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CARACTERES DIAGNÓSTICOS FOLIARES EN TÁXONES IBÉRICOSDE ISOETES L. (ISOETACEAE, PTERIDOPHYTA)

• por

CARMEN PRADA' & CRISTINA H. ROLLERF1 Facultad de Biología, Departamento de Biología Vegetal I, Universidad Complutense de Madrid.

E-28040 Madrid <[email protected]>5 Facultad de Ciencias Naturales y Museo. Paseo del Bosque, s/n. 1900 La Plata (Argentina)

<[email protected]>

Resumen

PRADA, C. & C.H. ROLLERI (2003). Caracteres diagnósticos foliares en táxones ibéricos deIsoetes L. (Isoetaceae, Pteridophyta). Anales Jará. Bot. Madrid 60(2): 371-386.

Se presenta un estudio de morfología foliar comparada en los táxones del género Isoetes quecrecen en la Península Ibérica: /. durieui e /. histrix (terrestres), /. setaceum, I. velatum subsp.velatum (anfibios) e /. brochonii, I. echinosporum, I. x hickeyi, I. lacustre, I. longissimum e/. velatum subsp. asturicense (acuáticos). Se incluye también en la comparación un taxon anfi-bio tetraploide no descrito, relacionado morfológicamente con /. velatum, que hasta su des-cripción se designa provisionalmente como Isoetes sp. Se estudiaron varias colecciones ibéri-cas y, en el caso de algunos táxones, se incluyeron ejemplares procedentes de otras localidadesde Europa y América, con el fin de contrastar los rasgos analizados. Los caracteres estudiadosfueron: ornamentaciones cuticulares, modelos epidérmicos y estomas (morfología, distribu-ción y dimensiones), contomo de las secciones transversales foliares, epidermis en corte(membrana cuticular, cutícula, ornamentaciones cuticulares), desarrollo relativo del mesofilo,presencia o ausencia y distribución del colénquima, diafragmas foliares y presencia o ausenciade protuberancias intercelulares pécticas de las células de los diafragmas (de tipo filamento).Todos los caracteres son independientes de la edad de los microfilos, de la madurez de las plan-tas y, en general, del habitat, y se observan por igual en material fresco o restaurado medianteuna técnica que se propone en este trabajo.

Palabras clave: mesofilo, modelos epidérmicos, morfología foliar, ornamentaciones cuticula-res, protuberancias intercelulares pécticas.

Abstract

PRADA, C. & C.H. ROLLERI (2003). Foliar diagnostic characters in Iberian species of Isoetes L.(Isoetaceae, Pteridophyta). Anales Jará. Bot. Madrid 60(2): 371-386 (in Spanish).

This is a comparative study of foliar morphology of the species of Isoetes L. growing in theIberian Península. The taxa included are /. durieui and /. histrix (terrestrial), /. setaceum, and/. velatum subsp. velatum (amphibious), and /. brochonii, I. echinosporum, I. x hickeyi, I. la-custre, I. longissimum and /. velatum subsp. asturicense (aquatic). Material of an undescribedamphibious tetraploid taxon related to /. velatum was also included in this study and referredas Isoetes sp. until proper description. Several Iberian collections, together with European andAmerican specimens of some of the taxa were analyzed. Selected diagnostic characters of themicrophylls are: cuticular ornamentation (striae, ridges and warts), cuticular flanges, epider-mal patterns, stomata distribution and dimensions, foliar transverse sectíons outline, degree ofdevelopment of the mesophyll, presence or absence, and distribution of the mechanical tissues(collenchyma), diaphragms, and presence or absence and type of intercellular pectic protuber-ances. All characters are stable, and do not vary with the age of the plants or the microphylls.Cuticular striae, ridges and warts, as well as stomata develop early in plantlets. Stomata presentin the microphylls of two aquatic taxa (/. longissimum, I. velatum subsp. asturicense) suggest

372 ANALES JARDÍN BOTÁNICO DE MADRID, 60(2) 2003

that their absence is not entirely due to influence of aquatic environment. Collenchyma occurs,also, in species growing in different habitats. Restored herbarium material proved to be asuseful as fresh or fixed material, an important advantage in the case of Isoetes species, manyof which grow in vulnerable áreas or are known only through herbarium specimens due todestruction of their pristine habitats.

Key words: mesophyll, epidermal patterns, foliar morphology, cuticular omamentation, inter-cellular pectic protuberances.

INTRODUCCIÓN

El género Isoetes L. es cosmopolita y estárepresentado por c. 150 táxones (TRYON &TRYON, 1982), cuya clasificación se ha basa-do principalmente en las adaptaciones al ha-bitat que ocupan (BAKER, 1880; MOTELAY &VENDRYÉS, 1882) o en la ornamentación delas esporas (PFEIFFER, 1922). En este génerollama la atención la escasez de rasgos diag-nósticos que se utilizan para la delimitaciónde los táxones. Los trabajos sobre caracteresvegetativos foliares son pocos y su aplicacióna la sistemática es muy infrecuente. PFEIFFER(1922) registra por primera vez la presenciade tejidos mecánicos hipodérmicos, a los queconsidera de sostén y no conductores ("peri-pheral bast"). HALL (1971) analiza caracteresdiversos, como la longitud de los microfilos,el número de canales protoxilemáticos pre-sentes en la venilla media de éstos, los tejidosmecánicos hipodérmicos (que interpretacomo colénquima), los tipos de células de losdiafragmas foliares y la presencia de protube-rancias intercelulares pécticas (POTGIETER &VAN WYK, 1992; ROLLERI & al., 1999), a lasque denomina "pelos internos". También esel primero en registrar ciertos rasgos epi-dérmicos, como las cuñas cuticulares sobre-levadas, las verrugas cuticulares ("tiny papil-lae") y la epidermis esporangial, aunque dudaacerca del valor taxonómico de todos estoscaracteres. PRADA (1979) realiza un estudiode los táxones ibéricos de Isoetes y retomalos caracteres analizados por HALL (1971),sobre la base de los cuales propone una clavepara su determinación. SHARMA & SINGH(1984) describen la epidermis de la lígula ylos pelos glandulares marginales de dicha es-tructura. KOTT & BRITTON (1985) estudiancaracteres foliares como la longitud, posicióny color de los microfilos, a los que otorganescaso valor taxonómico en los táxones trata-

dos, mientras que consideran otros rasgos,como la presencia o ausencia de estomas ycordones de sostén, como variables y depen-dientes del habitat. HICKEY (1986) y TAYLOR& HICKEY (1992) interpretan la presencia dealgunos caracteres morfológicos y anatómi-cos de los microfilos, tales como los filopo-dios, las bases foliares escamosas persisten-tes o los cordones colenquimáticos subepi-dérmicos, en ciertos grupos de táxones, comoresultado de la convergencia morfológicadebida a los cambios de habitat ocurridos alo largo de la historia evolutiva del género, yutilizan dichos caracteres para proponer unanueva división infragenérica. Más reciente-mente, ROMEO & al. (1999) estudian la es-tructura de los canales presentes en la vena delos microfilos, y TROIA & al. (1999), la ana-tomía foliar comparada de dos táxones terres-tres, /. durieui Bory e /. histrix Bory, pero laúnica diferencia significativa que destacan esel mayor tamaño de las células oclusivas delos estomas de /. durieui; también mencionanlas verrugas cuticulares ("papilas") y las cu-ñas cuticulares sobrelevadas ("ribbon-likestructures"), pero no les dan ninguna relevan-cia taxonómica. Las verrugas cuticulares hansido ilustradas con fotografías de microsco-pio electrónico de barrido por MUSSELMAN(2002) en un taxon sudafricano terrestre, nodescrito, del que se ilustran papilas, sin des-cribirlas ni analizarlas.

Aquí se presenta un estudio de caracteresfoliares en los táxones del género Isoetes quePRADA (1986) reconoce para la Península Ibé-rica: /. durieui Bory, /. echinosporum Durieu,/. histrix Bory, /. lacustre L., /. longissimumBory, /. setaceum Lam., /. velatum A. Braunsubsp. velatum, I. velatum A. Braun subsp. as-turicense (Laínz) Rivas-Mart. & Prada. De to-dos ellos se conoce la ploidía (PRADA, 1983;TAYLOR & HICKEY, 1992; GIOVANNINI & al.,2001; TROIA, 2001), que se indica en la ta-

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bla 1. Isoetes durieui e /. histrix son terrestres;Isoetes setaceum e /. velatum subsp. velatumson anfibios, y el resto de los analizados sonacuáticos, de ríos o de lagos de montaña.También se ha incluido en el estudio a /. bro-chonii Motelay, taxon pirenaico dodecaploi-de, acuático, derivado por alopoliploidía de/. echinosporum e /. lacustre (TAYLOR & Hic-KEY, 1992), a un híbrido hexaploide, /. x hic-keyi Taylor & Luebke (/. echinosporum x/. lacustre) y a un taxon nuevo, anfibio, tetra-ploide (Prada, inéd.), relacionado morfológi-camente con /. velatum, que por no haber sidodescrito formalmente aún se designará comoIsoetes sp. De algunos de estos táxones se es-tudiaron ejemplares procedentes de localida-des de Europa y América, con el fin de ponera prueba los rasgos analizados.

Isoetes durieui e /. histrix se caracterizan porla presencia de filopodios (BORY, 1844; PFEIF-

FER, 1922; PRADA, 1986; CESCA & PERUZZI,

2001), generalmente de mayor longitud en/. histrix. Debido a que la longitud de los filopo-dios es un carácter variable, se seleccionaronpara este estudio ejemplares de ambos táxonescon filopodios cortos y largos, para comprobarsi este rasgo se correlacionaba con otros.

Los caracteres foliares estudiados fueron:la epidermis en superficie, incluyendo orna-mentaciones cuticulares, modelos epidérmi-cos y estomas (morfología, distribución, célu-las periestomáticas y dimensiones); seccionestransversales foliares, con análisis del contor-no de las secciones, epidermis en corte (mem-brana cuticular, cutícula, ornamentacionescuticulares), grado de desarrollo relativo delmesofilo, presencia o ausencia, desarrollocomparado y distribución del colénquima su-bepidérmico, tipos de diafragmas foliares delas cámaras aeríferas y presencia o ausenciade protuberancias intercelulares pécticas enlas células de los diafragmas.

TABLA 1

CARACTERES EPIDÉRMICOS EN ISOETÁCEAS IBÉRICAS

Especie

/. echinosporum

I. x hickeyi

I. lacustre

I. brochonii

I. histrix

I. durieui

I. setaceum

I. velatumsubsp. velatum

I. velatumsubsp. asturicense

I. longissimum

Isoetes sp.

Ploidía

2x

6x

lOx

12x

2x

lOx

2x

2x

2x

4JC

4x

Radiocelular1

3-4:1

4-14:1

8-10:1

10-14:1

7-8:1/2-3:1

6-9:1/4-8:1

5-7:1/2-3:1

2,5-3:1/2-3:1

2-3:1/2-1:1

2-5:1/2-3:1

2-3:1/2-1:1

Dimensionesestomas2

-

-

-

-

(35)54(59) x(22)24(30)

(65)70(80)x(27,5)33(49)

(70)77(89) x(34)38(42)

(40)57,5(65) x(15)16(20)

(37,5)45(62,5) x(13)20(30)

(50)63(70) x(12)17(22,5)

(40)48(52,5) x(14,5)17(22)

N.° de célulasvecinas'

-

-

-

-

4-5(6)

4-5(6)

6-7

6-8

6-8

6-8

6-8

N.° de gruposde colénquima

3-2(1)

-

-

2(1)

4

4

4

30-40

8(10)

3(4)

30-40

PIP4

+

+

+

1 Relación longitud/anchura.2 Largo por ancho, en pin; entre paréntesis, valores extremos.' Número más frecuente de células periestomáticas (vecinas).' Presencia o ausencia de protuberancias intercelulares pécticas en las paredes de las células del mesofilo.


El estudio fue realizado con material frescoy también con material de herbario restaura-do, con el propósito de valorar hasta qué pun-to puede ser utilizado con asiduidad y con-fianza el material herborizado, ya que en Isoe-tes no sólo resulta importante ampliar el nú-mero de rasgos disponibles para sistematizarel género, sino que en algunos casos el mate-rial de herbario es el único disponible para unestudio, ya que muchos de los táxones crecenen medios vulnerables, fácilmente perturba-dos o incluso provienen de habitat parcial ototalmente destruidos en la actualidad.

MATERIALES Y MÉTODOS

Se utilizó el siguiente material de las co-lecciones efectuadas por una de las autoras(C. Prada) y de los herbarios BC, COI, JACA,LISE, MA, MACB, MAF y SEV (HOLMGREN

& al, 1990):

Isoetes brochonii MotelayFRA, Les Bouillouses, Lac du Vive, Prada s/n. Lac du

Vive, 31TDH21, Prada s/h.. MA 38687. Etang des Doug-nes, Herrero s/n. Ariége, vallée d'Orlu, pres Aix-les-Ther-mes, lac de Naguilles, Neyraut & al s/n., MA 471413.

Isoetes durieui BorySPA, CADE: Ubrique, Collado del Cuervo, Silvestre

65, SEV. Entre Tarifa y Algeciras, luque & al. 2176/78,SEV. MADRID: Entre Hoyo de Manzanares y ColmenarViejo, Prada s/n. Torrelodones, Prada s/n.

Isoetes echinosporum DurieuAN, Estanys de Pessons, Prada s/n.SPA, SORIA: Laguna Larga de Urbión, Montserrat

s/n., JACA.FRA, Les Bouillouses, Lac du Vive, Prada s/n.,

MACB 38686. Lac Noir, Herrero s/n. Les Bouillouses,Lac de Pradeillles, Prada s/n.

Isoetes x hickeyi W.C. Taylor & N. LuebkeSPA, LÉRIDA: Llac Petit de la Pera, Prada s/n.FRA, Les Bouillouses, Lac du Vive, Prada s/n.

Isoetes histrix Bory(incluyendo /. chaeturetii Mendes)

SPA, CÁCERES: Plasencia, Prada s/n. Abadía, hacia elembalse de Gabriel y Galán, Ramos & al. s/n. CÁDIZ: En-tre Tarifa y Algeciras, Luque & al, 2176/78 SEV. Sierradel Aljibe, Puerto de Gáliz, Silvestre 64, SEV. Ubrique,

Collado del Cuervo, Silvestre 65, SEV. CIUDAD REAL:Alcoba, Parque Nacional de Cabañeros, Be mal & Her-nández s/n. HUELVA: Laguna de la Dehesilla. Fuertes s/n.Coto de Doñana, Cubas s/n. LA CORUÑA: Torre de Hér-cules, Prada sin. MADRID: Torrelodones, Prada s/n. En-tre Hoyo de Manzanares y Colmenar Viejo, Prada s/n.PONTEVEDRA: Cabo Silleiro, Prada. s/n.

FRA, FINISTERE: Bigouden, Citoleuxs/n.POR, ALGARVE: Alrededores de Pinhal do Ludo, So-

brinho & Mendes, COI. Santa Margarida do Sado, Volk82-910. Evora, carretera N-18, km 46, Volk 82-459, Lei-ria versus Marinha Grande, Silva & al. s/n., LISE 80350.

Isoetes lacustre L.

AN, Estanys Furcat, Losa & Montserrat s/n., MAF.BUL, Montes Pirin, Lago Muratovo, Burgaz & al.

s/h., MACB 51516.SPA, LÉRIDA: Pallars Sobira. Estanys d'Unarre, Ma-

salles & Minot s/n., MA18850. Estanys de la Pera, Pradas/n., MACB 38685. Lac d'Anglade, Vieille Aure, Mont-serrat s/n., JACA. Estanque hacia el Estany Negre, Mont-serrat s/n., JACA. Estany de Cavallers, Val d'Aran, MA2357. Etang de Garguilles, au cirque de Colomés, Estival,s/n., BC 82417.

USA, WISCONSIN: Oneida Co., Pelican Lake, Pradas/n., MA 32678.

FRA, Aix-les-Thermes, lac de Naguilles, Neyraut &al. s/n., MA 471413. Les Bouillouses, Lac Long, Pradas/n. Lac d'Oredon, Dussaussois s/n.

Isoetes longissimum Bory

SPA, LA CORUÑA: Teijeiro, río Mandeo, Prada s/n.

Isoetes setaceum Lam.

SPA, HUELVA: Laguna de la Dehesilla, Fuertes s/n.

Isoetes velatum A. Braun subsp. velatum

SPA, HUELVA: Coto de Doñana, laguna del Navazodel Toro, Prada s/n. MADRID: Gargantilla del Lozoya,Prada s/n. ZAMORA: Rivadelago, Prada s/n.

Isoetes velatum subsp. asturicense (Laínz)Rivas-Mart. & Prada

SPA, ASTURIAS: Leitariegos, laguna de Arvás, Pra-da s/n.

Isoetes sp.

SPA, CÁCERES: RÍO Búrdalo, Prada s/n.

Las observaciones se han realizado con mi-croscopio óptico y electrónico de barrido, y enlos estudios se utilizó material de herbario res-taurado y material fresco, este último directa-mente o bien mantenido en una solución con-


servadora formada por una mezcla de alcohol95 (54 %), glicerina (24 %), agua (21 %) y for-mol (1 %).

La restauración del material de herbario seefectúa hirviendo los microfilos o trozos deellos en agua y detergente, en agitador, duran-te 5-6 minutos, colocándolos luego en estufa a50 °C durante 4-6 días sumergidos en éter mo-nobutílico del etilenglicol (butil cellosolve o"aerosol OT"; AYENSU, 1967) diluido en aguaen proporción 3:1. Tras ese período se retirande la estufa y se fijan durante 3-4 semanas enla solución mencionada arriba (mezcla fijado-ra y conservadora para material frágil), quesirve para completar el efecto de expansióndel butil cellosolve, pero que adicionalmentefija y da coherencia y elasticidad al materialtratado. Éste recupera casi por completo el ta-maño y la forma previos a la herborización ypuede tratarse como si fuera fresco.

Para estudios de epidermis en superficie seefectuaron aclarados. El material fresco y deherbario se diafanizó (aclaró) con hidróxidode sodio 2 % acuoso durante 20-40 minutos,se trató con hipoclorito de sodio comercial di-luido 1:1 hasta su vaciado completo, se lavórepetidamente con agua corriente, se coloreócon TBO (azul de toluidina O) 1 % acuoso du-rante 15 minutos y se montó en glicerina. Paralos estudios de epidermis en superficie conejemplares de herbario el material puede acla-rarse sin necesidad de restauración previa.

Para cortes transversales de material frescoy fijado se procedió directamente, efectuandocortes a mano alzada que se observaron mon-tados en glicerina. Para cortes transversalesde material de herbario los microfilos se res-tauraron como se indicó arriba, se colorearoncon TBO 1 % acuoso y se cortaron a mano al-zada una vez coloreados. El TBO (FEDER &O'BRIEN, 1968; POTGIETER & VAN WYK,1992; ROLLERI & al., 1999) es un coloranteefectivo para poner en evidencia paredes pec-tinadas (colénquima, protuberancias interce-lulares pécticas) y polifenoles (paredes inci-pientemente esclerosadas).

Las medidas de los estomas y los radios ce-lulares (relación longitud/anchura) se toma-ron en todos los ejemplares estudiados. Losvalores de los radios celulares representan la

media de la medidas tomadas en todas las cé-lulas presentes en diez campos elegidos alazar, tanto en epifitos como en hipofilos, ob-servados con 200 aumentos (c. 0,25 mm2).Las dimensiones de los estomas representanla media de veinticinco medidas por cada mi-crofilo, efectuadas en todos los ejemplares re-visados. Las ilustraciones de los diversos as-pectos de la morfología interna se realizaroncon un microscopio Olympus CX 41 provistode cámara clara.

Para los estudios con microscopio electró-nico de barrido los fragmentos de microfilosse sometieron a fijación en punto crítico, semontaron sobre los soportes en plata coloidaly durofix, se metalizaron con oro bajo vacío yse fotografiaron con un microscopio JEOLJSM-T33OAal5KV.

La terminología utilizada para la membra-na cuticular es de STACE (1965); la correspon-diente a ornamentaciones cuticulares es la deWILKINSON (1979); la referente a epidermis yestomas es la utilizada por ROLLERI &. al.(1987, 1991, 2002, 2003), y la referente a lasprotuberancias intercelulares pécticas siguelas propuestas por POTGIETER & VAN WYK(1992) y ROLLERI & al. (1999). Las autorasconsideran al estoma como el conjunto for-mado por las dos células oclusivas y el poro uostíolo. El término "anexas" designa las célu-las periestomáticas morfológicamente dife-rentes de las epidérmicas adyacentes (FONTQUER, 1953; ROLLERI & al., 1987) y el térmi-no "vecinas" a las que no se distinguen de cé-lulas epidérmicas (ROLLERI & al., 1987). Eneste sentido, "anexas" es equivalente al térmi-no inglés subsidiar? cells, y el término "veci-nas", al inglés neighbouring cells (ROLLERI &al., 1987; LELLINGER, 2002). La designación"verruga cuticular" reemplaza a tiny papillae(HALL, 1971)opa/?i«ae(TROiA&a/., 1999),ya que el término papila se usa aquí para lascélulas marginales prominentes, de acuerdocon el concepto de las autoras y el de otros,como FONT QUER (1953) y WILKINSON(1979). Otros términos pteridológicos se en-cuentran definidos y justificados en LELLIN-GER (2002). Los nombres específicos, larga-mente utilizados en femenino, se utilizan aquíen neutro, de acuerdo con PRADA (1986).


RESULTADOS

Epidermis en superficie

Ornamentaciones cuticulares.-Las célulasepidérmicas de los táxones estudiados deIsoetes están cutinizadas. La cutícula suele es-tar ornamentada y la ornamentación estáconstituida por estrías, pliegues y verrugascuticulares (WILKINSON, 1979).

Las estrías son arrugas finas y paralelas quediscurren longitudinalmente pasando por en-cima de las paredes de contacto transversalesde las células epidérmicas; los pliegues sonarrugas notablemente más gruesas que las es-trías, igualmente longitudinales y aproxima-damente paralelas. Los pliegues se presentanen los táxones terrestres, como /. durieui (fig.la) e /. histrix. Las estrías aparecen en los tá-xones anfibios y acuáticos (fig. lb-d); de estasúltimas, /. brochonii se destaca por tener estrí-as discontinuas y muy someras. Isoetes echi-nosporum es el único taxon con cutícula lisa ysin ornamentación apreciable.

Las verrugas cuticulares se distribuyentanto en las paredes externas como sobre lospliegues y suelen ser heterogéneas en tamañoy prominencia. Solamente se encuentran enlos táxones terrestres (fig. la).

Las paredes de contacto de las células epi-dérmicas desarrollan cufias cuticulares ("cu-ticular flanges"; WILKINSON, 1979) que pue-den estar muy engrosadas y ser externamenteprominentes. Se observan como un gruesolomo o un gran pliegue continuo, sobreleva-do, situado sobre las paredes de contacto lon-gitudinales. Las cufias cuticulares estánparticularmente desarrolladas en /. durieui,I. histrix, I. lacustre e /. setaceum (fig. Ib),mientras que están ausentes en los táxonesrestantes, TROIA & al. (1999) las observaronen microfilos de /. durieui, pero las registra-ron someramente como "ribbon-like structu-res". Las ilustraciones de MUSSELMAN (2002)indican que también están presentes en táxo-nes sudafricanos y que las verrugas cuticu-lares se alinean sobre estas cuñas. Es un ca-rácter que, por el momento, parece vincularsecon táxones terrestres.

Así, la cutícula es lisa, sin cufias cuticu-

lares, en /. echinosporum; someramente es-triada, con estrías discontinuas y sin cuñascuticulares, en /. brochonii; estriada y sin cu-ñas cuticulares, en /. x hyckeyi, I. velatumsubsp. velatum (fig. le), /. longisssimum(fig. Id),/, velatum subsp. asturicense & Isoe-tes sp.; estriada y con cuñas cuticulares so-bresalientes, en /. setaceum e /. lacustre, y, fi-nalmente, plegada y verrucosa, con cuñas cu-ticulares prominentes, en /. durieui e /. his-trix. Todos estos rasgos se observan bien ensuperficie, tanto mediante el microscopioóptico como con el electrónico de barrido.Son visibles por igual en microfilos centraleso periféricos del cormo y se forman tempra-namente en los microfilos juveniles de lasplántulas. En los táxones terrestres son inde-pendientes de la ausencia o presencia y longi-tud de los filopodios.

Modelos epidérmicos.--En vista superfi-cial, las células epidérmicas tienen paredesrectas y se disponen con un modelo poligonalen todos los táxones estudiados. No se han ob-servado células epidérmicas con paredes si-nuosas, aunque SHARMA & SINGH (1984) lasilustran para la epidermis de la lígula.

La epidermis de los microfilos presentavariaciones en las células marginales, en losespesores relativos de las paredes celulares yen el radio celular (relación longitud/anchurade las células).

Arbitrariamente se han considerado delga-das las paredes celulares cuyo espesor es me-nor de 1 um, moderadamente gruesas aque-llas cuyo espesor está entre 1 y 1,5 um, y muygruesas las paredes cuyo espesor excede2um.

Las paredes celulares son delgadas en lasepidermis de /. lacustre, I. longissimum, I. ve-latum subsp. velatum e /. velatum subsp. astu-ricense y moderadamente gruesas en los de-más táxones, mientras que son muy gruesassolamente en /. brochonii. Este carácter seaprecia en superficie solo con 1000 aumentosy es más obvio cuando se analiza la epidermisen sección transversal.

En la epidermis de algunos táxones, como/. x hickeyi, I. lacustre (fig. 2a,b), /. longissi-ma e /. brochonii (fig. 2e,f), se encuentran

C. PRADA & C.H. ROU.liRI: CARACTERES FOLIARES EN ISOETES IBÉRICOS 377

Fig. 1.-Ornamentaciones cuticulares en especies ibéricas de Isoetes L.: a, /. durieui, pliegues y verrugas cuticulares(/. histrix similar); b, /. setaceum, estrías y cuñas cuticulares externamente sobrelevadas; c. /. velatum subsp. velatum,estrías; d, /. longissimum, estrías.


grupos paucicelulares formados por unas 3-8células, cuyas paredes son notablemente másgruesas que las de células adyacentes; estosgrupos están intercalados entre las célulasepidérmicas comunes y el carácter se apreciacon escaso aumento (desde lOx) o con mi-croscopio estereoscópico.

El radio celular es diferente en cada taxon yocasionalmente varía en distintas partes de laepidermis del mismo microfilo (tabla 1). Elradio celular es similar en toda la epidermis enlos siguientes táxones: /. echinosporum (3-4:1), /. lacustre (8-10:1), /. brochonii (10-14:1), Ix hickeyi (4-14:1), /. velatum subsp.velatum (2,5-3:1) e /. longissimum (2-5:1). En/. histrix, I. durieui, I. setaceum, I. velatumsubsp. asturicense e Isoetes sp. se presentandos radios celulares diferentes, los más altosen la epidermis y los más bajos en las bandascelulares que contienen estomas. Así, /. histrixtiene radios celulares de 7-8:1 y 2-3:1; /. du-

Fig. 2.-Modelos epidérmicos en especies ibéricas acuáti-cas de Isoetes L.: a,b. /. lacustre; c,d, /. echinosporum;e.f, /. brochonii (/. x hickeyi similar) (izquierda, epifitos;derecha, hipofilos).

Fig. 3.-Modelos epidérmicos en especies ibéricas terrestresde Isoetes L.: a,b, /. durieui; c,d, /. histrix (izquierda, epifi-tos; derecha, hipofilos), ambos con papilas marginales.

rieui, radios de 6-9:1 y 4-8:1; /. setaceum, ra-dios de 5-7:1 y 2-3:1; mientras que /. velatumsusbp. asturicense e Isoetes sp. tienen radioscelulares de 2-3:1 y 2-1:1.

Estomas.-Los microfilos de los táxones es-tudiados de Isoetes son anñstomáticos o care-cen de estomas. Los estomas se distribuyen endos bandas adaxiales y dos abaxiales en casitodos los casos, aunque el número de hilerasde estomas en las bandas puede variar. En/. durieui (fig. 3a,b) e /. histrix (fig. 3c,d) hay2-3(4) hileras en las bandas adaxiales y 4-5(6)hileras en las abaxiales; en /. setaceum apare-cen en 2-3(4) hileras adaxiales y 2-3(5) hile-ras abaxiales (fig. 4a,b), mientras que en Isoe-tes sp. (fig. 4c,d) e /. velatum subsp. velatum(fig. 4e,f) suele haber 2-3 hileras, raramente 4.En dos táxones acuáticos, /. longissimum(fig. 5a,b) e /. velatum subsp. asturicense(fig. 5c,d) se encuentran 1-2(3) hileras de es-tomas tanto en la cara abaxial como en la ada-

C. PRADA & C.H. ROLLERI: CARACTERES FOUARES EN ISOETES IBÉRICOS 379

Fig. 4.-Modelos epidérmicos en especie ibéricas anfibiasde Isoetes L.: a,b, /. setaceum; c,d, Isoetes sp.; e,f, /. vela-tum subsp. velatum; g, Isoetes sp., detalle de estomas ju-veniles en plántulas; h, Isoetes sp., detalle de estomasadultos en plantas maduras (izquierda, epifilos; derecha,hipofilos).

xial, mientras que los estomas faltan por com-pleto en otros cuatro: /. lacustre (fig. 2a,b),/. echinosporum (fig. 2c,d), /. brochonii(fig. 2e,f) elxhickeyi. Como se mencionó an-tes, en los táxones terrestres y anfibios las cé-lulas epidérmicas de las bandas estomáticastienen menor radio celular que las del resto dela epidermis, mientras que en los acuáticoscon estomas la banda está menos definida ono existen diferencias importantes en el radiocelular de sus células y el de las epidérmicasadyacentes.

Los estomas adultos tienen contorno elípti-co angosto y son 2-4 veces más largos que an-chos (figs. 3-5). Tienen 4-8 células periesto-máticas vecinas (tabla 1), indistinguiblesmorfológicamente de las epidérmicas adya-centes, que se ordenan con disposicionesaproximadamente bipolares, más o menos te-tracíticas o hexacíticas, o bien se disponen

formando una corona, de manera más bien ac-tinocítica. Esta última disposición es la menoscomún y se encontró solamente en /. longissi-mum (fig. 5b) e Isoetes sp. (fig. 4c,d), aunqueen ambos táxones pueden coexistir las dosdisposiciones.

Los estomas se diferencian tempranamentey maduran con rapidez: se han encontrado es-tomas completamente desarrollados en mi-crofilos de 1-2 cm y en plántulas de tamañoaún menor, aunque tales estomas son clara-mente juveniles (fig. 4g), con el contornocircular y células oclusivas más cortas y an-chas que los estomas adultos de los microfilosmaduros (fig. 4h). La orientación bipolar o ac-tinocítica de las células periestomáticas tam-bién es temprana. No se encontraron inicialesestomáticas ni estomas inmaduros y no haydatos bibliográficos sobre la vía de desarrolloontogenético, presumiblemente perígena porla rapidez con que parece establecerse el tipoadulto.

Fig. 5.-Modelos epidérmicos en especies ibéricas acuáti-cas de Isoetes L.: a,b, /. longissimum; c,d, /. velatumsubsp. asturicense (izquierda, epifilos; derecha, hipofi-los).


Las dimensiones estomáticas son varia-bles: los estomas de mayor tamaño se presen-tan en /. durieui y en /. setaceum, mientrasque los más pequeños se encontraron en /. ve-latum subsp. velatum y subsp. asturicense,I. histrix e Isoetes sp.; los demás táxones tie-nen dimensiones intermedias (tabla 1). Las di-mensiones de los estomas son característicasde cada taxon y en los táxones poliploides eltamaño parece relacionarse con el grado deploidía.

La ausencia de estomas no parece relacio-narse exclusivamente con el habitat acuático.Todos los táxones anfibios presentan esto-mas, mientras que en los acuáticos los esto-mas aparecen en /. longissimum (fig. 5a,b) e/. velatum subsp. asturicense (fig. 5c,d), perofaltan en los otros cuatro.

Secciones transversales foliares

Los microfilos son crasos, más o menos tri-quetros, cuadrangulares o casi teretes. Se ate-núan largamente en un ápice gradualmentemás fino e igualmente craso, aunque en los tá-xones terrestres este ápice puede estar tapiza-do por una epidermis cuyas células presentanparedes más engrosadas que las restantes epi-dérmicas del microfilo, frecuentemente colo-readas de castaño.

El contorno de las secciones foliares estriangular, desde plano-convexo hasta casideltoide en /. durieui (fig. 6d), /. histrix(fig. 6a) e /. setaceum (fig. 6g); y desde más omenos trapezoidal a subcircular en los restan-tes táxones (fig. 7a,c,e,g j,l,m). En corte trans-versal se observan los siguientes tejidos: epi-dermis, mesofilo y tejidos vasculares. La epi-dermis es uniestratificada y en táxones terres-tres o anfibios con secciones foliares más omenos triangulares, los márgenes foliarespueden estar claramente diferenciados y for-mados por células sobresalientes a papilosas.El mesofilo está constituido por clorénquimay presenta colénquima como tejido de sostén.El grado de desarrollo de ambos tejidos es va-riable en los táxones y en todos se presentancuatro cámaras aeríferas de posición más omenos simétrica en torno al haz vascular cen-tral. Las cámaras aeríferas tienen diafragmas

transversales y en el caso de /. echinosporum,la capa del mesofilo en contacto con la cáma-ra aerífera está tapizada por parches de célulascuyas paredes hexagonales contactan sin es-pacios intercelulares y dan positiva la prue-ba para lignina o sus precursores. El tejidovascular es muy escaso y está reducido a unavenilla media, rodeada de tejido parenquimá-tico algo compacto y formada exclusivamen-te por xilema parcialmente reabsorbido quedeja una laguna protoxilemática.

La epidermis tiene una cutícula delgada,generalmente ornamentada y capas cuticula-res de espesor variable. La porción cutinizadade la pared o membrana cuticular está separa-da de la pared celulósica por una delgada capapéctica, que solo se aprecia con más de 400aumentos y con coloraciones adecuadas (WIL-KINSON, 1979). En la membrana cuticular sedistinguen dos partes: la cutícula y las capascuticulares (STACE, 1965). La cutícula es del-gada y químicamente está formada por cutinapura; los pliegues, estrías y verrugas general-mente involucran solo esta porción de lamembrana cuticular. Las capas cuticulares es-tán compuestas por cutina y celulosa, tienenmayor espesor que la cutícula y a veces parti-cipan parcialmente en la formación de las ve-rrugas cuticulares. Los espesores de la mem-brana cuticular son variables: las más delga-das se observaron en /. lacustre (fig. 7k),mientras que son moderadamente gruesas encasi todos los demás táxones, aunque las másgruesas son características de /. brochonii(fig. 7o) e /. echinosporum (fig. 7n). Como enotros caracteres observados, /. x hickeyi esmuy similar a /. brochonii.

Las cuñas cuticulares se aprecian tanto encorte transversal como en superficie. Estánparticularmente bien desarrolladas y son pro-minentes en/, durieui (fig la; fig. 6e,f), /. his-trix (fig. 6b,c), /. setaceum (fig. Ib; fig. 6h,i) e/. lacustre (fig. 7k); mientras que están ausen-tes en /. brochonii (fig. 7o), /. echinosporum(fig. 7n), /. x hickeyi, I. longissimum (fig. 7d),/. velatum subsp. velatum (fig. 7b), /. vela-tum subsp. asturicense (fig. 7d) e Isoetes sp.(fig. 7h).

Las células epidérmicas marginales, desde


Fig. 6.-Secciones transversales de microfilos en especies ibéricas de Isoetes L.: a, /. histrix, sección foliar completa;b, /. histrix, epifilo; c, /. histrix, área marginal; d, /. durieui, sección foliar completa; e, /. durieui, epifilo; f, /. durieui,área marginal; g, /. setaceum, sección foliar completa; h, /. setaceum, epifilo; i, /. setaceum, área marginal; j , /. seta-ceum, detalle del diafragma foliar. En negro, colénquima; ca, cámaras aeríferas; ce, cuñas cuticulares; co, colénquima;cp, capas cuticulares; cu, cutícula; pa, células papilosas marginales; pp, pared primaria; v, verrugas; vn, vena media.(Escalas: a, d, g: 1 mm; j : 50 uní; b, c, e, f, h, i: 100 um).

prominentes hasta papilosas, son característi-cas de los táxones con sección foliar más omenos triangular, como /. durieui, I. histrixe /. setaceum. Las células epidérmicas margi-nales se disponen en 2-5 hileras longitudi-

nalmente alargadas y con las paredes algomás engrosadas que las restantes epidérmicas.Son sobresalientes y papilosas en /. histrix(fig. 3c,d; fig. 6c) y son apenas prominentes,con las paredes externas muy engrosadas pero


Fig. 7.-Secciones transversales de microfilos en especies ibéricas de Isoetes L.: a, /. velatum subsp. velatum, sección fo-liar completa; b, /. velatum subsp. velatum, epifilo-hipofilo; c, /. velatum subsp. asturicense, sección foliar completa; d, /.velatum subsp. asturicense, hipofilo; e, /. longissimum, sección foliar completa; f, /. longissimum, epifito; g. Isoetes sp.,sección foliar completa; h, Isoetes sp., hipofilo; i, /. lacustre, células de los diafragmas foliares; j , /. lacustre, sección fo-liar completa; k, /. lacustre, hipofilo; 1, /. echinosporum, sección foliar completa; m, /. brochonii, sección foliar comple-ta; n, /. echinosporum, detalle en 1; o, /. brochonii, detalle en m. En negro, colénquima; ca. cámaras aeríferas; ce, cuñascuticulares: co, colénquima; cu, cutícula; pp, pared primaria. (Escalas: a, c, e, g, j , 1, m: 1 mm; b, d. f, h, i, k. n, o: 100 um).


no papilosas en ¡.durieui (fig. 3b; fig. 6f) e/. setaceum (fig. 6i). En /. durieui e /. histrixestas células marginales presentan verrugascuticulares y la cutícula está plegada o estria-da, al igual que en /. setaceum. En los demástáxones, con secciones transversales foliarestrapezoidales, cuadrangulares o casi circula-res, no se distinguen los márgenes.

La variación de los caracteres epidérmicosen corte transversal, en relación con los táxo-nes es la siguiente:

1) Cutícula plegada, verrucosa, capas cuti-culares 2-4 veces más gruesas que la cu-tícula, cuñas cuticulares presentes ymuy prominentes, márgenes papilosos:/. histrix.

2) Cutícula plegada, verrucosa, capas cuti-culares 2-4 veces más gruesas que la cu-tícula, cuñas cuticulares presentes ymuy prominentes, márgenes engrosa-dos no papilosos: /. durieui.

3) Cutícula estriada, capas cuticulares 2-4veces más gruesas que la cutícula,cuñas cuticulares muy prominentes,márgenes engrosados no papilosos:/. setaceum.

4) Cutícula lisa, capas cuticulares 3-4 ve-ces más gruesas que la cutícula, cuñascuticulares ausentes: /. echinosporum.

5) Cutícula estriada, capas cuticulares 1-2veces más gruesas que la cutícula,cuñas cuticulares prominentes: /. la-custre.

6) Cutícula someramente estriada, capascuticulares como /. echinosporum omás gruesas, cuñas cuticulares ausen-tes: /. brochonii.

7) Cutícula someramente estriada a fina-mente estriada, capas cuticulares como/. echinosporum o menos engrosadas,cuñas cuticulares ausentes: /. x hickeyi.

8) Cutícula estriada, capas cuticulares 2-3veces más gruesas que la cutícula, cu-ñas cuticulares ausentes: /. longissi-mum, I. velatum subsp. velatum, I. vela-tum subsp. asturicense, Isoetes sp.

El mesofilo es extremadamente simple en/. lacustre: en corte transversal está formadopor 1-2 capas de clorénquima de posición hi-

podérmica y 1-2 capas de clorénquima sepa-rando las cámaras aeríferas. El número de ca-pas de clorénquima llega a 4-5 en los demástáxones acuáticos, mientras que el mesofilode los táxones terrestres y anfibios es compa-rativamente más compacto y puede presentarmás capas celulares en corte transversal.

El tejido de sostén tiene posición hipodér-mica y está constituido por colénquima. To-dos los táxones, con excepción de /. lacustre,lo presentan aunque es escaso y su desarrolloalgo variable en /. brochonii e /. echinospo-rum (tabla 1). Los cordones de colénquimafueron llamados "fascículos hipodérmicos"por ROUY (1912); "peripheral bast", porPFEIFFER (1922), la primera autora en con-siderarlos tejido de sostén y no conductor;"fascículos fibrosos periféricos", por MAIRE(1952); "fibrous strands", por HALL (1971), elprimero en interpretarlos como colenquimá-ficos, y "fascículos fibrosos", por PRADA(1979). Esta última autora los describe porprimera vez para los táxones ibéricos, indi-cando que estarían ausentes en /. echinospo-rum e /. lacustre.

De acuerdo con lo observado aquí, elcolénquima se distribuye en cuatro grupospluricelulares extensos, uno abaxial, uno ada-xial central y dos marginales, en los táxonesterrestres /. histrix (fig. 6a) e /. durieui(fig. 6d). En los anfibios, como /. setaceum,puede estar fragmentado en numerosos gru-pos paucicelulares de 10-20 células por grupo(a veces más) distribuidos en 5-8 cordonesadaxiales y 30-32 (a veces más) abaxiales(fig. 6g); mientras que en /. velatum subsp. ve-latum e Isoetes sp. se presenta en numerososcordones paucicelulares (40-42 o más), a ve-ces formados solamente por 8-10 células ensección transversal (fig. 7 a y g, respectiva-mente). En los táxones acuáticos se presentade manera variable: es muy escaso en /. echi-nosporum, que presenta por lo común un solocordón de colénquima, abaxial, aunque a ve-ces también se encuentra un pequeño grupoadaxial central (fig. 7 1); se presenta en 3(4)grupos en /. longissimum (fig. 7e) y en 8(10)en I. velatum subsp. asturicense (fig. 7c). En/. echinosporum e /. longissimum es probableque los cordones de sostén sean longitudinal-


mente discontinuos, ya que la posición puedevariar a lo largo del microfílo (tabla 1).

Las cámaras aeríferas están cruzadas trans-versalmente por diafragmas, formados por cé-lulas globosas, de paredes delgadas y lisas, sinlobulaciones ni sinuosidades, en /. durieui e/. histrix. En los restantes táxones los diafrag-mas están formados por células lobuladas oprofundamente sinuosas, que dejan entre unay otra poros de contorno triangular o elíptico.Los poros son triangulares en los diafragmasde /. brochonii (fig. 7i), /. echinosporum, I. la-custre e /. velatum subsp. velatum y sonde circulares a elípticos en los diafragmas de/. setaceum (fig. 6 j), /. longissimum, I. vela-tum subsp. asturicense e Isoetes sp.

En las paredes de contacto de las células delos diafragmas pueden aparecer protuberan-cias intercelulares pécticas (POTGIETER &VAN WYK, 1992; ROLLERI & al., 1999). Estasprotuberancias (PIP) son proyecciones de lasparedes celulares, que en este caso tienen elaspecto de cortos filamentos, muy delgados.Fueron llamadas "pelos internos" por HALL(1971), el primer autor en registrar su presen-cia en Isoetes, indicando, pese a la designa-ción que les dio, que no se trataba de pelos tí-picos desde el punto de vista anatómico. PRA-DA (1979) las detectó en /. lacustre e /. seta-ceum y las designó con el mismo nombre.Hasta el momento se han registrado solamen-te en dos táxones acuáticos, /. brochonii e/. lacustre, ambas con diafragmas foliares deporos triangulares y en uno anfibio, /. seta-ceum, con diafragmas foliares de poros elíp-ticos.

DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES

Los caracteres foliares que se han estudia-do aquí por primera vez para un número signi-ficativo de táxones de Isoetes, son diagnósti-cos en los niveles específico, infraespecífico yaplicables a intertáxones (híbridos). El hechode que sean apreciables por igual en materialfresco y de herbario, que sean independientesde la edad de las plantas, del tamaño de losmicrofilos o de la posición de éstos en el cor-mo, que se mantengan estables aunque varíe

la longitud de los filopodios en los táxones te-rrestres, que se presenten igualmente en ejem-plares de áreas separadas de los mismos táxo-nes (caso de /. lacustre) o que parezcan relati-vamente independientes del medio (presenciade estomas y colénquima en táxones acuáti-cos) es altamente significativo en un géneroen que la disponibilidad de caracteres es bajay en el que la clasificación se apoya casi ex-clusivamente en la ornamentación de las es-poras.

Los modelos epidérmicos poligonales soncomunes a todos los táxones, pero el radio ce-lular, el tamaño de las células epidérmicas, laespecialización marginal y la distribución delos estomas varían a nivel específico. La orna-mentación cuticular (verrugas, estrías y plie-gues), el espesor de las capas cuticulares y lapresencia o ausencia de cuñas cuticulares so-bresalientes también son diagnósticos a nivelespecífico. La presencia de grupos celularesepidérmicos con paredes engrosadas es carac-terística de los táxones acuáticos con menordesarrollo de colénquima, y su función se in-terpreta como mecánica.

La presencia de estomas parece ser un ca-rácter propio de los táxones y su ausencia nosería enteramente el resultado de una adapta-ción al medio acuático, ya que están presentesen dos táxones acuáticos y ausentes en otroscuatro. Las dimensiones de los estomas difie-ren para cada taxon diploide; /. setaceum lospresenta notablemente más grandes que elresto de los diploides estudiados. Es posibleque las variaciones halladas en las células epi-dérmicas y en los estomas en los táxones di-ploides y poliploides relacionados estén vin-culadas, adicionalmente, con los distintos ni-veles de ploidía de los mismos, como son loscasos de /. velatum subsp. velatum (2x) e/. longissimum (4x), o el de /. brochonii (12x),alopoliploide derivado de /. echinosporum(2x) e /. lacustre (lux). La relación entre lostamaños celulares y el nivel de ploidía se haconstatado en otros muchos grupos de pteri-dófitos (BARRINGTON & al., 1986; PANGUA &al., 1990).

La distribución y extensión del colénquimason características de cada taxon. El colénqui-ma está particularmente bien desarrollado en


los táxones terrestres y también está presenteen microfílos de táxones acuáticos, pero eneste caso los fascículos pueden estar inte-rrumpidos longitudinalmente, son delgados yestán formados por pocas células, de modoque en secciones transversales foliares la can-tidad y grosor de tales cordones pueden variara lo largo del microfilo.

Ciertos táxones se distinguen claramentepor sus caracteres foliares (epidérmicos uotros); tales son los casos de /. durieui, I. his-trix, I. echinosporum, I. lacustre e /. seta-ceum. Los dos primeros, con verrugas y cuñascuticulares y estomas en dos bandas abaxialesy dos adaxiales, se diferencian entre sí por sussecciones foliares y la especialización margi-nal (esta última muy fácilmente observablecon escaso aumento). Isoetes setaceum se dis-tingue por su cutícula regularmente estriada yla presencia de cuñas cuticulares. Isoetesechinosporum se caracteriza por su cutículalisa, las capas cuticulares comparativamentemás gruesas y la ausencia de cuñas cuticula-res, mientras que /. lacustre se diferencia porla cutícula estriada, las capas cuticulares másdelgadas de todos los táxones, la presencia decuñas cuticulares y de grupos paucicelularesde paredes más engrosadas intercalados en laepidermis. Isoetes brochonii combina carac-teres de sus progenitores y se diferencia por lacutícula someramente estriada o casi lisa, laausencia de cuñas cuticulares, capas cuticula-res de grosor similar a las de /. echinosporumy grupos paucicelulares de paredes más en-grosadas intercalados en la epidermis, como/. lacustre. Isoetes x hickeyi es similar a/. brochonii. Estas diferencias registradas sonparticularmente interesantes en el caso de/. setaceum e /. velatum, que conviven en lasmismas localidades y que resultaban difícilesde determinar cuando ambos táxones se en-cuentran en etapas juveniles.

Los caracteres epidérmicos, además demostrar diferencias, también estarían indican-do afinidades: /. velatum subsp. velatum, I. ve-latum subsp. asturicense, I. longissimum eIsoetes sp. coinciden en muchos caracteres dela epidermis (cutícula estriada, desarrollo delas capas cuticulares) y forman un grupo muyuniforme en este aspecto. La sección foliar, el

grado de desarrollo del mesofilo y el númerode cordones de colénquima difieren algo encada uno de los cuatro táxones, pero podríaninterpretarse como variaciones cuantitativas.Estos táxones también presentan afinidades enlos caracteres esporales, de modo que este gru-po requiere una investigación más profundapara establecer los límites y relaciones de lasentidades taxonómicas involucradas.

Todos los resultados aquí obtenidos son su-gerentes y es posible que su aplicación a otrosgrupos de táxones suministre nuevos enfo-ques y abra nuevas perspectivas en la taxono-mía actual del género. La utilización de mate-rial de herbario restaurado es muy prometedo-ra. Las técnicas de restauración y fijación pos-terior propuestas aquí permiten que elmaterial seco y prensado recupere tamaños yvolúmenes propios de material fresco. El pro-ceso no afecta a los caracteres foliares aquídescritos y tiene particular interés en un géne-ro en el que muchas veces, por razones diver-sas -estación del año, dificultades de recolec-ción, habitat destruidos-, no se cuenta másque con ejemplares de herbario para trabajar.

AGRADECIMIENTOS

Este trabajo se realizó con el apoyo del Ministe-rio de Educación, Cultura y Deportes de España(MECD), organismo que facilitó la participaciónde la Dra. Cristina H. Rollen en un proyecto de in-vestigación pteridológica realizado en la Facultadde Biología de la Universidad Complutense (Ma-drid), mediante el otorgamiento de una ayuda paraprofesores extranjeros en régimen de año sabático(SAB2002-0005).

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Editado por Juan José AldasoroAceptado para publicación: 16-IX-2003

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