Buenas Prcticas de laboratorio

Segunda parte

M. en I. Pedro S. Valadez Eslava

Curso intersemestral

TEMARIO Equipos e instrumentos: Verificacin, calibracin y

calificacin Reactivos y soluciones: Solicitud, recepcin, manejo,

identificacin, almacenamiento, preparacin, procedimiento de operacin relacionados, trazabilidad en la preparacin de soluciones.

Manejo y ubicacin segura de reactivos Sistema CRETIB

Importancia del lavado y verificacin de la limpieza del material de vidrio.

Sustancias de referencia: Solicitud, recepcin, manejo, identificacin, almacenamiento, preparacin, procedimiento de operacin relacionados, trazabilidad, estndares primarios, secundarios, estandarizacin. Pureza en base seca y base hmeda.

2

TEMARIO Pesado correcto en la balanza analtica: Orden y

limpieza, tipos de pesada, verificacin de la exactitud y precisin.

Registros y reportes: procedimientos relacionados, buenas prcticas de documentacin y registros electrnicos.

Evaluacin de resultados de anlisis: Anlisis de tendencias: Definicin, registros de tendencias, evaluacin de tendencias.

Investigacin de resultados fuera de especificaciones: Definicin, objetivo de la investigacin, pasos de la investigacin, plan de accin.

3

TEMARIO

Controles de Cambio y Desviaciones: Definiciones, objetivo, generacin, seguimiento hasta su cierre o implementacin.

Evaluacin de los resultados.

Certificados de anlisis

4

CALIDAD

Humana Moral Vida Proceso (analtico) Producto (Resultados de anlisis)

5

DEFINICIN DE CALIDAD

Calidad: Conjunto de caractersticas de un bien o servicio que nos permiten cumplir y an rebasar las expectativas del consumidor

Calidad: Cumplimiento con las especificaciones

Servicio o producto de calidad: para que tenga calidad debe cumplir con una serie de estndares o requisitos

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Calidad

Cumplir en su totalidad con los requerimientos y expectativas del cliente.

Hacer las cosas bien desde la primera vez todo el tiempo.

Mejora continua.

7

Estudios empricos muestran lo siguiente

* 10 = 10 nuevos clientes potenciales

* 30

Perdida potencial de clientes para el futuro y clientes actuales

8

Normas internacionales y nacionales

9

Los principios de las BPL definen una serie de reglas y criterios para los sistemas de calidad en cuanto los anlisis son planeados, monitoreados, registrados archivados y reportados1

1

DEFINICIN BPL

10

Consecuencias regulatorias del NO cumplimiento de las BPL

Rechazo de los estudios sometidos a las autoridades.

Solicitud de la repeticin del estudio. Inhabilitacin para completar el estudio. Fallas para alcanzar el registro del producto y

licencia. Cierre del laboratorio tercero autorizado. Prdida de clientes y credibilidad de la compaa. Retiro de la licencia del producto. Retiro de producto del mercado.

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Los resultados confiables se basan en:

Gestin Personal

Equipo

Mtodo

Material Ambiente

12

Impacto social y econmico de un anlisis errneo, De un ejemplo para:

Un anlisis forense.

En el comercio.

Monitoreo ambiental.

13

Estudios internacionales comparativos de aptitud

14

EQUIPO E INSTRUMENTOS

Los equipos deben adquirirse de proveedores que tengan la capacidad de proporcionar soporte tcnico y mantenimiento.

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EQUIPO E INSTRUMENTOS

Antes de poner en servicio un equipo: se debe calificar, calibrar o verificar.

Cuando aplique el equipo debe ser verifcado o calibrado antes de su uso.

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EQUIPO E INSTRUMENTOS

Contar con los PNOs para su uso, limpieza y mantenimiento de los equipos.

Contar con los manuales proporcionados por el fabricante.

Equipos que no cumplen con las calibraciones deben ser puestos fuera de servicio.

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Validacin vs Calificacin

El trmino validacin se usa para procesos de fabricacin, procedimientos analticos y software.

El trmino calificacin se emplea para instrumentos.

AIQ : Calificacin de instrumentos analticos = proceso de garantizar que un instrumento es adecuado para el uso al que est destinado.

Referencia USP 37 2013 Calificacin de instrumentos analticos

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Calificacin de instrumentos analticos*

Coleccin de pruebas documentadas de que un instrumento se desempea adecuadamente para su uso previsto.

El uso de un instrumento calificado en los anlisis contribuye a la confianza en la validez de los datos generados.

*USP 36 2013 Calificacin de instrumentos analticos

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Fases de la calificacin

1 Calificacin de diseo

2 Calificacin de instalacin

3 Calificacin de operacin

4 Calificacin de desempeo

20

CALIBRACIN = ____________

21

VERIFICACIN

Cuando se requieran comprobaciones intermedias para mantener la confianza en el estado de la calibracin.

22

EQUIPO E INSTRUMENTOS

Todas las operaciones realizadas con los equipos deben quedar registradas, incluyendo soporte de resultados y los criterios de aceptacin, documentacin de la falla encontrada, como y cuando se detect el problema y la accin tomada.

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EQUIPO E INSTRUMENTOS

Rotular los equipos calibrados incluyendo la fecha en la que fueron calibrados y su fecha de vencimiento.

Los procedimientos deben indicar que hacer en caso de fallas.

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NIVELES DE SEGURIDAD

Debe protegerse la configuracin del hardware y software para que no se hagan cambios que puedan invalidar los resultados

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Equipos que procesan datos

Para los sistemas que manejan datos se debe asegurar que:

Calculos y la transferencia de datos son sistemticamente sujetas a verificaciones apropiadas.

Se cuenta con software validado Se cuenta con procedimientos para proteger la

integridad de los datos Se les da mantenimiento para que trabajen

adecuadamente Existen procedimientos para la generacin y el control

de los cambios. Se cuenta con un sistema de respaldo continuo, el cual

controla el acceso a los datos.

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PREGUNTA

Las autoridades regulatorias han establecido guas respecto a la frecuencia de calibracin de balanzas? Con base en qu se puede establecer la frecuencia?

27

28

Para la adquisicin de equipos, Cul (es) de los siguientes enunciados no corresponde?

a) Especificaciones del equipo y/o sistema

b) Que se desea medir

c) Instalaciones

d) Adquirir Tecnologa obsoleta

e) Mantenimiento

f) Alta complejidad en su manejo

PREGUNTA

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PESADO EN LA BALANZA ANALTICA

Cunto pesar? Pesar Manejo adecuado de la muestra

Clculos

Manejar el vocabulario

Tomar la can:dad a pesar de la tcnica o calcularlo uno mismo.

Tipo de pesada

Balanza verificada y calibrada.

Registrar el dato.

Evitar prdida o contaminacin.

Manejar las unidades y la pureza correctamente

29

30

USO PESAS Y BALANZAS (41) USP

Pesar aproximadamente con exactitud: la incertidumbre de la medicin (error sistemtico + error aleatorio), debe ser menor al 0.1 % de la lectura

30

31

Criterio de aceptacin

2 veces la desviacin estndar de al menos 10 pesadas, dividida entre la cantidad pesada no excede el 0.001.

=2 x DEX

31

32

Ejercicio La balanza que estoy usando es adecuada para pesar 20 mg ?

32

Respuesta

33

33

Pregunta Indique con qu paso inicia la pesada:

P _ _ _ _ _ _ _ _ _ _

Indique con que paso termina la pesada:

R E _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _

34

Reactivos

El laboratorio debe contar con una poltica y procedimientos para la seleccin y compra de los suministros que afectan la calidad de los anlisis.

Deben existir procedimientos para la compra, recepcin y el almacenamiento de reactivos, deben recibirse con su certificado de anlisis

Los reactivos no deben ser utilizados hasta que hayan sido inspeccionados, o verificados.

35

Reactivos

En algunos casos una lista de proveedores previamente calificados debe establecerse.

Etiquetas de los reactivos deben indicar:

Nombre, fabricante, fecha de recepcin, cuando aplique la concentracin, factor de estandarizacin, fecha de caducidad, condiciones de almacenamiento.

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Reactivos

Para reactivos preparados en el laboratorio adems:

Fecha de preparacin y nombre y/o iniciales de quien prepar.

Para soluciones preparados por dilucin: nombre del fabricante de la solucin original, fecha de preparacin, fecha de estandarizacin, factor de dilucin, nombre y/o iniciales de quien prepar.

37

Transportancin - subdivisin de reactivos

Siempre que sea posible transportar en su contenedor original.

Si se requiere subdividir es necesario:

Limpieza escrupulosa, uso de contenedores completamente indentificados.

38

Reactivos y soluciones

Deben estar etiquetadas, indicando la identidad, ttulo o concentracin, requerimientos de almacenamiento y fecha de expiracin.

Soluciones que presenten deterioro o fuera de la fecha de uso no deben ser utilizadas.

39

Reactivos y soluciones

Preparacin de reactivos en el laboratorio.

Deben emplearse procedimientos escritos que estn de acuerdo con farmacopeas u otros estndares. Se deben guardar los registros de la preparacin y la estandarizacin (normalizacin) de las soluciones volumtricas

40

Reactivos y soluciones

Para soluciones volumtricas preparadas por dilucin:

Nombre del fabricante original del reactivo. Fecha de preparacin. Fecha de estandarizacin o normalizacin. Factor de dilucin. Nombre de la persona que la prepar.

41

Reactivos y soluciones

Inspeccin

Todos los contenedores de reactivos deben inspeccionarse para asegurarse que el sello est intacto, antes de enviarse al cuarto o central de almacenamiento o laboratorio.

Estas inspecciones deben de ser registradas en la etiqueta del reactivo, anotando la fecha y las iniciales de la persona que realiz la inspeccin

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Reactivos y soluciones Almacenamiento.

Los stocks de reactivos deben ser almacenados en un rea condiciones de almacenamiento apropiadas. El almacn debe contar con botellas limpias, viales, cucharas o esptulas, embudos y etiquetas, segn se requiera para el dispensado de reactivos de su contenedor original a uno de pequeo volumen. Se debe contar con equipo de seguridad especial, para la transferencia de grandes volmenes de lquidos corrosivos.

43

Pregunta

Qu informacin debe contener la etiqueta de un reactivo?

44

Pregunta

La primera tarea que debe realizar al llegar a nuevo trabajo, es asignar fecha de caducidad a los reactivos y soluciones, Con base en qu establecera la fecha de caducidad?

45

SUSTANCIAS DE REFERENCIA

46

SUSTANCIA DE REFERENCIA

Para qu tipo de determinaciones se emplean las sustancia de referencia?

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SUSTANCIA DE REFERENCIA SECUNDARIA

Es obtenida valorando una materia prima contra una sustancia de referencia primaria.

Se la llama tambin Estndar de trabajo.

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Pureza en base seca y base hmeda

Pureza en base seca (BS):

Pureza de la sustancia de referencia despus de someterla al procedimiento de secado indicado en la etiqueta.

Pureza en base hmeda (BH):

Pureza del estndar tal cual se encuentra (As it is).

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EJERCICIO

Escriba que significa que un estndar de Mebendazol tenga una pureza de 99.3% en base seca:

99.3 %(BS) =--------------------------------------------

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Registro de las sustancias de referencia

Nmero de identificacin del material Descripcin precisa del material. Fuente de sumistro del material Fecha de recepcin Nmero de lote u otro cdigo de indentifiacin Uso desigando del material de referencia: por ejemplo:

material de referencia para infrarrojo o impureza para cromatografa en capa fina.

Ubicacin de almacenamiento en el laboratorio Condiciones de almacenamiento Cualquier otra informacin adicional OECD solicita incluir el nmero de CAS

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INSPECCIN DE LAS SUSTANCIAS DE REFERENCIA

Inspeccionar a intervalos regulares: verificar que no se han deteriorado y que se estn empleando las condiciones de almacenamiento adecuadas

Registrar los resultados de la inspeccin en una bitcora, firmar y fechar.

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Sustancias de refefencia

Registro y etiquetado:

Identificar con un nmero nico, ya sea que sean recin recibidos o preparados en el laboratorio. (Estndares de trabajo o sustancias de referencia secundarias).

Un nuevo nmero de identificacin debe ser asignado para cada nuevo lote.

El nmero de identificacin debe estar indicado en cada vial.

El nmero de identificacin debe anotarse en el registro analtico, cada vez que la sustancia de referencia es usada.

53

RESGUARDO DE LAS SUSTANCIAS DE REFERENCIA

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MUESTRAS

Sin una muestra no hay anlisis, sin una muestra adecuada no debera haber anlisis.

55

MUESTRAS

Cada muestra recibida debe contar con una solicitud de anlisis

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VERIFICACIN DE LA TEMPERATURA

57

TRAZABILIDAD

58

PATRONES DE REFERENCIA

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PATRON DE REFERENCIA

Contar con un programa y procedimiento para la calibracin de los patrones de referencia.

Los patrones deben calibrarse por un organismo que pueda proveer trazabilidad.

Los patrones de calibracin se deben utilizar solo para ese propsito.

Los patrones de referencia deben calibrarse antes y despus de cualquier ajuste.

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CONTROL DE CAMBIOS

Debe existir un procedimiento que incluya identificacin, documentacin, revisin y aprobacin de los cambios en: insumos, especificaciones, procedimientos, mtodos de anlisis, procesos de fabricacin, instalaciones, equipos, sistemas crticos y sistemas de cmputo.

Los cambios deben ser aprobados por el responsable de la Unidad de Calidad, asegurando su seguimiento y cierre.

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PREGUNTA

Usted va a someter un control de Cambios para cambiar el ensayo de un mtodo microbiolgico a un mtodo HPLC, Qu soporte documental debe anexar para realizar el cambio?

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Desviacin DE: Separar , Alejar

VA: Camino

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17025 Desviaciones

Las desviaciones respecto de los mtodos de ensayo y de calibracin deben ocurrir solamente si la desviacin ha sido documentada, justificada tcnicamente, autorizada y aceptada por el cliente.

Auditoras adicionales. Cuando la identificacin de no conformidades o desvos ponga en duda el cumplimiento del laboratorio con sus propias polticas y procedimientos, o el cumplimiento con esta Norma Internacional, el laboratorio debe asegurarse de que los correspondientes sectores de actividades sean auditados, segn el apartado 4.14, tan pronto como sea posible.

64

17025 Desviaciones

Acciones preventivas.

4.12.1 Se deben identificar las mejoras necesarias y las potenciales fuentes de no conformidades. Cuando se identifiquen oportunidades de mejora o si se requiere una accin preventiva, se deben desarrollar, implementar y realizar el seguimiento de planes de accin, a fin de reducir la probabilidad de ocurrencia de dichas no conformidades y aprovechar las oportunidades de mejora.

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LIMPIEZA DE MATERIAL DE VIDRIO

El xito de muchas valoraciones y pruebas farmacopeicas depende de la limpieza del material del material de vidrio utilizado.

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PREENJUAGUE DEL MATERIAL

67

DETERGENTES

Los detergentes deben ser proporcionados por proveedores certificados.

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VERIFICACIN DE LA LIMPIEZA

Implementar una prueba para dictaminar si el material esta limpio.

cido Alcalino Neutro

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LIMPIEZA DE MATERIAL DE VIDRIO

Algunas pruebas donde la limpieza es crtica:

Pirgenos, carbono orgnico total, valoraciones de heparina sdica y actividad de vitamina B12, determinacin de minerales y componentes a niveles de trazas.

70

Mezcla crmica

Hidrxido de potasio en alcohol

Fosfto disdico o trisdico al 10 %

Peroxidisulfato de amonio

OTRAS SOLUCIONES PARA LA LIMPIEZA DEL MATERIAL

71

72

Qu enunciados no corresponden para evitar posible contaminacin debida al uso previo del material en otro anlisis? Indique al menos tres cuidados que debe tener con este material.

a) Contener soluciones inorgnicas por periodos prolongados en el material de vidrio y mucho mejor si es volumtrico.

b) Lavar lo mas pronto posible material que este en contacto con soluciones concentradas.

c) Dejar separadas las juntas, llaves y vlvulas esmeriladas despus de su uso.

d) Limpiar el material con cepillos gastados para rayar el vidrio y aumentar las posibilidades de contaminacin.

e) Evitar poner el vidrio en contacto con soluciones de cido fluorhdrico lcalis concentrados.

PREGUNTA

NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-052-SEMARNAT-2005, QUE ESTABLECE LAS CARACTERSTICAS, EL PROCEDIMIENTO DE IDENTIFICACIN, CLASIFICACIN Y LOS LISTADOS DE LOS RESIDUOS PELIGROSOS.

Esta Norma Oficial Mexicana establece el procedimiento para identificar si un residuo es peligroso, el cual incluye los listados de los residuos peligrosos y las caractersticas que hacen que se consideren como tales.

Los residuos peligrosos, en cualquier estado fsico, por sus caractersticas corrosivas, reactivas, explosivas, inflamables, txicas, y biolgico-infecciosas, y por su forma de manejo pueden representar un riesgo para el equilibrio ecolgico, el ambiente y la salud.

73

CRETIB.- El acrnimo de clasificacin de las caractersticas a identificar en los reactivos.

C: Corrosivo R: Reactivo E: Explosivo T: Txico I: Inflamable B: Biolgico - Infeccioso

74

IDENTIFICAR CON EL CDIGO CRETIB

75

Biolgico-Infeccioso

Son aquellos materiales generados durante los servicios de atencin mdica que contengan agentes biolgico-infecciosos segn son definidos en esta Norma, y que puedan causar efectos nocivos a la salud y al ambiente.

76

77

El laboratorio de microbiologa debe contar con reas separadas:

rea separada para poder realizar pruebas de esterilidad Cuenta con diferenciales de presin que

ayuden al control de la contaminacin a travs de barreras de entrada de aire (presin positiva) .

reas

Limpia

Cepario

Lavado

Incubacin

rea separada para poder realizar el manejo de los microorganismos (presin negativa).

Barreras: Vestimenta de proteccin, procedimientos de sanitizacin, cabinas de seguridad dedicadas, procedimiento para manejar derrames de cultivos y personal entrenado.

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Se debe establecer la limpieza y sanitizacin de reas donde se ejecuten actividades que necesitan ambientes controladas (manufactura y acondicionamiento de productos farmacuticos estriles y no estriles, anlisis microbiolgicos).

La limpieza y sanitizacin se debe realizar con agentes que hayan probado su efectividad para disminuir la carga microbiana (agentes clorados, fenlicos, aminas cuaternarias, etc.)

Estos agentes de limpieza se preparan con agua purificada con una calidad microbiolgica comprobable.

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Preparacin Seguir al pie de la letra la preparacin de acuerdo a lo

especificado en marbete del fabricante o de la tcnica. Precaucin en el calentamiento! El oscurecimiento de

los medios es una indicacin del sobre calentamiento (Reaccin de Maillard).

Esterilizacin Autoclave calificada y bajo un modelo de carga validado. Hay medios de cultivo que solo se hierven y no necesitan

esterilizacin. El procedimiento debe especificar los cuidados que deben tenerse con estos medios (dosificar bajo campana de flujo laminar, en contenedores estriles, etc.)

Filtracin por membrana.

Verificacin del registro de esterilizacin Verificar los parmetros de esterilizacin (temperatura,

tiempo y presin).

80

Verificacin del pH

Verificar pH una vez que el medio se encuentre a temperatura ambiente (25C).

Extraer aspticamente la muestra.

Para superficies de agar se recomienda usar un electrodo plano.

El valor de pH de los medios deber estar en un intervalo de +/- 0.2 del valor indicado por el fabricante.

81

82

83

Se evala cada lote de medio listo para usar y cada partida de medio preparado.

Procedimiento Lista de microorganismos a utilizar para realizar la promocin a

cada medio de cultivo.

Realizacin de la cuenta viable.

Preparacin de la solucin estandarizada de los microorganismos a emplear. La cantidad de microorganismos a usar debe estar entre 10-100 UFC/inculo.

Almacenamiento e identificacin de la solucin estandarizada.

Inoculacin de los medios e incubacin.

Interpretacin de resultados.

84

Evaluacin de los resultados de los ensayos Al terminar los anlisis, se revisan los resultados

y cuando sea apropiado se evaluan estadsticamente para determinar si son congruentes y si cumplen con las especificaciones.

85

ANLISIS DE TENDENCIAS

Sistema que se establece para evaluar la distribucin de los resultados con respecto al tiempo, con la finalidad de identificar alguna tendencia en los resultados

86

ANLISIS DE TENDENCIAS

17025:

Para establecer acciones correctivas se podra incluir el anlisis de las tendencias.

Los resultados de los ensayos deben ser registrado en forma tal que se puedan detectar tendencias.

87

Implementacin del sistema

Generar alertas en tiempo real para detectar problemas potenciales, at the Bench, para iniciar oportunamente la investigacin.

88

Mtodo grfico para determinar resultados OOT

89

Tres resultados consecutivos estn de un solo lado del lmite central

Tiempo (meses)

% Valoracin

0 99.4 3 98.2 6 97.1 9 96.0

90

INVESTIGACIN DE RESULTADOS FUERA DE ESPECIFICACIONES (OOS)

DEFINICIN: RESULTADOS QUE NO CUMPLEN CON LAS ESPECIFICACIONES

91

RESULTADOS FUERA DE ESPECIFICACIONES (OOS)

Falla para cumplir cualquier especificacin registrada, en controles en proceso, o especificaciones de liberacin o estabilidad.

92

Especificaciones

96.0 % 104.0 %

Lmites farmacopeicos o lmites registrados 95.0 %

93

RESULTADO FUERA DE TENDENCIA, CUESTIONABLE O ATPICO (OOT)

Resultado que se encuentra dentro de las especificaciones pero esta fuera de la tendencia histrica del producto.

94

Ejemplo de resultado atpico

Resultado valoracin Especificacin interna

95.0 % - 105.0 %

RESULTADO

100.2 % TPICO

99.4 % TPICO

100.3 % TPICO

98.7 % TPICO

100.7 % TPICO

99.1 % TPICO

96.3 % ATPICO

95

PREGUNTA

Por qu los resultados fuera de tendencia deben investigarse si no estn fuera de especificaciones?

96

RESULTADO ABERRANTE (OUTLIER)

Resultado extremo el cual es significativamente diferente de las dems observaciones del mismo anlisis o de los resultados histricos del producto

97

Ejemplo de resultado aberrante

Resultado valoracin Especificacin interna

95.0 % - 105.0 %

RESULTADO

100.2 % TPICO

99.4 % TPICO

100.3 % TPICO

98.7 % TPICO

100.7 % TPICO

99.1 % TPICO

73.3 % ABERRANTE

98

OBJETIVO DE LA INVESTIGACIN

Determinar si el resultado fuera de especificaciones es representativo o no de la poblacin

Determinar la causa del resultado fuera de especificaciones

99

UTILIDAD DE LA INVESTIGACIN ACCIONES A TOMAR

Tomar acciones preventivas para evitar su recurrencia.

Las autoridades regulatorias quieren encontrar que se tomaron acciones oportunas para eliminar la causa raz y que fueron efectivas

100

POSIBLES RESULTADOS DE LA INVESTIGACIN

Posibilidades Error del laboratorio

Error del proceso

101

Paso 1. DETECCIN (Formato A)

Paso 2: INVESTIGACIN NIVEL 1 (Formato B)

Paso 3: INVESTIGACIN NIVEL 2 (Formato C)

Paso 4 PROTOCOLO DE REPITES (Formato D)

Paso 5 CIERRE DE LA INVESTIGACIN (Formato E)

Paso 6 PLAN DE ACCIN (Formato A del plan de accin)

Paso 7 ACCIONES REQUERIDAS (Formato B del plan de accin)

Paso 9 CIERRE (Formato D del plan de accin)

Paso 8 VERIFICACIN DE EJECUCIN Y EFECTIVIDAD DE LAS ACCIONES REQUERIDAS (Formato C del plan de accin)

Anlsis estadstico: X +/- 3 DE, para Determinar si el resultado fuera de

especificaciones se confirmar o no

En caso de sospecha de resultado aberrante, aplicar la prueba de desviacin

estudentizada extrema, para determinar si es estadsticamente un resultado aberrrante

DIAGRAMA DE FLUJO

En caso de sospecha de resultado aberrante, aplicar la prueba de desviacin

estudentizada extrema, para determinar si es estadsticamente un resultado aberrrante

Causa encontrada

Causa encontrada

Causa encontrada

Si

No

Si

Si

No

No

No

No

Se requiere plan de accin?

Si

Finaliza la investigacin en el paso 5 (Formato E)

No

102

INVESTIGACIN

En caso de confirmarse el resultado fuera de especificaciones, se procede a generar una No conformidad o desviacin

103

VALIDACIN DE METODOS ANALTICOS DEFINICIN PROCESO POR EL CUAL QUEDA ESTABLECIDO, POR ESTUDIOS DE LABORATORIO, QUE LA CAPACIDAD DEL METODO SATISFACE LOS REQUISITOS PARA LAS APLICACIONES ANALTICAS DESEADAS.

VALIDACIN DE MTODOS ANALTICOS

Una parte integral del desarrollo de un mtodo analtico es la validacin del mismo, es decir, el mtodo debe probarse para determinar su efectividad.

GUIAS NACIONALES

Gua de Validacin de mtodos analticos emitida por el Colegio Nacional de Qumicos Farmacuticos Bilogos. (2002)

GUIAS NACIONALES

Gua de validacin de mtodos analticos: limpieza de equipos, Comisin Interinstitucional de Buenas Prcticas de fabricacin, Mxico D.F., 2004

GUIAS INTERNACIONALES

ICH EURACHEM FDA FDA (CDER) CDER Bioanalticos Otros pases

CONFERENCIA INTERNACIONAL DE ARMONIZACIN

Gua ICH CONFERENCIA INTERNACIONAL DE ARMONIZACIN

Validation of Analytical procedures:

Text and Methodology Q2 (R1)

GUAS INTERNACIONALES

DECISIONES IMPORTANTES BASADAS EN RESULTADOS ANALTICOS

oLiberacin de lotes. oRechazo de lotes. oReproceso de lotes. oEstablecimiento de fechas de caducidad

basadas en estudios de estabilidad. oDeterminacin de trazas para liberacin de

equipos para fabricacin. oLa necesidad de realizar estudios

toxicolgicos adicionales, si aparecen nuevas impurezas o si las impurezas conocidas rebasan los lmites.

OBJETIVO

El objetivo de un mtodo debe ser claramente entendido para determinar las caractersticas que deben ser evaluadas.

La validacin debe proveer la seguridad de que el mtodo ser Libre de problemas durante su uso.

CONDICIONES PARA VALIDAR

Los instrumentos deben de estar calificados/validados, antes de empezar con las actividades de validacin.

Contar con sustancias de referencia adecuadamente caracterizadas.

El personal debe estar adecuadamente capacitado.

Contar con procedimientos para la validacin y reporte de mtodos analticos.

CONDICIONES PARA VALIDAR

CONTAR CON UN MTODO ANALTICO CON UN BUEN DESEMPEO, QUE INDIQUE QUE HAY POSIBILIDADES DE SER VALIDADO CON XITO.

PARMETROS DE DESEMPEO PRUEBA DE

IMPUREZAS

PARMETRO DE DESEMPEO

Contenido/ Potencia/

Valoracin

Contenido/ Valoracin Limite

IDENTIFICACIN

Precisin/Adecuabilidad del Sistema SI SI SI * Linealidad del sistema. SI SI NO NO Especificidad SI SI SI SI Exactitud y repetibilidad SI SI NO NO Linealidad del mtodo SI SI NO NO Precisin intermedia SI SI NO NO Estabilidad de la muestra y referencia SI * NO NO Limite de deteccin NO NO SI NO Limite de cuantificacin NO SI NO NO Robustez * * * NO Tolerancia * * * NO

* Puede ser requerido segn la naturaleza del mtodo

ETAPAS DE LA VALIDACIN DE MTODOS ANALTICOS

1. SISTEMA: SE TRABAJA CON SUSTANCIAS DE REFERENCIA

2. MTODO (PLACEBO): SE TRABAJA CON LOS EXCIPIENTES (PLACEBOS) Y SUSTANCIAS DE REFERENCIA.

3. MTODO (PRODUCTO TERMINADO) : PROBAMOS EL METODO CON PRODUCTO TERMINADO

RELACION ENTRE EXACTITUD Y PRECISIN

Exacto y preciso

RELACIN CONCENTRACIN DE ANALITO, % RSD (CV)

REFERENCIA (% RSD)

CRITERIOS DE ACEPTACIN (% RECOBRO)

CRITERIOS DE ACEPTACIN (% RECOBRO)

VALIDACIN INADECUADA = PROCEDIMIENTOS INADECUADOS

RESULTADOS OOS

RETRASOS

REPETICIONES

DECISIONES EQUIVOCAS

VALIDACION INADECUADA

OOS= Resultado fuera de especificaciones.

PREGUNTA

Mencione 3 razones por las cuales los procedimientos analticos deben estar validados.

REVALIDACIN

Se requiere cuando hay:

Cambios en el proceso de sntesis de la sustancia activa.

Cambios en la composicin del producto terminado

Cambios en el mtodo analtico. Cuando le mtodo es transferido de un

laboratorio a otro laboratorio (WHO)

Buenas prcticas de cromatografa

Los sistemas de cromatografa de lquidos se consideran como un conjunto de partes o mdulos.

Computadora

Detector

Columna

Bomba Inyector

126

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

Es una parte integral de varios procedimientos analticos.

Nos permite confirmar que el mtodo se esta desempeando adecuadamente, es una herramienta de diagnstico.

127

EL CROMATOGRAMA

T0 TIEMPO DE LA FASE MVIL

TR TIEMPO DE RETENCIN ( DETERMINA LA IDENTIDAD DEL COMPUESTO) tR B

tR A

T0

W1/2 B

W1/2 A

W B W A

128

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

Parmetros de adecuabilidad del sistema

Repetibilidad de inyeccin de la solucin de referencia

Resolucin Coleo Nmero de platos tericos Factor de capacidad Tiempo de retencin Tiempo de retencin relativo

129

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

130

131

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

La adecuabilidad del sistema es especfica para cada mtodo

A pesar que la adecuabilidad del sistema puede realizarse durante el anlisis, generalmente es realizada Antes de proceder con el anlisis de las muestras

131

SECUENCIA DE INYECCIN

132

CRITERIOS DE ACEPTACIN

Manual del CNQFB. Para cada inyeccin se recomienda reportar: K> 2 R > 2 T

Coeficiente de variacin (CV, RSD, o DER)

Datos de 5 rplicas deben emplearse para calcular el coeficiente de variacin, si el CV requerido por el mtodo es < 2.0 %.

Datos de 6 rplicas deben emplearse si el CV solicitado por el mtodo es mayor a 2.0%.

134

SIMETRIA DEL PICO (Coleo o Tailing)

Es especialmente importante reportarlo en pruebas de impurezas, si el coleo es muy alto podra enmascarar otras impurezas.

Cuando el coleo se incrementa, la integracin se vuele menos confiable y la precisin puede verse comprometida.

135

136

MTODOS PARA ANALIZAR CANTIDADES BAJAS DE ANALITOS

Preparar una solucin de sensibilidad: Sirve para demostrar que se tiene una adecuada relacin Seal/ruido.

Determinar tambin la reproduciblidad de las rplicas de inyecciones.

136

137

ADECUABILIDAD DEL SISTEMA

Todos los factores que son crticos para el mtodo deben ser identificados e incluidos en la adecuabilidad del sistema.

Si no se cumple la adecuabilidad del sistema los factores crticos deben ser ajustados.

137

CASOS ESPECIALES Cuando la especificacin es muy cerrada

Ejemplo: 99.0 % - 101.0 % un CV de 2.0 % no sera adecuado.

Emplear el criterio recomendado por la Farmacopea britnica (BP), de 1/6 el rango de la especificacin en este caso..

Rango: 2 X 1/6 = 0.33 % de CV

138

Confrontacin de estndares (Estndar Check)

Cuntos soluciones de referencia deben prepararse en un anlisis espectrofotomtrico o cromatogrfico?

139

Confrontacin de estndares (Estndar Check)

Si se emplean dos estndares, calcular la confrontacin de estndares:

% = Re spuesta St1Conentracin St1

X Concentracin St2Re spuestaSt2

X100

Dependiendo del mtodo el % de confrontacin debe encontrarse entre: 98.0 102.0 % o 97.0 103.0 %

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Certificados de anlisis

1. Nmero de registro de la muestra 2. Fecha de recepcin 3. Nombre y direccin del laboratorio que

analiz la muestra. 4. Nombre y direccin de quin realiz el

anlisis 5. Nombre, descripcin y nmero de lote de la

muestra. 6. Nombre y direccin del fabricante original y si

corresponde, del distribuidor o acondicionador

141

Certificados de anlisis

7. Referencia a las especificaciones del ensayo y la muestra.

8. Resultados de las pruebas realizadas (promedio, desviacin estndar) y sus lmites.

9. Conclusin sobre si la muestra se encuentra o no dentro de especificaciones.

10. Fecha de caducidad o reanlisis. 11. Fecha del anlisis 12. Firma del director o persona autorizada por

el laboratorio.

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