brucella ovis
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ASPECTOS INMUNOLÓGICOS EN EL
DIAGNOSTICO Y CONTROL DE LA
EPIDEMITIS CONTAGIOSA DEL CARNERO
POR B.OVIS
FAUSTO BLADIMIR PANTOJA
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B. ovis es un cocobacilo encapsulado, carece de pilis y
flagelos, es Gram negativo.
Crece en medios sólidos como el Agar tripticasa soya o agar
Columbia, con suero equino,bovino,u ovino al 10% y en una
atm con 5-10% de CO2
Para aislar muestras a partir de semen, de mucus o de
necropsias se util izan medios de cultivo sólidos selectivos
como el Thayer Martin o el Agar Skirrow que permiten el
crecimiento de B.ovis inhibiendo la presencia de otros M.O
de la flora normal de vagina y prepucio.
MORFOLOGIA Y CARACTERISTICAS
CULTURALES
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Las colonias visibles después de una incubación de 3 -5 días,
se aprecian pequeñas, circulares, opacas, granulares y con
tonalidades de blanco a marrón
Puede observarse la morfología rugosa de B ovis por trans-
iluminación oblicua amarillas,aspecto seco, opaco y
granular
confirmación acriflavina
. Colorante que aglutina las colonias
Otras pruebas que permiten identificar y/o aglutinar las
colonias de B ovis: tinción de colonias con el cristal violeta
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ESTRUCTURA ANTIGENICA
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la estructura de la Envoltura celular de las bacterias gram negativas presenta:
1.-Membrana plasmática interna
2.- Espacio periplasmico: (P, PG)
3.- ME
Estas envolturas se dist inguen por ser más resistentes a la acción de detergentes, proteólisis de enzimas y digestión de l isozima
ESTRUCTURA ANTIGÉNICA
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MI: proteínas de membrana
interna
E. periplasmico:P. solubles y
peptidoglucano.(PG)
ME:LPS- rugoso y proteínas
de ME (epitopos)
LPS: complejo-
lipido A, (restos)
Nucleo o core ( sacaridos de
glucosa, galactosa , manosa)
ANTIGENOS
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ESTRUCTURA LIPOPOLISCARIDO (LPS)
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ME:
PME mayores: 36-38 KDa--- o--
porinas—LPS
PME: 25-27 KDa y 31-34 KDa--- PG
proteina de 25-27 KDa ..
Conformación diferente se
distingue de otras Brucellas.
Las PME varian en las distintas
especies, en B.ovis, las de 25-27
KDa y 31-34 KDa son
predominantes…en vesículas
l iberadas
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PME menores : 10 KDa,16.5
KDa 19 KDa 89 KDa 89-94 KDa
Lipoproteina: 8 Kda---
determinantes antigenicos
comunes con la lpoproteina de
Braun.. E. coli .
Espacio periplasmico….P 26
KDa caracterizada
En citoplasma: P 18 KDa
especifica del genero Brucella.
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Pruebas serológicas
Western blot… identificar antígenos individuales y su
inmunodominancia.
Estudios (infección experimental y natural):
Respuesta humoral LPS y PME (25 -27 y 31-34 KDa)
Epidídimo- orquitis… rta mas intensa a mas proteínas (+
estimulación Ag)
RESPUESTA INMUNITARIA HUMORAL Y
CELULAR
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OTROS ESTUDIOS
5 Ag IMD (fases aguda y
crónica)…LPS,PME -17,19 y 29 KDa
proteína de estrés térmico (63 KDa).
Estudios Posteriores:
suero de carnero infectado…western
blot:
Ag contra PME,y P periplasmicas y
citoplasmáticas
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Raton ( rex inmune a B. ovis )
Inyeccion Ac anti PMEs Y LPS previa… usado como protección
PME menores y 34 KDa blancos inmunidad Humoral
…opsonizacion… muerte intracelular de B.ovis .. Ac
muerte extracelular= cel. NK
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B ovis es un Parasito Intracelular facultativo
Capaz de sobrevir y multiplicarse en el interior de los
macrófagos
Transferencia de suero, mejor que transferencia de células
sensibilizadas
Suero anti B. abortus confirió mayor protección que células
inmunes para B. ovis
Inmunidad humoral brinda mas protección que la celular
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El diagnostico: examen clínico y su
confirmación mediante el aislamiento de
B.ovis en el semen y/o resultados + en
pruebas serológicas
Se debe tener en cuenta la situación
epidemiológica, datos reproductivos
(vacunaciones, antecedentes)
DIAGNOSTICO
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Palpación del contenido escrotal
Se examina muestras de semen en m. óptico
(animalidades morfológicas y de motilidad)
Coloración de Giemsa: presencia de células
inflamatorias
Si Hay M.O sospechosos….muestra se incuba
a una Atm 5-10% Co2 y se examina durante
10 días
examen clínico
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Fijación del complemento combinado con la
palpación escrotal… ideal en Australia y
Nueva Zelanda
Tº (1-4ºC)….rx positivas en etapas tempranas
pero la prueba es poco especifica a
diferencia de la aplicad a 37ºC
muy compleja….reactivos…. Prozona
Menos sensible y especifica que la ELISA
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ELISA , inmunodifusion en gel y fijación de
complemento utilizan como ag al extracto HS
obtenido a partir de la cepa B. ovis REO 198…
fácil obtención y es rico en Ag in.domiantes
Rx cruzada con B melitensis (áreas o animales
vacunados)
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INMUNODIFUSION EN GEL…referencia en
América del sur, es sencilla, de bajo costo,
fácil de interpretar
ELIS…mas sensibilidad y especificidad que
las anteriores, procesa muestras de manera
simultanea.
Las mejores resultados se han obtenido por
combinación de inmunodifusion en gel y
ELISA.. Sensibilidad del 100%.
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Otra alternativa: prueba alérgica
Usa como alérgeno a la brucelina del INRA
Detectar infección en un rebaño
Vigilancia epidemiológica, de rutina
Interferida por la infección con otras
especies de Brucella