas se encontraron en gametogénesis. En el caso de la gónada
femenina se encontró conformada por folículos ováricos donde resguarda ovocitos
maduros (Fig. 15, A y B). En el caso de la gónada masculina se encontró conformada
por espermatocitos confinados en “túbulos seminíferos” (Fig. 15, E y F). El porcentaje
de gónada femenina fue de 66% y gónada masculina de 33%.
Las gónadas de la época nortes se encontraron en desove y postdesove tanto machos
como hembras (Fig. 16, A-D). En los folículos ováricos disminuyó el número de
ovocitos maduros como se aprecia en la imagen A. En el caso de los machos también se
evidenció la pérdida de espermatocitos maduros como se observa en las imágenes C y
D. El porcentaje de hembras fue de 62.5% en tanto que machos de 37.5%.
40
Fig 15) Microfotografía de las gónada femenina y masculina del ostión C.
virginica, en donde se muestra el desarrollo gonádico encontrado durante la época
de seca. En A, ovogénesis, se observan los folículos ováricos (1) ocupados por
ovogonias ubicadas a la periferia de los folículos y de menor tamaño que los
ovocitos primarios (flecha); en B, acercamiento del folículo ovárico, se observa el
ovocito primario(1); en C, desove, en donde disminuye la cantidad de óvulos por
expulsión (flecha); en D, un acercamiento del folículo desocupado por un gameto
femenino (1); en E, se observan túbulos seminíferos de espermatocitos maduros (1)
y en F, un acercamiento del túbulo seminífero donde se muestra tejido conectivo
(1).
41
Fig 16) Microfotografía de las gónadas femeninas y masculinas de C.
virginica en época nortes. En A, desove, se observan folículos ováricos con pocos
ovocitos maduros (1). En B, postdesove, los folículos ováricos y células sexuales
desaparecen casi en su totalidad (1) e incluso se aprecia un gameto no funcional y
sólo se observa la “huella” de un ovocito maduro (flecha). En C, se muestran los
túbulos seminíferos en corte longitudinal (1) de la gónada masculina con evidencia
de desove (flecha). En D, un acercamiento del túbulo seminífero (1).
42
DISCUSIÓN
La laguna de Alvarado presentó dominancia de las condiciones de estuarinidad ya que
la salinidad registrada durante ambas épocas de muestreo cayó dentro del intervalo que
presentan la mayoría de las lagunas veracruzanas (10-30 ‰).
En este tipo de ecosistema estuarino-lagunar la salinidad puede variar de un extremo a
otro por la influencia de las épocas de seca y lluvias. La salinidad registrada durante la
época seca varió en comparación con la época nortes, esto se puede deber a que en
época nortes se presentaron lluvias y, aunado a las aportaciones dulceacuícolas,
ocasionó que se registrara una salinidad nula coincidiendo con lo registrado por otros
autores (Contreras-Espinosa et al., 2002).
La temperatura es un reflejo de la situación latitudinal de las lagunas, ya que se
encuentran ubicadas dentro de la región subtropical, en donde los valores elevados de
temperatura son comunes a lo largo del año. Esto se pudo ver en las temperaturas
registradas en ambas época ya que no cambiaron mucho entre si e incluso se
mantuvieron dentro del intervalo registrado para una laguna costera veracruzana (25-
30°C) (Contreras-Espinosa et al., 2002).
Los eventos reproductivos pueden estar influenciados por este tipo de factores
exógenos, como son temperatura y salinidad. La temperatura pudo influenciar en la
gametogénesis observada en época seca, pues existen temperaturas mínimas favorables
para el inicio y el desarrollo de la gametogénesis, así como la temperatura mínima
43
crítica debajo de la cual la emisión de gametos no puede producirse. Y lo mismo ocurre
con la madurez siendo el estímulo principal la variación de la temperatura (Guerra et al.,
2004). En este trabajo sólo se registró en época seca el aumento de 1 °C .
La disminución de salinidad observada en época nortes también constituye un factor que
pudo provocar el desove. De manera similar Georges- Zamora et al. (2003) reporta que
los menores valores de salinidad registrados en época nortes (octubre y noviembre)
coincidieron con los eventos de desove de septiembre a diciembre.
De los organismos encontrados en asociación con los ostiones son los balanos lo que
tuvieron mayor incidencia, constituyen fauna de asociación normal o bien al fijarse en
sus conchas inducir asfixia al animal. Los poliquetos se consideran organismos
perturbadores del ostión ya que decrece su vitalidad y crecimiento pero en las
cantidades registradas se ha reportado como parte de la fauna acompañante natural y no
les afecta en su desarrollo(Guerra et al., 2004).
Los ostiones de ambas épocas se encontraron en un buen estado fisiológico de acuerdo
al índice de Estado, por lo que la variación de dos unidades, puede no ser relevante.
Durante el análisis tisular se pudo apreciar únicamente una parte del esófago, el cual
está encargado de transportar las partículas alimentarias a la cámara anterior del
estómago o caecum, en donde se inicia la selección de partículas alimenticias (Kennedy
y Newell, 1996). Fue prácticamente imposible observar el estómago posiblemente por
su complejidad ya que menciona Rodríguez de la Rua et al. (2005) que en C. angulata
44
este órgano está formado por ductos/conductos primarios que se ramifican en múltiples
conductos secundarios, siendo complicada su identificación.
Siguiendo el transporte de las partículas alimentarias por el tracto digestivo estos ductos
del estómago finalizan en masa de túbulos ciegos o divertículos digestivos. Estos
túbulos son precisamente los llamados túbulos digestivos en el presente trabajo.
Dos tipos de células digestivas, columnar y triangular, fueron observadas en el epitelio
de los túbulos del presente estudio lo cual concuerdan con el trabajo realizado por
Marígomez et al. (1990). En su estudio de la glándula digestiva de la lapa (Littorina
littorea), concluyeron que el epitelio que reviste los túbulos está compuesto por dos
tipos de células bien definidas: una de ellas las células basófilas, las cuales las describe
como células piramidales con abundante retículo endoplasmático rugoso y relacionadas
con la síntesis de proteínas. Sin embargo, de éste tipo celular no fue posible notar con
claridad bajo el microscopio óptico debido a que únicamente es posible observarlas a
100x y en el presente estudio solo se realizaron observaciones a 10x y 40x. Y el otro
tipo de célula, de tipo columnar que más adelante se discutirá.
Por otro lado Soto et al. (2002) estudiaron la glándula digestiva del mejillón de la
especie Mytilus galloprovincialis, los cuales mencionan que a pesar de no ser muy clara
la función de las células basófilas, éstas podrían estar implicadas en la digestión
extracelular por producción y secreción de enzimas hidrolíticas. El segundo tipo celular
observado fue evidentemente teñido con eosina y éstos son las denominadas células
digestivas acidófilas, involucradas en la absorción y digestión intracelular pues se
45
caracterizan por presentar un sistema endo-lisosomal bien desarrollado y
desintoxicación de xenobióticos (Harrison y Khon, 1997; Soto et al., 2002).
Estos mismos autores, Harrison y Khon (1997), mencionan cómo ocurre la absorción y
digestión intracelular en la glándula digestiva. El alimento entra por las células
digestivas acidófilas (columnares) apicalmente por endocitosis formando pinosomas, o
por fagocitosis, formando heterofagosomas. Los heterofagosomas se fusionan con los
lisosomas primarios hacia la parte media de las células; la digestión continúa y resulta
en heterolisosomas que se caracterizan por un halo. De manera que al final de la
digestión, el material indigerible forma cuerpos residuales que se pierden en el lúmen
del túbulo en una variedad de formas, por ejemplo, la secreción apócrina en forma de
esferas excretoras.
La estructura de las células digestivas que componen los túbulos fue reconocida al
observar la glándula digestiva la cual cambia de manera cíclica y sincronizada
dependiendo de la actividad digestiva (Kennedy y Newell, 1996). Esto puede explicar
por qué no se encontró diferencias significativas de las fases en los túbulos digestivos.
Dicha sincronización pudo observarse al distinguirse las fases 2-5 en los túbulos de la
glándula del presente estudio. Sin embargo, la prevalencia de la fase de desintegración
en las dos épocas podría asociarse con mecanismos de defensa activado, ya que las
células digestivas están encargadas de la fagocitosis del material de desecho;
participando así en los procesos de desintoxicación (Marígomez et al., 1990; Zorita et
al., 2006).
46
Aparentemente existe una correspondencia entre las fases de la glándula digestiva y la
gónada. Se observó que los ostiones se encontraron sexualmente maduros cuando los
túbulos se encontraron principalmente en fase 4 (desintegración) en época seca, siendo
la fase de mayor auge de digestión. En el caso de época de nortes los ostiones desovaron
y la glándula digestiva presentó menos túbulos entrando a la fase de desintegración-
absorción.
Los cúmulos de células cafés observados en época seca son llamados “vesículas” por
Zaroogian y Yevich (1994). En su estudio histopatológico de la glándula digestiva
descubrieron que estas vesículas en realidad se encuentran dentro de las células cafés y
variaban en tamaño dependiendo de la cantidad de material que embebían en su
citoplasma. En el presente trabajo los fagocitos observados como células cafés
precisamente formaban “vesículas” con apariencia granular, algunas eran más grandes
que otras, lo que nos indica que su tamaño dependía mucho de la cantidad de material
soluble que fagocitara. Estos mismos autores las nombraron “vesículas jóvenes, ya que
al ir fagocitando más y más material soluble en el citoplasma, se van incrementando
hasta convertirse en las típicas vesículas grandes tales como las observadas en el
presente estudio.
El deterioro observado en el epitelio de revestimiento del tracto digestivo aunado con
las múltiples secreciones eosinófilas encontradas, constituye un mecanismo primario de
defensa que puede activarse por la exposición a algún tipo de agente externo que
ocasionó estas respuestas. Mathew et al.(2002) mencionan que los contaminantes
ambientales tienen el potencial de actuar como inmunosupresores en tejidos diana, por
47
ello afectan la función de un tipo específico de células y posiblemente la interrupción de
resistencia del huésped.
Esto nos puede decir que las secreciones encontradas aparecieron como un intento por
combatir el estrés por algún contaminante, causando procesos inflamatorios como los
observados en ambas épocas. Cabe señalar que los procesos inflamatorios variaron en
intensidad entre épocas. Los ostiones con mayores daños tisulares se presentaron en
época nortes, puesto que la mayoría de los epitelios del tracto digestivo había
abundantes secreciones eosinófilas al punto incluso de causar grandes deformaciones y
perdida del mismo. En algunas estructuras digestivas éstas eran tan abundantes que su
forma particular de “herradura” se perdía.
Entre los factores que pueden influenciar el estado de salud de los ostiones durante
época nortes están los aportes fluviales que provocan un mayor acarreo de materia
orgánica e inorgánica a la Laguna; principalmente por parte del río Papaloapan que
pudo estar acarreando varios contaminantes provenientes de los monocultivos que se
practican en la región de Alvarado.
Estos monocultivos se caracterizan por requerir grandes cantidades de agroquímicos,
particularmente los fertilizantes que contienen Cd que es comúnmente aplicado al
cultivo de frijol, chile verde, naranjas y eventualmente lixiviados desde el suelo y
finalmente transportados por los ríos hasta llegar a la Laguna de Alvarado (Lango-
Reynoso et al., 2010).
48
La remisión de contaminantes desde el sedimento podrían estar relacionados al mayor
daño tisular encontrado en época nortes ya que los ostiones al estar asociados al bentos
pudieran estar más expuestos a contaminantes de la zona. Palmerín- Ruiz (2010)
encontró durante época nortes, en el mismo sitio de muestreo del presente trabajo los
niveles mas altos de materia orgánica, adjudicándolo a la hidrodinámica del lugar ya
que al estar en el centro de la laguna la circulación de las masas de agua es mínima y
con poca profundidad (1.5.m) lo que a su vez provoca la acumulación de materia
orgánica.La materia orgánica mantiene compuestos organoclorados en el sedimento, el
autor reportó los niveles mas elevados de organoclorados precisamente en época nortes
y encontró la mayor concentración de organoclorados totales hacia la zona sur del
sistema lagunar.
La materia orgánica también tienen gran afinidad con los metales pesados ya que se
unen a ella permaneciendo por largo tiempo (Boening, 1999). Uno de los metales
críticos es el cobre ya que Guzmán-Amaya et al (2005) encontró concentraciones en C.
virginica que rebasan la norma mexicana (NOM-031-SSA1-1993) e internacional
(FDA).
Los daños tisulares en este trabajo fueron inflamación, pérdida de epitelio de
revestimiento general en el tracto digestivo, así como la activación de mecanismos de
defensa como fueron las células cafés, que al actuar como lisosomas degradan y
desintoxican al ostión de todo material tóxico. Estas lesiones han sido reportadas por
Guzmán-Garcíaet al. (2007) dentro de los mecanismos primarios de defensa ante la
exposición de Cd. Guzmán- Amaya et al., 2005 ya había reportado altos niveles de este
metal en los ostiones de la laguna de Alvarado por lo que eventualmente
49
concentraciones de este metal podrían inducir daños primarios en el tracto digestivo de
C. virginica.
Lango- Reynoso et al. (2010) estudiaron las concentraciones tisulares del Cd, Pb y
Arsénico (As) en C. virginica en la laguna de Tamiahua, Veracruz. Encontraron
mayores concentraciones de Cd en Manto-Músculo- Branquias (MMB) que en glándula
digestiva- gónada (GDG) ya que se cree que el MMB es el primer contacto con el agua
y al ser el ostión un organismo filtrador pues es más viable que se acumulen más los
metales en estas primeras estructuras que el GDD. Esto sugiere que los cambios en la
glándula digestiva pueden estar más relacionados con lesiones progresivas que generen
cambios deletéreos en la población.
En cuanto a la infección parasitaria no se encontró daño histológico en asociación a los
parásitos. Sin embargo en época de secas pese a que no se logró identificar el parásito se
ha reportado que el protozoario Perkinsus marinus es considerado como el patógeno
mas importante en la especie C. virginica. Este protozoario ha causado grandes
mortalidades tanto en su medio natural como en cultivo del ostión en el Golfo de
México y en la costa Atlántica de Estados Unidos (Gullian y Aguirre-Macedo, 2009).
Carnegie y Burreson (2009) encontraron mayor infección de P. marinus en C. virginica
conforme aumentaban las condiciones físicas, por ejemplo en los meses en que el
aporte de agua dulce al estuario disminuía y la salinidad aumentaba la infección era
devastadora. En cambio cuando aumentaba el aporte de agua dulce y la salinidad
disminuía, las infecciones por el protozoario bajaban de manera drástica.
50
Aguirre-Macedo et al. (2007) pese a que estudiaron entre protozoarios, bacterias y
helmintos encontraron como grupo infeccioso en la laguna Alvarado, Veracruz a las
bacterias, en especial las relacionadas a contaminación fecal. Los autores concluyeron
que su presencia se debía a la alta presión por actividad humana y la descarga de aguas
negras proveniente del poblado de Alvarado.
CONCLUSIONES
• Los parámetros fisicoquímicos correspondieron a los rangos presentados en una
laguna costera.
• El índice de estado reveló que el estado fisiológico del ostión fue óptimo.
• No se presentaron malos olores, ni deformaciones ni verme en los ostiones y los
organismos asociados fueron balanos>mejillones>poliquetos>cangrejo.
• Las estructuras observadas del aparato digestivo del ostión estuvo constituido
por esófago, estómago, saco del estilete, intestino medio, intestino descendente,
e intestino ascendente.
• La glándula digestiva estuvo conformada por túbulos primarios y secundarios
con 5 fases, las cuales fueron absorción<desintegración>reconstitución en ambas
épocas.
• La proporción de hembras fue mayor que machos en ambas épocas. En época
seca los ostiones estuvieron sexualmente maduros y en época nortes desovaron.
51
• En la época de nortes las células cafés fueron más abundantes asociado con el
deterioro de los epitelios. Por lo que las células cafés podrán estar asociados con
mecanismos de defensa ante daños tisulares.
• El estado de salud del ostión en la Laguna de Alvarado, Veracruz no es crítica a
pesar de encontrar procesos inflamatorios ya que estos no fueron muy graves e
incluso en la época que se encontró mayor inflamación los organismos lograron
desovar.
RECOMENDACIONES
• En la parte técnica es recomendable dejar a los ostiones casi a un mes en
fijación, ya que uno de los principales problemas fueron las mellas que se hacían
en los cortes por no haberse fijado bien el tejido.
• Complementar el estudio tisular con manto-músculo-branquia para contar con
mayores elementos que puedan aportar mayor conocimiento de las condiciones
fisiológicas del ostión en su medio natural.
• El biomarcador de efecto (histopatología) sí respondió ya que permitió apreciar
los cambios tisulares a través de la técnica histológica H-E, por lo que es
recomendable utilizar la glándula digestiva como diagnóstico del estado
fisiológico del ostión.
52
BIBLIOGRAFÍA
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proposal for a protocol to assess aquatic pollution. Journal of Fish Diseases. 22:
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Anexo 1
Procesamiento de Deshidratación, Aclaración e infiltración
(Histoquinette, programa 9)
Reactivo HORA
OH 80% 1:30
OH 96% 1:30
OH 96% 1:30
OH 96% 1:30
OH 100% 1:30
OH 100% 1:30
OH 100% 1:30
Xilol 1:30
Xilol 1:30
Xilol-Parafina 1:30
Parafina 2
Parafina 2
62
Anexo 2
CAMPO
40 ostiones
Laguna Buen País, SLA.
2011
Seca
Nortes
Salinidad
Temperatura
pH
Lab. Ecotoxicología
UAMI
Hielera
Lavado
Epífitos
Epifauna
Índice de Estado
Características morfométricas
Desconcharon
10 organismos
60 °C
Peso seco
Histología
Formalina 10%
7 días
Enjuague
Cassetes
Deshidratación,aclaración e infiltración
Inclusión Parafina
Placa de enfriamiento
Microtomo de rotación
5 micras
Baño de flotación
Tren de tinción (H-E)
Análsis tisular
Microscopio óptico
Cámara digital
Identificación de fases y
contabilización de fases
1: Preparación
2: Absorción
3: Absorción y Desintegración, intermedio
4) Desintegración, 5: Reconstitución ,
Estadística
Fases