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Recibido: mayo 2014. Aprobado: mayo 2014.

Versin nal: julio 2014.

Saber, Universidad de Oriente, Venezuela.Vol. 26 N 4: 361-372. (2014)ISSN: 2343-6468 Digital / ISSN: 1315-0162 Impreso / Depsito Legal pp 198702SU187

ARTCULO DE REVISINAGROBIOLOGA

CITOGENTICA COMO HERRAMIENTA TAXONMICA EN PECESCYTOGENETICS AS A TAXONOMIC TOOL IN FISH

MAURONIRCHIO1,2, CLAUDIOOLIVEIRA3

1

Universidad de Oriente, Ncleo de Nueva Esparta, Escuela de Ciencias Aplicadas del Mar, Isla de Margarita,Venezuela, 2Universidad Tcnica de Machala, Facultad de Ciencias Agropecuarias, Ecuador,3UniversidadeEstadual Paulista, Instituto de Biocincias, Departamento de Morfologia, Botucatu, So Paulo, Brasil.

E-mail: [email protected]

RESUMEN

Se presenta una descripcin general de las tcnicas bsicas y moleculares ms comnmente empleadas para elestudio de los cromosomas en los peces, con ejemplos que demuestran la utilidad de la citogentica para resolver

problemas de tipo taxonmico, particularmente cuando las caracter sticas mersticas o morfomtricas no permitenuna clara diferenciacin entre especies.

PALABRASCLAVE: Cromosomas, cariotipo, morfometra.

ABSTRACT

This document presents a general overview on the basic and molecular techniques more commonly employedfor the study of chromosomes in shes, with examples that demonstrate the usefulness of cytogenetics toresolve taxonomic problems, particularly when meristic or morphometric characteristic do not result in a cleardifferentiation between species.

KEYWORDS: Chromosomes, karyotype, morphometry.

Figura 1. Nmero de nuevas especies de peces descritas en el mundo por ao (datos tomados de Eschmeyer y Fong 2014).

INTRODUCCIN

Los peces constituyen un grupo parafiltico querepresenta ms de la mitad de las 55.000 especies devertebrados vivientes (Helfman et al. 2009). Mientras ladescripcin de nuevas especies pertenecientes al grupo delos anbios, reptiles, aves y mamferos no es muy frecuente,hasta ahora han sido reconocidas 33.065 especies de peces(Eschmeyer y Fong 2014) y el registro anual indicaque existe una tendencia a que los descubrimientos de

nuevas especies se incrementen (Fig. 1), lo cual reeja laimportancia esencial de distinguir unidades taxonmicas

para el entendimiento fundamental de la biodiversidadde los peces y su conservacin mediante la delimitacin,descripcin y asignacin de nombres a las especies con

base en normas establecidas (Taxonoma) y la evaluacinde las relaciones de parentesco entre ellas o entre taxonessuperiores como Familias y rdenes (Sistemtica)mediante el estudio de caracteres especcos (variacionesde estructuras homlogas).


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NIRCHIOYOLIVEIRA

Los caracteres tradicionalmente empleados entaxonoma pueden incluir cualquier diferencia descriptiblecomo el color, la presencia de rayas, manchas, nmero y

posicin de fotforos, estructuras sexualmente dimrcasque pueden tener valor funcional, incluyendo rganos

usados por los machos para inseminar a las hembras comoel gonopodio de los guppy o los pterigopodios de loscondrctios. Tambin pueden corresponder a estructurasque pueden ser contadas como el nmero de escamas,arcos branquiales, poros ceflicos, espinas y radios delas aletas, entre otros (mersticos); o aquellas variablescontinuas que pueden ser medidas (morfomtricas) comola longitud estndar, longitud de las aletas, dimetro de losojos, altura del cuerpo, ancho de la cabeza o proporcionesentre ellas aunque son ms difciles de definir conexactitud y, al estar sujetas a ser medidas con diferentesgrados de precisin, son menos fcilmente repetibles,adems de estar expuestas al problema de la alometra,

es decir, que la longitud de diferentes partes del cuerpopueden cambiar con el desarrollo del individuo (Helfmanet al. 2009).

Una herramienta que ha demostrado ser de gran utilidadpara generar informacin importante para la distincin deespecies en los peces es la Citogentica. En sus principios,los estudios citogenticos en peces resultaron tediosos y

poco informativos debido a la obtencin de metafases depoca calidad para el anlisis a causa del pequeo tamao ymayor nmero de sus cromosomas en comparacin con losde los mamferos. Sin embargo, a partir de la publicacinde McPhail y Jones (1966), con una metodologa para laobtencin de preparaciones cromosmicas mediante eluso de clulas en suspensin, se logr un gran avance. A

partir de ah, la incorporacin de modicaciones como eltratamiento con colchicina y optimizacin en el tiempo detratamiento hipotnico de las clulas y con la aplicacin de

procedimientos para la estimulacin de la mitosis, result

en la obtencin de un mayor nmero de clulas mitticasdisponibles para la preparacin de los cromosomasmetafsicos de buena calidad en especies marinas y deagua dulce, allanando el camino para la consolidacin del

protocolo que se emplea actualmente con gran xito en la

mayora de los laboratorios (Foresti 2008).

Hasta el ao 2011, haban sido obtenidos datos sobreel nmero de cromosomas y frmula cariotpica para3.425 especies y subespecies vivientes de agnatos, pecescartilaginosos, actinopterigios y sarcopterigios (Arai2011). No obstante, esa informacin apenas representauna pequea fraccin de todas las especies reconocidas de

peces existentes (aproximadamente el 10,36%). Aun as,el empleo de tcnicas como el bandeo C para estudiar ladistribucin de heterocromatina constitutiva, localizacinde regiones organizadoras del nuclolo por impregnacincon nitrato de plata (Ag-RONs), el uso de uorocromos

base-especcos y la identicacin de secuencias deADN en los cromosomas mediante Hibridacin in situuorescente, han contribuido de manera importante alestudio de las relaciones y la clasicacin de la ictiofauna,

permitiendo resolver problemas difciles de esclarecermediante la taxonoma clsica. Veamos a grandes rasgoslas principales caractersticas citogenticas y las tcnicasque son empleadas ms frecuentemente para el estudiode los cromosomas de los peces.

Cariotipo, Nmero Diploide (2n) y NmeroFundamental (FN)

El cariotipo es el patrn cromosmico de una especieexpresado a travs de la descripcin del nmero, tamaoy forma de cada tipo de cromosoma del set completo decromosomas agrupados en pares homlogos y ordenadossegn su tamao y forma, desde el ms grande al ms

pequeo (Fig. 2).

Figura 2. Cromosomas de Opistognatus macrognatusordenados segn tipo y tamao (tomado de Nirchio et al. 2012).


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Citogentica como herramienta t axonmica en peces.....

El nmero de cromosomas generalmente se determinaen la mitosis y es denominado nmero diploide (2n),excepto en organismos poliploides en cuyo caso es citadoel nmero base o nmero de cromosomas del genoma dela serie original haploide. El nmero de cromosomas es

generalmente constante en una especie, as como tambinla forma, tamao, posicin del centrmero, nmero ylocalizacin de genes ribosomales (NORs, 18S rDNA,5S rDNA) y cantidad y distribucin de la heterocromatinaconstitutiva, permitiendo que estas caractersticas puedanser empleadas como una poderosa herramienta paradiferenciar especies cuando los cromosomas son losucientemente grandes para su observacin microscpica.

Un descriptor citogentico comn es el nmerototal de brazos o nmero fundamental (NF), el cual esdefinido como la cantidad de brazos cortos y largos

presentes en un cariotipo (Matthey 1945, 1965) y es un

indicador de la proporcin de cromosomas acrocntricosfrente a la cantidad de cromosomas metacntricos ysubmetacntricos presentes en un cariotipo. El NF

puede variar dependiendo del criterio adoptado parasu determinacin. Algunos autores cuentan todos los

brazos visibles de los cromosomas mientras que otrosno consideran los brazos diminutos de cromosomasacrocntricos pequeos o cromosomas subtelocntricos.Las diferencias en el NF dentro de una misma especie oentre individuos de localidades geogrcas diferentes,cuando el nmero diploide es constante, indican laocurrencia de cambios estructurales en el complementocromosmico como consecuencia de modicaciones en sumorfologa sin variacin en el nmero de cromosomas y

permiten establecer hiptesis sobre la dinmica evolutivadel cariotipo.

Por ejemplo, si en dos especies relacionadas y con elmismo nmero cromosmico se encuentra una disminucindel NF en un cariotipo en comparacin con el otro, es

posible suponer que a partir del cariotipo original pudieronocurrir inversiones pericentromricas de un cromosomameta o submetacntrico dando origen a un cromosomaacrocntrico y, por lo tanto, la visualizacin del brazo cortovisible de ese cromosoma original deja de contabilizarse,

en tanto que las fusiones cntricas no tienen efecto en losnmeros fundamentales, pero s en la reduccin de losnmeros cromosmicos entre las especies comparadas.

Regiones organizadoras de nuclolos (RONs) y DNAribosomal

El nuclolo corresponde a una regin especficadentro del ncleo interfsico de la clula eucaritica, y

puede ser observado con el microscopio de luz comouna o ms estructuras esfricas de tamao variable, peroen general grande, en aquellas clulas con alta tasa desntesis protenica. A medida que transcurre la divisincelular, disminuye la tasa metablica celular y el nuclolo

va desapareciendo, reapareciendo en el ncleo telofsico.El nuclolo est constituido por DNA ribosomal (rDNA),RNA ribosmico (rRNA) y protenas y es responsablede la formacin de los ribosomas que son las estructurasligadas a la sntesis protenica en el citoplasma celular.En realidad, el nuclolo corresponde a las regiones dondese localizan las secuencias de rDNA responsables de latranscripcin que, aun estando localizadas en cromosomasdistintos, se asocian ntimamente y se denominan RegionesOrganizadoras del Nuclolo (NORs). En los peces, las

NORs generalmente estn ubicadas en constriccionessecundarias de los cromosomas, pueden observarse enun solo par cromosmico (Nirchio et al. 2001, 2003a,b,

Alves et al. 2012), o distribuidas en varios cromosomasdel complemento (Nirchio et al. 2007a, 2008, Monteiroet al. 2008, Alves et al. 2012 ) y su nmero, posicin ylocalizacin cromosmica es especie-especca para variosgrupos de peces (Kavalco et al. 2005, Nirchio et al. 2005,Diniz et al. 2009).

Los genes ribosomales se encuentran organizadoscomo secuencias repetitivas en tndem separadas unasde otras por segmentos espaciadores (Fig. 3). Cada unade estas secuencias es responsable de la sntesis de unamolcula precursora de rRNA de tamao 40S o 45S ala que se asocian protenas no-histnicas formando uncomplejo de ribonucleoprotena. En detalle, cada unidadde transcripcin tiene la misma organizacin, siendoreconocidos en direccin 53 un segmento externo(ETS), una secuencia de rRNA 18S, un segmento intercalar1 (ITS1), una secuencia de rRNA 5,8S, un segmentointercalar 2 (ITS2) seguido de una secuencia de rRNA28S. Al contrario del espaciador, tambin conocidocomo IGS, que no transcribe, los segmentos ETS, ITS1,ITS2 son transcritos, estn presentes en el transcripto

primario o rRNA pre-ribosmico pero no hacen parte dela molcula de rRNA y efectivamente harn parte de losribosomas, siendo eliminados durante el metabolismo

post-transcripcional en un proceso tambin conocidocomo modicaciones postranscripcionales o maduracindel RNA (Sumner 2003, beda-Manzanaro et al. 2010).El rRNA 18S y las protenas forman la subunidad menorde los ribosomas mientras que los rRNA 28S, 5,8S y 5Sms las protenas forman parte de la subunidad mayor. Lamolcula 5S tambin es transcrita por genes repetitivos

pero localizados fuera de las NORs y con frecuencia encromosomas distintos (Grifths et al. 2012).


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Las NORs pueden ser visualizadas de formaindirecta, por el mtodo de paso nico de Howell yBlack (1980), tcnica que se basa en la anidad que

presenta el nit rato de plata por las protenas cidascomo la nucleolina asociada a la estructura brilardel nuclolo y el pre-ARN naciente. Estas protenas

persisten en la regin de la constriccin secundariadurante todo el ciclo celular, permitiendo colorear losnuclolos en interfase y dichas regiones en cromosomasmetafsicos (Fig. 4). Sin embargo, debe tenerse precaucinal interpretar los resultados obtenidos mediante latcnica de impregnacin con nitrato de plata debido a

Figura 3. Organizacin del cistrn y transcripto primario que codica los genes ribosomales con la localizacin de los distintos tipos de rRNA enel ribosoma eucaritico.


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Figura 5. Bandas-C restringidas a los centrmeros de todos loscromosomas de tres especies de Lutjanidae. Lutjanus analis (a),

L. griseus (b), L. synagriscitotipo I (c) y L. synagris citotipo II (d)(tomado de Nirchio et al. 2008).

Figura 4. Metafase de Catorops spixiiprimero teida con colorante de Giemsa (izquierda) y luego mediante impregnacin argntica (derecha). Lasechas indican las NORs marcadas en los cromosomas y en el ncleo interfsico.

que otras estructuras, adems de las NORs, pueden sercoloreadas con las sales de plata, tales como algunasheterocromatinas, histonas, ncleos cromosmicos,

complejos sinaptonmicos y principalmente cinetocoros(Sumner 1990, Dobigny et al. 2002).

Heterocromatina Constitutiva

El trmino bandas-C se emplea para designarlas regiones de heterocromatina constitutiva que

predominantemente contienen secuencias de DNAaltamente repetidas e inactivas durante la transcripcin. Latcnica de bandeo-C ms comnmente utilizada (Sumner1972) involucra la depurinizacin de la cromatina contratamiento cido (HCl), desnaturalizacin del DNAcon tratamiento alcalino (BaOH), quiebre de las cadenasde DNA en los sitios depurinizados y remocin de lascadenas de DNA desnaturalizado en solucin salinacaliente (2xSSC) (Comings 1978) lo que permite, luegode la tincin con colorante de Giemsa, revelar bloques msintensamente coloreados que el material cromosmicorestante, el cual presenta una coloracin ms plida.Estas marcaciones o bandas C ocurren frecuentementeen la regin de los centrmeros o prximas a ellos (deall la designacin con la letra C) (Fig. 5), aunque puedeestar presente en los telmeros y regiones intersticiales.

En peces, el anlisis comparativo de la distribucin de laheterocromatina constitutiva a lo largo de los cromosomasha sido utilizado para la identicacin de polimorsmoscromosmicos (Molina 1995) para la identicacin decromosomas sexuales (Galetti y Foresti 1986, Andreattaet al. 1992) y para caracterizar las especies o grupos deespecies (Caputo et al. 1996, Ferreira et al. 2005, Ruber etal. 2011, Valente et al. 2012), contribuyendo a una mayorcomprensin de las relaciones genticas y evolutivas

dentro de y entre los diferentes grupos.

Hibridacin in situfuorescente

Es una tcnica ms especfica (FISH, en ingls,fuorescent in situ hybridization) que permite, con sondasespeccas de ADN, la deteccin de un gen o grupo de


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genes o aun de secuencias particulares, en diferentes estadosde la cromatina en el ncleo interfsicos, en cromosomasmitticos y/o meiticos. Primero, la muestra de ADN(cromosomas metafsicos o ncleos en interfase) debe serdesnaturalizada mediante altas temperaturas para separar

las hebras complementarias de la estructura en doble hlicedel ADN y aadir entonces la sonda de inters (tambindesnaturalizada), que ha sido marcada con uorescencia,que se hibridar al ADN de la muestra en el sitio en el

que se encuentra los genes que se desean localizar en elcromosoma, en un proceso denominado templado, en el quese vuelve a formar la doble hlice (Nirchio y Oliveira 2006).Las sondas son fragmentos de DNA de aproximadamente100-500 pb, lo que permite su penetracin hasta los sitios en

los que se encuentran los genes en los cromosomas. Estassondas poseen algn nucletido modicado acoplado a unamolcula marcadora que permitir su localizacin medianteun microscopio de uorescencia (Fig. 6).

Ejemplos de la aplicacin la citogentica en problemastaxonmicos en peces

La literatura sobre la aplicacin de los datos

citogenticos en los estudios de la biologa comparativa delos peces es muy amplia, con un gran nmero de ejemplosque muestran su grado de eciencia. A continuacin sereeren algunos a n de ilustrar la ecacia de las tcnicascitogenticas para la identicacin de especies.

Mugilidae

Debido a que los caracteres morfolgicos externos

son muy conservativos entre las especies de este grupo, lafamilia ha sido objeto de numerosas revisiones sistemticastanto a nivel de gnero como de especie y, en algunos casos,las sutiles diferencias interespeccas de los caracteres

mersticos y morfomtricos han contribuido con el aumentode numerosos problemas taxonmicos y de nomenclatura enel grupo. Por ejemplo,MugilcuremayM. gaimardianus,haban sido consideradas como dos especies diferentesestrechamente emparentadas, diferenciables solo por elcolor del iris del ojo en especmenes vivos, la longitudde la aleta pectoral y el nmero de series oblicuas deescamas a lo largo de la lnea lateral. Sin embargo, el colordel iris se pierde en especmenes preservados y las aletas

Figura 6. Metafases de of Rhomboplitesaurorubens (a-b) y Ocyuruschrysurus(c-d) despus de haber sido sometidas a FISH con 18S rDNA(izquierda) y con 5S rDNA (derecha). Las echas indican los cromosomas portadores de los genes ribosomales mayores (18S rDNA). Las puntas deechas indican los cromosomas portadores de los genes ribosomales menores (5S rDNA).


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muchas veces se deterioran durante la captura por lo quese recurre principalmente al nmero de series oblicuasde escamas como criterio para diferenciar especies. Noobstante, la amplitud del intervalo del nmero de escamascaracterstico para estas dos especies, lo convierte en una

variable de poca fortaleza como nico carcter diagnstico,debido a que los valores se solapan en ambas entidadestaxonmicas, de tal manera que Menezes (1983) indica que

M. curemaposee de 36 a 40 series laterales de escamasyM. gaimardianusde 35 a 38, mientras que Cervign(1993) seala entre 37 y 40 paraM. curemay entre 35 y39 para M. gaimardianus. Por otro lado, la descripcinoriginal de M. gaimardianus cre diversos problemastaxonmicos en el pasado debido a la descripcin ambiguade la especie y la aparente prdida del espcimen tipo.Por esa razn, elInternational Committee on Zoological

Nomenclature invalid el nombre Mugilgaimardianus(ICZN 1994) y procedi a declararlo nomina dubia y

consecuentemente como una sinonimia deM. curema. Sinembargo, el estudio citogentico demostr que existannotables diferencias en el nmero y tipo de cromosomasentre ejemplares que concordaban con la descripcindeM. curemay aquellos que podran clasicarse como

M. gaimardianus, sobre la base del color rojo del irisdel ojo. De hecho, M. curemaposee un cariotipo 2n =24 compuesto por 22 cromosomas metacntricos y 2submetacntricos mientras las supuestasM. gaimardianus

poseen un cariotipo 2n = 48 constituido por cromosomasenteramente acrocntricos (Nirchio et al. 2003b, 2007b)(Fig. 7). Esta evidencia necesariamente condujo a revisar lasituacin sistemtica de estas dos entidades taxonmicas,revelando que en realidad se trataba de dos especiesdiferentes,M. curemayM. rubrioculus (antes denominada

gaimardianus) (Harrison et al. 2007) demostrndose elpoder de la citogentica como herramienta para distinguirentre especies de Mugilidae.

Figura 7. Fotograas deMugilcuremayMugilrubrioculuscon sus respectivos cariotipos.

Gymnotidae

En un estudio en el que fueron examinados loscariotipos de cinco poblaciones morfolgicamenteindistinguibles del pez cuchillo elctrico de la Amazoniaoriental de Brasil, identicados inequvocamente como

Gymnotus caraposensu stricto sobre la base de lapigmentacin, caracteres mersticos y morfologa externa,se encontr que los especmenes de una de las cincolocalidades exhibieron un cariotipo 2n = 40 (34M/SM +6ST/A) no documentado previamente para especies delgnero Gymnotusen la cuenca del Amazonas, mientras


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que especmenes procedentes de otras cuatro localidadesexhibieron un cariotipo 2n = 42 (30M/SM + 12ST/A),que ya haba sido descrito (Milhomem et al. 2008). Ladiferencia entre los dos cariotipos en el nmero diploidey morfologa de los cromosomas fue explicada como

consecuencia de eventos de fusin-sin y tambin porinversiones pericntricas. La presencia de secuenciastelomricas intersticiales detectadas mediante el ensayoFISH en un par de cromosomas metacntricos en la

poblacin con cariotipo 2n = 40 sugiri que esa poblacinse ha diferenciado como una especie diferente respecto alas que poseen cariotipo 2n = 42.

Haemulidae

El gneroHaemulonperteneciente a los Haemulinaese encuentra representado en Venezuela por 14 especiesreconocidas (Cervign 1993), de las cuales, hasta ahora

han sido cariotipadas solo siete, encontrndose, en todoslos casos, un complemento 2n = 48A, muy difcil dediferenciar entre especies cuando solo se considera elcariotipo convencional teido con Giemsa (Fig 8).

Un anlisis ms detallado empleando las tcnicasde impregnacin con nitrato de plata, bandeo-C ymapeo de los genes ribosomales 18S-rDNA y 5S-DNAen Haemulon aurolineatum , H. bonariensi s y H.

plumierii(Nirchio et al. 2007c) mostr que, si bien esastres especies presentan caractersticas citogenticasconservadas (nmero diploide, presencia y ubicacinde constricciones secundarias en el cromosoma 24,ubicacin de los clster 18S rDNA), la distribucinde bandas C, y la localizacin de los cluster 5S-rDNA

permiti la clara diferenciacin deH. aurolineatumdelas otras dos especies (Fig. 9).

Figura 8. Cariotipos deHaemulon aurolineatum(A),H. bonariense(B),H. plumierii(C),H. sciurus(D),H. favolineatum(E) y Orthopristis ruber(F). A la derecha del cariotipo se muestra una fotografa de la especie.


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Characidae

La caracterizacin citogentica de seis especiesde Astyanax (A. altiparanae, A. argyrimarginatus, A.elachylepis, A. xavante,y dos especies provisionalmentellamadas Astyanax sp. y A. aff. bimaculatus, mediantetincin convencional con Giemsa, AgNORs, bandeo-C,fluorocromo base-especficos, y mapeo de los genesribosomales 18S y 5S mostr un nmero diploide 2n= 50 para cinco especies y 2n = 52 en Astyanax sp.,identicando pequeas variaciones macroestructurales(Tenrio et al. 2013) en los cariotipos que fueron atribuidas

principalmente a cambios en la cantidad y distribucinde heterocromatina constitutiva entre las especies de

Astyanaxcon 2n = 50. Asimismo, en Astyanaxsp. con2n = 52, adems de la variacin en la distribucin de laheterocromatina constitutiva, parece haberse producido unevento de sin cntrica en un par cromosmico seguidode reorganizaciones posteriores menores, con lo que seevidencia la notable diversidad cariotpica que caracterizaa este grupo e indica, segn Tenrio et al. (2013) lanecesidad de una revisin taxonmica para incluirA. aff.bimaculatusyAstyanaxsp. como nuevas especies con la

posible inclusin deAstyanaxsp. en otro gnero.

Parodontidae

As como en los casos anteriores las caractersticascromosmicas permitieron establecer claramentediferencias a nivel especfico, estudios citogenticosen Parodon nasus y P. tortuosus (Parodontidae:Characiformes) mostraron que el nmero diploideobservado en ambas especies fue 2n = 54 (48M/SM

y 6ST) sin diferencias entre los sexos y que, a pesarde ligeras diferencias en el patrn de distribucinde la heterocromatina, la ubicacin de las regionesorganizadoras nucleolares (NORs) y de los genes rRNA5S fueron similares (Bellafronte et al. 2005), apoyandola opinin que sostiene queP. tortuosuses una sinonmiadeP. nasus.

Ariidae

La taxonoma de este grupo es incierta, con varioscasos de identicacin errnea. En un estudio citogenticorealizado por Sczepanski et al. (2010) para caracterizardos poblaciones de Genidensgenidensy dos poblacionesdeAspistorluniscutisde la costa sur de Brasil, utilizandotcnicas convencionales y sondas de hibridacin in situfluorescente con 18S rDNA se encontr que las dosespecies tenan el mismo nmero diploide (2n = 56),nmeros fundamentales altos y patrones de bandassimilares, corroborando as la homogeneidad cariotpica

propuesta para el grupo. Sin embargo, NORs nicas fueronencontradas en el gnero Genidensy mltiples enAspistor,lo que es considerado como un marcador citotaxonmicoimportante para este gnero.

Pimelodidae

En el caso de las especies del gneroPseudoplatystoma(Pimelodidae), distribuido en las principales cuencasuviales de Amrica del sur, la taxonoma tradicionalhaba reconocido solo tres especies pero anlisismorfolgicos elevaron su nmero a ocho, incluyendodos nuevas especies (Buitrago-Surez y Burr 2007), P.

Figura 9. Metafase que muestran la posicin de los cluster 5S rDNA deHaemulonaurolineatum(izquierda),H. bonariensis(centro), yH.plumierii(derecha). Las echas y puntas de echa indican la ubicacin de seales positivas fuertes y dbiles, respectivamente. Detalles de los cromosomas

portadores de los genes 5S rDNA se muestran en los cariotipos parciales y en los ideogramas bajo cada una de las metafases.


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orinocoense yP. metaense, distribuidas exclusivamenteen la cuenca del Orinoco. Estas especies presentancariotipos muy conservados (2n = 56) y similarescaractersticas citogenticas en trminos de distribucinde heterocromatina constitutiva y nmero y localizacin

de genes ribosomales mayores y menores. Sin embargo,el anlisis de secuencias de los genes mitocondrialesCitocromo b (1110 bp) y un fragmento del gen COI(432 bp) conrmaron la asignacin de P. metaense y

P. orinocoense a dos clados moleculares distintos dePseudoplatystomaidenticados en la cuenca del Orinoco.Las genealogas obtenidas con estos dos marcadoresmitocondriales conrman que los clados molecularesidenticados proporcionan apoyo para el reconocimientode solo algunos de las ocho morfoespecies descritas parael gneroPseudoplatystomaponiendo sobre el tapete lanecesidad de re-evaluar mediante anlisis morfolgicosy moleculares la monolia de algunos linajes (Nirchioet al. 2013).

CONCLUSIN

Los datos disponibles hasta la fecha indican quecaractersticas cromosmicas como posicin delcentrmero, nmero, tipo y posicin de RegionesOrganizadoras del Nuclolo, tamao absoluto yrelativo de los cromosomas, cantidad y distribucin deheterocromatina pueden ser investigadas en los pecescon tcnicas relativamente sencillas y al alcance demuchos laboratorios. Estas tcnicas, aplicadas cadavez a un mayor nmero de grupos, brindan valiososaportes para la resolucin de problemas taxonmicos,evolutivos y aplicados, permitiendo generar importanteinformacin para establecer la distincin entre especies,especies crpticas y razas cromosmicas, contribuyendo aldesarrollo de la citotaxonoma en los peces y acrecentandoas el conocimiento de su biodiversidad.

AGRADECIMIENTOS

Al Consejo de Investigacin de la Universidad deOriente, Venezuela y al Proyecto Prometeo de la Secretarade Educacin Superior, Ciencia, Tecnologa e Innovacin

de la Repblica de Ecuador.

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