acción activa del factor derEDF) en el tratamiento de la modelo animal de degene

BECA SC

ed

J. BaM.A. ZA. Boix

A. Carvalho, Sanj

ivado del epitelio pigmentaa neovascularización coroideración macular asociada a

CO 2010

ad

adalZapataxaderaA. Salas, C.

jurjo

Estado actual conocimie

MAE patología multifactoria

Ed dEdad

Tabaquismo

Raza blanca

Factores genéticos

Polimorfismo TyR402His en

Polimorfismo Ala69Se

entos científicos-técnicos

al

n el gen del factor del complemento H

er en el gen 2 ARMS2

Estado actual conocimie

MAE patología multifactoria

Edad

Tabaquismo

Raza blanca

Factores genéticos

Sistema inmunológicoDrusas actúan como

El desarrollo de grandes drusas y la apoptosis constituyen un factor que determina el r

entos científicos-técnicos

al

o estimulo antigénico

del EPR son señales de la respuesta inmune y riesgo de progresión a DMAE avanzada

Estado actual conocimie

MAE patología multifactoria

mecanismo que lleva al desarrollo de las

conocido

Angiogénesis ocular como factor c

VEGF

entos científicos-técnicos

al

s lesiones de DMAE temprana y tardía e

clave en la progresión de la DMAE

PEDF

Estado actual conocimie

MAE patología multifactoria

sición de DMAE seca a húmeda ocurre isis del receptor 2 del VEGF es reducidaGF en el EPR

PEDF

entos científicos-técnicos

al

cuando la capacidad del PEDF de regula, generando una disregulación en la señ

VEGF

Estado actual conocimie

DF

oproteina 50kd de la família de los inhibi

ti i é i á t t l jor antiangiogénico más potente en el ojo

retado cells EPR

to neurotrófico

to antiinflamatorio

to protección barrera EPR

entos científicos-técnicos

dores de la proteasa serina

o

Estado actual conocimie

DF

oproteina 50kd de la família de los inhibi

or antiangiogénico más potente en el ojog g p j

retado cells EPR

to neurotrófico

to antiinflamatorio

to protección barrera EPR

entos científicos-técnicos

dores de la proteasa serina

o matriz FRmatriz FR

Hipó

1.- El tratamiento con PEDF puede ser la mejor opcióinducida por el VEGF, sino también ejerciendo unprotectora en el EPR

2.- La administración tópica de la faPEDF, por tenefectiva en el polo posterior, ofreciendo una forma de

3.- La administración tópica de una fracción del péptineovascularización coroidea

4.- La faPEDF puede mantener la capacidad neurotróentero

tesis

ón terapéutica para la DMAE, no sólo inhibiendo la Nna acción antiinflamatoria, neurotrófica en la retina

er menor tamaño, puede penetrar en la córnea yye administración no invasiva

do es tan efectiva como la intravítrea en el control de

ófica y antiinflamatoria del péptido

Obje

Evaluar y comparar la eficacia de una faPEDFde determinar una mejor vía terapéutica para la

fase experime

fase experime

fase experimeDeterminar cuál es la faPEDF mmigración y formación tubular eumbilical humano

Determinar el efecto citoprotector de la faPEDF en e

Evaluar el efecto de la faPEDF en la

tivos

F sintética por vía intravítrea y tópica, con el fina DMAE húmeda

entos “in vitro”

entos “in vivo”

entos in vitromás eficaz en la inhibición de la proliferación,en cultivos de cells endoteliales de cordón

el cultivo celular de EPR sometido a estrés oxidativo

producción de citoquinas por el EPR

Obje

Evaluar y comparar la eficacia de una faPEDFde determinar una mejor vía terapéutica para la

fase experimefase experime

fase experime

Preparar el modelo Valorar el efecto de la administración tópica de la faP

modeloValorar el efecto y tiempo de efectividad en

Comparar la toxicidad corneal con la toxicidad vitr

Comparar entre ambos grupos de estud

tivos

F sintética por vía intravítrea y tópica, con el fina DMAE húmeda

entos “in vitro”entos in vitro

entos “in vivo”

de NVC en ratonesEDF en el control de las lesiones neovasculares en e

o animaln la administración intravítrea de la faPEDFreoretiniana producida en los dos grupos de estudio

dio el efecto sobre las lesiones de NVC

PEDF SINTÉTICO

Fracción activa neurotrófica deriva de la

Fracción activa antiangiogénica deriva d

s posiciones Val78-Thr121 (44-mer)

de las posiciones Asp44-Asn77 (34-mer)

PEDF SINTÉTICO

Fracción activa neurotrófica deriva de l

Fracción activa antiangiogénica deriva

7 faPCultivos de células endoteliales de

Cultivos primarios de línea celular de e

Ensayo de migr

Ensayo de formación

as posiciones Val78-Thr121 (44-mer)

de las posiciones Asp44-Asn77 (34-mer

EDFcordón umbilical humano (HUVEC)

epitelio pigmentario humano (ARPE-19)

ración (HUVEC)

n de tubos (HUVEC)

SAYO DE MIGRACIÓN (HUUVEC)

faPEDF inhibe la migración de cells

5-FU stop proliferación celu

Raspador celular

≠[faPEDF]1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100nM

SAYO DE MIGRACIÓN (HUUVEC)

faPEDF inhibe la migración de cells

5-FU stop proliferación celu

Raspador celular

≠[faPEDF]1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100nM

SAYO DE MIGRACIÓN (HUUVEC)

faPEDF inhibe la migración de cells

5-FU stop proliferación celu

Raspador celular

≠[faPEDF]1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100nM

SAYO DE MIGRACIÓN (HUUVEC)

faPEDF inhibe la migración de cells

≠[faPEDF]

5-FU stop proliferación celu

Raspador celular

1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100nM

SAYO DE MIGRACIÓN (HU

Área sin migración celular (µm)

UVEC)

ENSAYO DE FORMACIÓN(HUVEC)

N DE TUBOS

Las cells de endotelio vasculara formar estructuras tubulares

son co-cultivadas con fibroblatratadas con VEGF y FG

≠[faPEDF]

Evaluar la capacidad inhibitorformación de tubos a distinconcentraciones de faPE

1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100

SAYO DE FORMACIÓN DEE TUBOS (HUVEC)

Las cells de endotelio vasculara formar estructuras tubulares

son co-cultivadas con fibroblatratadas con VEGF y FG

≠[faPEDF]

Evaluar la capacidad inhibitorformación de tubos a distinconcentraciones de faPE

1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100

SAYO DE FORMACIÓN DDE TUBOS (HUVEC)

Las cells de endotelio vasculara formar estructuras tubulares

son co-cultivadas con fibroblatratadas con VEGF y FG

≠[faPEDF]

Evaluar la capacidad inhibitorformación de tubos a distinconcentraciones de faPE

1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100

ENSAYO DE FORMACIÓN(HUVEC)

tubos

N DE TUBOS

Las fracciones 2 y 3 presentaron disminución enlongitud de tubos a concentración de 50nM

ENSAYO DE FORMACIÓN(HUVEC)

tubos

La fra

L

N DE TUBOS

La fracción 2 del péptido fue eficaz en la inhibición formación de tubos a todas las concentracione

acción 3 demostró eficacia a partir de una concentrac

Las fracciones 6 y 7 sólo a partir de concentraciones d

ENSAYO DE VIABILIDAD C

(HUVEC)

CELULAR

Ensayo con azul tripán (penetra mb cells muertas)≠[faPEDF]

Determinar faPEDF con mayor efecto antiproliferativo sobre cells endoteliales

1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100nM

Las fracciones 2 y 3 presentan diferenciaestadísticamente significativas a una concentra

5nM

ENSAYO DE PROLIFERAC

(HUVEC)

CIÓN CELULAR

Ensayo con Alamar blue (proliferación/metabolismo)

≠[faPEDF]

Determinar faPEDF con mayor efecto antiproliferativo sobre cells endoteliales

1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100nM

No diferencias estadísticamente significativasninguna fracción ni concentración de péptid

odelo animal NVC

nes C57BL de 6 a 12 semanas de edad

tura mb bruch láser verde en 4 localizaciones peripapilar

250mw 100ms

dio evaluado y aprobado por el

Ojo adelfo control

oscopía confocal verificar NVC

asia CO2 según el protocolo ético establecido

odelo animal NVC

nes C57BL de 6 a 12 semanas de edad

tura mb bruch láser verde en 4 localizaciones peripapilar

250mw 100ms

dio evaluado y aprobado por el

Ojo adelfo control

oscopía confocal verificar NVC

asia CO2 según el protocolo ético establecido

ONCLUSIONES

1.- Las faPEDF 2 y 3 demostraron ser efectivas eendote

2.- Las faPEDF 2 y 3 demostraron ser efectivas enlongit

fase “in vitro”

longit3.- Las faPEDF 2 y 3 demostraron ser efectivas e

endoteliales

4.- Los resultados “in vitro”han demostrado la capdel péptido PEDF, siendo el primer paso para elpatología neovascular de la retina

en inhibir la capacidad de migración de las cells lialesn inhibir la formación de tubos y en disminuir su ududen disminuir la viabilidad de las cells

pacidad antiangiogénica en una pequeña fracción actl desarrollo de una posible terapia no invasiva para