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TOXICOLOGÍA AMBIENTAL INFORME DE LABORATORIO “Ensayo de Toxicidad” Integrantes: Fernanda Cortes-Monroy Verónica Díaz Francisco Marchant Milena Meneses Uranía Olivares Nicolas Ortiz

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Page 1: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

TOXICOLOGÍA AMBIENTAL

INFORME DE LABORATORIO

“Ensayo de Toxicidad”

Integrantes: Fernanda Cortes-Monroy

Verónica Díaz

Francisco Marchant

Milena Meneses

Uranía Olivares

Nicolas Ortiz

Profesor: Marcelo Fuentes

Fecha:

Page 2: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

Índice

Resumen

El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga “Lactuca sativa” es una prueba en la cual

pretende determinar de qué manera pueden influir las condiciones del humedal “El Culebrón” en

la germinación de las semillas y en el desarrollo de las plántulas durante los primeros días de

crecimiento, con esto se busca establecer si existe inhibición en la germinación y en la

elongación de la radícula y del hipocotilo.

Para poder determinar esto se realizaron pruebas de laboratorio en las cuales se cultivaron

semillas en capsulas de petri con una base de papel filtro y con diluciones de 25%, 50% y 100%

de las muestras extraídas del humedal. Posteriormente las semillas fueron contadas y medidas

luego de su incubación en un horno en oscuridad por 5 días a 22+2°C.

Los resultados obtenidos exponen un patrón similar en ambas muestras estudiadas, ya que en el

caso del hipocotilo existe un crecimiento por sobre la media, esto a diferencia de la radícula la

cual presenta una inhibición y de acuerdo a la desviación estándar estos datos no presentan una

alta dispersión y su comportamiento es homogéneo.

Las graficas obtenidas fueron poco representativas debido a la falta de muestras,

observando que solo en una de estas se asimiló a una curva dosis-respuesta. Dentro de las

características del humedal El Culebrón, como micronutrientes, concentraciones de hierro, y la

eutrofización, permitieron que la plántula obtuviera de éstas las condiciones favorables para su

desarrollo.

Page 3: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

I. Introducción

Cada día son introducidas al ambiente nuevas sustancias químicas, es así como la

contaminación del agua se produce por vertimientos de origen industrial o municipal, residuos

agrícolas, drenajes de minas y lixiviados de rellenos sanitarios los cuales son liberados al medio

ambiente sin ningún control o por fuentes difusas a través de la erosión, ( Bohórquez, P.

Campos, C. 2007. Evaluación de Lactuca sativa y Selenastrum capricornutum como indicadores

de toxicidad en aguas. Pontificia Universidad Javeriana. Bogotá. 16pp.), debido a esto en

términos de consumo de tiempo, espacio y costo, la evaluación de las mismas mediante la

utilización de ensayos convencionales con animales resultaría impracticable. De esta forma, la

necesidad de procedimientos baratos y rápidos para el tamizaje de la toxicidad de sustancias

químicas presentes en muestras ambientales, ha conducido al desarrollo de diferentes bioensayos

a corto plazo con sistemas de plantas por las ventajas que éstas poseen. ( Torres, M. García, M.

Hernández, N. Fernández, M. 2006. Toxicidad aguda de lixiviados acuosos mediante un ensayo

con Lactuca sativa L. INHEM. Cuba. 3pp.) Es por esto que se utilizan ensayos de toxicidad

como herramientas que permite detectar y evaluar la capacidad inherente de

un agente de producir efectos tóxicos sobre organismos vivos utilizando

especies de prueba (Universidad de Concepción. 2007. Programa de

monitoreo ecotoxicológico de los efuentes industriales en el rio Cruces,

provincia de Valdivia. Centro EULA. Chile. 41pp.) como lo es la Lactuca sativa

L. (lechuga común) cuyas pruebas ayudan a evaluar la calidad de los efluentes y de esta

forma prevenir o alertar sobre riesgos en el ecosistema. ( Bohórquez, P. Campos, C. 2007.

Page 4: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

Evaluación de Lactuca sativa y Selenastrum capricornutum como indicadores de toxicidad en

aguas. Pontificia Universidad Javeriana. Bogotá. 16pp.)

Resulta de importancia para el desarrollo regional determinar cuál es el posible efecto que

genera la contaminación sobre el estero El Culebrón lugar que representa un importante sitio de

nidificación, descanso y alimentación para aves de ambientes acuáticos, cuya superficie abarca

aproximadamente 18 ha asociadas a una biodiversidad faunistica de Becacina, Gaviota Garuma,

Huairavillo, Garza Cuca y Chorlos Playeros. (CONAMA. 2002. Estrategia regional y plan de

acción de la biodiversidad IV región Coquimbo. Chile. 20pp.)

Page 5: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

II. Objetivos

A. Objetivo General

Evaluar el efecto toxico de las muestras extraídas del Humedal Culebrón, mediante un

bioensayo de toxicidad aguda de semillas de lechuga L. sativa, a partir de su elongación de la

radícula e hipocotilo.

B. Objetivos Específicos

- Calcular el promedio y desviación estándar de la elongación de la radícula y del

hipocotilo de las plántulas de cada repetición.

- Determinar el porcentaje de inhibición de la radícula e hipocotilo para cada dilución.

- Construir curvas- dosis respuesta para el porcentaje de inhibición de la radícula

hipocotilo.

Page 6: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

III. Materiales y Métodos

Para realizar el ensayo de toxicidad se necesitaron de semillas de lechugas (Lactuca

sativa L var. mantecosa), 20 capsulas de petri de 100 mm de diámetro, 20 papeles filtro

Whatman núm. 3, pinzas, 4 matraces de aforo, 7 pipetas volumétricas, balanza analítica para

masar los reactivos que se utilizaran en el ensayo de toxicidad, 2 probetas de 1 L, 6 vasos

precipitados de 100 mL, un botellón con capacidad de 2 L para preparar el agua dura, bolsas

plásticas para envolver las capsulas de petri, estufa a 22°C o cámara oscura termostatizasa

(22+2°C).

En la preparación del agua dura reconstituida, se deben masar las cantidades

correspondientes de a 0,49 g MgSO4* H2O, 0,384 g NaHCO3 y 0,016 KCl. En 3 vasos

precipitados se debe realizar las diluciones de los reactivos mencionados anteriormente, luego

las soluciones de deben adicionar a una probeta con agua destilada para completar 1 L, esta

cantidad se debe agregar al botellón, enseguida se debe hacer una cuarta dilución, para la cual se

debe masar 0,24 gCaSO4*2H2O y luego diluir la cantidad necesaria en un vaso precipitado de

100 mL con agua destilada y agitar con una varilla, posteriormente deben agregar los 100 mL de

la disolución y 900 mL de agua destilada al botellón para completar los 2L y formar el agua dura

reconstituida.

Por otro lado se debe comenzar a preparar las capsulas rotulándose con el número de la

muestra, dilución y grupo de laboratorio, estas albergaran las muestras (18 capsulas) y 2 controles

Page 7: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

negativos, en cada una de estas se debe colocar el papel de filtro whatman núm. 3 y encima 20

semillas de lechuga con la ayuda de una pinza procurando dejar espacio suficiente entre ellas para

permitir la elongación de las raíces.

De las muestras 1 y 2 se preparan 3 diluciones cada una por triplicado; la primera al 100%

se lleva a cabo vaceando desde el frasco que contiene la muestra a un vaso precipitado unos 20

mL, de los cuales se depositan con una pipeta volumétrica alrededor de 4 mL en cada una de las

tres capsulas; la segunda dilución al 50% se lleva a cabo vaceando desde el frasco que contiene la

muestra 50 mL a un vaso precipitado, este contenido es trasvasijado a un matraz el cual se afora

con agua dura reconstituida, desde esté se debe depositar con una pipeta volumétrica alrededor de

4 mL en cada una de las tres capsulas; la tercera y última dilución al 25% se lleva a cabo

vaceando desde el frasco que contiene la muestra 25 mL a un vaso precipitado, este contenido es

trasvasijado a un matraz el cual se afora con agua dura reconstituida, desde esté se debe depositar

con una pipeta volumétrica alrededor de 4 mL en cada una de las tres capsulas. Para los controles

negativos se agrega con ayuda de una pipeta volumétrica alrededor de 4 mL de agua dura

reconstituida en cada capsula. Se debe tener en cuenta para todas las capsulas que no deben

quedar espacios de aire entre la capsula y el papel lo que dificultaría el contacto de la semilla con

el agua y por ende alteraría los resultados del experimento. Cada capsula debe ser envuelta en una

bolsa plástica procurando quede bien sellada para evitar pérdidas del agua por evaporación, luego

se introducen en una cámara oscura termostatizada (22+2°C), durante un período de incubación

de 120 h una vez transcurrido este período se realiza la medición de la radícula y el hipocotilo de

cada plántula, considerando la elongación de la radícula desde el nudo (región más engrosada de

Page 8: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

transición entre la radícula y el hipocotilo) hasta el ápice radicular. La medida de elongación del

hipocotilo se considera desde el nudo hasta el sitio de inserción de los dos cotiledones.

La toxicidad fue evaluada por la medición de los efectos subletales (inhibición de la

prolongación de la radícula e hipocotilo). El porcentaje de inhibición de la prolongación de la

radícula e hipocotilo se realizó mediante la fórmula:

Inhibición de crecimiento (IP) = Control- Muestra x100 Control

IP negativo: Se consideró estimulación del crecimiento

IP positiva: Tóxica (inhibición de la prolongación)

IP: 0 No tóxica

El procesamiento estadístico de toda la información se realizó en Microsoft Excel 2007.

Page 9: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

IV. Resultados

1. Promedio y desviación estándar de la elongación de la radícula y del hipocotilo de las

plántulas de cada repetición.

Muestra 1.

Tabla I:

Dilución Promedio de elongación de

radícula (cm)

Desviación estándar

25% 1,06 0,72

50% 1,06 0,66

100% 0,75 0,62

Tabla II:

Dilución Promedio de elongación de

hipocotilo(cm)

Desviación estándar

25% 1,73 1,27

50% 2,10 1,25

100% 1,60 1,33

Page 10: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

Muestra 2.

Tabla III:

Dilución Promedio de elongación de

radícula (cm)

Desviación estándar

25% 0,91 0,80

50% 1,14 0,57

100% 0,94 0,48

Tabla IV:

Dilución Promedio de elongación de

hipocotilo(cm)

Desviación estándar

25% 1,01 1,08

50% 1,91 0,89

100% 2,12 1,40

Page 11: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

2. Porcentaje de inhibición de radícula e hipocotilo para cada dilución.

Muestra 1.

Tabla V:

Dilución % % de inhibición Radícula

25 17,06

50 17,45

100 41,54

Tabla VI:

Dilución % % de inhibición Hipocotilo

25 -10,21

50 -33,44

100 -1,59

Page 12: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

Muestra 2.

Tabla VII:

% Dilución % de inhibición Radícula

25 46,27

50 32,84

100 44,9

Tabla VIII:

% Dilucion % de inhibición Hipocotilo

25 51,59

50 8,85

100 -1,36

Page 13: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

3. Curvas- dosis respuesta de inhibición de la radícula e hipocotilo.

Muestra 1.

25 50 10005

1015202530354045

Curva dosis-respuesta Radicula

Series1

Dosis

Porc

enta

je d

e in

hibi

ción

crec

imie

nto

Radi

cula

Figura 1:

Page 14: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

25 50 100

-40.00

-35.00

-30.00

-25.00

-20.00

-15.00

-10.00

-5.00

0.00

Curva dosis-respuesta Hipocotilo

Series1

Dosis

Porc

enta

je d

e in

hibi

ción

crec

imie

nto

Hipo

cotil

o

Figura 2:

Muestra 2.

25 50 10005

101520253035404550

Curva dosis-respuesta Radicula

Series1

Dosis

Porc

enta

je d

e in

hibi

ción

crec

imie

nto

Radi

cula

Figura 3:

Page 15: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

25 50 100-10

0

10

20

30

40

50

60

Curva dosis-respuesta Hipocotilo

Series1

Dosis

Porc

enta

je d

e in

hibi

ción

crec

mie

nto

Hipo

cotil

o

Figura 4:

V. Discusión

En el desarrollo de la experiencia se debe tener en cuenta los errores experimentales,

como por ejemplo el cálculo en las concentraciones de los reactivos, el etiquetado de las

muestras, la cantidad de agua que se le adiciona a las capsulas de petri, también la temperatura a

la cual son incubadas, etc. Lo que puede hacer variar los resultados finales del laboratorio.

En relación a los promedios (tabla I y III), la radícula presento un menor crecimiento que

el control negativo (1,28cm). En contraste con el hipocotilo el promedio de elongación (tabla II y

IV) fue mayor al control negativo siendo estos comportamientos representados en la muestra 1 y

2.

Page 16: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

Comparando el comportamiento de la desviación en la elongación de los hipocotilo (tabla

II y IV) de ambas muestras con el control negativo (1,03cm) se determina que todas las

desviaciones son mayores que el control, a diferencia de la elongación de las radículas (tabla I y

III) donde el valor correspondiente del control negativo (0,86cm) para la radícula nunca se vio

sobrepasado. Debido a esto se puede decir que el crecimiento que presenta la radícula es más

homogéneo mientras que el del hipocotilo será heterogéneo teniendo en cuenta que este valor

puede verse afectado por el número de muertes. (Bibliografía de desviación en relación a lo

homogéneo y heterogéneo). A mayor valor de C.V. mayor heterogeneidad de los valores de la

variable; y a menor C.V., mayor homogeneidad en los valores de la variable (Cochran y

Snedecor, 1981).

La muestra 1 en la inhibición de la radícula presenta un patrón progresivo al aumentar las

concentraciones. Para el hipocotilo no existe inhibición, debido a que todos los valores son

negativos, por lo que demuestra un crecimiento mayor que el control normal.

La muestra 2 en la inhibición de la radícula no sigue un patrón en relación a las

concentraciones, que es lo que se esperaría. Para el hipocotilo si existe inhibición pero esta es

inversa pues en el 25% existe una mayor retardo en el 100%.

Señalan que se debe considerar, el mayor desarrollo de los modelos vegetales en las

muestras con respecto al control, puesto que la exaltación u hormesis en un punto final no debe

ser interpretada como un efecto favorable o estimulante debido a que es posible que muchos

compuestos a bajas concentraciones produzcan exaltación por ser micronutrientes para los

vegetales (Slabbert y Venter (1990) y Castillo (2004)). En relación a la respuesta por la dosis

Page 17: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

suministrada a la lechuga (muestra 1), se verifica una variación en la medida de la radícula según

el gráfico, según lo investigado, la lechuga es una especie de hoja de gran sensibilidad a asfixias

radiculares y deterioros foliares y las formas actuales de regadío

(http://bibliotecadigital.innovacionagraria.cl/gsdl/collect/publicac/index/assoc/HASHa474.dir/

81LibroLechuga.pdf?ie=UTF-8&oe=UTF-

8&q=prettyphoto&iframe=true&width=90%25&height=90%25), además se sabe que el sistema

radicular de la lechuga es muy reducido en comparación con la parte aérea, por lo que es muy

sensible a la falta de humedad y soporta mal un periodo de sequía

(http://www.litar.cl/boletin_lechugas.pdf), aunque éste sea muy breve, estos datos pueden

interpretarse de tal manera que las semillas recibieron una cantidad de agua que no fue necesaria

para el crecimiento óptimo de ellas, lo que produjo la inhibición en el crecimiento de estas.

En la muestra 1 (fig. 1) la grafica es la que más se asemeja a una curva dosis respuesta, ya

que al aumentar concentraciones se acrecienta la inhibición.

La curva del hipocotilo (fig. 2) y la radícula de la muestra 2 (fig. 3) se observa que al

50% existe una desviación del dato, puesto que al utilizar 3 diluciones (25, 50 y 100%) de las

muestras no se cuenta con el óptimo de datos para realizar una curva representativa, debido a que

su forma es muy difícil de obtener, por lo que se recomienda realizar una curva dosis-respuesta

con un mínimo de 5 o 6 diluciones de la muestra o compuesto a estudiar, de manera que se

obtengan valores de toxicidad intermedios entre 100 y 0% (libro bkn).

Page 18: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

La curva del hipocotilo de la muestra 2 (fig. 4) se presenta de manera inversa a lo esperado,

porque en el 25% se alcanza el mayor retardo del crecimiento, mientras que al 100% de

concentración existe una estimulación del crecimiento, al igual que la figura 2, debido a que

existen estudios que evidencian un proceso de eutrofización en el estero el culebrón lo que podría

explicar el desarrollo de la lechuga, ya que al obtener nutrientes disponibles al momento de

realizarse el bioensayo, la planta puede crecer en el tiempo estimado, (cabe destacar que este

proceso no es natural en el estero, ya que se produce debido a la ocurrencia de eventos de

contaminación sobre los cuerpos de agua

(http://www.centroneotropical.org/recsos/manual_01.pdf) abriendo la posibilidad a que se

encuentren compuestos que no son propios del humedal y que puedan influir en la inhibición del

crecimiento de algunas partes de la lechuga.

Cabe la posibilidad que dentro del humedal el culebrón se encuentre una cantidad de

Calcio considerable lo que explicaría la variación de los resultados en cuanto a la inhibición del

crecimiento de la lechuga puesto que este mismo calcio influye en gran medida en la salud de la

planta, tanto del sistema radicular como de la parte aérea (http://www.hortalizas.com/pdh/?

storyid=1179) según estudios que se han realizado para determinar la importancia del calcio en

las plantas, en este caso la lechuga.

Page 19: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

VI. Conclusión

Se puede inferir que debido a lo obtenido experimentalmente a través del bioensayo, los

promedios y desviaciones encontrados para la radícula (muestra 1 y 2), mostraron una inhibición

en el crecimiento con respecto al control negativo observando un comportamiento homogéneo en

los datos debido a la desviación estándar encontrada, en contraste con los resultados obtenidos

para el hipocotilo que en la mayoría de las muestras presento un crecimiento, exponiendo un

comportamiento heterogéneo de los datos obtenidos (desviación estándar). De esto se puede

deducir que las características del humedal permitieron que la plántula posea las condiciones

favorables para su desarrollo; cabe destacar que hay presencia de eutrofización en el humedal El

Culebrón.

Page 20: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

Con respecto a las curvas-dosis respuesta, la figura 1 es la más representativa debido a

que la inhibición mostrada en la radícula y el aumento de las concentraciones es directamente

proporcional. Las demás figuras son menos representativas puesto que la cantidad de datos para

la construcción de la grafica no permite observar el comportamiento exacto de la curva.

Finalmente los objetivos planteados del bioensayo de toxicidad fueron cumplidos.

Anexos

Tabla IX: Datos obtenidos de la elongación de la radícula e hipocotilo, con una dilución del 25%

de la muestra 1.

25% 25% 25%Radicula

(cm)Hipocotilo

(cm)Radicula

(cm)Hipocotilo

(cm)Radicula

(cm)Hipocotil

o (cm)1,5 3,7 2,0 3,0 2,0 3,11,3 2,1 1,4 2,7 1,3 2,01,0 3,0 2,1 2,1 1,1 2,91,0 3,1 0,6 1,3 2,5 4,10,7 3,3 1,1 2,0 2,0 2,51,0 4,0 1,4 1,6 2,0 1,61,2 3,0 2,3 2,7 1,5 2,51,2 4,5 2,0 1,8 1,8 2,3

Page 21: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

1,2 2,9 1,8 1.8 1,8 2,91,5 3,0 1,0 1,0 1,0 1,20,6 3,0 2,0 2,2 2,0 2,80,8 1,6 0,6 1,2 1,5 2,00,5 1,2 0,8 0,5 2,2 2,50 0 1,0 0,6 2,0 2,20 0 1,6 2,5 1,0 1,10 0 1,6 1,8 1,2 1,30 0 0 0 0 00 0 0 0 0 00 0 0 0 0 00 0 0 0 0 0

Tabla X: Datos obtenidos de la elongación de la radícula e hipocotilo, con una dilución del 50%

de la muestra 1.

50% 50% 50%Radicula

(cm)Hipocotilo

(cm)Radicula

(cm)Hipocotilo

(cm)Radicula

(cm)Hipocotil

o (cm)1,5 2,8 1,5 3,0 1,9 2,91,0 2,7 1,2 2,7 1,0 2,51,0 2,0 1,5 3,5 1,0 2,91,0 3,0 2,0 3,3 1,8 2,91,2 3,6 0,9 2,0 2,4 3,21,2 2,5 1,5 3,0 1,5 1,50,5 1,3 1,5 3,5 1,5 2,00,8 2,9 1,5 2,8 1,5 3,01,3 3,0 1,0 2,5 1,0 3,21,2 3,5 0,7 2,6 1,2 3,71,2 1,9 1,7 3,0 2,0 4,01,1 1,9 1,7 2,5 1,0 2,51,5 2,9 2,0 2,0 1,2 2,31,8 2,2 2,0 1,8 1,6 2,40,7 1,7 1,5 3,0 0,5 0,90,6 0,9 0,0 0,0 1,9 3,70,6 2,1 0,0 0,0 0,0 0,00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

Page 22: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

Tabla XI: Datos obtenidos de la elongación de la radícula e hipocotilo, con una dilución del

100% de la muestra 1.

100% 100% 100%Radicula

(cm)Hipocotilo

(cm)Radicula

(cm)Hipocotilo

(cm)Radicula

(cm)Hipocotil

o (cm)1,0 2,0 1,5 2,8 1,0 2,01,5 3,5 0,7 2,2 1,0 2,01,0 2,0 1,5 3,0 1,3 2,81,5 3,3 1,3 3,5 1,2 3,51,5 3,0 0,5 1,5 1,0 3,01,0 1,8 1,5 3,0 1,1 2,91,1 1,5 0,8 2,5 1,5 2,51,0 3,5 2,0 3,4 1,0 3,01,5 2,7 1,5 2,5 1,2 2,51,1 1,7 0,7 1,4 1,0 2,01,0 2,0 1,2 2,0 0,7 1,21,0 1,6 1,5 3,4 0,0 0,00,0 0,0 1,0 3,0 0,0 0,00,0 0,0 1,5 2,5 0,0 0,00,0 0,0 1,5 3,0 0,0 0,00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

Tabla XII: Datos obtenidos de la elongación de la radícula e hipocotilo, con una dilución del

25% de la muestra 2.

25% 25% 25%Radicula

(cm)Hipocotilo

(cm)Radicula

(cm)Hipocotilo

(cm)Radicula

(cm)Hipocotil

o (cm)1,5 3,3 1,6 2,7 2,1 2,11,7 2,0 1,4 2,6 1,6 1,3

Page 23: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

1,6 2,6 1,5 2,7 2,1 1,22,0 3,3 0,2 1,3 1,5 2,51,0 1,4 0,7 1,0 2,2 2,32,0 2,3 0,6 0,6 2,2 2,41,1 2,4 1,7 2,1 0,6 0,50,5 1,0 1,0 2,5 0,8 0,60,8 1,8 2,0 2,8 0,8 1,81,8 2,3 1,6 1,8 0,9 2,52,0 1,7 1,8 2,5 0,0 0,00,4 0,8 1,1 1,6 0,0 0,01,5 2,2 1,8 2,1 0,0 0,02,0 2,7 1,0 1,1 0,0 0,01,4 2,6 0,7 0,9 0,0 0,00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

Tabla XIII: Datos obtenidos de la elongación de la radícula e hipocotilo, con una dilución del

50% de la muestra 2.

50% 50% 50%Radicula

(cm)Hipocotilo

(cm)Radicula

(cm)Hipocotilo

(cm)Radicula

(cm)Hipocotil

o (cm)1,2 2,1 0,9 3,0 2,1 2,40,8 1,6 1,2 1,4 1,3 2,31,2 2,4 1,1 2,3 1,6 2,71,0 2,6 1,5 2,6 1,0 1,51,5 2,0 1,4 2,3 1,3 2,01,2 2,4 1,2 2,1 1,4 2,51,8 2,5 2,0 2,4 1,4 2,72,0 2,8 1,6 2,8 1,0 1,21,4 3,0 1,8 2,4 1,1 1,61,8 2,2 1,3 2,9 1,6 2,61,0 2,0 1,0 2,7 0,8 2,02,0 2,6 1,0 1,4 1,4 3,01,8 2,3 1,3 2,7 0,8 2,7

Page 24: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

0,5 0,7 1,2 2,8 2,5 2,90,5 0,5 0,5 0,5 1,7 1,80,6 1,0 0,9 1,0 0,5 1,10,6 1,1 0,8 2,2 2,0 2,40,7 1,3 0,0 0,0 0,6 0,51,1 1,6 0,0 0,0 1,0 2,20,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

Tabla XIV: Datos obtenidos de la elongación de la radícula e hipocotilo, con una dilución del

100% de la muestra 2.

100% 100% 100%Radicula

(cm)Hipocotilo

(cm)Radicula

(cm)Hipocotilo

(cm)Radicula

(cm)Hipocotil

o (cm)1,4 2,0 1,3 2,5 1,5 2,01,0 3,0 1,7 2,3 1,1 2,31,0 3,8 1,3 2,1 1,5 3,00,5 1,3 1,7 3,5 1,1 3,10,8 2,0 1,4 2,7 1,5 2,60,5 2,0 1,2 2,8 0,9 2,40,6 2,2 1,5 4,0 0,8 3,60,6 2,1 1,7 2,9 0,8 1,71,4 3,3 1,2 2,4 1,3 2,71,1 2,4 1,3 1,7 0,7 1,52,0 3,0 0,5 0,7 1,2 2,11,0 2,2 0,5 0,8 0,9 2,01,0 2,1 1,3 1,5 0,5 1,21,0 2,1 0,7 1,0 0,9 1,61,0 2,2 1,3 2,9 1,4 2,60,6 1,4 1,1 2,6 0,6 0,80,0 0,0 1,1 3,0 0,5 1,70,0 0,0 0,9 2,3 0,7 1,40,0 0,0 0,0 0,0 1,1 10,00,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0

Tabla XV: Datos obtenidos de la elongación de la radícula e hipocotilo de los controles

negativos.

Page 25: BIOENSAYO HUMEDAL CULEBRON

CN 1 CN 2Radicula

(cm)Hipocotilo

(cm)Radicula

(cm)Hipocotil

o (cm)2,40 2,50 2,50 2,402,00 2,80 2,50 2,102,00 2,80 2,00 2,502,40 2,10 2,00 2,402,00 2,50 1,80 2,302,10 2,30 1,50 2,501,70 2,50 1,50 2,502,00 2,20 1,70 2,202,00 2,00 1,50 2,201,70 2,20 1,50 2,101,80 2,00 1,20 2,002,00 1,70 1,00 2,001,20 2,40 1,30 1,501,50 1,60 1,00 0,500,90 1,00 0 00,50 1,00 0 0

0 0 0 00 0 0 00 0 0 00 0 0 0

Tabla VXI: Promedio y desviación estándar de radícula de controles negativos

Promedio Radícula

Desviación estándar

1,70 0,86

Tabla XVII: Promedio y desviación estándar de hipocotilo de controles negativos

Promedio Hipocotilo

Desviación estándar

2,09 1,03